三种中国南海红树林内生真菌.
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究
南海红树林内生真菌GX—3代谢产物研究摘要：采用反复硅胶柱色谱法、Sephadex LH-20凝胶色谱法等分离纯化南海红树林内生真菌GX-3的代谢产物，并通过理化常数测定和光谱分析鉴定其化学结构。
结果表明，从南海红树林内生真菌GX-3的菌体中分离得到6个代谢产物。
经波谱解析，分别为：环（苯丙-甘）二肽（1）、环（丙-亮）二肽（2）、Fusaric acid （3）、3，6-di-sec-butyl-1，4-dihydroxypiperazine-2，5-dione（4）、环（脯-亮）二肽（5）、环（甘-亮）二肽（6）。
初步药理活性显示化合物1对口腔癌细胞KB、KBv200的抗肿瘤活性的LD50值分别为6.5和11.2 μmol/L。
通过鉴定，所有化合物均系首次从南海红树林内生真菌GX-3中分离得到。
关键词：红树林；内生真菌；代谢产物海洋微生物资源由于具有可持续开发性，其活性物质生产不受天然资源难再生的限制，能通过发酵进行胞外生产，与现代微生物技术相结合，较容易实现工业化生产，特别是其生产不对环境造成危害，符合当今绿色化学发展的方向。
而多数报道均显示海洋真菌都与红树林有着紧密的联系[1，2]，对红树林真菌生物活性物质的研究已成为海洋微生物资源开发利用，寻找天然药物先导化合物的重要途径。
近十几年来，已有学者对中国南海红树林内生真菌进行了系统的研究，并从中分离获得了一系列结构新颖、药理活性良好的海洋天然化合物[3-9]。
1 材料与方法1.1 仪器和试剂美国Varian公司的INOV A-500NB超导核磁共振谱仪、INOV A-300NB核磁共振仪、VG ZAB-HS双聚焦质谱仪、Thermo DSQ电子轰击电离质谱仪和Thermo MAT95XP高分辨质谱仪；北京泰克仪器有限公司的X-4数字显示显微熔点测定仪。
所用试剂均为广州化学试剂厂生产，化学纯，溶剂经重蒸后使用；柱层析硅胶为青岛海洋化工厂生产的200～300目硅胶，硅胶H，薄层硅胶GF254。
三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究的开题报告
三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究的开题
报告
题目：三种南海海洋红树林内生真菌次级代谢产物的研究
摘要：南海是我国具有重要意义的海洋资源之一，其中海洋红树林内生真菌是其中一种十分重要的生物资源。
本研究将选取三种南海海洋红树林内生真菌进行研究，分析其次级代谢产物及其生物活性，为南海海洋红树林内生真菌资源的开发和利用提供理论依据和实验依据。
研究思路：首先，将从南海海洋红树林内采集到的内生真菌进行筛选和鉴定，选取三种具有代表性的真菌进行研究。
其次，采用化学分离和纯化技术，分离并获得该三种真菌次级代谢产物。
然后，对所得次级代谢产物进行结构鉴定、生物活性测试与分析，寻找具有活性、生物功能组合的代谢物。
最后，深入研究代谢物的应用前景和开发利用方法。
研究意义：本研究将可深入了解南海海洋红树林内生真菌的代谢途径及产物与其生物活性之间的关系，为南海南海海洋红树林内生真菌资源的可持续利用、开发提供理论和实践支持。
关键词：南海海洋红树林；内生真菌；次级代谢产物；鉴定；生物活性。
两株南海红树林内生真菌(SK7、SK11)次级代谢产物的研究的开题报告
两株南海红树林内生真菌(SK7、SK11)次级代谢产物的研
究的开题报告
一、研究背景
红树林是近海地区重要的生态系统，具有天然的防风固沙、保护海岸线、保护生物多样性等功能。
同时，红树林内生微生物是具有巨大研究价值的资源之一。
其中，
红树林内生真菌能够合成大量次级代谢产物，具有广泛的生物活性和药理作用。
因此，深入研究红树林内生真菌的次级代谢产物具有重要的理论和应用意义。
二、研究目的
本研究旨在从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物，并对其进行结构鉴定和生物活性测试，为寻找新型天然产物提供科学依据和理
论指导。
三、研究内容和方法
1、采集南海红树林样品，进行微生物分离和鉴定。
2、利用高效液相色谱、气相色谱及质谱等技术对红树林内生真菌的次级代谢产
物进行分离纯化和结构鉴定。
3、通过生物活性测试，对筛选出的次级代谢产物进行药理学评价。
四、预期成果
1、从南海红树林内生真菌中筛选出具有生物活性和药理作用的次级代谢产物。
2、对筛选出的次级代谢产物进行结构鉴定和生物活性测试，探讨其可能的药理
作用和应用前景。
3、为后续糖尿病、心血管等疾病药物开发提供基础数据和理论依据。
南海红树林内生真菌No.ZZF71代谢产物研究
本 文 首 次 报 道 对 南 海 红 树 林 内 源 真 菌 Ｎ ． Ｚ ７ 代谢产 物 的研 究工作 。通过静 置发 酵培 ｏＺ Ｆ １ 养， 从真菌 Ｎ 。Ｚ ７ ｏＺ Ｆ １的菌 体 和发 酵培 养液 中提 取 分离得到 ６个代谢 产物（ １ ， 图 ） 分别鉴定其 结构为 ： 环 （ 异亮 ） 肽 （ ） ８羟基．一 甲基．． 亮． 二 １ 、一 １羟 ３甲基一一 ２ （一 ３ 甲基一一 ２烯氧 ）９ 一 杂蒽 ．一 （ ） 三 油 酸甘 油 一Ｈ 氧 ９酮 ２ 、 酯 （ ）麦角 甾醇（ ） 甘露醇 （ ）苯 乙酸（ ） ３、 ４、 ５、 ６。
文章 编号 ：０ ４１ ５ （ ０ ８ ０ －８ ３０ １０ — ６ ２０ ） ７０ ９ －３ ６
南 海 红 树 林 内生 真 菌 Ｎ ． Ｚ ７ 代 谢 产 物 研 究 ｏＺ Ｆ １
杨 瑞云 ， 忠 京 邵 长伦 ， 永 成 ， 世 宁 黄 一， 林 周
（ ．广西 师范 大学化 学化 工学院 ， １ 广西 ２ ．中山大学化 学与化 学工程 学 院 ， 广东 ３ ．广西 民族 大学化 学与 生态工 程学 院 ， 广西 ４ ．中国海洋 大学 医药学 院 ， 山东 桂林 广州 ５ １０ ； ４ ０ ４ ５０ ７ ； １２ ５
收 稿 日期 ：０７】 ・２ 修 回 日期 ：０ ８０ －０ ２０ －１２ ； ２ ０ －２２
基金项目： 国家 ８３科技攻关计划资助项 目（ ０ ３ Ａ ２０ ０ ； ６ ２０ Ａ ６４ １ ） 广东省 自然科学重点基金资助项 目（ ２７ ２ ０１３）
联系人简介 ： 林永成（９ ５ ）男 ， １４ － ， 教授 ， 主要从事天然产物化学 的研究。Ｅ ａ ： ｓ ｃ ａ ． ｓ．ｄ ．ｎ ｍ ｉ ｃ ｌ ＠ｍ ｉ ｓ ｕ ｅｕ ｃ ｌｅｙ ｌｙ
南海红树林内生真菌B60中的一个新原儿茶酸衍生物
９ ０Ｈ ） ７ ５ （ Ｈ， ， ． ｚ ， ． ８ １ ｄ Ｊ＝１ ８Ｈ ） 的 ３个 氢构 ． ｚ
成 苯环 １ ３ ４三取代 Ａ Ｘ 自旋 系统 ； ５８ ， ， Ｂ ． １处为
可 交换 的氢 信号 ，表 明含有 一 个 自由酚 羟基 ；此外
氢 谱 中还 有 如下信 号 ：４ ６ 处 的 Ｏ Ｈ ， ．６处 的 ．１ Ｃ ， ５４
与 Ｃ一 ２和 Ｃ一 ３相 关 ， Ｈ一２分别 与 Ｃ一 ４和 Ｃ一 ５ 相关 ，由此 可 以推 导 出分 子 中存在 这一 个异戊 烯基 团 ；而 Ｈ一１与 Ｃ一４ 三 键 相 关 可 以确定 该异 戊 饷 烯 片段 通过 氧原 子 连 在 Ｃ一 ５ ８ 处 的 一Ｏ ４ ．１ Ｈ与
Ｃ Ｈ，３ ８ ． ６处 的 Ｏ Ｈ ，１７ Ｃ ．９和 １７ ． ４处 的 ２个 Ｃ Ｈ。
根据 ＨＭＱ 谱 确 定 碳 直 接 相 连 的 氢 的 情 况 Ｃ （ 表 １ ， 因为 ５ ８ 见 ） ． １处 的 质 子 不 直 接 与 碳 相 连 ，
进一 步说 明 该 氢 为 一 活 泼 氢 。通 过 ＨＭ Ｃ谱 确 定 Ｂ
摘 要 ：对红树林内生真菌 Ｂ０进行次级代谢产物研究， ６ 从其培养液中分离得到一个新的原儿茶酸衍生物，３ 一
羟基４一 异戊烯氧基苯 甲酸 甲酯 （ ） １ 。该 化合 物的结构通过 广泛 的波谱 方法得 到确证 ，尤 其是 ２ ＭＲ （ ＭＱ ， ＤＮ Ｈ Ｃ
ＨＭ Ｃ 。 Ｂ ）
关键 词 ：内生真菌；新原儿茶酸衍生物；结构鉴定
了分 子 中的各个 官 能 团在苯 环 中的连 接位置 ，从 而 确定整 个分 子 的结 构 。在 ＨＭＢ Ｃ谱 中 ，Ｈ —１分 别
图 １ 化 合 物 １的 结 构 式 及 主 要 ＨＭ Ｃ相互 关 系 Ｂ
南海红树林内生真菌Cephalosporium sp.(2090#)次级代谢产物研究
角瓶 ， 内装培养液 ３０ Ｌ 经 １１ ０ １ Ｐ 高温 ０ ｍ ， ２ ℃（ ．Ｍ ａ） 灭菌 ２ ｒｎ ５ ｉ 后在超净工作台上接种。共接种 ７ Ｌ ａ ０， ２ ℃静置培养四周后 ， ５ 分别收集发酵液和菌体。
１ ４ 提 取分 离 ．
７ Ｌ发酵 物过 滤得 菌体 和发酵 液 ， ０ 发酵 液浓 缩
（． １ 广东医学院药学院 ， 广东 东莞 ５ ３０ ；．胶南市第一中学 ， ２８８ ２ 山东 ３ ．中国海洋 大学 医药 学院 ， 山东 青 岛 ２ ６０ ； ６０ ３
４ ．中山大学化 学 与化学 工程 学 院 ， 广东
关键词 ： 红树林 内生真菌 ； 次级代谢 产物 ； 环二肽 ； 甾醇
青岛 ２６０ ； ６４０
发酵 培 养 基 为 葡 萄 糖 １ ０ ， 白 胨 ０ ２ ， ．％ 蛋 ．％
授采 自南 海 红 树 的 内 生 真 菌 ， 菌 的 种 属 尚 未 鉴 该
酵母 膏 ０ １ ， 海 盐 ０２ ％ ，Ｈ ． 。５０ Ｌ三 ．％ 粗 ．５ ｐ ７０ ０ ｍ
定， 本文首次研究了该菌的次级代谢产物。从该菌 的菌体浸提液中分离得到七个已知化合物， 通过波 谱解析 以及文献 对 照 ， 分别 鉴定 为 ： （ 一 ） 肽 环 亮 亮 二 （ ）环 （ 亮 ） １ ， 丙一 二肽 （ ）环 （ 一 亮 ） 肽 （ ）环 ２， 亮 异 二 ３， （ 一 ） 肽（ ） 脯 异亮 二 ４ 和环 （ 苯丙一 ） 肽 （ ）麦 角 甾 甘 二 ５， 醇（） ６ 和过氧化麦角 甾醇 （ ） ７。
１ 实 验 部分
１ １ 仪器 与试 剂 ．
仪器 ： 国 Ｂｕｅ 公 司 Ｖ Ｃ Ｏ ２型 富 立叶 德 ｒｋｒ Ｅ Ｔ Ｒ２
变换红外光谱仪 （ Ｔ Ｒ ｓ ｃ ｏ ｅ ｒ ； 国 Ｖ ｒ ｎ Ｆ — ｅｔｍ ｔ ）美 Ｉ ｐ ｒ ｅ ａ ａ ｉ 公 司 ＩＯ Ａ ５０ Ｂ超 导 核 磁 共 振 谱仪 ； 国 Ｖ Ｎ Ｖ ０ Ｎ 英 Ｇ 公 司 Ｚ ＢＨ Ａ —Ｓ双聚 焦 磁 质 谱 仪 ； 国 Ｅｅ ｅｔ 公 德 ｌｍ ｎａ ｒ 司 Ｖｒ ＬＣ ＳＯ元素 分 析仪 。 ａｉ Ｅ ＨＮ — ｏ 试 剂 ： 萄 糖 Ｃ 蛋 白胨 Ｂ 酵 母 膏 Ｂ 粗 葡 Ｒ， Ｒ， Ｒ，
五种南海红树林真菌次级代谢产物的研究的开题报告
五种南海红树林真菌次级代谢产物的研究的开题报告标题：南海红树林真菌次级代谢产物研究摘要：南海红树林是地球上独特的珍贵生态系统，其中各种微生物生物量大且物种丰富。
真菌是其中重要的组成部分，具有丰富多样的次级代谢产物。
本文采用分离纯化、质谱分析等方法，分别研究了南海红树林中5种常见真菌的次级代谢产物，并从中筛选出具有生物活性的化合物，对其进行初步的活性评价，为今后的深入研究提供参考。
内容：1. 研究背景和意义2. 研究对象与方法3. 研究进展与成果4. 展望与期望正文：一、研究背景和意义南海红树林是我国特有的生态系统，包括了红树林、海草床和珊瑚礁等生态群落，具有丰富的生物资源和生态学价值。
其中，各种微生物丰富多样，真菌作为其中的一个重要组成部分，具有很高的生物多样性和生物活性，被广泛应用于医药、农业、环境等领域。
红树林真菌的次级代谢产物具有很大的潜在应用价值，加之南海红树林真菌物种繁多、资源丰富，因此研究红树林真菌的次级代谢产物具有实际的应用价值和科学研究的意义。
二、研究对象与方法2.1 研究对象本研究选取了南海岛屿附近红树林中5种常见真菌进行研究，包括：Penicillium glabrum、Aspergillus flavus、Fusarium equiseti、Phoma sp. 和Trichoderma sp.。
2.2 研究方法采用分离纯化、质谱分析等方法，分别研究各菌株次级代谢产物，并从中筛选出具有生物活性的化合物。
实验流程如下：1. 真菌分离将采集的南海红树林样品进行分离纯化，得到单菌株。
2. 发酵条件的优化选用培养基、发酵条件进行优化，以提高次级代谢产物的产量。
3. 提取和分离次级代谢产物进行次级代谢产物的提取和分离，得到纯化的化合物。
4. 质谱分析采用质谱分析技术，结合NMR等分析方法对各纯化物进行鉴定。
5. 活性评价对筛选出的具有生物活性的化合物进行初步的活性评价，分析其对植物、微生物等的生物活性。
南海红树林内生真菌Sk-2代谢产物研究
南海红树林 内生真菌 Ｓ ｋ 一 ２ 代谢产物研究
杨 建香
ｆ 桂林 师范高等专科学校 学报编辑部 ， 广西 桂林 ５ ４ １ ０ ０ １ ）
［ 摘 要】 目的：研究南海红树林 内生真菌 ｓ ｋ 一 ２的代谢产物。方法 ：采用反复硅胶柱色谱法、 Ｓ ｅ ｐ ｈ ａ ｄ ｅ ｘ
Ｌ Ｈ 一 ２ Ｏ凝 胶色 谱法 等进行 分 离纯化 ， 并通过 理化 常数 测定和 核磁 数据分 析鉴 定其 化学结 构。结 果 ： 从南海 红树 林 内 生 真菌 Ｓ ｋ － ２的培 养 液 中分 离得 到 ４个 代 谢 产 物 。经 波 谱 解 析 ，分 别 为 ：大 黄 素 甲醚 （ １ ） ， ３ ， ６ 一 ｄ ｉ ｓ ｅ ｃ ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ 一 １ ， ４ 一 ｄ １ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ ｙ ｐ １ Ｄ ｅ ｒ ａ ｚ ｛ ｎ ｅ 一 ２ ， ５ 一 ｄ ｉ ｏ ｎ ｅ （ ２ ） ． ７ ， ８ 一 二 甲基 苯 并 ［ ｇ ］ 蝶啶 一 ２ ， ４（ １ Ｈ ， ３ Ｈ ） 一二酮（ ３ ） 过氧 化麦角 甾醇（ ４ ） 。结论 ： 四个化 合物 均首次 从南 海红树 林 内生真菌 Ｓ ｋ 一 ２中分 离得到 。
研究表明， 海 洋 微 生物 将 成 为 下 个 世 纪 开 发 新 型 药 物 的重 要 资 源［ ３ １， 海 洋 微 生 物 是 产 生新 的 生 物 活 性 物 质 的极 好 来 源之 一 ， ｌ ４ １ 而 海 洋 微 生 物 中 的红 树 林 内生 真菌 ， 已成 为海 洋微 生 物 资 源开 发 利用 ， 寻 找 天然 药物 先导 化合 物 的重要 途径 。 本 文对 南 海 红 树 林 内生 真 菌 Ｓ Ｋ一 ２的次 级 代 谢 产 物 进 行 系 统研 究 ， 从 培 养 液 中分 离 得 到 ４个 化 合 物： （ １ ）大 黄 素 甲醚 ； （ ２ ） ３ ， ６ 一 ｄ ｉ ｓ ｅ ｃ ｂ ｕ ｔ ｙ ｌ 一 １ ， ４ 一 ｄ ｉ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｘ —
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22
5个连在烯基上的H
11 27 26 10 3 5 6
12
28 29
7 OH 4 9 8 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
22
（ 2.29 ，20.6）
（ 2.03 ，37.8）
（3.34，60.5）
11 27 26 10 3 5 6
分 别 提 取
以PDA为培养基经121℃(0.1mPa) 高温灭菌25min后接种。共接种 100L，室温静置培养30d。
分 离 纯 化
结 构 鉴 定
实验结果
OH HN O O O HO O OH O O
பைடு நூலகம்
1
2
HO
3
OH
O
OH HO
OH
OH
OH O O
4
5
OH
OH
Cytochalasin C
11 27 26 10 3 5 6 12 7 OH 4 9 8 13 1 HN 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
11 27 26 10 3 5 6
12
28 29
7 OH 8 4 9 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
22
13个CH
5个CH3 2个CH2
11 27 26 10 3 5 6
12
28 29
7 OH 4 9 8 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
年 为 止
——
——272 个
本课题组的研究成果
O OO H2C C O HN N N HN O H O Xyloketal A O HO H OH H H O
O H O O H O Xyloketal F Xyloketal D Xyloketal G O H O H2 C O H O H H O O O
3
4
三种中国南海红树林内生真菌 次级代谢产物的研究
王佳珺 05331004
海洋微生物的研究意义
巨大而 独特的 生态系 统
海洋微生 物多样性 真菌代谢产 物的多样性 海洋微生 物资源的 可持续开 发性
海洋微生物的研究成为 国内外研究的热点领域
海洋微生物的研究进展
2003 第 一 次 世 界 大 战 —— 首 次 有 抗 菌年 活 性 的第 天一 然个 产具 物 1986 —— 2002 年 以 来 不 断 增 多
28 29
22
C30H37NO6
M-1
元素分析结果： C 70.99%、H 7.30%、N 2.76%
11 27 26 10 3 5 6
12
28 29
7 OH 4 9 8 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
22
12个碳
210.3 175.3 170.3
O O
H O O H HO O H O Xyloketal B O H O O
Xyloallenolide A O O
O
O
O O H Xyloketal E O
Xyloketal C
O OH H O
O
H O O
HO
研究方案及思路
菌 种 采 集 扩 大 培 养
菌体部分经干燥处理后用甲醇浸提， 菌液部分通过加热浓缩后分别利用石 油醚、乙酸乙酯分别萃取 硅胶柱以石油醚(PE)—乙酸 乙酯(EA)—甲醇(MO)梯度洗 脱。收集各组分再经反复柱 层析，制备薄层层析和重结 晶纯化。
22
（5.18，75.3）
Cytochalasin C
11 27 26 10 3 5 6 12 7 OH 4 9 8 13 1 HN 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
28 29
22
实验结果
O O HO
1
HO
2
OH
O
OH HO
OH
OH
OH O O OH OH
12
28 29
7 OH 4 9 8 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23
22
（3.75，2.46）
（5.87，5.30）
11 27 26 10 3
12
28 29
5 6 7 OH 4 9 8 13 HN 1 21 27' 2 15 28' O 19 O 17 24 O O OH 25 23