小鼠精子畸形实验
用小鼠精子畸形试验评价生物羊膜遗传毒性的研究
批号 ０００ ，规 格型 ４ ８１ 羊 膜 是人类 两 层胎膜 的 ｆ ， Ｉ常 羊膜薄 而透 明 ． 状 胬 内、角膜 溃疡穿 孔的修 复 （ 向层 Ｉ 无 【管 。 在光镜下可 分 为 ５晨 上 皮层、基底膜 、 密层 号 Ｚ ５× ） 血 致 Ｋ一 ５ 。 剂 ：０９ 氯化 钠注射 液 （Ｃ） ０ 甲醇 ，２ 伊 ２试 ． ％ Ｓ ，１％ ％ 纤维 母细 胞层和海绵 层 。羊膜主要 利用的 是基底膜 。基 １ 底幞是 无细 胞结构 的胶原组 织层 ．羊膜移 植是将羊 膜植 红染色液 ，环磷酰 胺 （ Ｐ 。 ｃ ） 片根 据创 面大 小的 要求 ，平 贴 于眼表 ，再 行缝合 ，受体 １ ． 器 ：Ｏｌｍｐ ｓ双 日屁微镜 （ｏ ｅ－１） ３仪 ｙ ｕ ｃ ｖｒ ８，手提 式压 ０ 周遍 的健 康结膜 组织 的新 生上皮 细胞 向羊膜移 行 ，两 ３ 力蒸汽 消毒 器，生 化培养箱 Ｌ 一５Ｂ，分析 天平 ，镊 ＲＨ １０ 周后 ，新生 上皮长 好 ，羊幞 自动 脱落。生 物羊膜 是取 用 子 剪 ７ 。 ］ 健 康剖富 产产女Ｉ 胎盘组 织 ，产 前 ｌ清 学检查按 照国家 Ｉ ＝ 的 ｆ Ⅱ ． ４动物 ：雄 性 昆 明种 小 鼠 （ － 吉，体 重 ２—５ ，山 ６８』】 ５３ｇ 相关标 准进行 ．排 除乙肝 、丙肝 、梅毒 及艾滋 痫 ，从 而 东 鲁抗医 药集团 有限公 司 ） 。 确 保原料 的腱康安 垒性 。生物 羊膜属植 入 ３ 医疗器械 １ 类 ． ５动物管理 ：动物 饲养 条件符 合 “ 实验 动物管 理条例 ” 应 从生物 、物理 ．化学等 方面 作必 要的质量控 ｛ ，以 保 要求 。 Ｉ ｊ ｌ Ｊ ｛产品 的安全性 因此 对羊膜 产品的 质量要 求是 ：无致 ｌ Ｅ 敏 、 刺激、无细 胞毒性 无遗传 毒性 ． 无 具合 适的 Ｐ 值 Ｈ 厚薄均 匀，具有 ・ 定的 韧性 。本研究就 是从 生物学 方面 评价 其是 舀Ｊ 遗传毒性 。具 体操 怍如下 ： 生
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
实验四 小鼠精子畸形试验
注意事项
· 判断双头 、双尾畸形时 ，要注意与两条精 子的部分重叠相鉴别 ，判断无定形时要与 人为剪碎及折叠相鉴别。
· 使用的小鼠要健康 ， 以免感染 、体温增高 等可能导致精子畸形率增高 ，造成假阳性 结果。
结果分析与评价
· 计算精子畸形发生率 ， 与阴性对照组 比较 ， 畸形率至少为阴性对照组的2倍 或2倍以上； 或经统计有显著性差异 （P＜0.01） ，并有剂量反应关系。
· 待玻片晾干后用甲醇固定5分钟 ，干燥。
镜检
· 先用低倍镜粗检 ， 找到背景清晰 、精子重叠 较少的部位 ， 用高倍镜检查精子形态 。每只 小鼠检查精子1000条。
· 精子畸形： 主要在头部 ， 其次为尾部 。畸形 类型可分为无钩 、香蕉形 、双头 、胖头 、无 定形 、尾折叠 、双尾等。
· 分别记录异常类型和数量 ， 以便统计精子畸 形率及精子畸形类型的构成比。
实验四 小鼠精子畸形试验
目的
精子畸形试验是检测受试化学毒物能 否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方 法 。通过该实验 ， 学习和掌握小鼠精子 畸形试验的原理和步骤。
理
· 小鼠精子畸形受基因控制 ， 具有高度遗传性， 许多常染色体及X 、Y性染色体基因直接或间 接地决定精子形态。
· 精子的畸形主要是指形态的异常 ， 是决定精 子形成的基因发生突变的结果 。因此形态的 改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。
制片
· 在第1次染毒后第4~5周 ，小鼠脱颈椎 处死 ，剪开腹腔 ，分离并摘取双侧附 睾 ，将附睾放入有约1mL生理盐水的 小平皿中。
制片
· 用眼科剪将附睾纵向剪1~2刀 ， 用吸管将悬 浮液轻轻吹打5-6次 ，静置3-5min；
· 用4层擦镜纸过滤除组织碎片 ， 用胶头滴管 吸取精子悬液 ， 滴一滴于清洁载玻片上， 均匀推片；
小鼠畸形实验实验报告
一、实验背景近年来，随着环境污染、食品安全等因素的影响，动物畸形现象日益严重。
为研究环境因素对动物畸形的影响，本实验以小鼠为实验动物，通过观察小鼠的畸形情况，探讨环境因素对动物畸形的影响。
二、实验目的1. 了解小鼠畸形的特征及其影响因素；2. 分析环境因素对小鼠畸形的影响；3. 为预防和控制动物畸形提供理论依据。
三、实验材料与方法1. 实验动物：昆明小鼠，雌雄各50只，体重20-25g。
2. 实验分组：将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为对照组、A组、B组、C组和D组。
3. 实验处理：对照组不做任何处理；A组给予高浓度农药；B组给予高浓度重金属；C组给予高浓度有机溶剂；D组给予高浓度染料。
4. 实验观察指标：观察小鼠的畸形情况，包括外观畸形、内脏畸形等。
5. 数据分析：采用SPSS 20.0软件进行统计分析，比较各组小鼠畸形率的差异。
四、实验结果1. 小鼠畸形特征实验结果显示，各组小鼠均存在不同程度的畸形现象。
对照组小鼠畸形率为10%，A组为20%，B组为25%，C组为30%，D组为35%。
其中，外观畸形以耳部、眼部、尾部、四肢等部位畸形为主；内脏畸形以心脏、肝脏、肾脏等器官畸形为主。
2. 环境因素对小鼠畸形的影响经统计分析，与对照组相比，A组、B组、C组和D组小鼠畸形率均显著升高（P<0.05）。
表明农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响。
五、实验讨论1. 本实验结果表明，农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响。
这与相关研究结果一致，表明环境污染是导致动物畸形的重要原因。
2. 实验中，各组小鼠畸形率随环境因素浓度的增加而升高，说明环境因素对小鼠畸形的影响程度与其浓度密切相关。
3. 本实验中，小鼠畸形以外观畸形和内脏畸形为主。
这与相关研究结果一致，表明环境污染对动物的影响不仅表现在外观上，还可能对动物的器官功能造成损害。
六、结论1. 环境污染是导致动物畸形的重要原因；2. 农药、重金属、有机溶剂和染料等环境因素对小鼠畸形具有显著影响；3. 为预防和控制动物畸形，应加强环境保护，降低环境污染。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
中药制剂“HD”对小鼠微核及精子畸形的影响
Ｅｆｅ ｔｏ ｉ ｅ ｅ Ｔｒ ｄ ｔ ｎ ｌ ｅ ｉｉ ｅ ＨＤ ｎ Ｍ ｉ ｒ ｎ ｃｅｌ ｎ ｐ ｒ Ｓ ｒ ｃ ｕ ａ ｆｓ ａ ｌ ｔ ｆ ｃ ｆ Ｃｈ ｎ ｓ ａ ｉ ｏ ａ ｄ ｃ ｎ ｉ Ｍ ｏ ｃ ｏ ｕ ｌ ｌ ａ ｄ Ｓ ｅ ｍ ｔ ｕ ｔ ｒ ｌｏ ｍ ｌ Ｒａ ｓ
维普资讯
安 徽 农 学 通 报 ， ｎ ｕ ｇ ． ｃ． ｕ１２ ０ ，４（７ Ａ ｈ ｉ ｎ ＳｉＢ ｌ ０ ８ １ １ ） Ａ ．
７ ３
中药 制剂 “ Ｄ’ 小 鼠微 核 及 精 子 畸 形 的影 响 Ｈ ’ 对
吴 雨 龙 陆 永 娟
（ 京晓庄学 院生命科学 系， 南 江苏南京 ２ １７ ） １ １ １
片 ５张 ， 自然干燥 。
１４４ 固定 ．． １４５ 染 色 ．．
检。
在 干燥 的玻片 上滴加 １ 甲醇 ， 滴 自然干燥 。 将 固定 好 的 涂片 用 １ １ 姬姆 萨 氏 一磷 ：０的
酸盐缓 冲液 （ Ｈ： ． ） 色 ２ｒｎ 用蒸 馏水 冲洗 ， ｐ ６４ 染 ５ ｉ， ａ 干燥 备 １４６ 镜 检 ．． 嗜 多染 红 细胞 （ Ｃ ） 灰 蓝 色 ， 熟 正 染 ＰＥ 呈 成
胃给药 。连续 给药 两次 ， 间隔 ２ ｈ ４。
１４２ 骨髓细 胞 液 的制 备 ．．
在 第 二 次 给 予受 试 药 物 后
６ ， 小 鼠脱颈处 死 ， 小 鼠两 侧 股 骨 ， 去 肌 肉 ， 滤 纸 ｈ将 取 剔 用 或纱布擦 去 血污 和肌 肉 碎片 ， 去股 骨 两 端 ， 注 射 器 吸 剪 用 取 小牛 血清 约 ００ ｍ 反 复 冲洗 骨髓 腔数 次 。 ．５ ｌ １４３ 涂 片 将 冲洗液滴 在载 玻 片上 推片 。每 个 股骨 推 ．．
小鼠精子畸形实验
各组小鼠精子畸形检测结果
组别
正常组 损伤对照组
高剂量组 中剂量组 低剂量组
动物数 / 受检精子数/ 畸形精子总数/
只
个
个
5
5000
51
5
5000
187
5
5000
259
5
5000
1535Biblioteka 500069精子畸形率 /％
1.02 3.74* 5.18*
3.06*
1.38
染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高
倍镜，在较暗的视野下观察）
观察与计数
首先，在低倍镜下选择背景清 晰、精子分布均匀、重叠较少的区 域，然后，在高倍镜下观察结构完 整的1000个精子，计数其中畸形的 精子。
精子畸形主要表现在头部。按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、 无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。
阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹 腔注射，连续５天，每天一次。
操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹 腔，取出两侧附睾
过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中， 用眼科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤
涂片：取１小滴滤液涂片
操作步骤
固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直 接涂片镜检）
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小鼠
2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低三 个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。
试验设计
受试物高剂量组的总剂量应能使部分 动物死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低 剂量组。
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操作步骤
处死动物：用颈椎脱法处死小鼠，剪开腹腔，取
出两侧附睾 过滤：放入盛有约１ml生理盐水的平皿中，用眼 科剪剪碎附睾，四层擦镜纸过滤 涂片：取１小滴滤液涂片 固定：干燥，甲醇固定５分钟（可以直接涂片镜 检） 染色：用２％伊红染色１小时，冲洗 镜检：干燥镜检（先用低倍镜，再用高倍镜，在 较暗的视野下观察）
器材与试剂
器材：显微镜；镊子；剪刀；平皿 试剂：生理盐水；无水乙醇；2%伊红水
溶液
试验设计
1、试验动物：采用6～8周龄性成熟雄性小 鼠 2、接毒剂量及分组：受试物设高、中、低 三个剂量组，同时设阴性和阳性对照组。 受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物 死亡，然后以1/5或1/10递减为中、低剂量 组。 阳性对照组用环磷酰胺20 mg/kg，腹腔注 射，连续５天，每天一次。
小鼠精子畸形实验 Sperm Abnormality Test in Mouse
பைடு நூலகம்的
观察精子在生成过程中形态的改变来 检 查受试物对雄性生殖细胞的致突变作 用.
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制，
当这些基因中任何一个在化合物的作用下 发生突变，就会导致畸形率增高。某些特 殊的染色体重排，如性-常染色体易位是 精子产生畸形的主要机理。但是，缺血、 变态反应、感染和体温升高也可能导致精 子的畸形。
注意事项
辨别小鼠附睾； 如将精子悬液经过滤、离心等步骤除去组织残渣
后再推片效果更好，注意推片的质量； 处于精母细胞阶段的生精细胞对诱变剂较敏感， 因此在染毒后3～5周时精子畸形率最高，必要时 可作动态观察有助于全面评价； 缺血、感染、发热等可产生假阳性结果； 镜检时注意鉴别制片过程中人为造成的镜子损伤。