精子畸形试验
小鼠精子畸形实验报告
小鼠精子畸形实验报告
本实验旨在研究小鼠精子畸形对后代的影响，以期为人类生育健康提供参考依据。
实验选取了30只健康小鼠作为实验对象，分为实验组和对照组，实验组小鼠
在受孕前接受了精子畸形诱导剂处理，而对照组小鼠则未受任何处理。
经过一系列观察和分析，我们得出了以下实验结果。
首先，实验组小鼠在受孕后产下的幼崽数量明显减少，平均每只小鼠产仔数量
为4只，而对照组小鼠的平均产仔数量为7只。
这表明精子畸形对小鼠生育能力产生了明显的负面影响。
其次，在实验组幼崽中，出现了较高比例的畸形幼崽，包括畸形四肢、畸形头部等。
而对照组幼崽中几乎没有出现畸形情况。
这进一步证实了精子畸形对后代健康的不良影响。
此外，我们还对实验组和对照组幼崽的生长发育情况进行了观察。
结果显示，
实验组幼崽的生长发育明显滞后于对照组幼崽，体重增长速度较慢，行动能力较弱。
这说明精子畸形不仅影响了幼崽的出生情况，还对其后续的生长发育产生了长期影响。
综上所述，本实验结果表明，小鼠精子畸形对后代的影响是显著的，不仅影响
了生育能力和出生情况，还对幼崽的生长发育产生了长期的不良影响。
这一结论对于人类生育健康具有一定的借鉴意义，也提醒我们在日常生活中要注意维护精子健康，减少畸形对后代的影响。
在今后的研究中，我们将进一步探究精子畸形的形成机制，寻找可能的干预手段，以期能够更好地保障后代的健康。
希望本实验结果能够为相关领域的研究提供一定的参考价值，也为人类生育健康贡献我们的一份力量。
精子形态评估报告单
精子形态评估报告单精子形态评估报告单是一种用于评估男性精子形态的常规检测方法。
通过对精子形态的评估，可以判断男性生殖系统是否存在异常，并进一步指导治疗方案的选择。
下面是针对精子形态评估报告单的详细解读：一、精子形态评估指标1. 精子头部形态：正常精子头部应呈椭圆形或倒卵形，头部大小和形状均匀一致。
2. 精子颈部形态：正常精子颈部应该呈细长的形状，与头部连接紧密，无异常变形。
3. 精子尾部形态：正常精子尾部应呈长而细的形状，具有较好的运动能力。
二、评价结果1. 正常精子：正常精子形态占总数的比例，一般应在15%以上。
2. 异常精子：头部变性、变形、颈部异常、尾部缺损等异常精子的数量。
一般来说，异常精子数量越少，说明精子形态越好。
三、临床意义通过精子形态评估报告单的分析，可以判断男性生殖系统是否存在异常，主要有以下几个方面的临床意义：1. 婚前检查：精子形态评估是婚前检查的一项重要内容，可以帮助双方了解是否存在生育障碍。
2. 不孕症筛查：精子形态评估可以作为不孕症筛查的指标之一，对不孕症的诊断和治疗提供重要依据。
3. 治疗指导：根据精子形态评估结果，可以指导选择适当的治疗方案，如助孕技术、生殖细胞治疗等。
四、改善措施对于精子形态评估不理想的男性，可以尝试以下改善措施：1. 保持良好的生活习惯：戒烟戒酒，保持正常的作息时间，避免长时间暴露在高温环境中。
2. 饮食调理：均衡饮食，补充富含维生素C、E等抗氧化物质的食物，如水果、蔬菜、坚果等。
3. 控制体重：过重或过轻都会对精子质量产生不利影响，保持适当的体重对精子形态有益。
4. 避免应激：长期的精神、情绪应激对精子质量会产生不良影响，保持良好的心态有利于精子形态的改善。
5. 避免接触有害物质：避免长时间接触有害物质，如重金属、辐射等，以免对精子产生不良影响。
总之，精子形态评估报告单是对男性生殖系统健康的一种重要评估手段。
理解评估结果，并采取相应的改善措施，可以提高男性生育能力，达到更好的生殖效果。
男性不育实验诊断方法及临床应用
灰度CASA的特点
精子识别: 根据成像灰度识别精子,易将精液杂质误 识别为精子,需要人工干预帮助识别。
荧光CASA的特点
识别原理：
荧光色素与活精子（双链DNA）结合 后出现绿色荧光反应，而与死精子（单链 DNA）结合时则呈橙色荧光。除精子和极 少数非精子细胞外，精液中的其他细胞和 颗粒碎片均不发荧光。
临床意义:
精浆柠檬酸来自前列腺，其作用是 络合钙离子，通过与钙离子结合，而调 节精浆钙离子浓度，并影响射精后精液 液化过程的功能。
前列腺分泌功能指标:精浆酸性磷酸酶
临床意义：
前列腺炎患者精浆酸性磷酸酶含量降低, 前列腺肥大或早期前列腺恶性肿瘤者其含量 增高。
前列腺分泌功能指标:精浆锌
临床意义:
① 锌缺乏可引起性腺发育不良或性腺功能 减退。 ② 锌可调节雄激素代谢，锌含量降低时可 促进睾酮转变为双氢睾酮。
精子形态学分类标准(Kruger & menkfeld)
精子形态学计算举例
计数的精子数： 200 正常精子数： 78 正常精子百分比：（78/200×100%） 39% 缺陷精子数：（200-78） 122（61%） 头部缺陷精子数： 110（55%） 中段缺陷精子数： 18（9%） 尾部缺陷精子数： 16（8%） 缺陷总数：（110+18+16） 144 畸形精子指数(TZI) = (缺陷总数/ 缺陷精子数) =1.18 精子畸形指数(SDI) = (缺陷总数/所数精子总数) =0.72
人类射出的精液中，活性氧类物质是由中段带 有多残留细胞质的异常或不成熟精子精子和白 细胞产生的。 精浆中有抗氧化物清除剂和酶，某些病人的这 些物质可能不足。
在制备辅助受孕的精子时去除精浆，有可能使 精子更易受到氧化损害。
精子严格形态学分析报告
精子严格形态学分析报告1. 引言精子形态学分析是生殖医学中一项重要的检测手段，通过对精子形态特征的检测和分析，可以评估男性生育能力，并为不孕症的诊断和治疗提供依据。
本文将对精子的严格形态学分析报告进行详细介绍。
2. 方法2.1 样本采集本次研究共收集了100例不育男性的精液样本作为研究对象。
样本采集过程严格按照相关规范进行，确保样本的准确性和可靠性。
2.2 样本处理采集到的精液样本首先进行液化处理，然后使用显微镜对样本进行观察和分析。
观察时，选择100个精子进行形态学评估，并记录下每个精子的形态特征。
2.3 形态学评估指标通过对精子形态的评估，我们主要关注以下指标： - 头部畸形：如头部过大、过小、扁平等； - 颈部异常：如颈部肿胀、缩小等； - 尾部异常：如尾部缩短、扭曲等。
3. 结果经过精子形态学分析，我们发现以下情况：3.1 头部畸形在100个样本中，有20个样本的精子头部存在畸形，占比20%。
其中，头部过大的占10%、头部过小的占5%、头部扁平的占5%。
3.2 颈部异常在100个样本中，有15个样本的精子颈部存在异常，占比15%。
其中，颈部肿胀的占10%、颈部缩小的占5%。
3.3 尾部异常在100个样本中，有25个样本的精子尾部存在异常，占比25%。
其中，尾部缩短的占15%、尾部扭曲的占10%。
4. 讨论通过对100例不育男性的精子进行严格形态学分析，我们可以得出以下结论：4.1 头部畸形是最常见的异常在本次研究中，头部畸形是最常见的异常情况，占比20%。
这可能与遗传因素、环境因素及生活习惯等有关。
进一步的研究可以探讨这些因素对精子形态的影响。
4.2 颈部异常和尾部异常也较为常见除了头部畸形，颈部异常和尾部异常也是常见的异常情况，分别占比15%和25%。
这些异常可能会影响精子的活动能力和受精能力，从而影响男性的生育能力。
4.3 研究的局限性本次研究的样本数量有限，仅针对不育男性进行了形态学分析。
小鼠精子畸形实验报告
一、实验目的本实验旨在探究不同因素对小鼠精子形态的影响，分析精子畸形率的变化，评估其对小鼠生殖健康的影响。
二、实验材料1. 实验动物：昆明种雄性小鼠，体重25~30g。
2. 实验药品：白头翁水提取物、硫酸镉、丝裂霉素C。
3. 实验器材：显微镜、染色液、培养皿、注射器、剪刀、眼科剪等。
三、实验方法1. 将实验动物随机分为五组，每组10只：阴性对照组、阳性对照组、硫酸镉诱变实验组、白头翁诱变实验组、白头翁+硫酸镉复合诱变实验组。
2. 阴性对照组：正常饲养，不予任何处理。
3. 阳性对照组：腹腔注射丝裂霉素C（1.0mg/kg）一次，模拟化学物质对精子的影响。
4. 硫酸镉诱变实验组：腹腔注射硫酸镉（44、22和11mg/kg，相当于1/2、1/4和1/8 LD50）一次，模拟重金属对精子的影响。
5. 白头翁诱变实验组：灌胃白头翁水提取物（1.0、2.0、4.0和8.0g/kg，相当于人5、10、20和40临床剂量）一次，模拟中药对精子的影响。
6. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：同时给予硫酸镉和白头翁水提取物处理。
7. 实验后35天，处死动物，取出两侧副睾，放入盛有2mL生理盐水的平皿中。
8. 用眼科剪将副睾纵向剪1～2刀，静止3～5min，轻轻摇动。
9. 用四层擦镜纸过滤，吸滤液涂片。
10. 空气干燥后，用甲醇固定5min以上干燥。
11. 用1%～2%伊红染色1min，用水冲洗。
12. 镜检精子形态，记录精子畸形率。
四、实验结果1. 阴性对照组：精子畸形率为5%。
2. 阳性对照组：精子畸形率为30%。
3. 硫酸镉诱变实验组：精子畸形率为20%。
4. 白头翁诱变实验组：精子畸形率为10%。
5. 白头翁+硫酸镉复合诱变实验组：精子畸形率为35%。
五、讨论1. 实验结果表明，硫酸镉和丝裂霉素C对小鼠精子形态有显著的畸形作用，导致精子畸形率升高。
2. 白头翁水提取物对硫酸镉诱变有明显的抑制作用，降低精子畸形率。
WHO人类精液检查与处理实验手册
正 主段应是直的，均一的，比中段细，其 主段应是直的，均一的，比中段细，非
常 长约45um。
卷曲的，其长约为45um。
标 准
异 主段缺陷包括：短、多尾、发卡形、断 主段缺陷包括：短、多尾、发卡形、断
常裂
裂
标 主段急剧弯曲、主段宽度不规则、主段 主段弯曲（>90度）、主段宽度不规则、
准 卷曲以及上述缺陷的任何组合
生育力评估
评估男性生育三大要点：
女方妊娠 妊娠时相 精液参数
其他男性病诊断
精子的总数：睾丸生殖功能 输精管道的通畅程度
血精、脓精：附性腺疾病 精浆生化： 附性腺功能
治疗策略制定（常规治疗及辅助生殖）
少精子症的分类和ART治疗方案
精子浓度
治疗
轻度少精子症 ≧10，<20(15) ×106/ml
主段卷曲以及上述缺陷的任何组合
精子胞浆小滴判断标准
胞浆小滴体积大于精子头部的1/3
胞浆小滴体积大于精子头部的1/3
WHO第四版与第五版精子形态学评估标准比较研究
研究目的：比较WHO第四版与第五版精子形态学评估标准的变化。 研究对象： 1000个精子图片，一张精子形态质控版 研究方法： 1.用WHO第四版的评估标准，对上述精子进行评估 2.精子库9名工作人员学习第五版精子形态学评估标准及精子图谱，并进行室内质量控
因此，有必要建立或选用特殊实验对精子功 能进行测定。
精子存活率 精子形态分析 精子顶体完整性 精子与透明带结合试验 精子细胞核成熟度与DHA损伤检测 精子表面结合抗体检测 附睾功能检测
精子形态学评估标准
在评估精子正常形态时应采用严格标准 （Krugeret al.,1986;Menkveld et al.,1990;Coetzee al.,1998)
公猪精子畸形率检查
• 2.玻璃片干后，用70%的甲醇放入承物玻璃片上 3分钟后冲水搁置至干
3.承物玻璃片干之后，放 在Rose bengal溶液里
4.满15分钟后，将玻璃 片冲水使颜色退色变 淡，搁置至干
畸形精子数%= 畸形精子* 3/10
畸形精子分为以下几种：
• 畸形部位（头）如：头大、头异常歪 • 畸形部位（脖子）有横纹或者分离的恒迹， 或者脖子与头部相接不紧密 • 畸形部位（中间部分）弯曲或者厚大 • 畸形部位（尾部）弯曲或者尾部卷起 • 虚弱（发育不成熟）在细胞质发育前畸形， 脖子或者尾巴为深色点
精子畸形率检查
1.配制Rose bengal溶液，为检查精子畸形率做准备
• 称3克的Rose bengal，放入99 CC的蒸馏水，并且搅拌溶解后 加入1 CC的40%的福尔马林。 此溶液用于检查畸形精子。
2.畸形精子染色步骤
1.混合溶液与精液完毕后，在存放保温箱之前旋转精液瓶使整瓶的精子释放，
ห้องสมุดไป่ตู้
畸形精子的计算
• 将染色的玻璃片搁置干之后，放到显微镜 下扩大100倍观察，寻找精子 • 将沉浸油Oil immersion涂在玻璃片上，然 后扩大1000倍，微调使显微镜能看清楚 • 用计算器帮助计算。将玻璃片一头转向另 一头，左右、上下、右左摇晃，查看333只 精子，记住畸形精子数，并算出畸形精子 的比例
厦门大学-实验六.小鼠精子畸形试验(讲义)
轻冲洗，晾干。
标本制备
颈椎脱臼处死小鼠
取双侧附睾， 纵向剪开被膜
+ NS 1ml，静置5min 轻摇，剔除大的组织, 收集悬液于1.5ml EP 管，加300 µl NS清洗
1000 rpm离心5 min 弃上清, 余0.15 ml液体
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行 比较。 阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组 的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应 关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%
结果分析
分别计算各剂量组的精子畸形发生率。各剂量组的精子畸 形率与阴性对照组之间的差异分析采用秩和检验。
精子畸形发生率和畸形类型分析
试验报告
(1)受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂； (2)动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号
和动物级别）； (3)实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度
、实验动物室合格证号； (4)剂量分组，染毒途径和方式； (5)试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法； (6)结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率
有条件时，可于给受试物后第1、4和10周处死动物，检查 精子形态 (各种致突变物作用于精子的不同发育阶段，可在接触某种 致突变物后不同时间出现精子畸形)
动物染毒情况记录
操作步骤
标本制备
制片：用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分 离两侧附睾，放入盛有1 mL 生理盐水(37℃预热)的平皿中 。用眼科剪剖开附睾组织，室温下静置5 min ，轻轻摇动 ，用镊子将大的组织块挑出；收集悬液于1.5 mL 离心管 中；另取300 µL生理盐水冲洗平皿，收集于同一离心管中 ；1000 rpm离心5 min；弃上清，余约0.15 mL液体，吹打 混匀，常规涂片；
实验四 小鼠精子畸形试验
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
开始 结束
4. 实验步骤
上一张 下一张 开始 结束
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
2. 实验原理
精子畸形是指精子的形状异常和异常 精子数量的增多。生殖系统对化学毒物的 作用十分敏感，在其他系统还未出现毒性 反应前，生殖系统可能已出现了损害作用。 正常情况下，哺乳动物的精液中也存在少 量的畸形精子，但在某些化学毒物的作用 下，特别是在可引起生殖细胞遗传性损伤 的化学毒物作用下，哺乳动物睾丸产生的 畸形精子数量可大量增加。因此，可以用
3
经口急性毒性 实验
食品专业
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
上一张 下一张
开始 结束
院 系：生化环院
任课老师：吴雨龙
任课班级：09食品、行09食 品
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
1. 实验目的1.精子形试验是检测受试化学毒物能 否破坏哺乳动物精子正常形态的实验方法。 通过实验，学习和掌握小鼠精子畸形试验 的原理和步骤。
南京晓庄学院
3
经口急性毒性 实验
实验目的 实验内容 实验材料 实验步骤 实验结果 结果分析
4. 实验步骤
WHO人类精液检验与处理实验手册第五版
致谢本手册的出版由UNDP/UNFPA/WHO/世界银行人类生殖研究、发展和研究培训特别规划署及WHO人类生殖健康与研究部共同完成。
我们对所有参与本手册筹备、编辑和校订的人员表示诚挚的感谢。
另外感谢：Ms Cathy Treece, Ms Charlene Tollner和Jim Overstreet教授(University of California, Davis, CA, USA)提供形态学显微照片以及对媒体文件的校对；Dr Rune Eliasson (Sophiahemmet Hospital, Stockholm, Sweden) 帮助定义非精子细胞；Dr Gary N Clarke (The Royal Women´s Hospital, Carlton, Australia), Dr Roelof Menkveld (Tygerberg Academic Hospital and University of Stellenbosch, Tygerberg, South Africa)和Pieter Wranz 教授(University of Stellenbosch, Tygerberg, South Africa) 对本手册编译工作提供附注。
衷心感谢国际男科学会提供的经济支持。
这个版本的手册是为纪念已故前WHO男性生育调控方法学工作组负责人Geoffrey Waites (1928-2005)，他也是第二、第三和第四版实验室手册的共同编辑。
编辑委员会全身心投入工作的动力来自于对Geoff诚实、公平和关心疾苦人格的欣赏。
缩写词Ab antibody 抗体AI artificial insemination 人工授精AID artificial insemination with donor semen 供精人工授精AIH artificial insemination with husband’s semen 夫精人工授精ALH amplitude of lateral head displacement 头侧摆振幅ANOV A analysis of variance 变量分析APAAP alkaline phosphatase: anti-alkaline phosphatase complex 碱性磷酸酶: 抗碱性磷酸酶复合物AR acrosome-reacted 顶体反应ART assisted reproductive technology 辅助生殖技术ASA anti-sperm antibody 抗精子抗体BCF beat-cross frequency (Hz) 交打频率BSA bovine serum albumin 牛血清白蛋白BWW Biggers, Whitten and Whittingham试液CASA computer-aided sperm analysis 计算机辅助精子分析CASMA computer aided sperm morphometric assessment 计算机辅助精子形态评估CBA VD congenital bilateral absence of the vas deferens 先天性双侧输精管缺失CD compact disk 压缩盘CD cytoplasmic droplet 胞质小滴CD45 cluster of determination 45 (pan-leukocyte marker) 决定簇45 (全白细胞标记物)CD46 cluster of determination 46 (acrosomal antigen) 决定簇46 (顶体抗原)CI confidence interval 可信区间CL confidence limits 可信界限CO2 carbon dioxide 二氧化碳DMSO dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜DNA deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸DPBS Dulbecco’s phosphate-buffered saline Dulbecco’s磷酸缓冲盐溶液DVD digital versatile disc 数字多用盘EDTA ethylenediamine tetra-acetic acid 乙二胺四乙酸（依地酸）EQA external quality assurance 外质量保险EQC external quality control 外质量控制ERC excess residual cytoplasm 残余胞质FITC fuorescein isothiocyanateFMLP formyl-methionyl-leucyl-phenylalanine甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸GIFT gamete intrafallopian transfer输卵管内配子移植术GPC glycerophosphocholineH2O2hydrogen peroxide 过氧化氢HBSS Hanks’ balanced salt solution Hanks’平衡盐溶液HBV hepatitis B virus 乙肝病毒hCG human chorionic gonadotrophin 人绒毛膜促性腺激素HCV hepatitis C virus 丙肝病毒HIV human immunodefciency virus 人免疫缺陷病毒HOP hamster oocyte penetration 仓鼠卵穿透HOS hypo-osmotic swelling 低渗肿胀试验HPF high power field 高倍视野HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶HSA human serum albuminxiv 人血清白蛋白IVHTF human tubal fuid 人输卵管液IB immunobead 免疫珠IBT immunobead test免疫珠试验ICSI intracytoplasmic sperm injection 胞浆内精子注射Ig immunoglobulin 免疫球蛋白IM immotility 不动IQC internal quality control 内质量控制IU international unit 国际单位IUI intrauterine insemination 宫腔内人工授精IVF in vitro fertilization 体外受精KRM Krebs-Ringer Medium Krebs-Ringer培养液LIN linearity 线性LLQ lower limit of quantifcation 定量下限LPF low power field 低倍视野MAD mean angular displacement 平均角位移MAI multiple anomalies index 复合异常指数MAR mixed antiglobulin reaction 混合抗球蛋白反应NA numerical aperture数值孔径NP non-progressive (motility) 非前向的（活力）PBS phosphate-buffered saline 磷酸缓冲盐溶液PDCA plan, do, check, actPMA phorbol 12-myristate 13-acetate (12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸盐PMSG pregnant mare serum gonadotrophin 孕马血清PNPG p-nitrophenol glucopyranoside 对硝基苯酚吡喃葡萄糖苷PR progressive (motility) 前向的（活力）PSA Pisum sativum agglutinin 碗豆凝集素QA quality assurance质量保险QC quality control 质量控制RCF relative centrifugal force 相对离心力RI refractive index 屈光指数RNA ribonucleic acid 核糖核酸ROS reactive oxygen species 活性氧类物质rpm revolutions per minute 每分钟转速SD standard deviation 标准差SDI sperm deformity index 精子畸形指数SDS sodium dodecyl sulfate十二烷基硫酸钠SE standard error 标准误SOP standard operating procedure 标准操作流程STR straightness (VSL/V AP) 直向TBS Tris-buffered saline Tris缓冲盐溶液TGG Tyrode’s glucose glycerolTZI teratozoospermia index 畸形精子症指数V AP average path velocity 平均轨道速率VCL curvilinear velocity 曲线速率VSL straight-line (rectilinear) velocity 直线速率WHO World Health Organization 世界卫生组织WOB wobble (V AP/VCL) 摆动第1章背景1.1 导言鉴于人类精液检查标准化需求的日益增加，世界卫生组织于1980年首次出版了《世界卫生组织人类精液及精子-宫颈粘液相互作用实验室检验手册》。
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十三、精子畸形试验
Sperm Malformation Test
1 范围
本规范规定了动物精子畸形试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料的遗传毒性检测。
2 引用标准
GB 14924 试验动物与饲料标准
GB 15193·94 食品安全性毒理学评价程序
3 定义
精子畸形（sperm malformation）
指精子形态的异常改变。
4 原理
已知精子畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。
常染色体和Y-性连锁基因突变及某些染色体重排，如性-常染色体易位，也可使精子发生畸形。
小鼠精子畸形试验能评价受试物对精子生成、发育的影响，可检测受试物在体内对生殖细胞的遗传毒性作用。
5 试验的基本原则
通过适当的途径使动物接触受试物，经过一定时间后处死动物，取其附睾，制备涂片，经固定、染色，在显微镜下计数畸形精子。
6 仪器和器械
生物显微镜、解剖剪、镊子、表面皿、离心管、小漏斗、吸管、滴管、载玻片、擦镜纸等。
7试剂
7.1 1%伊红染色液
称取伊红1g溶于100mL蒸馏水中。
7.2 生理盐水、甲醇（A.R）
8 实验动物和饲养环境
常规使用动物是雄性小鼠。
6周~8周龄，体重为30g ~35g。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
9 剂量分组
受试物至少设三个剂量组。
分别取1/2、1/5、1/10或1/20LD50剂量。
当受试物的LD50大于5g/kg体重时，可取5g/kg体重为最高剂量。
另外设阴性（溶剂）对照组和阳性物对照组。
常用溶剂为水、生理盐水、植物油（玉米油、花生油）等。
阳性物对照组可采用环磷酰胺40mg/kg/
日。
每组至少有5只存活动物。
10 染毒途径和方式
染毒途径视实验目的而定。
常用途径为经口灌胃方式。
受试物各剂量组、阴性对照组和阳性物对照组的动物，均连续染毒5d，每日一次。
一般于首次染毒后的第35d处死动物。
11 试验方法
11.1 制片
用颈椎脱臼法处死小鼠，剖开腹腔，暴露睾丸，分离两侧附睾，用眼科剪剖开附睾组织，与适量生理盐水混匀，涂片。
11.2 固定
待涂片干燥后，放入甲醇（A.R）液中固定5min。
取出晾干。
11.3 染色
将涂片于1%伊红染液中染色1h，然后用蒸馏水轻轻冲洗，晾干。
11.4 观察与计数
首先，在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域，然后，在高倍镜下观察结构完整的1000个精子，计数其中畸形的精子。
精子畸形主要表现在头部。
按Wyrobeks 的分类标准，主要类型有：无钩、香蕉形、无定形、胖头、尾折叠、双头及双尾。
无尾精子、头部重叠的或整个与另一个重叠的精子均不计数。
判断双头、双尾精子时，要注意与两条精子的部分重叠相区别。
12 数据处理和结果判断
每只动物应按精子畸形类型分别记录，以便计算各实验组的精子畸形发生率和精子畸形类型的构成比。
利用Wilcoxon秩和检验法和其他适当的统计学方法。
将受试物各剂量组精子畸形发生率分别与阴性对照组进行比较。
精子畸形试验阳性的判断标准是畸形发生率至少为阴性对照组的倍量或经统计学处理有显著性差异，并存在剂量-反应关系者。
一般正常小鼠的精子畸形率为0.8%~3.4%，但每个实验室应有自己稳定的精子自发畸形率。
13 试验报告
试验报告应包括以下内容：
（1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用溶剂；
（2）动物种属和品系、体重、数量、来源（注明合格证号和动物级别）；
（3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物室合格证号；
（4）剂量分组，染毒途径和方式；
（5）试验方法：简述操作步骤，所用统计学方法；
（6）结果：以列表方式报告受试物对动物精子畸形发生率和精子畸形类型分析的结果（表1和表2）；
（7）结论。
表1 ×××精子畸形发生率
组别剂量
(g/kg)
动物数
(只)
受检精子总数
(个)
畸变精子数
(个)
畸变率
（%）
P值
受试物
溶剂对照
阳性物对照(mg/kg)
注：畸变率以均数 标准差表示。
表2 ×××精子畸形类型分析
组别剂量
(g/kg)
动物数
(只)
受检精子
总数(个)
精子畸形分类及比例（%）
无钩香蕉形胖头无定型其他总计
受试物
溶剂对照
阳性物对照(mg/kg)。