腺相关病毒包装操作手册剖析
病毒包装实验整体流程及原理(慢病毒、腺病毒)
广州英思特生物科技有限公司为您提供高效快速的病毒包装实验外包服务，病毒感染细胞实验整体流程及原理目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。
1、病毒的种类病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒1.1慢病毒1.1.1原理慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种。
构建的siRNA/miRNA慢病毒载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比，一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞，并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组，进行长时间的稳定表达。
1.1.2特点1）直接包装成为假病毒颗粒，对分裂和非分裂细胞均有感染作用，适合RNAi研究和体内实验中难于转染的细胞(比如神经元细胞、干细胞或其它原代细胞)。
?2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。
3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。
4）无需任何转染试剂，操作简便。
5）可以根据客户需要制备多种标记。
1.1.3慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒RNAi干扰载体的构建和质粒纯化提取。
2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。
3）培养48hrs-72hrs左右，收集含有病毒的上清培养液。
4）病毒的纯化和浓缩。
5）分装、-80 ℃保存。
6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
1.2、腺病毒1.2.1原理腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。
有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。
这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。
腺相关病毒包装原理及步骤
腺相关病毒包装原理及步骤采用第2代重组腺相关病毒包装系统制备病毒颗粒。
该包装系统包含3个质粒和一株包装细胞株。
1）1个转移质粒：含有两侧有AAVITR序列的转基因表达盒子。
2）1个Rep-cap表达质粒：表达Rep和Cap两个基因。
3）1个辅助质粒：包含来自腺病毒的一些基因（E4、E2a和VA）。
这些腺病毒的基因可以促进AAV基因组的复制。
4）1株含有腺病毒E1基因的293细胞。
野生型腺相关病毒基因组是一条长约4.7 kb的线性单链DNA （ssDNA）分子。
基因组两末端各有一个145 nt长的Inverted Terminal Repeat (ITR)，ITR序列是对称的，自己能形成发夹结构。
病毒感染细胞后，释放出单链病毒基因组，末端发夹结构促使腺相关病毒以单链基因组为模板复制互补链，形成双链DNA。
野生型病毒只表达2个基因：rep (replication) 和cap (capsid)，Rep编码非结构蛋白，Cap编码结构蛋白。
腺相关病毒基因组不编码polymerase，基因组DNA的复制需要用到宿主细胞表达的polymerase。
将基因组上的Rep和Cap基因删除，克隆到质粒上，然后将目的基因克隆在两个ITR 之间，这个质粒就成为转移质粒。
而Rep和Cap基因被克隆到另外一个质粒上，成为Rep-cap表达质粒。
除了Rep-cap表达质粒，还需要一个辅助质粒。
这个辅助质粒表达腺病毒的一些基因（E4、E2a和VA），这些腺病毒基因可以促进AAV基因组的复制。
除了3个质粒外，腺相关病毒包装系统还需要一株表达腺病毒E1基因的293细胞。
每次包装重组腺相关病毒，辅助质粒均固定不变，只要血清型不变，Rep-cap质粒也是相对固定，变化的是编码目的基因的转移质粒。
病毒包装实验整体规程及原理(慢病毒、腺病毒)
广州英思特生物科技有限公司为您提供高效快速的病毒包装实验外包服务，病毒感染细胞实验整体流程及原理目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。
1、病毒的种类1.11.1.1体，一方面1.1.21）研。
? 2）可以通过简单方式，在短时间内获得稳定表达特定基因的多种细胞株。
3）可用于基因敲除、基因治疗和转基因动物研究。
4）无需任何转染试剂，操作简便。
5）可以根据客户需要制备多种标记。
1.1.3慢病毒包装简要流程：1）含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化提取。
2）慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。
3）培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。
4）病毒的纯化和浓缩。
5）分装、- 80 ℃保存。
6）滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
1.21.2.1达E11.2.21）2）3）4）5）1.2.3腺病毒包装简要流程1）构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体2）采用 PacI 消化纯化的质粒。
3）消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。
4）将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。
5）分装，-80℃保存。
1.3、慢病毒和腺病毒的比较2、构建目的基因到载体2.1构建手段一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。
1）如果原始质粒与载体有匹配酶切位点，采用相应的内切酶切下相应片段，回收并连接到载体，酶切，并测序鉴定DNA分子。
质粒在宿主细胞体内外都可复制。
通过个些特性，人们可以把一些目的DNA片断构建在质粒中，通过转化入大肠杆菌中，利用选择培养基来筛选从而不断的复制，来得到目的产物。
3、质粒DNA在大肠杆菌里转化连接上目的基因的质粒转化大肠杆菌是为了让目的基因在大肠杆菌里扩增，然后提取质粒，以下是质粒DNA在大肠杆菌里转化的三步骤。
3.1大肠杆菌感受态细胞的制备30min2）离心管放到42℃保温90s3）冰浴2min4）每管加800ulLB液体培养基，37℃培养1h（150r/min）5）取适当体积（100ul）的复苏细胞，涂布在选择性培养基上，正置6）倒置平皿37℃，12~16h，出现菌落3.3质粒提取步骤1）取1~4ml在LB培养基中培养过夜的菌液，12000转离心1min，弃上清一次。
腺相关病毒（AAV）包装技巧
腺相关病毒（AAV）包装技巧上⽂已经介绍了腺相关病毒的基础知识，具有如此多优点、功能如此强⼤的腺相关病毒是如何⽣产的？本⽂将为⼤家揭开腺相关病毒⽣产的神秘⾯纱。
腺相关病毒⽣产流程⼤致可分为基因克隆、细胞转染、收毒、病毒纯化、滴度检测等步骤，具体步骤我们下⽂分解？怎么可能，下⾯就是腺相关病毒⽣产流程。
腺相关病毒重组克隆载体构建1）根据订单不同选择不同的载体，在此以⼈源基因克隆为例。
2）Vigenebio 公司的 AAV 载体与我们的⼈源 ORF （注：维真⽣物拥有18000⼈源cDNA ORF克隆，可以最快的时间克隆到载体）库中的穿梭质粒的多克隆位点相兼容，通过酶切，连接，转化的⽅式将基因亚克隆进⼊ pAV-FH AAV 载体，得到阳性克隆之后进⾏酶切跑胶验证及测序以确认插曲⽚段的正确性。
细胞冻存流程1) 按照培养细胞流程，将细胞吹下来加⼊ 50ml 离⼼管中， 800g 离⼼5min。
2) 配制冻存液，90% ⾎清，10% DMSO，混匀。
3) 离⼼后去上清，将配制的冻存液加⼊，将细胞吹匀4) 取上述溶液 1ml 分⾄ 1.5ml 细胞冻存管中，做好标记和⽇期。
5) 放⼊装有异丙醇的冻存盒中，放⼊-80度冰箱过夜。
（冻存盒要提前⼀天从冰箱中拿⾄室温，使异丙醇的温度达到室温，每次冻存前确保异丙醇的加⼊量在刻度线上）。
6) 第⼆天将冻存盒放⼊液氮或-150℃冰箱中。
细胞复苏流程1) 10cm 培养盘中加 10cm 新鲜 DMEM 培养基，放培养箱预热⾄ 37℃。
2) 从液氮中取出冷冻管，迅速投⼊37 ℃～38℃⽔浴中，使其融化（1-2 分钟左右）。
3) 待细胞冻存管中溶液尚未完全融化时加⼊预热的培养盘中。
4) 摇晃均匀，放培养箱培养。
5) 4h后待细胞完全贴壁后更换新鲜培养基（除去冻存液中 DMSO 对细胞的毒害作⽤。
也可在第 3步中 800g 离⼼5min，除去培养基后再悬浮细胞添加⾄新鲜预热的 DMEM 细胞培养⽫中）。
腺相关病毒操作手册--汉恒生物
汉恒生物科技(上海)有限公司 400‐092‐0065 1汉恒生物---腺相关病毒操作手册一、腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector ，AAV ）简介腺相关病毒属微小病毒科( parvovirus)，为无包膜的单链线状 DNA 病毒。
AA V 的基因组约 4700bp ，包括上下游两个开放读码框架(ORF)，位于分别由 145 个核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。
基因组中有 3 个启动子(P5、P19 和 P40) 和 2 个开放阅读读框(ORF)，rep 和 cap ，如图 1 所示。
rep 编码 4 个重叠的多功能蛋白，即 Rep78、Rep68、Rep52 和 Rep40，其中 Rep78 与 Rep68 参与 AA V 的复制与整合，Rep52 和 Rep40 具有解螺旋酶和 ATP 酶活性，与 Rep78、Rep68 共同参与单链基因组的复制；cap 编码的 VP1、VP2、VP3是装配成完整病毒所需要的衣壳蛋白，它们在 AA V 病毒整合、复制和装配中其重要作用。
图 1. AA V 基因组结构二、腺相关病毒的优点1. 安全性高：迄今从未发现野生型A A V 对人体致病，重组A A V 基因组序列上去除了大部分的野生型A A V 基因组元件，进一步保证了安全性；2. 免疫原性低：AA V2 的基因组仅 4681 个核苷酸，便于用常规的重组 DNA 技术进行操作，而且进行动物实验时造成的免疫反应小；3. 宿主范围广：能感染分裂细胞和非分裂细胞；4. 表达稳定：能介导基因的长期稳定表达；5. 物理性质稳定：在60℃不能被灭活，能抗氯仿；三、重组腺相关病毒载体系统简介汉恒生物科技(上海)有限公司 400‐092‐0065 2AAV 是一种复制缺陷型微小病毒，其增殖复制需要腺病毒或疱疹病毒的辅助。
AAV 无辅助病毒系统（AAV Helper-Free System ）可以在无辅助病毒的条件下生产出重组腺相关病毒。
腺相关病毒操作手册
腺相关病毒操作手册一、腺相关病毒（Adeno-Associated Viral Vector，AAV）简介腺相关病毒属微小病毒科(parvovirus)，为无包膜的单链线状DNA病毒。
AA V的基因组约4700bp，包括上下游两个开放读码框架(ORF)，位于分别由145个核苷酸组成的2个反向末端重复序列(ITR)之间。
基因组中有3个启动子(P5、P19和P40)和2个开放阅读读框(ORF)，rep和cap，如图1所示。
rep编码4个重叠的多功能蛋白，即Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，其中Rep78与Rep68参与AA V的复制与整合，Rep52和Rep40具有解螺旋酶和ATP酶活性，与Rep78、Rep68共同参与单链基因组的复制；cap编码的VP1、VP2、VP3是装配成完整病毒所需要的衣壳蛋白，它们在AA V病毒整合、复制和装配中其重要作用。
图1.AA V基因结构二、腺相关病毒的优点1.安全性高：迄今从未发现野生型AA V对人体致病，重组AA V基因组序列上去除了大部分的野生型AA V基因组元件，进一步保证了安全性；2.免疫原性低：AA V2的基因组仅4681个核苷酸，便于用常规的重组DNA技术进行操作，而且进行动物实验时造成的免疫反应小；3.宿主范围广：能感染分裂细胞和非分裂细胞；4.表达稳定：能介导基因的长期稳定表达；5.物理性质稳定：在60℃不能被灭活，能抗氯仿；（汉恒--AAV包装）三、重组腺相关病毒载体系统简介AAV是一种复制缺陷型微小病毒，其增殖复制需要腺病毒或疱疹病毒的辅助。
AAV无辅助病毒系统（AAV Helper-Free System）可以在无辅助病毒的条件下生产出重组腺相关病毒。
在AAV Helper-Free System中，生产具有感染性的AAV病毒颗粒所需的腺病毒基因产物（如：E2A，E4等基因）大部分由pHelper质粒提供，其余的腺病毒基因产物由稳定表达腺病毒E1基因的AAV-293宿主细胞提供。
腺病毒包装操作手册
汉恒重组腺病毒操作手册目录腺病毒安全使用和注意事项腺病毒储存与稀释的注意事项一、整体实验流程二、实验材料三、腺病毒包装和浓缩四、重组腺病毒滴度（PFU）的测定五、重组腺病毒感染目的细胞六、重组腺病毒用于动物实验附1：汉恒生物腺病毒载体附2：腺病毒感染细胞最佳MOI的摸索（表达荧光的病毒） 附3：汉恒生物常见三种病毒感染目的细胞比较腺病毒安全使用和注意事项➢腺病毒安全使用注意事项（*非常重要*）1) 腺病毒相关实验请在生物安全柜（BL-2级别）内操作。
2) 操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。
3) 操作病毒时需要特别小心病毒溅出。
如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加 1%的SDS溶液擦拭干净。
4) 接触过病毒的枪头、离心管、培养板及培养瓶请用84消毒液浸泡后统一处理。
5) 如实验过程中需要离心，应使用密封性好的离心管，必要时请用封口膜封口后离心。
6) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌后处理。
7) 实验完毕后请用香皂清洗双手。
➢腺病毒储存与稀释的注意事项1）腺病毒的储存收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长期保存请分装后放置于 -80 ℃ 。
注：a.反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融会使病毒滴度降低10%~50%），因此在病毒使用过程中尽量避免反复冻融。
汉恒生物对病毒已进行分装（200 μl/tube），收到后请直接放置-80℃冰箱保存即可。
b.若病毒储存时间超过6个月，汉恒生物建议在使用前重新测定病毒滴度（参见附表2-慢病毒滴度测定方法）。
2）腺病毒的稀释需要稀释病毒时，请将病毒取出置于冰浴融解后，使用PBS或培养目的细胞用的无血清培养基(含血清或含双抗不影响病毒感染)混匀分装后置于 4℃保存(一周内使用完最佳)。
重组腺病毒是一种复制缺陷的腺病毒载体系统，在基因治疗、基础生命科学研究等领域被广泛应用。
腺相关病毒包装操作手册剖析
一、AAV 安全使用注意事项（*非常重要！！！*）
1) AAV 相关实验请在生物安全柜（BL-2 级别）内操作。 2) 操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。 3) 操作病毒时特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇
加 1%的 SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用 84 消毒 液浸泡后统一处理。 4) 如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。 5) 动物注射操作请在生物安全柜内（BL-2 级别）完成。 6) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。 7) 实验完毕用洗手液清洗双手。 二、AAV 储存和稀释注意事项 1. AAV 的储存 收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长 期保存请分装后放置于-80℃。 注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融病毒滴度会降低 10%-50%），因此在病毒使用过程中 应尽量避免反复冻融。汉恒生物已对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后请直接放置-80℃保存即 可。
Arch3.0-EYFP pHBAAV-CMV-DIO-
hCHETA-EYFP pHBAAV-hSyneNpHR3.0-EYFP pHBAAV-hSynhChR2(H134R)-mcherry
启动子及其特点
CAG（人巨细胞病毒 启动子 CMV 和鸡 beta-actin 嵌合型启 动子），广谱，强
CMV（人巨细胞病毒启动 子），广谱，强
特异启动子），强
标记基因 GFP GFP GFP
是否 Cre 依赖 是
否 否
CAG（CMV 和鸡 beta-
Gq-
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hCHETA-EYFP pHBAAV-CMV-DIO-
eNpHR3.0-EYFP pHBAAV-CMV-DIOhChR2(H134R)-mcherry pHBAAV-CMV-DIO-
ArchT-EYFP pHBAAV-CMV-DIOC1V1 (t/t)-TS-mcherry pHBAAV-CMV-DIO-
EYFP
否
红光 激活
pHBAAV-hSyn-C1V1(t/t)-TS-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-hSyn-Arch3.0抑制
EYFP
EYFP
否
激活
pHBAAV-hSyn-DIOhCHETA-EYFP
EYFP
否
抑制
pHBAAV-GFAPeNpHR3.0-EYFP
EYFP
否
pHBAAV-GFAP激活
否
circRNA 过
pHBAAV-CMV-
1.2 kb
CMV，广谱，强
ZsGreen
否
表达
crRNA-EF1-ZsGreen
pHBAAV-gRNA-
在体敲除
gRNA
U6
saCas9
无
否
2) 汉恒生物 AAV 光遗传学工具现货列表（表 2）
载体 类型 抑制
激活
抑制 红光 激活 抑制
激活
抑制
激活
抑制 红光 激活 抑制
特异启动子，强
标记基因 GFP GFP GFP
是否 Cre 依赖 是
否 否
CAG（CMV 和鸡 beta-
Gq-
pHBAAV-CAG-DIO-
actin 嵌合型启动子），广 mCherry
是
DREADD hM3D(Gq)-mCherry
谱，强
CAG（CMV 和鸡 beta-
Gi-
pHBAAV-CAG-DIO-
腺相关病毒（AAV）操作手册
目录
一、 AAV 安全注意事项 二、 AAV 储存和稀释注意事项 三、 AAV 介绍 四、 汉恒生物 AAV 产品服务及载体信息与现货列表 五、 AAV 整体实验流程 六、 实验材料 七、 AAV 载体构建 八、 AAV 包装 九、 AAV 收集和纯化 十、 AAV 滴度测定 十一、 AAV 感染细胞测试 十二、 AAV 用于动物实验（重磅干货，五星推荐） 十三、 案例分享
4) 汉恒生物 AAV-mRFP-GFP-LC3 自噬流监测工具（表 4）
载体 类型 双标 单标
载体名称
pHBAAV-mRFP-GFP-LC3 pHBAAV-GFP-LC3
启动子及其特点
CMV，广谱，强 CMV，广谱，强
标记基因
mRFP/GFP GFP
是否 Cre 依赖 否 否
五、整体实验流程（图 2）
hSyn（人源成熟神经元特 异启动子），中强度
标记基因 EYFP
mcherry EYFP
mcherry EYFP EYFP EYFP
mcherry EYFP
mcherry EYFP EYFP EYFP
mcherry
是否 Cre 依赖 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 是 否 否
抑制
pHBAAV-hSyn-ArchTEYFP
pHBAAV-CMV-MCSEF1-ZsGreen
pHBAAV-CAG-MCST2A-ZsGreen
pHBAAV-CAG-MCST2A-mcherry
pHBAAV-CAG-DIOMCS-T2A-ZsGreen pHBAAV-CAG-DIOMCS-T2A-mCherry pHBAAV-hsyn-MCS-
是否 Cre 依赖 否 否 否 否 是 是 否 否 否 否
pHBAAV-GFAP-T2A-
GFAP，星形胶质细
1.6 kb
EGFP
否
EGFP
胞，中强度
干扰
pHBAAV-U6-MCSCMV-ZsGreen
pHBAAV-U6-CMVmCherry
shRNA shRNA
U6
ZsGreen
否
U6
mcherry
否
激活
pHBAAV-GFAPhCHETA-EYFP
EYFP
否
抑制
pHBAAV-CaMKIIeNpHR3.0-EYFP
EYFP
否
pHBAAV-CaMKII激活
hChR2(H134R)-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-CaMKII-
抑制
EYFP
否
ArchT-EYFP
CaMKII（兴奋性经元神经
启动子及其特点
CMV，广谱，强
CMV，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强
CAG，广谱，强 hSyn，成熟神经
元，中强度 hSyn，成熟神经
元，中强度 CamkII，兴奋性经元 神经特异启动子，强 CamkII，兴奋性经元 神经特异启动子，强
标记基因 ZsGreen ZsGreen ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry ZsGreen mcherry
激活
抑制
激活
载体名称
pHBAAV-CAG-DIOeNpHR3.0-EYFP
pHBAAV- CAG -DIOhChR2(H134R)-mcherry
pHBAAV- CAG -DIOArchT-EYFP
pHBAAV- CAG -DIOC1V1 (t/t)-TS-mcherry pHBAAV- CAG -DIO-
附录 1 附录 2
一、AAV 安全使用注意事项（*非常重要！！！*）
1) AAV 相关实验请在生物安全柜（BL-2 级别）内操作。 2) 操作病毒时请穿实验服，佩戴口罩和手套，尽量不要裸露双手及手臂的皮肤。 3) 操作病毒时特别小心病毒溅出。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用 70%乙醇
加 1%的 SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头、离心管、培养板、培养液请用 84 消毒 液浸泡后统一处理。 4) 如需要离心，应使用密封性好的离心管，如有必要请用封口膜封口后离心。 5) 动物注射操作请在生物安全柜内（BL-2 级别）完成。 6) 病毒相关的废弃物需要特殊收集，统一经高温灭菌处理。 7) 实验完毕用洗手液清洗双手。 二、AAV 储存和稀释注意事项 1. AAV 的储存 收到病毒液后若在短期内使用，可将病毒放置于 4℃保存（一周内使用完最佳）；如需长 期保存请分装后放置于-80℃。 注：a．反复冻融会降低病毒滴度（每次冻融病毒滴度会降低 10%-50%），因此在病毒使用过程中 应尽量避免反复冻融。汉恒生物已对病毒进行了分装（200 l/tube），收到后请直接放置-80℃保存即 可。
图 1、 AAV2 基因组结构示意图。 四、汉恒生物 AAV 产品服务及载体信息与现货列表 1. 汉恒 AAV 产品分类：
常规基因的过表达和干扰定制（载体列表见“七、载体构建”部分）； 组织特异性启动子过表达定制（载体列表见“七、载体构建”部分）； 常规启动子和组织特异性启动子驱动的 AAV-Cas9 定制； AAV 介导的光遗传、化学遗传载体现货及改造服务等（见表 1）； 双标、单标 LC3 自噬流监测工具（见表 2）； 组织特异性 AAV-DIO 载体的定制（原理见附件 2）。 2. 汉恒 AAV 产品特点：
hChR2(H134R)-mcherry
mcherry
否
pHBAAV-GFAP-ArchT-
抑制
EYFP
否
EYFP
GFAP（星形胶质细胞特异
红光 激活
pHBAAV-GFAPC1V1 (t/t)-TS-mcherry
启动子），中强度
mcherry
否
抑制
pHBAAV-GFAPArch3.0-EYFP
EYFP
T2A-ZsGreen pHBAAV-hsyn-MCS-
T2A-mCherry pHBAAV-CamkII-MCS-
T2A-ZsGreen pHBAAV-CamkII-MCS-
T2A-mCherry
可插入片段 大小
1.6 kb 1.2 kb 1.5 kb 1.5 kb 1.2 kb 1.2 kb 1.6 kb 1.6 kb 1.6 kb 1.6 kb
actin 嵌合型启动子），广 mCherry
是
DREADD hM4D(Gi)-mCherry
谱，强
Gq-
pHBAAV-hSyn-DIO- hSyn（人源成熟神经元特
mCherry
是
DREADD hM3D(Gq)-mCherry
异启动子），中强度
Gi-
pHBAAV-hSyn-DIO- hSyn（人源成熟神经元特
红光 激活
pHBAAV-CaMKIIC1V1 (t/t)-TS-mcherry
特异启动子），强
mcherry
否
抑制
pHBAAV-CaMKIIArch3.0-EYFP
EYFP
否
激活
pHBAAV-CaMKIIhCHETA-EYFP
EYFP
否
3) 汉恒生物 AAV 化学遗传学工具现货列表（表 3）
载体类型
安全-AAV 不参与任何疾病的发生，已经用于临床疾病的治疗；
高效-病毒滴度高达 1013 以上，组织感染能力超强；
表达周期久-AAV 免疫原性超低，基因持续表达半年以上；
最全血清型-拥有全部 12 种血清型和一系列突变体亚型，几乎可以感染所有的组织
和脏器；
组织特异性-拥有 DIO 元件载体系统和最全的组织特异性启动子工具箱，如心脏、