基因工程09生物技术参考
基因工程与生物技术应用
基因工程与生物技术应用基因工程和生物技术是现代生物科学领域中的重要分支，它们通过改变生物体基因组的结构和功能，开创了许多新的研究领域和应用前景。
基因工程技术的发展不仅有助于在农业、医学和环境保护等各个方面取得突破性进展，还为人类社会带来了巨大的经济和社会效益。
一、基因工程在农业领域的应用在农业领域，基因工程技术被广泛应用于作物改良和动植物疾病防治。
通过转基因技术，科学家们可以将具有特定功能的基因导入到农作物中，使其具备耐病虫害、耐逆境、提高产量等优良性状。
例如，转基因水稻通过导入抗虫基因，大大降低了对农药的依赖，减轻了农民的负担，同时也减少了农药对环境的污染。
二、基因工程在医学领域的应用在医学领域，基因工程技术被广泛应用于基因治疗、药物研发和诊断技术等方面。
通过基因治疗，研究人员可以矫正遗传性疾病引起的基因突变，为患者提供有效的治疗方法。
此外，基因工程技术还帮助开发了许多新型药物，如蛋白质药物、基因制药等，这些药物可以更精准地作用于靶标，提高疗效，减少副作用。
三、基因工程在环境领域的应用基因工程技术在环境领域的应用主要集中在生物修复和环境监测上。
通过基因工程技术，科学家们可以改造一些具有特殊功能的微生物，使其能够在环境中分解有毒有害物质，从而实现对环境的修复。
此外，基因工程还可以用于生物传感器的开发，通过监测生物体内外的基因表达来判断环境中有害物质的浓度和分布情况。
综上所述，基因工程和生物技术的应用范围十分广泛，不仅在农业、医学和环境领域发挥着重要作用，还对经济发展和社会进步产生了深远影响。
随着技术的不断突破和创新，我们可以期待基因工程和生物技术在未来的进一步发展和应用，为人类带来更多的福祉。
基因工程与生物技术
基因工程与生物技术基因工程和生物技术是现代生物科学领域的两个重要分支，通过对生物体的基因进行改造和利用，可以为人类社会带来巨大的进步和发展。
本文将介绍基因工程和生物技术的基本概念、应用领域和未来发展方向。
一、基因工程基因工程是指通过对生物体的基因进行编辑和改造，实现遗传信息的转移和改变。
它主要包括基因的克隆、转移和表达等技术。
通过基因工程技术，可以实现对目标物种的基因组进行精确改造，从而产生具有特定目标性状的生物种群。
基因工程技术已被广泛应用于医学、农业、环境保护等领域。
1.1 医学应用在医学领域，基因工程技术为疾病的诊断和治疗提供了新的途径。
通过基因工程技术，科学家可以将人类基因中的缺陷基因进行修复或替换，实现基因治疗。
目前，基因工程技术已成功应用于遗传病的治疗，如囊状纤维化等。
此外，基因工程技术还被用于制造新型药物，如重组蛋白和抗体药物等。
1.2 农业应用在农业领域，基因工程技术为农作物的育种和病虫害的防治提供了新的手段。
通过将具有抗病虫害或耐逆性的基因导入农作物中，可以提高作物的产量和质量，降低农药的使用量。
目前，转基因作物已广泛种植，如转基因水稻、玉米等。
1.3 环境保护基因工程技术还可以应用于环境保护领域。
通过利用微生物的代谢能力，可以实现对环境中有害物质的降解和清除。
此外，基因工程技术还可以用于生物能源的开发和利用，如利用微生物合成生物柴油等。
二、生物技术生物技术是指利用生物体、细胞和分子等进行实验室操作和生物制造的技术。
它涉及生物工程、生物化学、分子生物学等多个学科领域。
生物技术可以用于生物制药、生物能源和环境保护等方面。
2.1 生物制药生物技术在生物制药领域发挥着重要作用。
通过基因工程技术，可以将具有生物活性的基因导入真核细胞或细菌中，使其产生目标蛋白。
这些蛋白可以用于制造新型药物，如生长因子、细胞因子和抗体药物等。
2.2 生物能源生物技术也在生物能源领域具有广泛应用前景。
通过利用微生物的合成能力，可以实现对生物质的降解和转化，生产生物柴油、生物乙醇等可再生能源。
基因工程课后习题答案
基因工程课后习题答案基因工程课后习题答案基因工程是一门涉及生物学、遗传学和生物技术的综合学科，它的发展和应用在医学、农业、环境保护等领域具有重要意义。
在学习基因工程的过程中，我们常常会遇到一些习题，下面是一些常见的基因工程课后习题及其答案，希望能对大家的学习有所帮助。
1. 什么是基因工程？基因工程是利用生物技术手段对生物体的基因进行操作和改变的过程。
它包括了基因的克隆、重组、转染和编辑等技术，旨在实现对基因组的精确控制和改造。
2. 请简要介绍基因克隆的步骤。
基因克隆是指将感兴趣的基因从一个生物体中复制并插入到另一个生物体中的过程。
其步骤主要包括：DNA提取、DNA片段的切割、载体DNA的准备、DNA片段的连接、转化和筛选等。
3. 什么是重组DNA技术？重组DNA技术是指将来自不同生物体的DNA片段进行切割，然后通过连接酶将其重新组合成新的DNA分子的过程。
重组DNA技术的应用广泛，可以用于基因克隆、基因表达、基因治疗等领域。
4. 请简要介绍PCR技术。
PCR（聚合酶链反应）是一种体外扩增DNA的技术。
它通过不断重复DNA的变性、退火和延伸等步骤，可以在短时间内大量复制目标DNA序列。
PCR技术在基因工程中被广泛应用于基因克隆、基因检测和DNA测序等方面。
5. 什么是基因编辑技术？基因编辑技术是指通过直接对基因组进行修改，实现对目标基因的精确编辑和改造的技术。
目前最常用的基因编辑技术是CRISPR-Cas9系统，它可以实现高效、精确和经济的基因编辑，对于研究基因功能和治疗基因相关疾病具有重要意义。
6. 基因工程在医学领域有哪些应用？基因工程在医学领域的应用非常广泛，包括基因治疗、药物生产、疫苗研发等方面。
例如，通过基因工程可以将治疗性基因导入患者体内，用于治疗遗传性疾病和癌症等疾病；还可以利用基因工程技术生产重组蛋白药物，如胰岛素和生长激素等。
7. 基因工程在农业领域有哪些应用？基因工程在农业领域的应用主要包括转基因作物的培育和农业有害生物的控制。
生物技术-基因工程篇
质粒在宿主细胞中的复制有两种类型
严密型质粒：复制需要蛋白质合成和DNA聚合酶 Ⅲ 的存在，它的复制与宿主细胞的增殖密切相关，每个 宿主细胞内只有1~5个严密型质粒。
松弛型质粒：复制需要DNA聚合酶Ⅰ，可以在没有 蛋白质合成的情况下继续复制，每个宿主细胞内可存 有10~200个以上的松弛型质粒，在细胞蛋白质合成及 染色质复制停止的情况下，可继续大量扩增至上千份。
1、化学转化法
受体细胞经一定的化学作用后，细胞膜通透性增加， 处于感受态，称之为感受态细胞（Competent cells）。
Cacl2法：受体菌（如大肠杆菌 E-coli）在低温下（0℃）被
置于低渗的Cacl2溶液中，菌体膨胀成球形。转化体系中的 DNA与Ca2+形成羟基钙磷酸复合物，粘附于细胞表面，之后
切点间的片段可以被外源性DNA替代。
2）M13噬菌体（M13 phage）
a. M13噬菌体基因的结构及生活史特点 •单链线性DNA分子，长约6500个核苷酸； •感染大肠杆菌后，单链线性DNA分子可转变成 双链复制型(RF)。从大肠杆菌中分离出双链复制 型的M13还可作为克隆双链DNA的载体； •大肠杆菌被感染后，并不死亡，只是生长缓慢， 而新的噬菌体被释放到菌体外。 •基因组中有一段长约507个核苷酸的非必需区 (IS)，可以插入外源性DNA。
工具酶
限制性核酸内切酶(restriction endonuclease )
◇能识别DNA分子内部的特异的对称序列,水解磷 酸酯键，切断分子,水解磷酸二酯键，产生DNA片段 的5′端为P，3 ′端为—OH。
◇ 识别序列的特点 ①专一；②常由4~6个碱基组成； ③具有回文序列
BamH 1 酶-GGATCC-CCTAGG-
常识考点生物技术的四大工程
生物技术的四大工程是指基因工程、生物制药、农业生物技术和环境生物技术。
这些工程在当代生物科技领域具有重要的地位和广泛的应用。
本文将从引言、概述、正文内容、总结等部分详细阐述这四大工程的相关知识。
引言：生物技术是指利用细胞、生物体以及生物分子进行研究和创新的技术，它具有广泛的应用领域，如医学、农业、环保等。
而生物技术的四大工程是在生物技术领域中应用最为广泛且影响最大的四个重要分支。
这四大工程是基因工程、生物制药、农业生物技术和环境生物技术。
概述：1.基因工程（Geneticengineering）基因工程是指通过改变和重组生物体的遗传物质来实现特定目的的技术。
它涉及到DNA分子的提取、修饰和重新组合。
基因工程的应用包括基因治疗、基因工艺和转基因技术等。
小点详述：（1）基因工程的原理和方法；（2）基因工程在医学领域的应用；（3）基因工程在农业领域的应用；（4）基因工程在工业生产中的应用；（5）基因工程的伦理与社会问题。
2.生物制药（Biopharmaceuticals）生物制药是指利用生物技术生产药物的过程。
这些药物是以细胞、组织和生物分子为基础的。
生物制药工程包括生物反应器设计、工艺优化和纯化技术等。
小点详述：（1）生物制药的发展历程；（2）生物制药的原理和流程；（3）生物制药在医学领域的应用；（4）生物制药的质量控制；（5）生物制药的发展前景。
3.农业生物技术（Agriculturalbiotechnology）农业生物技术是指利用生物技术手段提高农作物和动物的产量和质量的技术。
这包括常见的转基因农作物、动物遗传改良以及农业生物制剂等。
小点详述：（1）农业生物技术的发展历程；（2）转基因农作物的优缺点；（3）农业生物技术在动物遗传改良中的应用；（4）农业生物技术在农作物病害防治中的应用；（5）农业生物技术对环境的影响。
4.环境生物技术（Environmentalbiotechnology）环境生物技术是指利用生物技术手段解决环境问题的技术。
胰岛素制备
生物技术制药参考资料09级制药工程（1）班叶溢民090219011基因工程制备胰岛素一、胰岛素的定义胰岛素是由胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。
二、目前临床使用的胰岛素来源1、动物胰岛素：从猪和牛的胰腺中提取，两者药效相同，但与人胰岛素相比，猪胰岛素中有1个氨基酸不同，牛胰岛素中有3个氨基酸不同，因而易产生抗体。
2、半合成人胰岛素：将猪胰岛素第30位丙氨酸，置换成与人胰岛素相同的苏氨酸，即为半合成人胰岛素。
3、重组人胰岛素（现阶段临床最常使用的胰岛素）：利用生物工程技术，获得的高纯度的生物合成人胰岛素，其氨基酸排列顺序及生物活性与人体本身的胰岛素完全相同。
三、目前，国际上生产医用重组人胰岛素(recombi—nant human insulin，rhI)的方法1、用基因工程大肠杆菌escherichia coli，E．CO一)分别发酵生产人胰岛素(human insulin，hi)的A、B链，然后经化学再氧化法，使两条链在一定条件下重新形成二硫键，得到hI。
这一方法缺点较多，目前已较少使用；2、用基因工程E．coli发酵生产人胰岛素原(hu—man peoinsulin，hPI)，后经加工形成hI。
E．coli系统表达量高，但缺点是不利于表达hI这样的小蛋白，产物易降解，故常采用融和蛋白形式将hPI连接在一个较大的蛋白质后，表达产物需经过一系列复杂的后加工才能形成有活性的hi；3、通过基因工程酵母菌发酵生产hPI，经后加工形成hI。
酵母系统下游后加工比细菌表达系统简单，但缺点是生产慢，生产周期长，且重组蛋白分泌量少(1～50 mg／L)，产量低。
因此，虽然rhI投放市场已久，但人们一直在努力寻求和探索更加有效的表达系统和高效的表达策略I2 J，尤其是对E．CO一尻表达系统的研究更是越来越深入，用E．coli系统表达hPI的策略也越来越多。
另一方面，在胰岛素的基因工程生产中，下游处理非常复杂，复杂的下游处理极大地降低了胰岛素的最终收率。
生物技术与工程之细胞工程与基因工程 微课微练(二) 基因工程中限制酶的选取与基因表达载体的构建
专题9 生物技术与工程之细胞工程与基因工程微课微练(二) 基因工程中限制酶的选取与基因表达载体的构建一、选择题1．(2022·东城区一模)自然界中很少出现蓝色的花，天然蓝色花产生的主要原因是花瓣细胞液泡中花青素在碱性条件下显蓝色。
我国科学家利用链霉菌的靛蓝合成酶基因(idgS)及其激活基因(sfp)构建基因表达载体(如图)，通过农杆菌转化法导入白玫瑰中，在细胞质基质中形成稳定显色的靛蓝。
下列相关叙述错误的是()A．上述获得蓝色玫瑰的方案中无需转入能调控液泡pH的基因B．将sfp基因插入Ti质粒时使用的限制酶是PmeⅠ和Bam HⅠC．sfp和idgS基因具有各自的启动子，表达是相互独立进行的D．农杆菌可将Ti质粒上的T-DNA整合到白玫瑰染色体DNA上解析：选B蓝色玫瑰细胞质基质中的靛蓝能够稳定显色，不受pH的影响，故本题方案中无需转入能调控液泡pH的基因，A正确；将sfp基因插入Ti质粒时若使用的限制酶是PmeⅠ和Bam HⅠ，则会将终止子1一同切除，故只能用Bam H Ⅰ，B错误；sfp和idgS基因具有各自的启动子，表达是相互独立进行的，C正确；将目的基因导入植物细胞可采用农杆菌转化法，故农杆菌可将Ti质粒上的T-DNA整合到白玫瑰染色体DNA上，D正确。
2．(2022·辽宁三模)ACC合成酶是乙烯合成的关键酶，乙烯的合成会影响番茄的储藏和运输。
如图为科学家利用ACC合成酶基因的反向连接构建载体，通过基因工程设计的耐储转基因番茄流程图。
下列说法不正确的是()A．引物的特异性是能够从番茄DNA中获取ACC合成酶基因的关键B．反向连接的ACC合成酶基因合成的mRNA通过与正常的ACC合成酶基因的mRNA 互补，限制了细胞内乙烯的合成C．可以在培养基中加入氨苄青霉素和四环素，存活下来的细胞内则含有携带目的基因的质粒D．设计双酶切处理目的基因及载体的目的是更好地保证目的基因的反向连接解析：选C引物能与ACC合成酶基因通过碱基互补配对结合定位ACC合成酶基因的位置，因此引物的特异性是能够从番茄DNA中获取ACC合成酶基因的关键，A正确；反向连接的ACC合成酶基因合成的mRNA通过与正常的ACC合成酶基因的mRNA互补，使ACC合成酶基因不能正常表达，限制了细胞内乙烯的合成，B正确；从题图中可知，基因表达载体中ACC合成酶基因破坏了四环素抗性基因，因此含有携带目的基因质粒的细胞能在氨苄青霉素培养基中存活，但不能在四环素培养基中存活，C错误；设计双酶切处理目的基因及载体是为了更好地保证目的基因的反向连接，D正确。
生物技术研究中的基因工程技术
生物技术研究中的基因工程技术Introduction生物技术研究中，基因工程技术是一种具有广泛应用前景的技术，这种技术可以改变基因组结构、改良生物的性状，甚至创造新的生物种。
由于基因工程技术具有重要的实用价值，目前已经成为生物领域中的一项重要研究领域。
本文将对基因工程技术进行详细的介绍和探讨。
技术原理基因工程技术是基于生物学、分子生物学以及遗传学等多学科交叉的科学研究，其基本原理是将人工合成的DNA或RNA片段按照需要的方式导入目标生物细胞，并通过某些方法将这些DNA 或RNA片段正确地结合到细胞的基因组中。
这一过程涉及到多种技术手段，例如DNA重组技术、PCR技术、基因克隆技术、基因转染技术等。
其中，DNA重组技术是基础中的基础，通过将不同来源的DNA段以不同的方式组合起来，从而创造新的DNA序列；PCR技术则可以快速地从一小段DNA序列中扩增出大量精确的复制品，从而达到对细胞DNA的操作目的。
基因克隆技术是实现基因工程的一种重要手段，它通过复制目标生物的DNA序列，并将其植入到另一个宿主细胞内，从而实现对目标基因的操作。
基因转染技术则是将外源DNA或RNA片段灌入目标细胞，使其把外源DNA或RNA片段作为自己的DNA或RNA片段来表达。
应用领域基因工程技术在生命科学、农业、医学、工业等领域中都具有十分广泛的应用前景。
在生命科学领域，基因工程技术可以帮助科学家们研究生物的基本构造和功能，开展疾病的分子机制研究，从而为前沿生命科学的发展提供了重要的技术支持。
在农业领域，基因工程技术可以创造出抗病、耐旱、高产的新品种，帮助生产者降低成本，提高农业生产率；同时，基因工程技术还可以研制出一些生物农药和转基因作物，从而降低农业生产对人工合成化学农药的依赖。
在医学领域，基因工程技术可以帮助人类更好地理解人体疾病的病因和发病机制，为科学家研发新型药物和诊断方法提供有力的支持。
此外，基因工程技术还可以用于干细胞治疗、人工器官等领域。
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---------------精品文档---------------答案仅供参考一、名词解释：1、DNA 变性： DNA 份子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。
2、DNA 复性：变性DNA 在适当条件下,二条互补链全部或者部份恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。
3、退火：指模板双链 DNA 经热变性，螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到55℃摆布，使引物(即具有互补碱基的 RNA 片段)与该模板 DNA 单链重新配对，形成新的双链份子的过程。
4、DNA 芯片：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。
由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为 DNA 芯片。
仅供参考学习第 1 页---------------精品文档--------------- 5、基因诊断：又称 DNA 诊断或者份子诊断，通过份子生物学和份子遗传学的技术，直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常，从而对疾病做出判断。
6、酶活性单位： 1 单位限制性内切酶(1 U)通常定义：在建议使用的 Buffer 及温度下，在 20ml (50ml)反应体系中反应 1 小时，使 1g 入DNA 彻底消化所需的酶量。
7、星活性：在非最适的反应条件下，酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种酶切特异性降低的现象，称为星活性。
8、平台效应：反应初期，靶序列 DNA 片段的增加呈指数形式，随着PCR 产物的逐渐积累，被扩增的 DNA 片段再也不呈指数增加，而进入线性增长期或者静止期，这种现象称为平台效应。
二、简答题1、影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？1)连接所用的目的片段的状态：¹效率：粘性末端>平端(100 倍)；¹ 5，突出>3，突出；¹平端： HaeIII>AluI>HinCII>SmaI2)连接温度仅供参考学习第 2 页¹连接效果最好在37 ℃，但形成的互补不稳定;¹最佳连接温度： 12-16 ℃，较好的连接效果，互补又较稳定;3)反应液中的成份：¹ ATP：反复冻熔， ATP 活性降低， ATP 溶解度不高，连接缓冲液宜分装；¹单价离子： 150-200mM NaCl，提高连接效果；¹ PEG：5%以下可以提高连接效率4)插入片段与载体的浓度比例¹载体 DNA 与外源 DNA 的份子摩尔比通常为 1 ﹕ 3 摆布，甚至 1 ﹕ 10 或者更高。
¹目的或者作用：增加插入片段与载体的接触机会，减少载体自我连接的现象。
6、建议放在 4 度冰箱连接两天效率更高比14 度好2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影响？答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在仅供参考学习第 3 页一定环境条件下表现出来的特异性。
条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会浮现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性又称为星号活性。
概括起来，诱发星活性的因素有如下几种：(1)高甘油含量(>5％, v／v)；(2)限制性内切核酸酶用量过高(>100U／ugDNA)；(3)低离子强度(<25 mmol／L)；(4)高 pH(8.0 以上)；(5)含有有机溶剂，如 DMSO，乙醇等；(6)有非 Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+，Cu2+，C02+，Zn2+等)。
3、影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？仅供参考学习第 4 页---------------精品文档--------------- 答： (1) DNA 的纯度 (2) DNA 甲基化的程度 (3) 酶切消化反应的温度 (4) DNA 的份子结构 (5) 核酸内切限制酶的缓冲液4、细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同？在基因工程中有什么用途？答：主要差别是：CIP68°C 时失活，而BAP68°C 稳定，且耐酚抽提。
应用：(1)dsDNA 的 5'端脱磷酸，防止 DNA 的自身连接。
但是用CIP 处理后，最好将CIP 除去后，再进行连接反应。
(2)DNA 和 RNA 脱磷酸，然后用于多核苷酸激酶进行末端标记。
5、PCR 的基本原理是什么？用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？答： )DNA 半保留复制的原理，在体外进行 DNA 的变性、复性和引物延伸。
(2)至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA 序列。
仅供参考学习第 5 页6、怎样将一个平末端 DNA 片段插入到EcoR I 限制位点中去？答：化学合成一些长为 10bp 含有EcoRI 识别位点的短的 DNA 片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用 EcoRI 切割这种连接片段，就会产生 EcoRI 的单链末端。
这种片段就可以插入到任何 EcoRI 的限制性内切酶位点中。
7、黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。
答：黏性末端连接法不足之处有： (1)载体易自身环化； (2)若是用同一种限制性内切核酸酶产生的黏性末端连接又不易定向克隆； (3)难插入特定的基因； (4)再者就是大片段DNA 的重组率较低，即使用碱性磷酸酶处理了载体，防止了载体的自身环化，载体也有成环的倾向； (5)用这种方法产生的重组体往往含有不止一个外源片仅供参考学习第 6 页段或者不止一个载体连接起来的串联重组体，增加筛选工作的艰难。
8、什么是同聚物加尾连接法？用何种方法加尾？具有哪些优缺点？答：所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链 DNA 的3’端各加之一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源 DNA 和载体 DNA 分子要分别加之不同的寡聚核苷酸，如 dA(dG)和dT(dC),然后在 DNA 连接酶的作用下涟接成为重组的 DNA。
这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链 DNA 份子的突出或者隐蔽的 3'-OH 上。
以 Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的 3'-OH 端逐个添加单核苷酸，如果用 Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或者平末端的 3'-OH 端逐个添加单个核苷酸。
同聚物加尾法实际上是一种人工黏性末端连接法，具有不少优点：．(1)首先不易自身环化，这是因为同一种 DNA 的两端的尾巴是相同的，仅供参考学习第 7 页所以不存在自身环化。
(2)因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端，所以连接效率较高。
(3)用任何一种方法制备的 DNA 都可以用这种方法进行连接。
同聚物加尾法也有一些不便之处： (1)方法繁琐； (2)外源片段难以回收。
由于添加了许多同聚物的尾巴，可能会影响外源基因的表达。
此外要注意的是，同聚物加尾法同平末端连接法一样，重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点。
9、何谓接头连接法？答：将人工合成的或者来源于现有质粒的一小段 DNA 份子(在这一小段 DNA 份子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列)，加到载体或者外源DNA 的份子上，这样便在载体 DNA 和外源 DNA 上创造出新的酶切点。
把这一小段含有酶切点的DNA 分子称为连接器份子，这种方法称为接头连接法。
10、普通质粒 DNA 的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？仅供参考学习第 8 页超螺旋质粒 DNA、开环质粒 DNA、线状质粒 DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：超螺旋质粒 DNA>线状质粒 DNA>开环质粒DNA 11、碱裂解法提取质粒 DNA 的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。
碱裂解法原理：在碱性条件下，双连 DNA 氢键断裂，结构破坏变性，环状超螺旋质粒不充分变性。
在中性条件下变性质粒恢复原来构型，而线性大分子细菌 DNA 不能复性呈不溶物而经离心除去。
提取失败： 1)洗去双链时，将质粒 DNA 洗去；2)破壁失败，质粒没析出；3)加剂问题电泳失败： 1)电压太高 2)没加染色剂3)胶穿孔 4) 电泳时间过长12、电泳缓冲液使用一定时间后浮现 DNA 在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；解决方法： 1.更换成新配置的电泳缓冲液；2.把电泳槽中的缓冲液倒出混匀后再仅供参考学习第 9 页重新使用13、电泳的指示剂和染色剂有何区别，各自的作用是什么？指示剂一定要在电泳前加入，指示剂普通与蔗糖、甘油或者聚蔗糖 400 组成载样缓冲液； (普通为：溴酚兰，二甲苯青)作用：①预知电泳的速率及方向；②使样品呈现颜色，便于加样；③一些高浓度蔗糖或者其它物质增加DNA 的密度，可以防止 DNA 的扩散染色剂即可以在电泳前加入样液，又可以电泳后再对凝胶染色； (溴化已锭 [EB] 、硝酸银、Goldview 染料)作用：呈现出核酸电泳后的带型。
14、限制性核酸内切酶的类型，基因工程常用的是哪种限制性核酸内切酶？(常用 II 型)15、结合已做的实验，分析影响酶切的因素。
1) DNA 的纯度： DNA 中的杂质如蛋白质、酚、氯仿、乙醇、 SDS、EDTA 等都会影响酶的活性。
2)DNA 的甲基化程度：dam 甲基化酶(修饰 GATC 中的 A)； dcm 甲基化酶(修饰 CCA/TGG 的 C) 。
3)温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度仅供参考学习第 10 页---------------精品文档---------------不同。
大多数是 37 o C ，少数要求 40-65 o C 。
4) 缓冲液 (Buffer)：是影响限制酶活性的重要因素。
提供 Mg 2+和离子 强度；维持 pH ；保持酶稳定性；有助于酶的稳定；保 持 酶 的 稳 定性，防止酶失活16、限制性核酸内切酶命名规则及各字母代表的 含义。
命名规则： 寄主菌属名的第 1 个字母＋种名的前 两个字母＋菌株或者菌型代号 (大写)＋空白＋发现序列(罗马数字)例子： EcoR Ⅰ(E ：属名； co ：种名； R ：株；Ⅰ： 发现次序)17、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端， 连接后不能被相关的仅供参考学习第 11 页MgCl 、 2NaCl/KCl ： Tris-HCl ： 二硫苏糖醇 (DTT)：牛血清白蛋 白 BSA 等： β －巯 基乙 醇：---------------精品文档---------------酶同时切割。