生物化学实验讲解
《生物化学》实验讲义
实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应一、目的意义1、学习几种鉴定氨基酸与蛋白质的一般方法及其原理。
2、学习和了解一些鉴定蛋白质的特殊颜色反应及其原理。
二、实验原理1、双缩脲反应当尿素加热到180℃左右时，2分子尿素发生缩合放出1分子氨而形成双缩脲.双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成复杂的紫红色化合物,这一呈色反应称为双缩脲反应。
蛋白质分子中含有多个与双缩脲相似的键，因此也具有双缩脲的颜色反应.借此可以鉴定蛋白质的存在或测定其含量。
应当指出，双缩脲反应并非蛋白质的特异颜色反应，因为凡含有肽键的物质并不都是蛋白质.2、茚三酮反应蛋白质与茚三酮共热,产生蓝紫色化合物，此反应为一切蛋白质及α-氨基酸（除脯氨酸和羟脯氨酸）所共有。
含有氨基酸的其他化合物也呈此反应.该反应十分灵敏，1:1500000浓度的氨基酸水溶液就能呈现反应。
因此，此反应广泛用于氨基酸的定量测定.3、黄色反应含有苯环侧链的（特别是含酪氨酸）蛋白质溶液与硝酸共热时，呈黄色（硝基化合物)，再加碱则变为橙黄色，此反应也称为黄蛋白反应。
OH+HNO3HO NO2+H2OHO NO2+O NOH三、仪器与试剂1、试剂(1) 蛋白质溶液：取10mL鸡蛋清,用蒸馏水稀释至100mL,搅拌均匀后用纱布过滤得上清液。
（2) 0。
3％色氨酸溶液、0。
3%酪氨酸溶液、0。
3％脯氨酸溶液、0。
5％甘氨酸溶液、0.5%苯酚溶液。
(3） 0.1％茚三酮－乙醇溶液:称取0。
1g茚三酮，溶于100mL 95％乙醇。
(4） 10%NaOH溶液、1％硫酸铜溶液、尿素、浓硝酸.2、仪器：试管及试管夹、酒精灯。
四、操作方法1、双缩脲反应(1) 取一支干燥试管，加入少量尿素,用微火加热使之熔化,待熔化的尿素开始变硬时停止加热。
此时，尿素已缩合为双缩脲并放出氨气（可由气味辨别）.待试管冷却，加入约1mL10％NaOH溶液，振荡使其溶解，再加入1滴1%硫酸铜溶液。
混匀后观察出现的粉红色. (2）另取1支试管，加入1mL蛋白质溶液，再加入2mL 10%NaOH溶液摇匀，然后再加入2滴1%的硫酸铜溶液。
生物化学实验原理和方法
生物化学实验原理和方法
生物化学实验是研究生物体内化学反应的实验方法，主要用于研究生物体内分子结构、代谢途径、蛋白质结构和功能等方面的问题。
生物化学实验的基本原理是利用生物体内的生物分子（如蛋白质、核酸、酶等）进行化学反应或与其他物质相互作用，从而检测、分离或定量这些分子。
生物化学实验主要包括以下几个方面的原则和方法：
1. 分离与纯化：将某一特定生物分子从其他组分中分离出来，获得纯净的样品。
常用方法包括离心、电泳、柱层析、过滤等。
2. 分析与测定：对生物分子的含量、结构和性质进行定量或定性的研究。
常用方法包括分光光度法、荧光法、比色法、拉曼光谱等。
3. 酶反应：酶是生物体内催化生物化学反应的一类蛋白质，其活性与底物浓度、温度、pH值等因素有关。
通过测定底物转化率来研究酶的活性。
常见的酶反应方法有酶解反应、酶促进反应等。
4. 蛋白质分析：蛋白质是生物体内最为重要的分子之一，可以通过电泳、质谱、Western blot等方法进行分析，从而了解蛋白质的结构、含量和功能。
5. 核酸分析：核酸是生物体内遗传信息的主要载体，可以通过PCR、凝胶电泳、
Southern blot等方法进行分析，用于检测基因的突变、限制性片段长度多态性等。
以上是一些常用的生物化学实验原理和方法，实际的生物化学实验会根据具体的研究目的和问题而选择适合的方法和技术。
生物化学大实验-1
⑷ 自动取液器 这种取液器在生化实验中大量地使用，它们 主要用于多次重复的快速定量移液，可以只用 一只手操作，十分方便。移液的准确度（即容 量误差）为 ±(0.5％～1.5％)，移液的精密度 （即重复性误差）更小些，为 ≤0.5％。 取液器可分为二种：一种是固定容量的，常 用的有100l 、200L和1000L等几种；另一 种是可调容量的取液器，常用的有200L、 1000L和5000L等多种规格。每种取液器都 有其专用的聚丙烯塑料吸头，吸头通常是一次 性使用，当然也可以超声清洗后重复使用，而 且此种吸头还可以进行120℃高压灭菌。
可调式自动取液器的操作方法是用拇指和食指 旋转取液器上部的旋钮，使数字窗口出现所需 容量体积的数字，在取液器下端插上一个塑料 吸头，并旋紧以保证气密，然后四指并拢握住 取液器上部，用拇指按住柱塞杆顶端的按钮， 向下按到第一停点，将取液器的吸头插入待取 的溶液中，缓慢松开按钮，吸上液体，并停留 1～2秒钟（粘性大的溶液可加长停留时间）， 将吸头沿器壁滑出容器，用吸水纸擦去吸头表 面可能附着的液体，排液时吸头接触倾斜的器 壁，先将按钮按到第一停点，停留一秒钟（粘 性大的液体要加长停留时间），再按压到第二 停点，吹出吸头尖部的剩余溶液，如果不便于 用手取下吸头，可按下除吸头推杆，将吸头推 入废物缸。
实验室中制备蒸馏水，多采用石英管加热的硬 质玻璃蒸馏水器，蒸馏时不能用自来水，因为 会产生水垢，最好用无离子水作为水源。如欲 除去有机物，可在蒸馏水器中每升水加1g高锰 酸钾和1mL 85％的磷酸，以便通过氧化除去有 机物。不含金属离子的水，需用亚沸蒸馏水， 即用石英亚沸蒸馏器进行蒸馏，其特点是在液 面上方加热，但水并不沸腾，只是液面处于亚 沸状态，可将水蒸气带出的杂质减至最低，但 制水量较小，每小时约1～4升。
生物化学实验讲稿
实验一血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳【实验目的】1．了解电泳法分离蛋白质的基本原理2. 掌握醋酸薄膜电泳分离血清蛋白质的方法【实验原理】采用醋酸纤维薄膜为支持物的电泳方法，叫做醋酸纤维素薄膜电泳。
电泳过程中带电颗粒的移动速度与其电荷数量、相对分子量的大小、电场强度及介质的粘度有关。
蛋白质是两性电解质，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于该蛋白质的等电点时其带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，带正电荷向阴极泳动。
此外，血清中各种蛋白质的分子大小、形状也不相同，在电场中就会以不同的速度向正极移动。
经一定电压和时间的电泳，不同的血浆蛋白所带电荷不同相对分子质量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带。
【试剂和器材】一、试剂1.新鲜血清——无溶血现象。
2.巴比妥——巴比妥钠缓冲液(pH8.6，0.07M，离子强度0.06)：称取巴比妥1.66g和巴比妥钠12.76g，溶于少量蒸馏水后定容1000ml。
3.染色液：称取氨基黑10B0.5g，加入蒸馏水40ml，甲醇50ml和冰乙酸10ml，混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
4.漂洗液：取95％乙醇45ml，冰乙酸５ml和蒸馏水50ml。
混匀，在具塞试剂瓶内贮存。
二、器材1、醋酸纤维素薄膜2、培养皿3、盖玻片4、直尺和铅笔5、镊子6、电泳仪和电泳槽7、滤纸【实验步骤】一、仪器和薄膜的准备1.准备醋酸纤维素薄膜：将薄膜小心地放入盛有缓冲液的培养皿内，使它漂浮在液面。
若迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则表明薄膜质地均匀；若润湿时，薄膜上出现深浅不一的条纹或斑点等，则为薄厚不匀的薄膜。
实验中应选用质地均匀的薄膜。
因为，纤维素薄膜的质量对电泳的结果影响很大。
例如，膜厚薄不均可以造成区带歪扭不齐、各区带界限不情、背景脱色困难、实验结果难于重复等现象。
2.将选用的薄膜用镊子轻压，使它全部浸入缓冲液内，待膜完全浸透（约半小时）后取出，夹在清洁的滤纸中间，轻轻吸去多余的缓冲液，同时分辨出光泽面和无光泽面。
生物化学实验(整理版)
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
2. 实验报告的要求：内容完整、条理清晰、数据准确、分析深入、讨论充分、结论明确。
五、实验拓展1. 结合实验内容，查阅相关文献，了解生物化学领域的最新研究进展。
2. 尝试设计新的实验方案，对生物化学现象进行深入探究。
3. 参加学术讲座、研讨会等活动，拓宽生物化学知识面。
生物化学实验（整理版）一、实验目的1. 了解生物化学实验的基本原理和方法。
2. 掌握实验操作技能，提高实验技能。
3. 培养科学探究能力，提高分析问题和解决问题的能力。
4. 深入了解生物体的化学组成、结构、功能及其相互关系。
二、实验内容1. 氨基酸的分离与鉴定2. 蛋白质的结构与性质3. 酶的催化作用与活性测定4. 糖类的分离与鉴定5. 脂类的提取与鉴定6. 核酸的分离与鉴定7. 代谢途径的探究三、实验操作1. 实验前的准备工作：了解实验原理、实验目的、实验步骤、实验所需试剂和仪器等。
2. 实验过程中的注意事项：严格按照实验步骤进行操作，注意实验安全，保持实验环境的整洁。
四、实验报告1. 实验报告的格式：包括实验目的、实验原理、实验步骤、实验结果、实验讨论、实验结论等部分。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
生物化学实验指导
生物化学实验指导实验一生化实验基本操作一. 玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。
洁净的玻璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。
㈠常用的洗涤方法：1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。
然后用自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干备用。
2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。
用后应及时用自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。
（1）如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2）如挂水珠，则应沥干后用重铬酸钾洗液浸泡4~6小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏水冲洗，最后干燥。
3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血浆溶解，然后再依次用1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3）以上二法如达不到清洁要求，可浸泡于重铬酸钾洗液4~6小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2~3次。
4.新购置的玻璃仪器，应先置于1~2%稀盐酸溶液中浸泡2~6小时，除去附着的游离碱，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗2~3次。
5.凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干涸后洗涤十分困难。
如不能及时洗涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。
㈡使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意以下几点：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。
否则会因洗液被稀释而降低洗液的氧化力。
2.Hg2+、Ba2+、Pb2+ 等离子可与洗液发生化学反应，生成不溶性化合物沉积在容器壁上。
因此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述离子（可用稀硝酸或5~10%EDTA钠清除）。
3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失效。
因此，容器壁上附有大量油类、有机物时，应先除去。
4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注意，千万不要滴落在皮肤或衣物上，以免灼伤或烧坏。
生物化学实验
生物化学实验一、糖的颜色反应及还原作用实验一：糖的颜色反应实验1.1 莫氏实验一、目的精品文档，你值得期待掌握莫氏（molisch）实验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚生成紫红色缩合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称“紫环反应”，其反应如下图：利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材1、棉花或滤纸。
2、吸管1.0ml(*4)、2.0ml(*1)。
3、试管1.5*15cm(*4)。
四、实验试剂1、莫氏试剂：称取α-萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至100ml。
此试剂需新鲜配置，并贮于棕色试剂瓶中。
2、1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml。
3、1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于蒸馏水并定容至100ml.4、1%淀粉溶液：讲1g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混合溶液合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅。
最后以沸蒸馏水稀释至100ml。
五、操作于4支试管中，分别加入1ml1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1ml水中）。
然后各加莫氏试剂2滴1，摇匀，讲试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5ml(切勿振摇！)硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。
六、注意事项1、试管中加入各种糖后，应做好标记，浓硫酸加入的方式应保持一致。
2、莫氏反应非常灵敏，所用的试剂应洗净，不可再样品中混入纸屑等杂物。
3、当糖浓度过高时，由于浓硫酸对他的焦化作用，将呈现红色及褐色而不呈现紫色，需稀释后再做。
思考题：1、解释α-苯酚反应的原理。
2、用莫氏试验鉴定糖时需注意哪些？试验1.2 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生产5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应，有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，呈鲜红色沉淀2，以果糖为例，其反应如下：三、实验器材1、吸管0.5ml(*3)、5.0ml(*1)。
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生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8. 实验后，要及时完成实验报告。
实验记录和实验报告一、实验记录实验课前应认真预习，将实验名称、目的和要求、原理、实验内容、操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本上。
实验中观察到的现象、结果和数据，应该及时地直接记在记录本上，绝对不可以用单片纸做记录或草稿。
原始记录必须准确、简练、详尽、清楚。
从实验课开始就应养成这种良好的习惯。
记录时，应做到正确记录实验结果、切忌夹杂主观因素，这是十分重要的。
在实验条件下观察到的现象，应如实仔细地记录下来。
在定量实验中观测的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光电比色计或分光光度计的读数等，都应设计一定的表格准确记下正确的读数，并根据仪器的精确度准确记录有效数字。
例如，光密度值为0.050不应写成0.05。
每一个结果最少要重复观测两次以上，当符合实验要求并确知仪器工作正常后再写在记录本上。
实验记录上的每一个数字，都是反映每一次实验的测量结果，所以，重复观测时即使数据完全相同也应如实记录下来。
数据的计算也应该写在记录本的另一页上，一般写在正式记录左边的一页。
总之，实验的每个结果都应正确无遗漏地做好记录。
实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量、准确的浓度等，都应记录清楚，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据。
如果发现记录的结果有怀疑、遗漏、丢失等，都必须重做实验。
因为，将不可靠的结果当作正确的记录，在实际工作中可能造成难于估计的损失。
所以，在学习期间就应一丝不苟，努力培养严谨的科学作风。
二、实验报告实验结束后，应及时整理总结实验结果，写出实验报告。
实验报告的书写应使用黑色或蓝色钢笔或圆珠笔，可使用铅笔作图或用Excel电脑打印制作标准曲线。
在实验报告中，目的和要求、原理以及操作方法部分应简单扼要的叙述，但是对于实验条件（试剂配制及仪器）和操作的关键环节必须写清楚。
对于实验结果部分，应根据实验课的要求将一定实验条件下获得的实验结果和数据进行整理、归纳、分析和对比，并尽量总结成各种图表，如原始数据及其处理的表格、标准曲线图以及比较实验组与对照组实验结果的图表等。
另外，还应针对实验结果进行必要的说明和分析。
讨论部分可以包括：思考题；实验的正常结果和异常现象；关于实验方法（或操作技术）和有关实验的一些问题；对于实验设计的认识、体会和建议；对实验课的改进意见等（要针对实验操作方面内容，对于应付写缺少仪器设备的不给分）。
实验报告规范格式：一、实验目的：5分二、实验原理: 15分三、实验步骤: 20分四、实验结果: 20分五、讨论分析: 30分六、改进实验建议: 10分实验一糖类的颜色反应一、实验目的1．了解糖类某些颜色反应的原理。
2．学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。
二、实验原理1.α-萘酚反应（Molisch反应）原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。
2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）原理在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。
此反应是酮糖的特异反应。
醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。
在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
三、器材1.试管及试管架2.滴管3.水浴锅四、试剂1.莫氏（Molisch）试剂：5% α-萘酚的酒精溶液，称取α-萘酚5g，溶于95%酒精中，并用此酒精使总体积达100mL，贮于棕色瓶内。
此试剂需新鲜配制。
2.塞氏（Seliwanoff）试剂：称取间苯二酚0.05g溶于30 mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100 mL，此试剂需新鲜配制。
3.1%葡萄糖溶液：称取葡萄糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
4.1%果糖溶液：称取果糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
5.1%蔗糖溶液：称取蔗糖1g，溶于100mL蒸馏水中。
6.1%淀粉溶液：称取可溶性淀粉1g与少量冷蒸馏水混合成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至100mL。
7.0.1%糠醛溶液：称取糠醛0.1g，溶于100mL蒸馏水中。
8.浓硫酸500mL五、操作1.α-萘酚反应（Molisch反应）取5支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、0.1%糠醛溶液各1.5mL。
再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。
斜执试管，沿管壁慢慢加入浓硫酸约1mL，慢慢立起试管，切勿摇动。
浓硫酸在试液下形成两层。
在二液分界2.间苯二酚反应（Seliwanoff反应）取3支试管，分别加入1%葡萄糖溶液、1%果糖溶液、1%蔗糖溶液各5mL。
再向各管分别加入塞氏试剂2mL，混匀。
将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察、记录各管颜色的变化及变化时间。
六、思考题1．可用何种颜色反应鉴别酮糖的存在？2．α-萘酚反应的原理是什么？实验二还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉(1000 g)2．主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2（4）三角瓶：100 mL×1 （5）容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL ×2；10 mL×1 （7）恒温水浴锅（8）煤气炉（9）漏斗（10）天平（11）分光光度计3．试剂（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000 mL容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL。
（3）碘-碘化钾溶液：称取5 g碘和10 g碘化钾，溶于100 mL蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞，溶于250 mL 70%乙醇中。
（5）6 M HCl和6 M NaOH各100 mL。
（分别取59.19 mL 37%浓盐酸和24克NaOH 定容至100mL）四、操作步骤1. 制作葡萄糖标准曲线取7支20 mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1 mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1 葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL葡萄糖标准液（mL）蒸馏水（mL）DNS（mL）葡萄糖含量（mg）光密度值（OD540nm）0 0 2 1.5 01 0.2 1.8 1.5 0.22 0.4 1.6 1.5 0.43 0.6 1.4 1.5 0.64 0.8 1.2 1.5 0.85 1.0 1.0 1.5 1.06 1.2 0.8 1.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 min，取出，用冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL，加塞后颠倒混匀。
调分光光度计波长至540 nm，用0号管调零点，等后面7~10号管准备好后，测出1～6号管的光密度值。
以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量（mg）为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
葡萄糖标准曲线光密度值2. 样品中还原糖和总糖的测定（1）还原糖的提取准确称取3.00 g食用面粉，放入100 mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50 mL蒸馏水，搅匀，置于50 ℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌，使还原糖浸出。
过滤，将滤液全部收集在100 mL的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
（2）总糖的水解和提取准确称取1.00 g食用面粉，放入100 mL三角瓶中，加15 mL蒸馏水及10 mL 6 M HCl，置沸水浴中加热水解30 min, 取出1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。
如已水解完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6 mol/L NaOH溶液中和至溶液呈微红色，并定容到100 mL，过滤取滤液10 mL于100 mL容量瓶中，定容至刻度，混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
（3）显色和比色取4支20 mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，将各管摇匀，在沸水浴中准确加热5 min，取出，冷水迅速冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL，加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。
调波长540 nm，用0号管调零点，测出7～10号管的光密度值。