感受态细胞吸收DNA分子三将目的基因导入受体细胞-牡丹江一中
黑龙江省牡丹江市第一高级中学2018-2019学年高二下学期4月月考生物试题(原卷版)
牡一中高二学年下学期4月份月考生物试卷一、选择题1.以下为形成cDNA过程和PCR扩增过程示意图。
据图分析，下列说法正确的是（）A. 催化①过程的酶是RNA聚合酶B. ④过程发生的变化是引物与单链DNA结合C. 催化②⑤过程的酶都是DNA聚合酶，都能耐高温D. 如果RNA单链中A与U之和占该链碱基含量的40%，则一个双链DNA中，A与U之和也占该DNA碱基含量的40%2.在DNA测序工作中，需要将某些限制性核酸内切酶的限制位点在DNA上定位，使其成为DNA分子中的物理参照点，这项工作叫做“限制酶图谱的构建”。
假设有以下一项实验：用限制酶HindⅢ，BamHⅠ和二者的混合物分别降解一个4kb（1kb即1千个碱基对）大小的线性DNA分子，降解产物分别进行凝胶电泳，在电场的作用下，降解产物分开，如下图所示。
据此分析，这两种限制性内切酶在该DNA分子上的限制位点数目是以下哪一组？()A. HindⅢ1个，BamHⅠ2个B. HindⅢ2个，BamHⅠ3个C. HindⅢ2个，BamHⅠ1个D. HindⅢ和BamHⅠ各有2个3.下列关于基因工程的叙述，正确的是( )A. 构建表达载体时需要在目的基因前加上起始密码子B. 农杆菌转化法可以将目的基因随机插入受体细胞的染色体DNA上C. 标记基因中不能有限制酶的识别位点以防止其被破坏而失去作用D. 导入人胰岛素基因的大肠杆菌可直接生产出有活性的人胰岛素4.SPL蛋白是植物中广泛存在的一类调控基因转录的分子。
不同植物的SPL蛋白结构不同，但均有一个大约由80个氨基酸构成的结构相同的功能区，可识别并结合到某些基因的特定区域。
SPL基因最初是从植物花序cDNA文库中得到的。
下列相关叙述正确的是A. SPL是80个氨基酸构成的蛋白质B. SPL基因能在花序细胞中表达C. SPL可催化特定基因的翻译过程D. SPL在不同绿色植物中功能差异较大5.基因工程是在DNA分子水平进行设计施工的，在基因操作的以下步骤中,不进行碱基互补配对的是( )①人工合成目的基因②E.coliDNA连接酶结合目的基因与运载体③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测和鉴定⑤个体生物学水平的鉴定A. ①③B. ③⑤C. ①⑤D. ②③④6.下列有关生物技术应用的叙述，正确的是（）A. 利用植物组织培养技术培育花药获得单倍体植株属于单倍体育种B.动物细胞培养液通常含有葡萄糖，蛋白质，无机盐，维生素和动物血清C. 将愈伤组织细胞进行诱变处理并筛选得到抗盐碱的烟草新品种D. 将α-抗胰蛋白酶基因转入乳腺细胞培育乳汁中含有该酶的转基因羊7. 某兴趣小组拟用组织培养繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。
高中生物高考考点81 基因工程(二)-备战2022年高考生物考点一遍过
1．基因工程的操作过程与应用（1）基因工程的操作步骤（2）基因工程的应用：培育转基因植物和转基因动物，生产基因工程药物，进行基因治疗。
（3）目的基因导入不同受体细胞的过程生物种类植物动物微生物常用方法农杆菌转化法显微注射技术感受态细胞法受体细胞体细胞或受精卵受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞到受体细胞染色体的DNA上→表达精卵发育→获得具有新性状的动物混合→感受态细胞吸收DNA分子（4）基因治疗与基因诊断的不同点原理操作过程进展基因治疗基因表达利用正常基因导入有基因缺陷的细胞中，以表达出正常性状来治疗(疾病)临床实验基因诊断碱基互补配对制作特定DNA探针与病人样品DNA混合，分析杂交带情况临床应用2．蛋白质工程（1）流程图写出流程图中字母代表的含义：A．转录，B．翻译，C．分子设计，D．多肽链，E．预期功能。
（2）结果：改造了现有蛋白质或制造出新的蛋白质。
（3）应用：主要集中应用于对现有蛋白质进行改造，改良生物性状。
学科&网考向一目的基因的获取及基因表达载体的构建1．利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素，下列相关叙述正确的是A．人和大肠杆菌在合成胰岛素时，转录和翻译的场所都是相同的B．所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C．通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌D．选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高【参考答案】D【试题解析】人是真核生物，大肠杆菌是原核生物，真核细胞转录在细胞核内，原核细胞在拟核中，A 错误；不同的限制酶识别不同的核苷酸序列，B错误；通过检测，大肠杆菌中没有胰岛素产生则可判断重组质粒未导入受体菌或虽已导入受体，但没有表达，C错误；D.利用基因工程技术可使大肠杆菌生产人的胰岛素时，选用大肠杆菌作为受体细胞主要原因是繁殖快、易培养、产量高，D正确。
高中生物专题1基因工程1.2第2课时将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定教案高二生物教案
第2课时 将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定[学习目标] 1.熟悉目的基因导入受体细胞的方法。
2.了解农杆菌转化法。
3.画出DNA 分子杂交示意图。
4.目的基因的检测方法的比较。
知识点一 将目的基因导入受体细胞知识梳理1.转化的含义：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内□01维持稳定和表达的过程。
2．将目的基因导入植物细胞(1)□01农杆菌转化法：将目的基因导入□02双子叶植物和裸子植物最常用的方法 ①农杆菌特点：当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量的□03酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的□04Ti 质料上的T －DNA(可转移的DNA)可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体的□05DNA 上。
②受体细胞：植物□06体细胞或受精卵。
③操作过程：将目的基因插入到□07Ti 质粒的TDNA 上―→转入□08农杆菌―→导入□09植物细胞―→目的基因整合到□10受体细胞染色体的DNA 上―→目的基因表达。
(2)基因枪法：适用于□11单子叶植物，成本较高。
是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的□12表达载体DNA 打入受体细胞中，使目的基因与其整合并□13表达的方法。
(3)花粉管通道法：我国科学家独创的方法花粉管通道法，就是在植物受粉后，花粉形成的花粉管还未愈合前，剪去□14柱头；然后，滴加□15DNA(含目的基因)，使目的基因借助□16花粉管通道进入受体细胞。
该方法十分简单经济。
我国的转基因抗虫棉就是用此种方法获得的。
3．将目的基因导入动物细胞(1)方法：□01显微注射技术，采用最多、最有效的方法。
(2)受体细胞：动物的□02受精卵。
(3)操作过程：将含有□03目的基因的表达载体提纯―→取卵(□04受精卵)―→□05显微注射―→受精卵经胚胎早期培养后，□06移植到雌性动物的□07输卵管或子宫内―→获得□08新性状的动物。
4．将目的基因导入微生物细胞(1)方法01Ca2＋处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态(这种细①用□胞称为□02感受态细胞)。
专题21(押江苏卷非选择题) 基因工程(解析版)
专题21（押江苏卷非选择题）基因工程从近几年的新课标卷的考查知识点来看，第23题主要考查基因工程知识。
基因工程的流程和应用是高考的必考点，且常考常新，预计2022年高考也不例外，依然会对其进行考查，有可能与新的科研实事结合，综合考查基因工程的流程和应用，比如新冠病毒疫苗的研发，还可能与细胞工程、胚胎工程等综合起来考查。
能准确识记课本内容，会正确分析图形，并从题干中摘取关键信息，规范答题。
能够结合背景材料分析问题、解决问题。
从题图中提取有效信息并结合这些信息，运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确结论。
把握知识间的内在联系，要求能运用所学知识解决生活中的一些实际问题，或运用所学知识解释生活中的一些现象1．（2021江苏高考真题）某小组为研究真菌基因m的功能，构建了融合表达蛋白M和tag 标签的质粒，请结合实验流程回答下列问题：(1)目的基因的扩增①提取真菌细胞______，经逆转录获得cDNA，进一步获得基因m片段。
②为了获得融合tag标签的蛋白M，设计引物P2时，不能包含基因m终止密码子的编码序列，否则将导致______。
③热启动PCR可提高扩增效率，方法之一是：先将除TaqDNA聚合酶（Taq酶）以外的各成分混合后，加热到80℃以上再混入酶，然后直接从94℃开始PCR扩增，下列叙述正确的有______A．Taq酶最适催化温度范围为50～60℃B．与常规PCR相比，热启动PCR可减少反应起始时引物错配形成的产物C．两条子链的合成一定都是从5′端向3′端延伸D．PCR产物DNA碱基序列的特异性体现了Taq酶的特异性(2)重组质粒的构建①将Sma I切开的载体A与添加同源序列的m混合，用特定DNA酶处理形成黏性末端，然后降温以促进______，形成A-m结合体。
将A-m结合体导入大肠杆菌，利用大肠杆菌中的DNA聚合酶及______酶等，完成质粒的环化。
四川省广元市四川师范大学附属万达中学2023届高考仿真卷生物试卷含解析
2023年高考生物模拟试卷注意事项1．考生要认真填写考场号和座位序号。
2．试题所有答案必须填涂或书写在答题卡上，在试卷上作答无效。
第一部分必须用2B 铅笔作答；第二部分必须用黑色字迹的签字笔作答。
3．考试结束后，考生须将试卷和答题卡放在桌面上，待监考员收回。
一、选择题：（共6小题，每小题6分，共36分。
每小题只有一个选项符合题目要求）1．下列关于生物变异和进化的叙述，正确的是（）A．基因突变会改变基因的结构和排列顺序B．二倍体植物和四倍体植物之间存在地理隔离C．秋水仙素诱导染色体数目加倍过程中可能发生基因重组D．在工业污染的条件下，桦尺蠖群体中黑色基因频率定向升高2．在人体内环境中可以发生的生化反应是（）A．组织液中某些蛋白质的合成B．麦芽糖的水解C．抗原与抗体的特异性结合D．葡萄糖的氧化分解3．二倍体百合（2n=24）形成配子过程中的细胞图像如下，下列叙述错误的是（）A．图②处于减数第二次分裂后期B．图③中，同源染色体的姐妹染色单体发生交叉互换C．图⑤中，移向两极的基因组成有可能不相同D．上述细胞分裂图像按进行时序排序为①→③→⑤→②→④4．澳大利亚一项新研究发现，女性在怀孕期间除多吃富含蛋白质和脂质的食物外，还应多吃富含植物纤维素的食物，这有利于胎儿免疫系统的发育。
下列相关叙述错误的是（）A．蛋白质、核酸和纤维素都以碳链作为基本骨架B．组成人体蛋白质的某些氨基酸必须从食物中获得C．人体内的细胞能分泌分解纤维素的酶将其水解为单糖D．胆固醇既参与人体血脂的运输，也参与细胞膜的构成5．如图表示桑基鱼塘生态系统部分能量流动示意图，图中字母代表相应的能量。
下列叙述错误的是（）A．b表示桑树呼吸作用散失的能量B．d表示桑树用于生长、发育、繁殖的能量C．如果g表示蚕传递给分解者的能量，则f表示未被利用的能量D．d/a×100%可以表示第一营养级到第二营养级的能量传递效率6．用含32P的培养基培养醋酸杆菌一段时间，能在醋酸杆菌中检测出放射性的化合物是（）A．油脂B．腺苷C．核苷酸D．丙酮酸二、综合题：本大题共4小题7．（9分）蛛丝蛋白纤维是目前已知的最坚韧的天然纤维之一，又被称为“生物钢”。
2020年牡丹江市第一高级中学高三生物第二次联考试卷及答案解析
2020年牡丹江市第一高级中学高三生物第二次联考试卷及答案解析一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 形成蛋白质结构的层次，从小到大依次是（）①氨基酸①C、H、O、N等元素①氨基酸脱水缩合①多肽链盘曲、折叠①多肽①蛋白质A.①→①→①→①→①→①B.①→①→①→①→①→①C.①→①→①→①→①→①D.①→①→①→①→①→①2. 下列有关细胞的表述，正确的是（）A. 所有细胞都能通过减数分裂、有丝分裂或无丝分裂方式进行细胞增殖B. 有细胞结构生物，体内细胞衰老就是个体的衰老C. 细胞凋亡是正常的生理过程，是由基因决定的细胞编程性死亡D. 克隆羊多利的核移植和植物组织培养实验能分别证明动、植物细胞具有全能性3. 下列关于细胞代谢的叙述,正确的是()A. 适宜条件下,水稻幼苗叶肉细胞中O2浓度:叶绿体>细胞质基质>线粒体B. 一定条件下乳酸菌细胞呼吸产生的NADPH可来自水和有机物C. 水稻幼苗在成长的过程中,叶肉细胞中产生ATP最多的场所是线粒体内膜D. 同一细胞中同时存在催化丙酮酸生成乳酸或酒精的酶4. 下列有关糖类的叙述，错误的是（）A.糖类可以简写为（CH2O）B.白糖属于单糖C.淀粉的水解产物是还原糖D.虾和蟹的外壳中都含有多糖5. 下列有关酶的叙述中，正确的是（）①酶是由具有分泌功能的活细胞产生的①酶催化化学反应的原理是提供化学反应所需的能量①酶是活细胞产生的①酶都是蛋白质①酶的基本组成单位是氨基酸或核糖核苷酸①酶在代谢中有多种功能①酶在生物的新陈代谢和生长发育中起调控作用①酶只起催化作用A.①①①B.①①①C.①①①D.①①①6. 图甲、乙、丙为某一动物细胞分裂后期的示意图。
下列相关叙述错误的是（）A. 由图示判断该动物是雌性B. 甲细胞通过分裂最终形成4个成熟的生殖细胞C. 三个细胞都含有同源染色体D. 丙细胞变异的原因是减数第一次分裂后期一对同源染色体没有分开7. 下列关于实验原理或实验结果的叙述正确的是（）A.根据叶绿体色素在层析液中溶解度不同可以分离色素B.显微镜下观察到的质壁分离是细胞质与细胞壁的分开C.探究温度对酶活性的影响时最好选用过氧化氢酶作为实验材料D.观察植物根尖分生区细胞有丝分裂时，可观察活细胞中染色体的变化8. “种豆南山下,草盛豆苗稀。
2020届牡丹江市第一高级中学高三生物上学期期末试卷及答案解析
2020届牡丹江市第一高级中学高三生物上学期期末试卷及答案解析一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 下列关于分泌蛋白的合成、加工、运输和分泌的叙述中错误的是（）A. 分泌的方式是胞吐，需要细胞呼吸提供A TPB. 分泌过程说明了细胞膜具有一定流动性C. 该过程前后高尔基体的膜面积基本保持不变D. 参与该过程的具膜细胞器有核糖体、内质网、高尔基体、线粒体2. 如图为动、植物细胞亚显微结构模式图，下列有关该图的叙述错误的是（）A.图的下半部分可以表示洋葱根尖成熟区细胞B.动物细胞有丝分裂时纺锤体的形成与a有关C.动物细胞在清水中会胀破，是因为没有结构iD.是否具有h不能作为确定植物细胞的标志3. 下列关于“探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化”实验的叙述，错误的是（）A. 将酵母菌接种到培养液中，并进行第一次计数B. 从静置的培养液中取适量上清液，用血细胞计数板计数C 每天定时取样，测定酵母菌细胞数量，绘制种群数量动态变化曲线D. 营养条件是影响酵母菌种群数量动态变化的因素之一4. 下列关于植物生长素的叙述，错误的是（）A. 保留有芽的插条易生根是因为芽能产生生长素B. 单侧光照射导致胚芽鞘背光侧合成的生长素较多C. 植物的顶端优势现象能体现生长素作用的两重性D. 生长素的作用会因细胞的成熟情况不同而有较大差异5. 科研人员研究核质互作的实验过程中，发现T-CMS细胞质雄性不育玉米可被显性核恢复基因Rf2（R基因）恢复育性，T-URF13基因（T基因）表示雄性不育基因，其作用机理如右图所示。
下列叙述正确的是A.在线粒体的内外均有核糖体分布B.细胞中R基因和T基因均成对存在C.R基因通常不会通过父本传递给下一代D.核（质）基因型为Rr（T）的个体自交，后代中出现雄性不育的概率是1/26. 如图为人体血糖平衡的调节示意图，图中字母表示物质，甲和乙代表不同的细胞，抗体1和抗体2只与相应的受体结合。
目的基因导入受体细胞及重组子的筛选
活化菌种，扩大培养，使其 处于对数生长后期 （OD600=0.4）
3-4 ml菌液冰水浴中10 分钟，4 ℃离心集菌
转 入 37 ℃ 水 浴 上5 min， 加入 1 ml不含选择性 药 物 的 LB 培 养 基
转入42 ℃水浴 上 2 min ， 使 感受态细胞吸 收重组DNA。
0.2 ml新制备好 的感受细胞中加 入缓冲液溶解的 重 组 DNA ， 置 于冰水浴中1 h 以上，期间轻摇 几次
第三节 重组子的筛选
在重组DNA分子的转化、转染或转导过程中，并非所有的受 体细胞都能被导入重组DNA分子，一般仅有少数重组DNA分子能 进入受体细胞。再者，在这些被转化的受体细胞中，除部分含 有我们期待的DNA分子外，另外一些还可能是由于载体自身或 一个载体与多个外源DNA片段形成的非期待重组DNA分子导入所 致。因此，需要采取必要的方法将重组子从大量的受体细胞中 筛选出来。 ■转化子：导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转 化子。 ■重组子：含有重组DNA分子的转化子称为重组子。
受体细胞在遗传密码的应用上无明显的偏倚性。 具有较好的转译后加工机制，便于真核目的基因的高效表达。 在理论研究和生产实践上有较高的应用价值。
3.各种类型受体细胞的优缺点
（1）原核细胞 ■优点 大 部 分 原 核 细 胞 没 有 纤 维 素 组 成 的 坚 硬 细 胞 壁 ， 便 于 外 源 DNA的进入。 没有核膜，染色体DNA没有固定结合的蛋白质，这为外源DNA 与裸露的染色体DNA重组减少了麻烦。 基因组简单，不含线粒体和叶绿体基因组，便于对引入的外 源基因进行遗传分析。 原核生物多数为单细胞生物，容易获得一致性的的实验材料， 并且培养简单，繁殖迅速，实验周期短，重复实验快。
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双链DNA (即目的基因)
需2）的根基据因已。知的氨基酸序列合成DNA法 ：
蛋白质 的氨基
mRNA 推测 的核苷
推测
结构基因 的核苷酸
酸序列
酸序列
序列
化学 合成
目的 基因
将目的基因导入微生物细胞
1.常用菌：大肠杆菌
2.微生物作受体细胞原因： 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少
基因工程的基本操作程序
目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定
操作过程
目的基因的获取
即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来
目的基因主要是指_编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因___
供体生物细胞
取出 D用N限A制酶剪
去多余部分
PCR仪
微量离心管
微量移液器
推动按钮 调节轮
一次性 吸液枪头
卸枪头器
卸枪头按钮
随堂闯关 PCR技术扩增过程
a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 氢断键裂，形成____单__链_
b、复性（55℃-60℃）：系统温度DN降A低，引物 与DNA模板结合，形成局部__双__链____。
显微注射法：
利用管尖极细（0.1至0.5μm）的玻璃 微量注射针，将外源基因片段直接注射到 原核期胚或培养的细胞中，然后藉由宿主 基因组序列可能发生的重组、缺失、复制 或易位等现象而使外源基因嵌入宿主的染 色体内。
缓冲溶液
一对引物：一对寡核苷酸序列：与目的基因 的起始段互补
前提： 一段已知目的基因的核苷酸序列，以便 根据这一序列合成引物
5/G—G
5/ 引物Ⅱ 3/
3/
G—G C—C
T—C 3/ 3/ A—G 5/
引物Ⅰ
G—A 5/
变性 复性
1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合；
延伸
3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。
③检测目的基因是否翻译成蛋白质
方法—— 抗原-抗体杂交 鉴定— 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
PCR技术—聚合酶链式反应
• 定义：
PCR是一项在生物体外复制 特定DNA片段的核酸合成技 术
• 原理：
DNA双链复制的基本原理
PCR扩增仪
条件：模板DNA( 需含有目的基因 )
四种脱氧核苷酸 (热dN稳TP定) DNA聚合酶(Taq酶） Mg2+(激活剂)
(三)将目的基因导入受体细胞
方法
农杆菌转化法 导入植物细胞 基因枪法
花粉管通道法 导入动物细胞 ——显微注射法
导入微生物细胞 —— 感受态细胞吸收 DNA分子
(四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功
检测—
①检测转基因生物染色体的 DNA
上方是法否—插—入D了N目A的-D基N因A分子 ②检测目的基杂因交是否转录出了 m方RN法A—— DNA-RNA分子杂交
目前被广泛提取使 用的目的基因有：苏 云金杆菌抗虫基因、 植物抗病基因（抗病 毒、抗细菌)、人胰岛 素基因等。
目的基因
获得目的基因的方法1）从基因中获取目的基因1.什么是基因 部分基因(cDNA)：含有一种生物的部分基因
2.怎样从基因中得到我们所需的目的基因？3.将切下的目的基因片段插入质粒的__切__口__处， 再加入适量___D_N__A__连__接_，形成了一个重组 DNA分子（重酶组质粒）
资 料:
科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的 过程和不懈的努力，才获得成功。
起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体 质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基 因在棉花体内没有表达。
根据基因的有关信息：如基因的转录产物mRNA
2）利用PCR技术扩增目的基因 2）3）人工合成
(二)基因表达载体的构建
1.用一定的__限__制___酶__切割 质粒，使其出现一个切 口，露出__黏___性__末__端___。
—— 核心
2.用_同__一__种___限__制__酶_切断目 的基因，使其产生__相__同_ __的__黏__性__末__端__。
目的：使目的基因在受体细胞中稳定存 在，并且可以遗传给下一代，同时使目 的基因能够表达和发挥作用。
(三)将目的基因导入受体细胞
• 常用的受体细胞：
动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。
• 将目的基因导入受体细胞的原理：
借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。
转化——目的基因进入_受__体__细___胞_内，并且在 受 体细胞内维持___稳__和定____表_的达过程
3.转化方法： Ca2+ 处理细胞→ 感受态 细胞
→表达载体与感受态细胞混合→ __感__受_态____细 胞吸收DNA分子。
1.农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植 物。Ti质粒的T-DNA可转移至受体细胞的染 色体上
2. 目的基因插入Ti质粒的T-DNA上 农杆菌 转 导入植物细胞 整合到受体细胞的染色体上 化 目的基因的遗传特性得以维持稳定和表达
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 从
引物的D5N′A端→3′端延伸，合成与模板互补 的___链_____。
利用PCR技术扩增目的基因
1）反转录法：
以目的基因转录成的 信使RNA为模板，反转 录成互补的单链DNA， 然后在酶的作用下合成 双链DNA，从而获得所
目的基因的mRNA 反转录
基因枪法：
基因枪法： 将直径4um的钨粉或金 粉在供体DNA中浸泡，然后用基因枪将 这些粒子打入细胞、组织或器官中，具 有一次处理多个细胞的优点，但转化效 率较低，另外这种方法也用于基因治疗 和抗体制备，并已取得初步成效。
花粉管通道法：
在授粉后向子房注射合目的基因的DNA溶液， 利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道 ，将外源DNA导入受精卵细胞，并进一步地被整 合到受体细胞的基因组中，随着受精卵的发育而 成为带转基因的新个体。该方法于80年代初期由 我国学者周光宇提出，我国目前推广面积最大的 转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。 该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株 ，技术简单，不需要装备精良的实验室，常规育 种工作者易于掌握。
然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗 虫基因首端)，导入棉花受精卵，长成的棉花植株 还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫 基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入 棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。
基因表达载体的组成：
a、目Байду номын сангаас基因
b、启动子
c、终止子 d、标记基因
e、复制原点