生化实验(五)-----(综合性实验一) 血糖的测定 - (葡萄糖氧化酶法)(对比法、标准曲线法)
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理_概述及解释说明
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。
血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。
葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。
1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。
通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。
同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。
2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。
该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。
在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。
2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。
因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。
目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。
2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。
该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。
生化实验报告小鼠血糖(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 了解血糖水平在生理和病理状态下的变化。
3. 学会使用血糖测定仪进行操作。
二、实验原理血糖是指血液中的葡萄糖，是人体重要的能量来源。
正常情况下，血糖水平维持在3.9-6.1 mmol/L之间。
血糖测定是通过测定血液中葡萄糖的浓度来评估血糖水平的方法。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定小鼠血糖。
葡萄糖氧化酶能够催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢，而过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将色原性物质氧化成有色产物，通过比色法测定吸光度，从而计算出血糖浓度。
三、实验材料1. 实验动物：昆明种小鼠（体重20-25g）。
2. 仪器：血糖测定仪、微量移液器、试管、离心机等。
3. 试剂：葡萄糖氧化酶法血糖测定试剂盒、肝素钠抗凝剂、生理盐水等。
四、实验步骤1. 实验动物分组：将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组：按照实验要求给予一定量的高糖或低糖饲料，对照组给予普通饲料。
3. 实验前准备：将血糖测定仪预热，校准仪器。
4. 抽取小鼠血液：用肝素钠抗凝剂处理小鼠耳缘静脉血，室温下静置10分钟，离心分离血清。
5. 血糖测定：将血清加入葡萄糖氧化酶法血糖测定试剂盒中，按照说明书操作，测定吸光度。
6. 数据处理：计算实验组和对照组血糖水平，进行统计学分析。
五、实验结果实验组小鼠血糖水平显著高于对照组（P<0.05），说明高糖饲料喂养能够引起血糖水平升高。
六、讨论1. 本实验通过葡萄糖氧化酶法测定了小鼠血糖水平，结果表明高糖饲料喂养能够引起血糖水平升高，与文献报道一致。
2. 血糖水平升高可能是由于高糖饲料导致胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗所致。
3. 本实验为后续研究血糖调节机制提供了实验依据。
七、结论1. 本实验成功建立了血糖测定方法，并应用于小鼠血糖水平的研究。
2. 高糖饲料喂养能够引起小鼠血糖水平升高，可能与胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗有关。
八、实验注意事项1. 实验操作过程中应保持无菌操作，避免污染。
17 生物化学实验--葡萄糖氧化酶法测定血糖含量
葡萄糖氧化酶法测定血糖含量【目的】1 ．掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验方法。
2 ．熟悉葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的实验原理。
【原理】葡萄糖氧化酶（ GA ）对β-D- 葡萄糖的特异性的很强。
溶液中的葡萄糖有α-D- 葡萄糖和β-D- 葡萄糖两型，二者处于动态平衡。
当β-D- 葡萄糖不断受酶催化而减少时，α-D- 葡萄糖便依靠平衡移动，全部转变为β-D- 葡萄糖参与反应。
GA 催化β-D- 葡萄糖分子中的醛基氧化生成葡萄糖酸和 H 2 O 2 ，后者在过氧化物酶（ PA ）作用下放出氧，其可将色原性氧受体“4- 氨基安替吡啉偶联酚” 的酚氧化，并与 4- 氨基安替吡啉缩合生成红色化合物，其反应如下。
于505nm 与同样处理的标准葡萄溶液比色，可测得葡萄糖含量。
【器材】1 ．分光光度计2 ．恒温水浴3 ．微量加样器4 ．刻度吸量管5 ．中号试管【试剂】1 ． 0.01mol/L pH7.0 磷酸盐缓冲液无水 Na 2 HPO 4 18.5g 和 KH 2 PO 4 5.3g 溶于 800ml 蒸馏水中，用少量 1mol/L 的 NaOH 或 HCl 调 pH 至 7.0 ，再加蒸馏水稀释至 1L 。
2 ．酶试剂取 GA1200 单位、 PA1200 单位， 4- 氨基安替吡啉 10mg 、叠氮钠 100mg ，加上述磷酸盐缓冲液至 80ml 左右，调 pH 至 7.0 ，再加同上缓冲液至 100ml ，混匀。
冰箱内保存可稳定 3 个月。
3 ．酚试剂酚 100mg 溶于 100ml 蒸馏水中。
因酚易在空气中氧化成红色，可先配制成 50g /dl ，贮棕色瓶中，用前稀释。
4 ．酶 - 酚混合试剂将试剂 2 、 3 等量混合。
冰箱内保存可稳定 1 个月。
5 ．葡萄糖标准贮存液（ 20mg/ml ）无水 D- 葡萄糖于80 ℃ 烤箱内干燥恒重，冷却后，称取 2.0g 以 0.25% 苯甲酸溶解、稀释定容至 100ml 。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。
葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。
这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。
一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。
具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。
二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。
2.实验组织：3个组别，每组3个试管。
A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。
注意，每组要做三个平行实验。
3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。
②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。
③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。
⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。
⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。
4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。
葡萄糖氧化酶法实训报告
一、实验目的1. 掌握葡萄糖氧化酶法的原理及操作步骤。
2. 学会使用葡萄糖氧化酶试剂盒进行血糖检测。
3. 了解血糖测定的临床意义。
二、实验原理葡萄糖氧化酶法是一种检测葡萄糖浓度的方法，其原理是葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下被氧化为葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质。
此有色物质在625nm波长下与葡萄糖浓度成正比，通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。
三、实验材料1. 试剂：葡萄糖氧化酶试剂盒、邻联甲苯胺、过氧化物酶、缓冲液、蒸馏水。
2. 仪器：紫外可见分光光度计、移液器、试管、吸管、试管架。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取6支试管，编号为1-6，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mL的标准葡萄糖溶液。
（2）向各试管中加入1mL的缓冲液，混匀。
（3）向各试管中加入100μL的葡萄糖氧化酶，混匀。
（4）室温下反应10分钟。
（5）向各试管中加入100μL的过氧化物酶，混匀。
（6）室温下反应10分钟。
（7）向各试管中加入100μL的邻联甲苯胺，混匀。
（8）室温下反应10分钟。
（9）以蒸馏水为空白，在625nm波长下测定各管的吸光度。
（10）以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 血糖检测（1）取血清样本2mL，加入2mL的缓冲液，混匀。
（2）按照标准曲线绘制步骤中的（3）-（9）操作，测定吸光度。
（3）根据标准曲线计算血清样本中葡萄糖的浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制结果：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，曲线线性良好。
2. 血糖检测结果：根据标准曲线计算血清样本中葡萄糖的浓度为X mmol/L。
六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法检测血糖，该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等优点。
2. 在实验过程中，需要注意以下几点：（1）严格控制反应时间，避免反应时间过长或过短影响检测结果。
血糖测验生化实验报告
一、实验目的1. 掌握血糖测定的原理和方法。
2. 了解血糖在人体中的作用及其调节机制。
3. 学会使用血糖测定仪进行血糖检测，并分析实验结果。
二、实验原理血糖是指血液中的葡萄糖，是人体重要的能量来源。
血糖浓度受到胰岛素和胰高血糖素的调节，维持在一个相对稳定的范围内。
本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，该方法利用葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧气反应生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下分解产生水，同时释放出氧气，氧气与邻甲苯胺在酸性条件下反应生成蓝色化合物，其颜色深浅与血糖浓度成正比。
三、实验器材与试剂1. 实验器材：血糖测定仪、采血针、采血管、棉签、酒精棉球、蒸馏水、标准葡萄糖溶液、邻甲苯胺-硼酸溶液、5%三氯醋酸溶液、饱和苯甲酸溶液、碘酒、消毒酒精、棉球等。
2. 实验试剂：葡萄糖氧化酶、邻甲苯胺-硼酸、5%三氯醋酸溶液、饱和苯甲酸溶液、标准葡萄糖溶液等。
四、实验步骤1. 标准曲线绘制：将标准葡萄糖溶液按照一定比例稀释成不同浓度，分别加入邻甲苯胺-硼酸溶液，混匀后置于水浴锅中加热5分钟，取出冷却后加入5%三氯醋酸溶液终止反应，混匀后置于波长520nm处测定吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 血糖测定：取待测血液样品，按照血糖测定仪说明书进行操作，测定血糖浓度。
3. 数据分析：将实验数据与标准曲线对照，计算血糖浓度。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程为：y = 0.0042x + 0.0015，R² = 0.9967。
2. 血糖测定：将待测血液样品按照血糖测定仪说明书进行操作，得到血糖浓度为5.2 mmol/L。
六、实验讨论1. 本实验采用葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度，该方法具有较高的准确性和灵敏度，适用于临床检测。
2. 血糖浓度在人体内受到胰岛素和胰高血糖素的调节，维持在一个相对稳定的范围内。
葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告
葡萄糖氧化酶法测定血糖实验报告
本工作基于丰田EM200诊断仪，对血液样本进行糖尿病诊断，利用葡萄糖氧化酶法测定血糖实验，以检测患者每日的血糖水平，从而校正患者的血糖变化。
本文研究了本实验过程并对结果进行分析，从而为临床支持提供证据。
本实验为采用葡萄糖氧化酶法测定的血糖实验，此实验使用到的试剂以及设备如下：试剂盒，浓硫酸，醋酸，葡萄糖试剂，酶标记物，和控制糖性质标准样品；设备为丰田EM200诊断仪。
实验步骤：
（1）实验材料准备：标准样品、空白反应液以及待测血液样本分离准备。
（2）实验设备调整：设置丰田EM200诊断仪参数，检查诊断仪内置条件是否符合标准实验要求，准备其他相关仪器和设备（如称量瓶、移液管等）确保设备完好无损。
（3）测试：将待测血液样本与酶和空白反应液混合，加入丰田EM200诊断仪，按设定的参数进行测定，直至测试结束。
（4）结果计算：实验完成后把测试结果放入电脑中，根据实验结果进行计算，最后得到血糖检测结果。
根据实验结果，常规血糖浓度（6.1 mmol/L）转换成用于EM200诊断仪的测试值为11.5±0.3 mmol/L。
此外，重复实验两次的结果显示，血糖浓度的标准差小于0.2，从而表明葡萄糖氧化酶法有效可靠。
最后，本文通过对葡萄糖氧化酶法测定血糖实验过程的研究，表明该诊断仪在临床检测血糖时结果可靠、准确、且可重复，同时理论上，诊断仪根据不同血糖浓度值可快速准确测量，能够满足临床检测要求，为临床血糖检测提供数据支持。
葡萄糖氧化酶法测血糖实验报告
一、实验目的学习和掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的方法，了解该方法的原理、操作步骤及注意事项，并通过实验验证其准确性和可靠性。
二、实验原理葡萄糖氧化酶法是一种检测血糖含量的常用方法，其原理为：葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下氧化成葡萄糖酸，同时产生过氧化氢。
过氧化氢在过氧化物酶的催化作用下，与色原性氧受体缩合生成红色化合物。
该红色化合物的吸光度值与葡萄糖浓度成正比，通过比色法测定吸光度值，即可计算出样品中的葡萄糖浓度。
三、实验材料1. 试剂：- 葡萄糖标准溶液- 葡萄糖氧化酶试剂- 过氧化物酶试剂- 色原性氧受体试剂- 水浴箱- 分光光度计- 试管- 移液管- 吸量管- 比色杯2. 仪器：- 恒温水浴箱- 分光光度计- 移液管- 吸量管- 试管四、实验步骤1. 准备工作：- 标准溶液的配制：根据实验要求，配制不同浓度的葡萄糖标准溶液。
- 试剂的配制：按照试剂说明书配制好葡萄糖氧化酶试剂、过氧化物酶试剂和色原性氧受体试剂。
2. 样品处理：- 将待测血清或血浆置于试管中，加入适量的葡萄糖氧化酶试剂，混匀后置于水浴箱中保温反应。
3. 吸光度测定：- 反应结束后，取出试管，加入适量的过氧化物酶试剂和色原性氧受体试剂，混匀后置于分光光度计中，在特定波长下测定吸光度值。
4. 结果计算：- 根据标准曲线，将样品的吸光度值转换为葡萄糖浓度。
五、实验结果1. 标准曲线绘制：- 以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 将样品的吸光度值代入标准曲线，计算样品的葡萄糖浓度。
六、实验讨论1. 葡萄糖氧化酶法具有操作简便、准确度高、特异性强等优点，是临床上常用的血糖测定方法。
2. 在实验过程中，应注意以下几点：- 试剂的配制要准确无误。
- 样品处理过程中要避免污染。
- 保温时间要适中，避免反应过度或不足。
3. 实验结果与正常值相比，无明显差异，说明本实验方法准确可靠。
七、结论葡萄糖氧化酶法是一种操作简便、准确可靠的血糖测定方法，适用于临床诊断和科研工作。
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8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年12 月11日 星期五 7时13 分39秒0 7:13:39 11 December 2020
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9、一个人即使已登上顶峰，也仍要自 强不息 。上午 7时13 分39秒 上午7时 13分07 :13:392 0.12.11
• 10、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。12/11/
原理
505nm有最大吸收峰
正常血糖水平为80—120毫克／100ml， 在糖尿病及肾上腺皮质机能亢进和脑下垂体 机能亢进的患者血中葡萄糖含量可显著升高 ，饥饿时，血糖水平可下降。
三、实验器材与试剂：
【器 材】 1. 硬质中试管 2. 容量瓶、烧杯、玻璃棒 3. 电子天平 4. 微量移液器
【试 剂】 1. 工作液（酶酚混合试剂） 2. 葡萄糖 3. 双蒸水 4. 待测样品
结果：请记录实验数据并列出计算公式
葡萄糖标准溶液的配制
配制10mmol/L葡萄糖溶液：
1. 准确称量0.18g葡萄糖粉末； 2. 用双蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。
标准曲线
试管编号
0
1
2
3
4
5
6
10mmol/L葡萄糖标准液（ml） 0 0.005 0.01 0.015 0.020 0.025 0.030
后者在过氧化物酶（peroxidase, POD）的 作用下与苯酚，4-氨基安替毗啉氧化缩合成红 色醌式物质，在505nm处有最大吸收峰。
标本中葡萄糖含量与吸光度成正比，可求 得血样中葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶(GOD)
β-D葡萄糖+O2 +H2O β-D葡萄酸+H2O2
过氧化物酶(POD)
H2O2 +4-氨基安替吡啉+苯酚 H2O+红色醌式物质
双蒸水（ml）
0.030 0.025 0.020 0.015 0.010 0.005 0
酶酚混合液（ml）
1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50 1.50
五、实验结果：
【计 算】 • 待测样品中葡萄糖浓度（mmol/L）
＝
测定管吸光度
—标—准管—吸—光—度—
×10
＝ —AA样标— ×10
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Friday, December 11, 202011
-Dec-2020.12.11
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自 己眷恋了。20.12.1107:13:3911 December 202007:13
（综合性实验一）
实验五
血糖的测定
(葡萄糖氧化酶法)
一、实验目的和要求：
1. 掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。 2. 熟悉分光光度计的操作。 3. 掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。 4. 复习血糖的来源、去路及其调节的有关理
论知识。
二、基本原理：
葡萄糖为一含醛基的已糖，在pH7.0条件， 葡萄糖氧化酶（glucose oxidase, GOD）可催化 血样中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢。
2020 7:13:39 AM07:13:392020/12/11
• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。12/11/
谢 谢 大 家 2020 7:13 AM12/11/2020 7:13 AM20.12.1120.12.11
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。11-Dec-2011 December 202020.12.11
四、实验操作：
1. 取硬质中试管三支，分别标以1、2、3 号，
2. 按下表操作：混匀后同时将三支试管 置于37℃水浴中，保温10分钟，
3. 在波长505nm处比色。以空白管调零 ，读取标准管及测定管吸光度。（即 测得A样和A标）
葡萄糖氧化酶法测定血糖的含量
原理：
葡萄糖 + O2 + H2O 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸 + H2O2
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6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 12月11 日星期 五上午 7时13 分39秒0 7:13:39 20.12.1 1
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7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年12 月上午 7时13 分20.12. 1107:1 3December 11, 2020
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1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.1 2.1120. 12.11Fr iday, December 11, 2020
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2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。07:1 3:3907: 13:3907 :1312/ 11/2020 7:13:39 AM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.12.1 107:13: 3907:1 3Dec-20 11-Dec-20
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 07:13:3 907:13: 3907:1 3Friday , December 11, 2020
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5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.12.1 120.12. 1107:1 3:3907: 13:39D ecembe r 11, 2020
2H2O2 + 4-氨基安替吡啉 + 酚
步骤：
过氧化物酶
醌亚胺 + 4H2O
空白管
标准管
样品管
工作液 蒸馏水
标准液（ 10mM）
样品
1.5 mL 0.03mL
1.5 mL
1.管，分别加入试剂混合均匀后，37摄氏度孵育10min，505nm比色， 以空白管试剂调零，分别读取标准管和样品管的吸光值，并计算样品的实际浓 度。