生物化学综合实验报告
华理生物化学实验报告

华理生物化学实验报告华理生物化学实验报告一、引言生物化学实验是生物学和化学两个学科的交叉领域,通过实验手段研究生物体内的化学反应和分子结构。
本次实验旨在探究华理生物化学实验的实验内容和实验方法,并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验目的本次实验的主要目的是掌握华理生物化学实验的相关知识和技能,了解生物体内的化学反应过程,培养实验操作能力和科学思维。
三、实验内容本次实验涉及到以下几个方面的内容:1. 蛋白质的分离与纯化:通过离心、过滤、电泳等方法,将蛋白质从混合溶液中分离出来,并进行纯化处理,以获得高纯度的蛋白质样品。
2. 酶的活性测定:通过酶促反应,测定酶的活性,了解酶在生物体内的重要作用。
常用的测定方法有比色法、荧光法和放射性同位素法等。
3. 脂类的提取与分析:通过溶剂萃取、薄层色谱等方法,提取和分析生物体内的脂类物质,了解脂类在生物体内的功能和代谢。
4. 糖类的测定和分析:通过酶促反应、比色法等方法,测定生物体内的糖类含量,并对其进行分析和研究,了解糖类在生物体内的重要作用。
四、实验方法1. 蛋白质的分离与纯化:将混合溶液经过离心分离,得到上清液,然后通过过滤、电泳等方法进行纯化处理。
2. 酶的活性测定:将酶样品与底物反应,观察反应产物的生成情况,并通过比色法、荧光法等测定酶的活性。
3. 脂类的提取与分析:将生物样品与有机溶剂进行溶剂萃取,得到脂类提取物,然后通过薄层色谱等方法进行分析。
4. 糖类的测定和分析:将生物样品与酶反应,观察反应产物的生成情况,并通过比色法等方法测定糖类的含量。
五、实验结果与讨论根据实验方法的操作步骤,我们得到了一系列实验结果。
通过对实验结果的分析和讨论,我们可以得出以下结论:1. 蛋白质的分离与纯化:通过离心、过滤、电泳等方法,我们成功地将蛋白质从混合溶液中分离出来,并获得了高纯度的蛋白质样品。
2. 酶的活性测定:通过酶促反应和比色法的测定,我们得到了酶的活性数据,并对其进行了分析和讨论。
生物化学实验报告(共2篇)

生物化学实验报告(共2篇)篇一:生物化学实验报告2012年生物化学实验b姓名:学号:实验时间:实验分组:组内成员:任课教师:实验报告xxxx 2012年11月17日摘要1. 实验部分1.1试剂与仪器1.试剂:(2)1 mol/l 醋酸,1 mol/l naoh,硫酸铵。
(3)平衡缓冲液:0.01 mol/l tris-hcl,ph 8.0。
(5)酶的底物溶液:用底物缓冲液配制15×10-3 mol/l 对硝基苯磷酸二钠溶液。
(7)分离胶缓冲液:1.5 mol/l tris-hcl缓冲液,ph 8.8,已加入10% sds。
(8)浓缩胶缓冲液:0.5 mol/l tris-hcl缓冲液,ph 6.8,已加入10% sds。
(13)脱色液:500 ml 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 ml。
匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。
1.2 小牛肠碱性磷酸酶提取方法2)将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中,加冰冷蒸馏水,高速匀浆,重复多次。
3)缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。
在4℃,10000 rpm条件下离心。
4)用滤布过滤去除杂质,倒入分液漏斗中,静止分层,取下层水相,用hac溶液调ph到4.9。
5)得到上清后放入离心管中,用naoh溶液调ph至6.5,称取硫酸铵加到离心管中溶解;再加冰冷丙酮,混匀,4℃静置30 min以上。
6)上清液中加入冰冷丙酮,4℃放置30 min以上。
4℃,10000 rpm,离心。
7)取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。
1.3 小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法2)紫外分光光度计检测条件为405 nm波长,测定时间60 s,取值2 s,记录范围0.0-1.5。
上下倒2次,放回分光光度计中,测定酶动力学曲线1.4 聚丙烯凝胶制备分离胶制备(浓度10%,制备量10 ml)试剂用量 h2o30% 丙烯酰胺1.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 8.810% 过硫酸铵temed4.1 ml 3.4 ml 2.4 ml 100 μl 10 μl浓缩胶制备(浓度5%,制备量6 ml)试剂 h2o30% 丙烯酰胺0.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 6.810% 过硫酸铵temed用量3.4 ml 1.0 ml 1.5 ml 60 μl 8 μl1.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量3)各取100 μl加入到5 ml考马斯亮蓝试管中,混匀,反应5 min以上。
生物化学实验报告

生物化学实验报告实验目的,通过本次实验,掌握生物化学实验的基本方法和技能,了解生物化学实验的原理和应用,提高实验操作能力和实验结果分析能力。
实验原理,生物化学实验是利用生物化学原理和方法,对生物体内的化学成分和代谢过程进行研究的实验。
其中包括蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子的分离、鉴定和定量分析。
实验材料和仪器,本次实验所需材料包括,蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子样品;试剂,酚酞、硫酸、氢氧化钠、蛋白质定性试剂、酶定性试剂等;仪器,分光光度计、离心机、电泳仪、显微镜等。
实验步骤:1. 蛋白质的定性实验,取少量蛋白质样品,加入蛋白质定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
2. 核酸的定性实验,取少量核酸样品,加入核酸定性试剂,观察颜色变化并记录结果。
3. 酶的定性实验,取少量酶样品,加入酶定性试剂,观察反应情况并记录结果。
4. 碳水化合物的定性实验,取少量碳水化合物样品,加入酚酞试剂,观察颜色变化并记录结果。
5. 生物分子的定量分析,利用分光光度计、离心机、电泳仪等仪器,对生物分子进行定量分析。
实验结果分析,根据实验结果,可以对样品中的蛋白质、核酸、酶、碳水化合物等生物分子进行鉴定和定量分析,从而了解生物体内的化学成分和代谢过程。
实验结论,通过本次实验,掌握了生物化学实验的基本方法和技能,了解了生物分子的定性和定量分析方法,提高了实验操作能力和实验结果分析能力。
实验意义,生物化学实验是生物化学理论与实践相结合的重要环节,通过实验可以加深对生物化学原理和方法的理解,为今后的科研工作和实验教学提供了重要的基础。
在本次实验中,我们不仅学会了生物分子的定性和定量分析方法,还培养了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
通过本次实验,我们对生物化学实验的原理和应用有了更深入的了解,提高了实验操作能力和实验结果分析能力,为今后的科研工作和实验教学打下了良好的基础。
生物化学综合实验报告(毛豆总蛋白质的提取及亲缘关系的研究)

生物化学综合实验毛豆总蛋白质的提取及亲缘关系的研究姓名:学号:201064学院:生物与食品工程学院班级:食品科学与工程10-2班目录摘要 (2)关键词 (2)引言 (2)目的 (3)原理 (3)试剂与器材 (5)实验操作流程 (6)实验结果及处理 (8)讨论 (11)参考文献 (12)毛豆不同组织可溶性蛋白提取和多肽组分差异研究摘要:本实验对毛豆的子叶与豆荚中可溶性蛋白进行提取,用考马斯亮蓝法对其定量分析,并采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳分离且比较其中的多肽组分,掌握蛋白质的一般研究方法和操作,而且对毛豆的不同组织的可溶性蛋白的性质有所了解。
关键词:毛豆可溶性蛋白考马斯亮蓝 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳Abstract:The experiments of soybean cotyledon and it's rind of soluble protein extraction, with Coomassie Brilliant Blue to test its quantitativeanalysis, and even a SDS polyacerylamide gel electrophoresis separationand is one of the protein components, polypeptide of the generalmethod ,and operation of sweet potatoes, and the organization of theprotein in nature have been resolved.Keywords:soybean solution protein Coomassie Brilliant Blue SDS-PAGE 引言蛋白质的性质、结构和功能的研究,以及生物体内蛋白质构象的变化都是建立在蛋白质分离纯化基础上的。
生物化学的实训报告

一、实训背景生物化学作为一门研究生命现象中的化学过程和原理的学科,是生命科学和医学领域的基础课程。
为了加深对生物化学理论知识的理解,提高实验技能,我们进行了为期两周的生物化学实训。
本次实训旨在通过实际操作,巩固课堂所学,培养学生的动手能力和创新意识。
二、实训目的1. 理解并掌握生物化学实验的基本操作和技能。
2. 培养严谨的科学态度和良好的实验习惯。
3. 加深对生物化学基本理论知识的理解和应用。
4. 提高分析问题和解决问题的能力。
三、实训内容本次实训主要包括以下内容:1. 蛋白质的鉴定与分离- 通过双缩脲法鉴定蛋白质的存在。
- 利用SDS-PAGE技术对蛋白质进行分离。
2. 核酸的提取与鉴定- 从细胞中提取DNA和RNA。
- 通过琼脂糖凝胶电泳法检测DNA和RNA的纯度和完整性。
3. 酶活性的测定- 测定不同底物对酶活性的影响。
- 分析温度、pH值等因素对酶活性的影响。
4. 代谢途径的实验研究- 研究糖酵解、三羧酸循环等代谢途径。
四、实训过程1. 蛋白质的鉴定与分离- 在实验开始前,我们首先复习了蛋白质的鉴定方法和SDS-PAGE技术。
- 通过实验操作,我们成功地将蛋白质从样品中提取出来,并利用双缩脲法进行了鉴定。
- 在SDS-PAGE实验中,我们严格按照操作步骤进行,成功分离了蛋白质。
2. 核酸的提取与鉴定- 在核酸提取实验中,我们学习了从细胞中提取DNA和RNA的方法。
- 通过琼脂糖凝胶电泳法,我们检测了DNA和RNA的纯度和完整性。
3. 酶活性的测定- 在酶活性测定实验中,我们研究了不同底物对酶活性的影响,并分析了温度、pH值等因素对酶活性的影响。
- 通过实验,我们得出了酶活性与底物浓度、温度和pH值之间的关系。
4. 代谢途径的实验研究- 在代谢途径实验研究中,我们重点研究了糖酵解、三羧酸循环等代谢途径。
- 通过实验,我们加深了对代谢途径的理解,并掌握了相关实验技能。
五、实训结果与分析1. 蛋白质的鉴定与分离- 双缩脲法成功鉴定了蛋白质的存在。
还原糖和总糖的测定

生物化学综合实验报告题目:3,5—二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓名:学号:同组成员:分院(系):专业班级:指导教师:完成日期:年月日1。
实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2。
实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度,制得标准曲线,在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。
3。
实验仪器和试剂试剂:1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl,6mol/L NaOH仪器:25,100ml容量瓶、1,5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱4。
实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0。
2、0。
4、0.6、0。
8、1.0毫升在加入蒸馏水2。
0、1.8、1。
6、1。
4、1.2、1.0毫升,最后向其中各加入DNS试剂1。
5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min,冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线,用1号样调零,测其分光度,制得标准曲线。
二、还原糖提取:取3g山芋粉,加入30ml水,搅匀后在50摄水中保温20min,离心,取滤液,用100ml容量瓶定容得还原糖待测液.总糖提取:取0.2克山芋粉,加入试管中吸取5ml HCL溶液,8ml蒸馏水搅匀,100摄下恒温水浴30min,冷却,NaOH调节PH至中性,离心,滤液用100ml容量瓶定容,得总糖待测液.测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1。
0、1。
0、0、0毫升,总糖0、0、0、0.5、0。
5毫升,蒸馏水2。
0、1。
0、1。
0、1。
5、1。
5毫升,DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却,稀释至25毫升用一号管调节分光度为0,测总糖和还原糖的分光度.5数据处理葡萄糖标准曲线表管号0 1 2 3 4 5 含糖总量(mg)0 0.2 0。
4 0。
6 0。
8 1 葡萄糖标液(ml)0 0.2 0.4 0。
实验报告生物化学实验结果与分析

实验报告生物化学实验结果与分析实验报告:生物化学实验结果与分析本次实验旨在研究蛋白质的组成和功能。
通过对不同样本进行定性和定量分析,我们探索了不同蛋白质的特性和潜在应用。
以下是实验结果和分析。
1. 实验方法我们使用了多种技术和试剂来分析蛋白质样本。
首先,我们采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方法,将不同样本中的蛋白质分离。
接着,我们使用染色剂对蛋白质进行染色,并通过分析染色带的迁移距离和颜色密度,评估蛋白质的相对含量。
最后,我们利用质谱技术,鉴定和分析蛋白质的序列和结构。
2. 实验结果与分析2.1 蛋白质组成分析在SDS-PAGE实验中,我们观察到每个样本中的多个蛋白质带。
根据迁移距离和颜色密度,我们可以初步判断不同样本中蛋白质的相对含量和分布情况。
通过与已知标准品进行比对,我们鉴定了几种主要蛋白质。
进一步的质谱分析结果显示,这些蛋白质具有不同的氨基酸序列和结构。
2.2 蛋白质功能分析针对不同样本中的蛋白质,我们通过文献研究和功能检测,评估了它们可能的功能和应用。
例如,在样本A中,我们发现一种具有抗氧化性质的蛋白质,可以用于制备抗氧化剂;在样本B中,我们发现一种具有抗菌活性的蛋白质,对抗多种细菌有显著抑制作用。
这些发现为进一步研究和应用这些蛋白质提供了潜在的方向。
2.3 蛋白质结构与功能关系通过蛋白质质谱分析和文献研究,我们尝试探究蛋白质结构与功能之间的关系。
通过比对不同样本中蛋白质的结构,我们发现不同结构和序列的蛋白质可能具有不同的功能和特性。
例如,在一些样本中,我们发现含有特定结构域的蛋白质对特定生物过程具有重要影响。
这一发现为进一步研究和改造蛋白质提供了理论基础。
3. 结论和展望通过本次实验,我们成功分析了不同样本中蛋白质的组成和功能。
我们发现不同样本中存在多种蛋白质,并且这些蛋白质具有不同的氨基酸序列、结构和功能。
这为进一步研究和应用蛋白质提供了基础和方向。
然而,本次实验还存在一些限制,如样本数量不足和分析深度有限等。
大学生物化学实验报告

一、实验名称:蛋白质分子量测定——凝胶层析法二、实验目的:1. 了解凝胶层析法的基本原理和操作步骤。
2. 学习利用凝胶层析法测定蛋白质的分子量。
3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
三、实验原理:凝胶层析法是一种利用凝胶作为固定相,通过分子大小不同的物质在凝胶孔径中的移动速度差异来实现分离的方法。
在凝胶层析中,大分子物质不能进入凝胶内部的孔径,而小分子物质可以进入孔径,从而在洗脱过程中,大分子物质先流出,小分子物质后流出。
通过测量不同分子量蛋白质的洗脱体积,可以计算出其分子量。
四、实验材料与试剂:1. 凝胶层析柱(直径1.5cm,长30cm)2. 凝胶(聚丙烯酰胺凝胶)3. 蛋白质样品(已知分子量)4. 标准样品(已知分子量)5. 洗脱液(Tris-HCl缓冲液)6. 显色剂(考马斯亮蓝G-250)7. 移液器8. 旋转混匀器9. 分光光度计五、实验步骤:1. 准备凝胶层析柱:将凝胶倒入层析柱中,用洗脱液充分浸泡凝胶,直至凝胶膨胀并固定在层析柱中。
2. 准备样品:将蛋白质样品和标准样品分别稀释至适当浓度。
3. 加样:将蛋白质样品和标准样品分别加入凝胶层析柱中,用洗脱液洗脱,收集不同洗脱体积的洗脱液。
4. 显色:将收集到的洗脱液加入考马斯亮蓝G-250显色剂,室温下显色10分钟。
5. 测量:用分光光度计测定显色液在595nm处的吸光度值。
6. 数据处理:以标准样品的分子量为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
根据蛋白质样品的吸光度值,从标准曲线上查得蛋白质的分子量。
六、实验结果:(此处插入实验数据表格,包括标准样品和蛋白质样品的分子量、洗脱体积、吸光度值等)七、实验分析:通过凝胶层析法,成功分离了蛋白质样品,并测定了其分子量。
实验结果表明,蛋白质样品的分子量与标准样品的分子量相符,说明实验操作正确。
八、讨论与心得:1. 凝胶层析法是一种简单、有效的蛋白质分离方法,可用于测定蛋白质的分子量。
2. 在实验过程中,要注意凝胶层析柱的制备、样品的加入和洗脱液的收集等操作步骤,以保证实验结果的准确性。
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存车处生物化学综合实验实验报告项目名称:核酸的分离纯化及性质研究指导教师:商亚芳班级:食品科学与工程类13-04班姓名:俞海清学号:2013218687 日期:2015/07/02-07/03 小组成员:俞海清曾斯棋核酸的分离纯化及其性质研究摘要:提取植物组织DNA和动物肝脏的DNA,先要破碎细胞,然后通过离心获得沉淀。
分理出脱氧核糖蛋白(DNP)。
利用阴离子除垢剂(SDS),将蛋白质和DNA 分离开来,用氯仿-异戊醇去蛋白质蛋白质变性,然后离心除去变性蛋白质,之后用乙醇将DNA沉淀出来,得到粗蛋白质。
为了获得高纯度的DNA,采用适量的RNase来降解残留的RNA,再利用乙醇来提取DNA,重复多次来获得较纯的DNA。
再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度时,发现提取出来的DNA纯度比较高。
利用二苯胺法测定DNA的含量,发现DNA含量偏低。
DNA产率很低。
最后采用琼脂糖凝胶电泳来分离DNA,测定DNA片段的分子质量。
结果实验成功的在紫外线下观察出了标准DNA条带以及待测样品条带。
Abstract: In order to extract the plant’s DNA and the pluck’s DNA.we should break cells,then separate the e the SDS to break protein and DNA.Phenol – chloroforM – isoaMyl alcohol Mixture can make protein denaturation .place it on the centrifugal machine to remove the protein .Then,take let the DNA dip into ethylalcohol.it can separate the DNA .In order to obtain high purity DNA, use the right amount of RNase to degradate residual RNA, recycled ethanol to extract DNA over and over ing ultraviolet absorption characteristics determine the purity of DNA .we found that the purity of DNA is high.Diphenylamine is used to check the content of DNA, the discovery of DNA’s content is low. DNA’s yield is very low.Finally, agarose gel electrophores is used to separate DNA and check molecular weight of DNA fragments.Under the uv light,we found standard DNA banding and the banding which belong to pending text sample successfully.关键词:DNA 分离二苯胺乙醇琼脂糖凝胶电泳氯仿-异戊烷Key words:DNA separate diphenylamineethylalcohol agarose gel electrophoresPhenol – chloroforM – isoaMyl alcohol Mixture前言:核酸(nucleic acid)是遗传信息的携带者,是基因表达的物质基础。
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,为生命的最基本物质之一。
核酸广泛存在于所有动植物细胞微生物体内,生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。
无论是进行核酸结构,还是功能研究,首先需要对核酸进行分离和纯化。
核酸样品质量将直接关系到实验的成败。
在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸的磷酸二酯键,破坏核酸一级结构。
所用器械和一些试剂需高温灭菌,提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂。
实验原理:1.植物组织中核酸的分离与纯化原理:DNA存在于细胞核中,天然状态的DNA大多数是以脱氧核糖核蛋白的形式存在,从细胞中提取DNA时,一般先获得脱氧核糖(DNP),在将蛋白质除去。
阴离子去垢剂SDS可使DNA与蛋白质分离,再用含少量的氯仿去蛋白质,最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。
DNP与核糖核蛋白(RNP)在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大,利用这一特性可将二者分离。
以NACL为例RNP0.14mol/LNACL中溶解度很大,而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1%;当NACL浓度逐渐增大时,RNP的溶解度变化不大,而DNP的溶解度则随之增加;当NACL的浓度为1mol/L时,DNP的溶解度最大,为纯水中溶解度的2倍,因此通常可用1mol/LNACL提取DNA。
进一步制备高纯度的DNA,可用适量的RNase处理提取液,以降解DNA中掺杂的RNA.为了防止提取过程中DNA被细胞中释放出来的DNase 降解以及DNA变性,整个提取过程应该在低温度下进行,同时可在研磨缓冲液中加柠檬酸三钠和Na2-EDTA抑制DNase的活性。
提取的DNA是否为纯净,双链,高分子化合物,一般要通过紫外吸收,化学测定和电镜观察等方面的鉴定,本实验采用紫外吸收法。
2. 肝脏中DNA的提取及纯度鉴定原理:在细胞核内,核酸通常是与某些组织蛋白质结合成复合物-核糖核蛋白和脱氧核糖核蛋白形式存在的,因此,在制备核酸时,需先将组织或细胞匀浆或破碎,使之释放出核蛋白,再设法将这两大类蛋白分开,再通过蛋白质变性如苯酚,氯仿等,去垢剂如十二烷磺基硫酸钠或使用蛋白酶处理,除去蛋白质,使核酸与蛋白质分离,从而将核酸与蛋白质分离开。
RNP和DNP在不同浓度的电解质溶液中的溶解度差异很大。
如在高浓度氯化钠(12mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小。
在低浓度氯化钠溶液中(0.14mol/L),DNP的溶解度很小,RNP的溶解度很大。
因此,可以利用不同浓度的氯化钠,将两者分离。
将抽提得到的核蛋白用SDS或苯酚处理使核蛋白解聚,DNA/RNA及与蛋白质分开;用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去,而DNA 则溶解于溶液中。
经上述分离纯化后的核酸盐溶液,再利用其不溶于有机溶剂的性质,而使其在适当浓度的亲水有机溶剂(如乙醇)中呈絮状沉淀析出。
重复进行上述处理,即可制成所要求纯度的脱氧核糖核酸制品。
提纯的DNA或DNA钠盐为白色纤维状固体。
为了防止DNA酶解,提取时加入EDTA。
因为EDTA是抑制DNA酶活性最好的抑制剂之一,由于DNA 酶的酶解作用必须有Ca2+及Mg2+的存在,故只要在提取液中加入少量的金属螯合剂EDTA,就可使DNA酶失活。
本实验采用动物新鲜肝脏为提取DNA的材料,通过组织匀浆,使细胞破碎,利用RNP和DNP在一定浓度氯化钠溶液中溶解度不同的特点,提取DNP。
用SDS使蛋白质变性和核蛋白解聚,释放出DNA。
用氯仿使蛋白质变性沉淀,离心去除。
用乙醇作沉淀剂,得到较纯的DNA。
用Rnsae去除RNA,再用氯仿使酶蛋白变性沉淀,离心去除,最后用乙醇作沉淀剂,得到更纯的DNA。
DNA纯度鉴定需要测定A260,A230和A280的值,经验数据表明,高纯度DNA样品A260/A280的值在1.9左右,当比值高时说明样品中混杂有RNA,当比值低时表明样品中蛋白质没有脱净;而A260/A230应大于或等于2.0,若比值过小则表明有杂质(一般多酚类或色素)。
因此,可利用A260/A280和A260/A230比值的大小来鉴定DNA样品的纯度。
3. 二苯胺法测定核酸的含量原理:脱氧核糖核酸中的α—脱氧核糖在酸性环境中变成ω—羟基—γ酮基戊醛与二苯胺试剂一起加热产生蓝色化合物,在595nm处有最大的吸收,在每毫升含DNA20~400微克范围内,光密度与DNA的浓度成正比,在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应的灵敏度。
除DNA外,脱氧木糖,阿拉伯糖也有同样的反应。
DNA HO CH2C — CH2 CHO 蓝色化合物酸性条件二苯胺==Oω—羟基—γ酮基戊醛4.DNA的琼脂糖凝胶电泳原理:DNA分子在碱性环境中(pH8.3缓冲液)带负电荷,外加电场作用下,向正极泳动。
不同的DNA片段由于其电荷、分子量大小及构型的不同,在电泳时的泳动速率就不同,从而可以区分出不同的区带,电泳后经溴乙锭染色,在波长254nm 紫外光照射下,DNA显橙红色荧光。
琼脂糖凝胶电泳对DNA的分离作用主要依据DNA的分子量及分子构型,同时与凝胶的浓度也有密切关系。
一定大小的DNA 片段在不同浓度的琼脂糖凝胶中,电泳迁移率不相同。
不同浓度的琼脂糖凝胶适宜分离DNA片段大小范围见表1。
因而要有效分离大小不同的DNA片段,主要是选用适当的琼脂糖凝胶浓度。
不同构型的DNA 在琼脂糖凝胶中的电泳速度差别较大。
在分子量相当的情况下,不同构型的DNA移动速度次序如下:共价闭环DNA>直线DNA>开环的双链环状DNA。
在同一浓度的凝胶中,分子量较小的DNA片段比较大的片段快。
DNA片段的迁移距离(迁移率)与它的大小(分子量)的对数成反比。
将未知DNA的迁移距离与已知分子大小的DNA标准物的电泳迁移距离进行比较,即可计算出未知DNA片段的大小。
1.实验仪器与试剂:1.实验试剂(1)以小白菜为材料提取DNA(2)研磨缓冲液:1mol/氯化钠,0.045mol/L 柠檬酸三钠盐,0.1mol/L乙二胺四乙酸二钠盐(Na2-EDTA),1%的十二烷基硫酸钠(SDS),并调到PH=7.0.(3)氯仿-异戊醇(V/v):氯仿:异戊醇=24:1(4)95%乙醇溶液(5)RNase溶液(6)TE溶液:含10mmol/L的Tris-HCL, 1mol/L的Na2-EDTA。
动物新鲜肝脏(猪)。
(7) 4mol/L 氯化钠溶液:将233.84g氯化钠溶于水,稀释至1000mL.(8) 0.14mol/L氯化钠-0.15mol/L乙二胺四乙酸钠溶液:溶解8.18g氯化钠及37.2g 乙二胺四乙酸钠于蒸馏水,稀释至1000mL。
(9) 10%的SDS溶液:25g 十二烷基硫酸钠溶于100mL 蒸馏水中。
(10) 15mol/L氯化钠-1.5mol/L柠檬酸三钠溶液:0.88g氯化钠和0.44g柠檬酸三钠溶于蒸馏水中,稀释至1000mL.(11) 1.5mol/L氯化钠-0.15mol/L柠檬酸三钠溶液:87.66g氯化钠和44.12g柠檬酸三钠溶于蒸馏水中,稀释至1000mL.(12)RNase溶液(10mg/mL):将RNaseA 10mg 溶解于1mL TE 缓冲液中。