纯化层析系统介绍
蛋白质纯化与层析技术
蛋白质纯化与层析技术蛋白质纯化是生物化学和生物技术领域中至关重要的过程，用于从混合物中分离和纯化目标蛋白质。
层析技术作为蛋白质纯化的关键步骤之一，它不仅可以选择性地将目标蛋白质从混合物中分离出来，还可以去除杂质，获得高纯度的蛋白质样品。
一、蛋白质纯化的基本原理蛋白质纯化的基本原理是根据不同的理化性质，如分子量、极性、电荷等特征，选择合适的纯化方法分离目标蛋白质。
常见的蛋白质纯化方法包括离心、超滤、电泳、沉淀和层析等。
离心法是通过调整离心速度和时间，根据不同蛋白质的分子量和密度差异，将目标蛋白质和非目标蛋白质分层离心，进而实现纯化。
超滤法则是利用滤膜对溶液进行筛选分离，减少蛋白质和其他分子之间的尺寸和质量差异，从而实现蛋白质的纯化。
电泳法是根据蛋白质在电场中不同的电荷和分子量特性，使其在凝胶上移动的速度不同，从而实现纯化和分离。
沉淀法则是通过添加适当的沉淀剂，使蛋白质凝聚成颗粒，经过离心后分离出来。
而层析法是根据蛋白质与层析介质之间的相互作用，通过选择性吸附和洗脱，将目标蛋白质从混合物中纯化出来。
二、层析技术的分类与原理层析技术是在纯化过程中广泛使用的方法，根据不同的工作原理和介质特性，可以将其分为几种不同的类型。
常见的层析技术包括吸附层析、凝胶层析、亲和层析和离子交换层析等。
吸附层析是通过目标蛋白质与特定层析介质之间的亲和力，使目标蛋白质被吸附在介质上，从而实现纯化。
凝胶层析则是利用介质中多孔性凝胶矩阵的分子筛效应，根据蛋白质的分子量和形状特征，通过不同的渗透效应将目标蛋白质分离出来。
亲和层析是利用目标蛋白质与特定配体（如抗体）之间的特异性结合，使目标蛋白质选择性地与介质上的配体结合，从而实现纯化。
离子交换层析则是基于蛋白质表面的电荷特性，通过电荷间的相互作用，使目标蛋白质与介质表面的离子互相吸附和洗脱，实现纯化。
三、层析技术的操作步骤和优化层析技术的操作步骤通常包括前处理、样品加载、洗脱和再生等步骤。
akta层析系统参数
AKTA层析系统参数1. 介绍AKTA层析系统是一种高效且可靠的分离技术，用于生物分子的层析纯化。
层析系统参数是指在使用AKTA层析系统时需要设定的一系列参数，包括流速、洗脱梯度、柱温等。
正确设置这些参数能够保证分离效果和纯化纯度。
在本文中，我们将详细探讨AKTA层析系统参数的选择和优化，帮助您合理使用该系统并取得最佳的分离效果。
2. 流速参数流速是指液相在层析柱中的通过速率。
流速参数的选择对于分离效果和纯化纯度有很大的影响。
2.1 比线速度比线速度是流速参数的常用表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱截面积的体积。
一般来说，比线速度越大，分离效果越好，但可能会降低纯化纯度。
建议在初始实验阶段采用较低的比线速度，然后根据样品的性质和分离需求逐步调整。
2.2 线速度线速度是流速参数的另一种表示方法，其定义为单位时间内液相通过层析柱的线性距离。
线速度与比线速度之间存在线性关系，可以相互转换。
3. 洗脱梯度参数洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的成分，以实现分离目标。
洗脱梯度参数的选择对分离效果和纯化纯度起着至关重要的作用。
3.1 起始缓冲液起始缓冲液是指开始层析时的溶液组成。
一般来说，起始缓冲液的性质应与待纯化物质相似，以提高分离效果。
如果待纯化物质溶解在缓冲液中，可以选择与之相同或类似的缓冲溶液。
3.2 洗脱缓冲液洗脱缓冲液是指在层析过程中使用的溶液，通过改变洗脱缓冲液的成分来实现分离目标。
选择合适的洗脱缓冲液需要考虑待纯化物质的亲和性和纯化纯度要求。
3.3 洗脱梯度洗脱梯度是指在层析过程中逐渐改变洗脱缓冲液的组成。
一般来说，采用线性梯度或者非线性梯度都可以实现分离效果。
线性梯度容易操作，但纯化纯度可能相对较低；非线性梯度可以提高纯化纯度，但操作难度较大。
根据实验要求和待纯化物质的特性选择合适的洗脱梯度。
4. 柱温参数柱温是指在层析过程中控制的柱子温度。
柱温参数的选择对于柱子的稳定性和分离效果有一定影响。
层析系统操作方法
层析系统操作方法
层析系统是一种高效的分离、纯化、分析化合物的方法。
其操作方法如下：
1. 样品的制备：将待分析的化合物或混合物溶解或悬浮于适当的溶剂中，以备注入样品进样口。
2. 进样：将样品注入样品进样口。
通常，进样口位于柱子的顶部或侧面，具体位置根据不同型号的层析柱而定。
3. 选择移动相：选择适当的移动相。
通常有两种移动相，一种是常规液相，另一种是气相。
4. 开始层析：开启泵，让移动相流经层析柱，分离化合物。
移动相会使得不同化合物在柱子内产生不同的扩散速度，从而分离。
5. 收集分离后的化合物：化合物随着移动相流出层析柱，通过检测器进行检测并记录。
对于需要进一步分析的化合物，可以通过收集样品进行后续的调查研究。
6. 停止层析：关闭泵，停止层析操作，清洗设备。
需要注意的是，在进行层析操作之前，需要根据不同的化合物选择不同的适宜移动相，从而实现更好的分离效果。
蛋白纯化液相层析
俄国植物学家米哈伊尔·茨维特-色谱学之父 茨维特奖-色谱界大奖
1906年茨维特用碳酸钙填充竖 立的玻璃管，以石油醚洗脱植 物色素的提取液，植物色素在 碳酸钙柱中实现分离。由于这 一实验将混合的植物色素分离 为不同的色带，因此他将这种 方法命名色谱法。
层析法的分类
1、根据固定相基质的形式分类，层析可以分为纸层析、薄层层析、毛 细管层析和柱层析。
预期使用有什么联系？
• 什么东西必须去除？ • 什么东西必须完全去除？ • 最终纯化的规模是什么？ • 如果需要扩大规模，用已选择的纯化技术将会产生什
么样的后果？
• 在经济方面的限制是什么？ • 什么样的资源和设备是可以利用的？
三步纯化策略CIPP
Capture Intermediate Purification Polishing
Chromatography，HIC ） • 反相层析（Reversed Phase Chromatography，RPC） • 亲和层析（Affinity Chromatography，AC ） • 总结
• 蛋白纯化一般需要考虑回答的问题： • 制备产品的目的是什么？ • 什么样的原材料是可以使用的和如何处理它？ • 纯度问题与材料的来源有什么样的关系，和终产品的
• 正相层析，属于分配层析，固定相极性大于流动相。 • 正相键合相层析，固定相共价键合在固定基质上的正相层析。 • 反相层析，属于分配层析，固定相极性小于流动相。 • 反相键合相层析，固定相共价键合在固定基质上的反相层析。 • 凝胶过滤层析，属于分子筛层析，流动相主要为水溶液。 • 凝胶渗透层析，属于分子筛层析，流动相主要为有机溶液。
• 每一个纯化参数的重要性是变化的，这主要取决于一个纯化步骤是否 用于捕获、中度纯化或者精细纯化阶段。
柱层析分离纯化原理
柱层析分离纯化原理一、柱层析分离纯化原理概述柱层析分离纯化是一种常用的生物分子分离纯化技术，其基本原理是利用吸附剂对不同组分的吸附能力的差异，实现对混合物的分离。
在柱层析过程中，混合物溶液通过加压或重力作用，流经吸附剂填充的色谱柱。
不同组分在固定相和流动相之间的分配系数不同，因此会以不同的速度在柱内移动，从而实现各组分的分离。
二、吸附剂的种类与性质1.硅胶：硅胶是一种常见的柱层析吸附剂，其表面具有极性基团，可以与非极性物质产生相互作用。
硅胶具有高比表面积、高孔隙率等特点，适用于多种生物分子的分离纯化。
2.氧化铝：氧化铝是一种具有中强碱性的吸附剂，适用于酸性物质的分离。
其表面具有较高的活性，能够与多种物质发生相互作用。
3.活性炭：活性炭是一种具有高比表面积和发达孔隙结构的吸附剂，能够吸附多种有机物质。
其表面具有较强的化学活性，可以通过与被吸附物质发生化学反应实现分离。
4.聚酰胺：聚酰胺是一种高分子吸附剂，能够通过氢键作用吸附多种物质。
其优点是选择性高、吸附能力强，适用于蛋白质、核酸等生物分子的分离纯化。
三、流动相与固定相的选择1.流动相：流动相是一种连续相，在柱层析过程中不断通过色谱柱。
选择适当的流动相有助于提高柱层析的分离效果。
常见的流动相包括有机溶剂和水溶液等。
2.固定相：固定相是色谱柱中的填料，是实现分离的关键因素。
根据被分离物质的性质选择合适的固定相，可以提高分离的选择性和效率。
四、洗脱方式及其影响因素1.洗脱方式：洗脱是指将已吸附在固定相上的组分从固定相中转移至流动相的过程。
常见的洗脱方式包括线性梯度洗脱和阶跃式洗脱等。
选择适当的洗脱方式有助于提高分离效果和纯度。
2.影响因素：洗脱方式的优劣受多种因素影响，如洗脱液的组成、流速、洗脱梯度等。
通过优化这些参数，可以提高柱层析的分离效果和纯度。
五、柱层析分离纯化的应用领域1.生物分子分离纯化：柱层析技术在生物分子分离纯化中应用广泛，如蛋白质、核酸、糖类等物质的分离纯化。
层析系统介绍
蛋白质纯化系统概况蛋白质纯化系统是我们开发的具有自主知识产权的产品，主要包括高压梯度层析泵、进样阀、多波长紫外检测器、电导、pH、温度检测器等硬件，以及用于仪器控制、方法编辑、数据及用户管理的多界面智能化计算机软件。
可进行离子交换层析、疏水作用层析、反相层析、亲和层析等不同层析模式操作，用于各类疫苗、抗体药物、酶、天然产物有效成分等的分离纯化。
Protein purification system, the product with independent enzyme and the active ingredients in natural product. intellectual property rights, is developed by ourselves. It consists of high-pressure gradient pump, sample valve, multi-wavelength UV detector, sensors (conductivity, pH and temperature) and other hardware, as well as the intelligent software for instruments control, method edit, data and user management. The system could be operated with various chromatography mode, including ion-exchange, hydrophobic interaction, affinity, reversed phase, etc., for the separation and purification of vaccine, antibody,产品优势•生物兼容性高压梯度泵•3波长同时在线紫外检测•网络化数据通讯模块•全流路参数在线显示,计算机在线操作•High pressure gradient pump with biological compatibility•Three wavelengths UV detectionsimultaneously•Networked data communication module•Parameters of the whole flow-pathdisplayed on-line•On-line operation with computer技术规格。
9种层析分离纯化方法详解
9种层析分离纯化方法详解层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。
所有的层析系统都由两个相组成：一是固定相，它或者是固体物质或者是固定于固体物质上的成分；另一是流动相，即可以流动的物质，如水和各种溶媒。
当待分离的混合物随溶媒（流动相）通过固定相时，由于各组份的理化性质存在差异，与两相发生相互作用（吸附、溶解、结合等）的能力不同，在两相中的分配（含量对比）不同，而且随溶媒向前移动，各组份不断地在两相中进行再分配。
与固定相相互作用力越弱的组份，随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移动的速度快。
反之，与固定相相互作用越强的组份，向前移动速度越慢。
分部收集流出液，可得到样品中所含的各单一组份，从而达到将各组份分离的目的。
按层析原理可将层析分为以下9种：1、亲和层析利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离的目的。
将可亲和的一对分子中的一方以共价键形式与不溶性载体相连作为固定相吸附剂，当含混合组分的样品通过此固定相时，只有和固定相分子有特异亲和力的物质，才能被固定相吸附结合，性无关组分随流动相流出。
改变流动相组分，可将结合的亲和物洗脱下来。
亲和层析中所用的载体称为基质，与基质共价连接的化合物称配基。
具有专一亲和力的生物分子对主要有：抗原与抗体，DNA与互补DNA或RNA，酶与底物、激素与受体、维生素与特异结合蛋白、糖蛋白与植物凝集素等。
亲和层析可用于纯化生物大分子、稀释液的浓缩、不稳定蛋白质的贮藏、分离核酸等。
亲和层析纯化的分离原理特点：亲和层析具有高选择性、高纯度、快速、浓缩等特点，在重组蛋白的分离中多作为第一步的粗纯，实现对绝大部分杂质蛋白的去除。
2、离子交换层析采用具有离子交换性能的物质作固定相，利用它与流动相中的离子能进行可逆交换的性质来分离离子型化合物的方法。
主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其他带电荷的生物分子。
不同蛋白质的等电点（pI，isoelectric point）特性，使在不同pH缓冲液条件下所带正/负净电荷不同，选择不同的离子交换柱实现分离。
纯化层析系统介绍
Sepax Instruments
内容
SCG-100 蛋白纯化系统
SCG-030
蛋白纯化系统
Sepax Instruments
SCG介绍：型号
SCG色谱系统型号：
• SCG-100 • 流速范围：0.01-100.0 ml/min • 最小步进：0.01ml/min • 最佳流速范围：1-60ml/min • SCG-030 • 流速范围：0.001-36.000ml/min • 最小步进：0.001ml/min • 最佳流速范围：0.5-20ml/min
Sepax Instruments
产品功能
Buffer选择
• 2通道，4通道，11通道， • 样品路气泡传感器，用于监控上样
UV检测器：
• 外置流通池，缩短系统死体积，便于维护 • 200~400nm，双通道 • 200~600nm，四通道/200~800nm，四通道
输液泵：
• 优异的性能及高可靠性 • P100（0.01~100.00ml/min），P030 （0.001~36.000ml/min） • 二元高压混合，动态混合器（0.6ml、2ml、 5ml、10ml）
Sepax Instruments
SCG介绍：可选模块
SCG 蛋白纯化系统
流动相选择
二通道 A/B SCG-100 二元高压输液泵
四通道 分别为A1/A2/B1/B2 SCG-030 二元高压输液泵 多通道选择 （最大至8通道）
输液泵
进样系统
C1CF-2346 手动切换进样阀
柱位阀
C52-3346I 自动切换进样器
Uv-Vis
SCG DAD600 4通道检测器
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
客户比较关注的设备方面的问题
5.收集方面： 我公司生产的SCG蛋白纯化系统收集方式分为两
种：阀收集和组分收集器收集。阀收集优点是收集 体积较大，可自己设定收集体积，缺点是组份收集 少。组分收集器收集具有以下优点：1. 支持多种收 集方式；2. 配制多种收集架，方便样品转移（96孔 板收集架，15m收集架，50ml收集架等）；3. 自动、 手动灵活收集；4. 可通SCG工作站控制，进行多种方 式收集；5. 组份收集多，且控制方便。缺点是收集 体积较少。客户可根据需要，选择合适的收集方式 及收集架等。采用进口元件，保证了收集的稳定性 及准确性。
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
7.清洗方面： SCG纯化系统中泵有自冲洗功能，防止泵头因缓
冲液导致的盐析出损伤其使用寿命，避免造成交叉 污染。运行过程中更换缓冲液，无需将柱子拆掉， 泵冲洗即可快速更换缓冲液以及排气泡。当实验完 成后，可实现在线清洗（CIP），因管路及流通池的 体积很小，整个流路的清洗方便，无卫生死角。
Sepax Instruments
模块：色谱工作站
方法编辑
Sepax Instruments
模块：色谱工作站
运行功能
1.运行过程中实时显示各种参数，如时间、体积、流速、压力、pH、UV、电导等，参数显示可 调整及颜色标记等。 2.软件全程LOGBOOK记录，可随时查看仪器任意时刻的运行状态记录。 3.实时方法编缉，可在线修改各种参数，修改后可选择运行完梯度并可设置自动暂停和自动停止， 方便实时修改和优化实验条件。 4.可手动快速运行模式，操作方便快捷，提高纯化方法探索的便捷性。 5.自动上样阀上样，软件可标上时间位置，并将当前运行时间重置归零，方便纯化后数据分析与 整理。 6.过压报警、收集报警等保护功能，能实时保护层析柱与系统。实时自动保存数据功能，可防止 意外断电导致的数据丢失。 7.SCG独有的手机、平板远程控制功能，可随时控制及观察当前的运行状态，调整方法，做到在 办公区即可对实验监控，方便操作，更安全，更健康。 8.全中文操作界面，友好图形交互，操作简单、功能全面、性能稳定。 9.可对数据进行分析，验证实验方法、填料、柱子等的稳定性、可靠性。 10.收集方式的多样性，可选择阀收集或收集架收集，且收集架具有自动识别及记忆功能。 11.可设置多个方法，采用不同方法对一个或多个样品，通过不同的柱子，采用不同的缓冲液对 样品进行纯化洗脱，可实现过夜无人值守等。 12.各种参数校正可通过软件控制，方便操作及管理。 13.动态混合器使得缓冲液的配比更精确；气泡传感器可检测到管路液体有无气泡，避免气泡进 到柱子，对填料造成损伤；泵头的自冲洗功能避免 盐析出污染泵头；更换缓冲液无需拆柱子，且 较大流速可以很快完成缓冲液的更换及气泡的排出。
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
2.检测器方面： 我公司生产的SCG蛋白纯化系统采用美国进口检
测器，检测波长精确到1nm，噪声在±4*10﹣5 AU （1s）内，漂移在1*10﹣3 AU/Hr内。有多种类型可 供客户选择，DAD400、DAD600以及DAD800，检测 范围分别为200-400nm、200-600nm、190-840nm。 客户可以根据自己的样品情况选择合适的检测器。
SCG-030
• 0.001-36.000ml/min • 建议使用范围：0.5-20ml/min • 步进：0.001ml/min • 4000psi
Sepax Instruments
Uv-Vis
SCG DAD600 4通道检测器
• 200-600nm • 程序设定1-4通道波长实时输出 • 生物惰性材料 • 光程：2.4mm(SCG-100)/5mm(SCG-030)/10mm • 氘灯 • CCD传感器
Sepax Instruments
蛋白纯化流程
典型的纯化流程
• 采用一种流动相平衡色谱柱
平衡
• 手动或上样泵将样品注入样品环 进样 • 单独的上样泵或其中一个输液泵将样品注入色谱柱
• 采用一种流动相将不需要保留的组份清洗
柱冲洗
• 采用梯度将目标组份洗脱出来，并进行收集
洗脱
• 将强保留的组份清洗干净
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
，灵敏度较高。pH检测器检测范围是0-14，精确 度为0.1，支持温度补偿。电导检测器检测范围是2uS999.99mS/cm，噪音小于0.1%。这两种检测器采用外 接流通池，便于清洗及减少管路死体积。一般做蛋白 的电导检测是必须得分，客户可根据自己样品的情况， 选择是否需要配置pH检测器。
5ml、10ml）
进样阀
• 支持Load、Inject、Purge、Sample Direct 功能
• Sample loop:20ul,50ul,100ul,250ul,500ul,1ml,2ml
柱位阀
• 1 column,1bypass • 5 column,1bypass
UV检测器：
• 外置流通池，缩短系统死体积，便于维护 • 200~400nm，双通道 • 200~600nm，四通道/200~800nm，四通道
SCG-030/100
Sepax Instruments
内容
SCG-100
SCG-030
蛋白纯化系统 蛋白纯化系统
Sepax Instruments
SCG介绍：型号
SCG色谱系统型号：
• SCG-100 • 流速范围：0.01-100.0 ml/min • 最小步进：0.01ml/min • 最佳流速范围：1-60ml/min
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
4.上样： 我公司生产的SCG蛋白纯化系统采用进样阀上样，
分为定量环进样和输液泵进样两种。定量环有1ml、 2ml和5ml的，PEEK材质，并配有1/16高压接头2个， 与大部分HPLC通用，其上样量较小，适用于一般工 艺开发前期小量实验、实验室级别等。输液泵进样 上样量较大，满足客户中试需求。具体上样量是根 据客户样品情况、选择的填料和柱子有关。进样阀 有三种状态调节，load、inject、waste，便于上样操 作以及缓冲液更换（waste状态，无需拆柱子）。
• SCG-030 • 流速范围：0.001-36.000ml/min • 最小步进：0.001ml/min • 最佳流速范围：0.5-20ml/min
Sepax Instruments
SCG介绍：可选模块
流动相选择 输液泵 进样系统 色谱柱
UV-Vis检测器 pH&Cond检测器
组份收集 层析工作站
SCG-030 二元高压输液泵
C52-3346I 自动切换进样器
柱选择阀
5Column,1bypass
SCG DAD600EX 四通道UV-VIS检测器
输液泵进样
色谱柱反冲
SCG DAD800EX 四通道UV-VIS检测器
样品泵进样系统
自动组份收集器 FC-R1，FC-R2
收集冷却系统
单独输液泵 进样系统
10.其他： SCG独有的手机、平板远程控制功能，可随时控
制及观察当前的运行状态，调整方法，做到在办公 区即可对实验监控，方便操作，更安全，更健康。
客户购买设备后，我公司会安排技术人员现场 安装培训，确保客户正常使用。
Sepax Instruments
SCG DAD400EX双通道检测器
• 200~400 nm • 程序设定1/2通道波长实时输出
SCG DAD800EX双通道检测器
• 200~840 nm • 程序设定1~4通道波长实时输出
Sepax Instruments
模块：组份收集器
组分收集器
优点： 1. 全自动组份收集器，可支持多种收集方式 2. 配制多种收集架，方便样品转移 （96孔板收集架，15m收集架，50ml收集架等） 3. 自动、手动灵活收集 4. 可通SCG工作站控制，进行多种方式收集 5. 稳定性可靠 6. 组份收集多，且控制方便 缺点： 1. 收集体积较少
8.保修期及配件等： SCG纯化系统保修期一般为一年，在保修期内，
除耗材外免费上门维修调试。系统配件全部采用进 口耗材，使用寿命较长。管路、接头同GE的柱子等 匹配。
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
9.价格： 根据客户选择的配置，价格不等，与行业内领
先品牌设备相比，同等配置的前提下，我们的价格 相当于其2/3左右的价格，具有一定的性价比。
柱清洗
• 采用纯水暂时保存色谱柱及系统 系统保存 • 采用有机溶剂（乙醇/水）保存系统
Sepax Instruments
输液泵
二元高压梯度
• 高压梯度混合 • 在线过滤 • 全生物惰性材料 • 流动相过滤 • 低脉动并联泵 • 在线柱塞自冲洗功能
SCG-100
• 0.01-100.00ml/min • 建议使用范围：1-60ml/min • 步进：0.01ml/min • 1500psi
Cond ，pH检测器
• 温度实时校准 • Cond：0.001~999.9mS/cm，pH：0~14
大体积收集阀
• 6/8/10/14通道大体积收集
组份收集器
• R1：1个Rack,支持72个15ml离心管，36个 50ml离心管，96孔板等
• R2：2个Rack
Sepax Instruments
客户比较关注的设备方面的问题
1.流动相配比精度： 我公司生产的SCG蛋白纯化系统采用美国进口泵，
分为SCG030和SCG100两种类型，对应的流速范围分 别为0. 001-36ml/min和0.01-100ml/min，流量非常准 确。泵头采用PEEK材质，耐除浓硫酸之外的各种试 剂，且耐高压（耐压范围分别为SCG030：4000psi， SCG100:1500psi）。 气泡传感器可检测到管路液体有无气泡，以防配比 不准，同时避免气泡进到柱子，对填料造成损伤。