神经干细胞研究进展
神经干细胞再生医学的研究进展
神经干细胞再生医学的研究进展神经干细胞是一类常见的干细胞，具有自我更新、多能性和可分化成各种神经系统细胞类型等特点。
神经干细胞再生医学是一项新兴的医学领域，致力于研究神经干细胞的再生、移植和修复功能，为治疗神经系统疾病提供新的选择和治疗手段。
近年来，神经干细胞再生医学的研究进展如火如荼，各种前沿技术和成果不断涌现。
一、神经干细胞的类型和来源神经干细胞是指具有自我更新、多能性和可分化成各种神经系统细胞类型的细胞。
根据来源和分化能力的不同，神经干细胞可分为两类：胚胎干细胞和成体神经干细胞。
胚胎干细胞来源于早期的胚胎，可以分化成三层胚系的各种组织细胞，包括神经系统细胞。
但是，胚胎干细胞的获取和使用存在着一系列的伦理和法律争议。
成体神经干细胞分布在成体神经系统的各种组织中，包括脑、脊髓、周围神经和感觉神经等组织。
成体神经干细胞的主要特点是分化潜能较低，主要分化成神经元和胶质细胞两类细胞。
二、神经干细胞移植的应用神经干细胞移植是神经干细胞再生医学的一个重要研究方向。
神经干细胞移植可以通过外源性干细胞移植和内源性干细胞增生两种方式实现。
外源性干细胞移植是指将神经干细胞移植到神经系统受损的区域，以修复和恢复神经系统功能。
内源性干细胞增生则是指利用神经系统自身的神经干细胞，通过诱导增殖和分化，实现神经系统的修复和再生。
神经干细胞移植的应用范围非常广泛，包括脑中风、脑损伤、帕金森综合症、白质疾病、多发性硬化症等神经系统疾病。
三、神经干细胞修复的机制神经干细胞修复神经系统功能的机制是复杂而多样的。
一方面，神经干细胞可以分化成各种神经系统细胞，如神经元、胶质细胞、导管细胞等，实现受损神经细胞的替换和修复。
另一方面，神经干细胞可以分泌生长因子、细胞因子、细胞外基质等物质，促进神经细胞的再生、增殖和分化，提高神经系统自我修复的能力。
此外，神经干细胞在修复神经系统功能的过程中还能够促进神经系统的神经塑性。
神经塑性是指神经元和神经网络在受到内外刺激的影响下，产生可逆性和不可逆性调整的过程，是神经系统适应环境和学习记忆的基础。
人类神经干细胞的研究进展
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人类神经干细胞 的研究进展
柄 立业 综 述 患 国 桢 审植 。 美键词］神经 Ｔ细胞
中 图分 类 号 ：Ｒ ５ ２４ 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：Ｃ ４ 一 ４ ９ （ ０ ２ ０ — ０ ９ ０ Ｎ ４ ｌ５ｍ ２ ０ ） ｌ０ ５ ＿ ３
比例。体外培养和扩增 的克隆在移植或分化实 验前体 外培
养 的时 间 与其 产 生 的 神 经 元 和胶 质 细 胞 的 比倒 有 无 关 系 ．
作者未提供 此方 面的信息 而这个问题 非常重要 ， 因为原代
培 养 的 神 经 干 细 胞 经 过 对 称 和 不对 称分 裂 可 能 产 生 新 的 神 经 干细 胞 和 分 化 方 向 已限 定 的神 经 前 体细 胞 ，实 际 上可 能 是 上 两 者 的混 合物１ ６ １ 。 Ｆ ｘ等 在 研 究 中发 现 体 外培 养 的 人 的 神 经 前 体 细 胞 ｌ ａ 移 植 后 可 以整 合 到 发 育 期 的前 脑 和 小 脑结 构 中 ，甚 至 可 代 替 小 脑 神 经 元 发 育缺 陷 突 变 鼠的颗 粒细 胞 层 。另一 个 研 究 小组 应 用 类 似 的 方 法 对 』 的 Ｈ Ｐ ｓ 行 短 期 培 养 后 ， 、 ＮＣ 进 移 植 八发 育期 的胚 胎 脑 组 织 ，人 类 细 胞 与 啮 齿 类 动 物 脑 组 织 很 好地 整合 到 一起 ． 以区 分 移 植 人 的细 胞 ， 成 所 谓 的嵌 难 形 和 脑Ｈ 在 这个 研究 中 ， 者 也 发 现 ． 啮齿 类 动 物 的轴 突 附 ． 作 在 近 部 位有 』 类 的 步 突胶 质 细胞 存 在 ， 与 了髓 鞘 的形 成 。移 、 参 植 的 人 类 的 细胞 可 以 分化 成 神 经 元 ，但 作 者 没 有 对 这 种 神 经 兀 的神 经 化 学 表 型进 行 鉴 定 这 些研 究 表 明 ，移 植 人 胚 胎 或 新生 动 物 脑 内 的 ＨＮ Ｃ Ｐｓ ｎ 在 局部 的 环境 的诱 导 下 分 化 ．提 示 不 同 种 属 之 间 的 这 Ｉ 种 发 育信 号 和 细胞 可 塑 的 保 守 性 。如 果 这 种 细胞 移植 到 成 年 大 鼠 脑 内会 怎 样 呢 ？ 种 移植 与 临 床移 植 更 相 似 。 源 于 这 来 』胚胎脑皮质的 Ｈ Ｐ 、 Ｎ Ｃ在 Ｆ Ｆ Ｇ ２和 Ｅ Ｆ的刺 激 下体 外 培 养 Ｇ ２ ４周 （ 周 传 １代 ）移 植 到 帕垒 森 动 物 模 型 的 受 损 的纹 状 ～ 每 ， 体 内 ， 八 的细 胞 可 以存 活 ， 分 化 为 神 经 元 和 星 型 胶 质 细 植 能 咆 Ｈ 人 类 的 神 经 元 发 出 广 泛 的 轴 突 伸 人 到 宿 主 的 脑组 织 － 然 而， ｆ － 与移 植 未 经 培 养 的脑 组织 不 同 的 是 ， 养 的 细 胞 培 移 植 后 在 宿 主 的 脑 组 织 中 更 广 泛 地 移 行 出移 植 部 位 ，大 部
神经干细胞论文
神经干细胞研究进展[摘要]神经干细胞研究是目前医学研究的热点之一，在目前已经取得了一定的研究成果。
尽管大部分研究仍处在动物模型和实验阶段，相信在不久的将来会有越来越多的成果应用于临床。
本文对有关神经干细胞的特性，来源，培养与纯化，临床应用等方面作一简单介绍。
[关键词] 神经干细胞随着分子生物学的迅猛发展，人们对神经系统多种疾病的相关基因及细胞研究有了更新的认识，使神经系统疾病的治疗有了更多可能的选择。
神经干细胞作为近几年来比较热门的研究课题之一，已经引起了越来越多的医护人员的关注，已经取得了一定的研究成果。
本综述对近几年来有关神经干细胞的研究作一简单介绍。
1、神经干细胞的特性干细胞是一类具有自我复制能力、多潜能分化的非特异性细胞，这种分化、复制能力贯穿于生物组织器官生长的始终。
在一定条件下，它可以分化成不同形态、不同功能的细胞。
神经干细胞( neuralstem cells, NSCs)是重要的干细胞类型之一，是神经系统发育过程中保留下来的具有自我更新和多向分化潜能的原始细胞,可分化为神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞等多种类型的神经细胞。
具有很多的特性，如自我更新、多潜能分化、迁移和播散、低免疫原性、良好的组织相容性、可长期存活等[1]。
2、神经干细胞的来源在20 世纪90 年代初, Reyonlds 等[2] 和Richards 等[3]从鼠和恒河猴以及人脑中分离出神经干细胞,从而证实了啮齿类海马齿状面的颗粒层细胞在成年后仍具有分裂能力这一推测。
最近,扎桑等[4] 报道在小鼠大脑室下带(subventricular zone,SVZ)有神经上皮的残余,是产生神经干细胞最活跃的部位,产生神经元迁移到嗅球体并分化成该处的中间神经元,其他的3个脑区分别为海马的齿状面,嗅回和纹状体。
其中海马的神经干细胞产生的新的神经元成齿状回的颗粒神经元。
1996 年Sohonen等[5]通过细胞培养证实这些部位的细胞能够自我复制并分化成神经元,星形胶质细胞和少突胶质细胞等。
干细胞技术的研究热点领域与最新进展
干细胞技术的研究热点领域与最新进展1.神经退行性疾病治疗：神经退行性疾病如帕金森病、阿尔茨海默病和脊髓损伤等一直是医学界的难题。
然而，干细胞技术为这些疾病的治疗提供了新的思路。
最新研究表明，通过将干细胞转化为特定的神经细胞类型，可以在动物模型中实现神经退行性疾病的修复，并且在临床试验中也取得了一些进展。
2.心脏病治疗：心脏病是目前全球范围内的主要死因之一、传统的治疗方法，如药物和手术治疗，只能缓解症状，而不能修复心脏的受损部分。
然而，近年来的研究表明，通过将干细胞注入患者的心脏组织中，可以促进心肌细胞的再生和修复，从而提高患者的心脏功能。
3.癌症治疗：干细胞技术在癌症治疗方面也有着重要的应用。
研究人员发现，癌症干细胞是肿瘤生长和转移的关键因素。
因此，通过干细胞的研究，可以理解肿瘤的发生机制，并发展新的靶向治疗方法。
最新的研究进展包括使用干细胞修复癌症治疗中引起的组织损伤，以及利用干细胞进行肿瘤的药物筛选。
4.组织工程：干细胞技术在组织工程领域也有巨大的应用前景。
研究人员开发出了一种新的方法，利用干细胞来生产各种组织和器官，如皮肤、肌肉和器官血管等。
这种方法不仅可以为整形外科和器官移植提供新的选择，还可以用于替代受损组织的修复和再生。
5.基因治疗：基因治疗是一种利用基因工程技术来修复或代替异常基因的治疗方法。
干细胞技术可以用来生产大量的健康细胞，并用于基因治疗中。
最新的研究进展包括使用干细胞来修复遗传性疾病，如囊性纤维化和血友病等。
总结起来，干细胞技术在神经退行性疾病治疗、心脏病治疗、癌症治疗、组织工程和基因治疗等领域都有着重要的应用。
随着研究的不断深入，我们相信干细胞技术将会为人类的健康和医学领域带来更多的突破和进展。
神经干细胞研究进展
神经干细胞研究进展一、引言神经干细胞(neural stem cell，NSC)是指存在于神经系统中，具有分化为神经神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能，从而能够产生大量脑细胞组织，并能进行自我更新，并足以提供大量脑组织细胞的细胞群[1]。
狭义的神经干细胞是指成体神经干细胞，指的是分布于胚胎及成人中枢及周围神经系统的干细胞。
简单的说，就是在成年哺乳动物的大脑中分离出来的具有分化潜能和自我更新能力的母细胞，它可以分化各类神经细胞，包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。
我们所讲的神经干细胞指的就是成体中存在于脑中的中枢神经干细胞，其实在外周也有一些“神经干细胞”称为“神经嵴干细胞”，可以分化成外周神经细胞、神经内分泌细胞和施旺细胞，还可横向分化成色素细胞和平滑肌细胞[2]。
神经干细胞具有以下特征：（1）有增殖能力；（2）由于自我维持和自我更新能力，对称分裂后形成的两个子细胞为干细胞，不对称分裂后形成的两个自细胞中的一个为干细胞，另一个为祖细胞，祖细胞在特定条件下可以分化为多种神经细胞；（3）具有多向分化潜能，在不同因子下，可以分化为不同类型的神经细胞，损伤或疾病可以刺激神经干细胞分化,自我更新能力和多向分化潜能是神经干细胞的两个基本特征[3]。
需要注意的是，在脑脊髓等所有神经组织中，不同的神经干细胞类型产生的子代细胞种类不同，分布也不同。
神经干细胞的治疗机理是：（1）患病部位组织损伤后释放各种趋化因子，可以吸引神经干细胞聚集到损伤部位，并在局部微环境的作用下分化为不同种类的细胞，修复及补充损伤的神经细胞。
由于缺血、缺氧导致的血管内皮细胞、胶质细胞的损伤，使局部通透性增加，另外在多种黏附分子的作用下，神经干细胞可以透过血脑屏障，高浓度的聚集在损伤部位；（2）神经干细胞可以分泌多种神经营养因子，促进损伤细胞的修复；（3）神经干细胞可以增强神经突触之间的联系，建立新的神经环路[4]。
二、研究现状1.新研究阐明大脑干细胞的身份[5]人神经系统具有复杂的结构，它将来自大脑的电信号发送到身体的其他部位，使我们能够移动和思考。
神经再生的研究进展
神经再生的研究进展神经再生是指当神经系统受到损伤或疾病威胁时，神经细胞和神经系统组织的修复和重新生长过程。
人们对于神经再生的研究已经历经数十年，虽然仍然面临许多挑战，但研究成果让我们对未来的发展充满期待。
1. 神经干细胞神经干细胞是指能够自我更新并发育成神经系统中各种类型的细胞的细胞。
研究发现，这些神经干细胞可以分化为多种类型细胞，如神经元、星形胶质细胞和寡突胶质细胞等等。
科学家对于神经干细胞的研究带来了巨大的期望，因为它们被认为是未来医学治疗神经系统疾病的基础。
2. 光学神经调控技术光学神经调控技术可以基于光敏色素的产生和光信号的转导来实现神经元的精确激活或抑制。
这项技术是通过光学和遗传学手段结合起来，从而实现对神经元的控制和修复。
同时，该技术的又一项应用是通过光刺激方式，加速神经内聚性的增强和调控系数，从而实现神经系统治疗和调节。
3. 藏青素治疗神经伤害藏青素是一种有机化合物，其抗氧化性能非常出色，可以用于治疗神经伤害。
研究表明，藏青素能保护神经细胞的生长和塑形，并促进受损神经的再生。
此外，藏青素还可以在神经系统中抵消有毒物质、减少有毒物质的代谢率，并且抑制细胞凋亡。
4. 神经再生疗法神经再生疗法是通过培养和植入人工神经干细胞进行神经再生。
在这项疗法中，神经干细胞被培养和植入到受损的神经系统中，到达患者的脑、脊髓或周围神经系统中。
科学家们相信，这些植入神经干细胞能够增强神经系统中的再生和修复能力，从而减轻或治愈神经系统疾病。
总的来说，神经再生的研究虽然有了重大进展，但仍然需要更多的研究，以便实用化应用。
我们希望未来的研究可以取得更多的进展和成果。
神经干细胞研究进展
神经干细胞研究进展【摘要】神经干细胞（neural stem cells，NSCs）是一类存在于中枢神经系统中且能够保持长期自我更新、复制的能力，并能够向多方向进行分化的原始细胞。
近年来神经干细胞已成为科学研究的热点问题。
目前NSCs已经广泛地应用于中枢神经系统退行性疾病、肿瘤以及缺血损伤等疾病的治疗。
本文对近年国内外学者在神经干细胞上的研究进行列举分析与总结，并对未来神经干细胞的发展前景提出展望。
【关键词】神经干细胞；分化；基因治疗；细胞替代治疗Advances on Neural Stem CellsLIN He-yu（Dalian Ocean University，Dalian Liaoning 116023，China）【Abstract】Neural stem cells （NSCs）exist in central nervous system，which is a kind of archaeocyte that have ability to self-update，proliferate，and have a potential of multi-direction differentiation. In recent years，neural stem cells have been become a hot spot in scientific research. Neural stem cells are able to replace and repair nervous system by differentiation，which is widely used in the treatment of degenerative disease of the central nervous system，ischemic injury and tumor. On the base of the analysis of the correlative research，this paper tries to make a summary of the recent research on neural stem cells，and make the forecast to the development of NSCs in the future.【Key words】Neural stem cell；Differentiation；Gene therapy；Cell replacement therapy1992年，Reynolds等[1]从成年小鼠纹状体和海马体中分离到了能在体外不断分裂增殖，具有多种分化潜能的细胞群，打破了以往人们对神经细胞不能再生的观念，也由此引发了始于上世纪90年代，直至今天都是研究热点的神经干细胞（NSCs）方面的探究。
内源性神经干细胞激活 增殖的研究进展
内源性神经干细胞激活增殖的研究进展脑血管疾病已经成为人类致死、致残最主要的原因之一，其发病率有逐年上升的趋势，且其发病呈现年轻化的趋势。
近年来大量研究证实内源性神经干细胞（NSCs）在治疗中枢神经系统疾病方面有其独特的优势，本文针对能够刺激NSCs激活的各类文献进行了综述，分析了这一领域目前存在的问题，并就今后发展进行了积极的思考。
标签：NSCs激活综述1 NSCs的激活、增殖正常机体内的神经干细胞存在于特定的位置，处于静息状态，在中枢神经系统受到损伤的情况下，如脑缺血，可以受到刺激而被激活，并迁移到受损的区域发生增殖、分化，但是激活、增殖NSCs的数量有限，分化受到很大的限制，且分化后的神经组织通常会大量的凋亡，限制了修复受损组织的能力。
许多化学、物理等的因素能够促进NSCs的激活。
1.1 细胞因子神经营养因子具有增加神经出芽、突触发生、神经递质传递和促进神经递质释放的作用。
研究表明，在脑缺血坏死后，会有大量的吞噬细胞浸润在梗死及梗死周边区，并分泌细胞因子和趋化因子，这些因子可使脑内多个部位的神经干细胞激活，促使其向损伤区迁移，并在多种因子、基因调控等的调节下在良好适合的微环境中发生增殖、迁移和分化等连续的变化，使受损神经组织得到不同程度的修复。
脑源性神经营养因子（(BDNF）主要分布于海马和皮质，在中枢神经系统发育过程中对神经元的生存、分化、生长和维持神经元的正常的生理功能中起关键性的作用，近来研究证实其还有抗伤害性刺激，促使神经损伤后的再生等作用[1]。
白血病抑制因子[2]是一种能提升NSCs的激活、调控其朝向神经元及少突胶质细胞分化的神经营养因子，其不但促进NSCs的增殖，而且能够显著降低多巴胺能神经元的凋亡，从而使发生分化的神经元继续存活。
许多其它的细胞因子，如粒细胞集落刺激因子，促红细胞生成素等在中枢神经系统疾病的治疗过程中能明显促进大鼠缺血周围脑组织神经细胞的增殖，及向神经元和神经胶质细胞发生分化；显著减少引起的神经细胞凋亡，增加缺血周围脑组织Bcl-2的表达、抑制Bax、Caspase-3的表达，促进神经细胞再生；明显改善大鼠的神经功能症状、减轻脑组织病理改变。
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Construction of pWAV2-TH
T7
Hind III Kpn I BamH I BstX I TH EcoR I EcoR V BGH PA BstX I Not I Xho I Xba I f1ori Apa I
P CMV
CMV ITR
Ampr
pcDNA3 -TH
SV40AP
Kpn I EcoR I Sma I Sal I Bgl II
神经干细胞研究进展
报告内容提要
国内外研究现状
骨髓源神经干细胞的横向分化 骨髓源神经干细胞致瘤性研究 骨髓源神经干细胞的活体示踪
一、国内外研究现状
神经干细胞的概念
神经干细胞是指来源于神经组织及神经
组织的发源地、终生保持自我更新能力，
并能分化为各种神经组织细胞的一类细胞 称为神经干细胞。
神经干细胞的研究概述
NESTIN免疫磁珠法分离
大鼠神经干细胞（箭头）
a
b
c
丫啶橙荧光染色鉴定大鼠神经干细胞及分化细胞活力情况（a,b）.
NESTIN免疫磁珠标记的大鼠神经干细胞（c）。
NSCs提纯后流式细胞仪检测结果。a 同型对照；b 阳性
Result of flow cytometry at post-purification . a Immunomagnetic beads-free; b With immunomagnetic beads
3
M
1
2
Control
大鼠NSCs提纯后RT-PCR法鉴定神经干细胞不同蛋白表达。
1:BF-1 ；2:TH ；3:GABA ； M：分子量标记； Control:PBS对照
a
b
c
d
大鼠骨髓基质细胞。0h（a）；13h（b）；39.5h（c）. 培养70h（d），将 细胞球分离成单细胞再种植于滋养细胞层（空箭头），有典型的神经元样 长突起细胞形成（黑箭头）。
a c
b d
人骨髓源性神经干细胞。张某，女，42岁d. 骨髓基质细胞 原代培养 8 天（a,b），细胞发育更大、更圆，颗粒明显。 培养 10天d (c,d)，具有长突起的神经元样细胞分化形成，突起间有连接。
a
b
人骨髓源性神经干细胞。 朱某，男，27岁。分化前 的干细胞阶段（a, 12天） 及分化后形成典型的神经 元样长突起细胞(b，20-30 天 )。
假伤组14×24h脑片(未见BrdU+细 胞, × 400)
模型常规治疗组14×24h 脑 片(偶见BrdU+细胞, × 400)
关于移植后NSC 出现时间的初步探索（家犬）
干细胞经脑室治疗组：伤后第 14×24h伤区BrdU+细胞，× 400
干细胞经血管内治疗组：伤后 第14×24h中脑伤区BrdU+细胞, × 400
U251细胞接种裸鼠两个月，于接 种部位可见明显的肿瘤组织形成
骨髓源性NSCs接种裸鼠四个月后，接 种部位未见有异常组织形成，表明体外 培养的骨髓源性NSCs不具有体内成瘤 性。
四、骨髓源神经干细胞的活体示踪
神经干细胞的标记示踪
图1 光镜下显示菲立磁（Feridex）标记后的 大鼠骨髓源性神经干细胞（培养1周）的典 型Prussian Blue染色（可见细胞浆内许多细 小的蓝色铁颗粒）
a
b
c
e
d
a 造模后10w, 对模型动物进行灌注． bcd：恒河猴大脑．
e：恒河猴脑干
再固定后冰冻切片
双侧黑质中线两侧DAB染色对比. 左图为正常侧，右图为模型侧 （造模后10w, 40×)
对照侧
模型侧
中脑切片DAB染色显示双侧红核（造模后10w, 40×）
a
b
a 恒河猴中脑切片对照侧黑质TH染色, 改良SABC法 （造模后10w, 200×,） b 恒河猴PD模型侧TH染色，改良SABC法 （造模后10w, 200×）
（No TH-gene）
BHK Control
(With THgene)
BHK Anti-TH
(With TH-gene)
BHK-th
BHK-th
转TH基因免疫细胞化学检测 （为NSC转基因移植治疗奠定基础）
体外Brdu标记阳性的恒河猴骨髓源性神经干细胞 (10d, 200×)
a
b
c
d
e
f
源于人骨髓基质细胞的神经干细胞，移植前以rAAV-GFP 标记的细胞状态
Lif因子培养10天纯骨髓源性神经干细胞
纯培养基空白对照
肝脏细胞阴性对照
20%
30%
a
b d 10%
40%
c
源于人骨髓基质细胞的神经干细胞，移植前状态。
骨髓源性神经干细胞移植手术中。 (神经干细胞准备)
手术显微镜检测下进行神经干细胞移植。
术前
术后（6个月）
伤后３个月运动性失语神经干细胞移植术
术前
术后（4个月）
C3-6损伤3个月病员，神经干细胞移植术
三、骨髓源神经干细胞致瘤性研究
神经干细胞的致瘤性研究
U251细胞豆球蛋白A（ConA）凝集试 验（ConA:100μg/ml），显示U251肿 瘤细胞有明显的凝集反应，细胞表面 结构发生改变。光镜100×
骨髓源性NSC豆球蛋白A（ConA） 凝集试验（ConA:100μg/ml），显 示骨髓源性NSC无明显的凝集反应。 光镜200×
c
a
b
源于人骨髓神经干细胞的长突起细胞免疫细胞化学方法鉴定。
a NSE阳性. 双极神经元. b GFAP-阳性，神经胶质细胞。.
天冬氨酸
氨基酸标准品混合液 4.183: 天冬氨酸； 7.947: 谷氨酸； 11.661:甘氨酸
RA因子培养10天纯骨髓源性神经干细胞
谷氨酸
氨基酸标准品混合液 4.183: 天冬氨酸； 7.947: 谷氨酸； 11.661:甘氨酸
a
b
c
d
人骨髓源性神经干细胞。李某，男，45岁. 由源于骨髓基质细胞的神经干细胞球分化出神经元样长突起细胞。 14d （a、b），17d（c、d）.
a
b
人骨髓源性神经干细胞。何某，女性，22岁. 源于骨髓基质细胞的神经干细胞克隆球及其分化的神经元样长 突起细胞。 原代培养12d（a ） ， 18d（b ）。
b
c 分化后细胞光镜下的形态（24d，100×）
c
a
b
c
d
恒河猴骨髓源性神经干细胞分化为典型的神经元样细胞
a b
恒河猴骨髓源性NSCs。 a Nestin染色 （10天，DAB显色，200×） b 分化后表达NSE抗原阳性的细胞 （ 20天， DAB显色，200×） c 分化后表达GFAP抗原阳性的细胞 （ 18天，DAB 显色，200×）
家犬骨髓源性神经干细胞经BrdU+标记后移植至损伤脑内（×400 ）
关于NSC移植途径的初步探索（家犬）
a
b
c
d
人骨髓源性神经干细胞。陈某，男，38岁. 神经干细胞克隆球形成，并有长突起细胞分化。
a: 0h c:10d
b: 7d d:12d
人骨髓源性神经干细胞增殖分裂情况（１）
人骨髓源性神经干细胞增殖分裂情况（２）
骨髓（室管膜、脂肪）
诱导分化 传代增殖
神经干细胞
移
植
优点 ①骨髓来源丰富、获 取容易 ②不存在伦理问题 ③不存在免疫排斥问题 困难 定向诱导分化难度大
4.髓鞘移植
获取胚胎嗅鞘细胞
培养传代增殖
髓鞘细胞
移
植
存在问题 ①仅适用脱髓鞘疾病 ②伦理问题 ③免疫排斥 ④细胞数量少
二、骨髓源神经干细胞的横向分化
pWAV2
Amp r
polyA ITR
CoiE1
SV40 Neomycin EcoR I
SP6
EcoR I
CMV ITR
Kpn I TH EcoR I Sma I Sal I Bgl II
pWAV2 -TH
Ampr
polyA ITR
TH基因载体构建
Control
（No THgene）
Anti-TH
家犬骨髓源性神经干细胞分化而来典型的神经元样细胞。 （ × 400 ）
家犬骨髓源性神经干细胞。扩增72h，克隆形成 （ × 200）
恒河猴的捕捉、麻醉、骨髓 获取。
a
恒河猴骨髓源性NSCs。 a 纯化后MSCs光镜下 形态（1d, 200 ×） b 增殖后形成的岛屿状细胞团（7d, 200×）
离心，细 胞悬浮于 0.85% 生 理盐水中
动物切片
人PET等
动物/人神经干细胞
a
b
a 原代培养24h。 Nestin 阳性的细胞克隆形成（箭头） b 传代培养48h。 细胞再次形成克隆（箭头）
a a b
b 形成的神经干细胞克隆球 有神经元/神经胶质细胞样长突起细胞分化
图1. 在苏木素预染背景下由神经球传代培养后的Nestin阳性细胞（↑）。而已分化的细胞则呈Nestin阳性（▲）(400X) 图2. 在有血清条件下传代培养3周的NSE阳性细胞 (400X) 图3. 在有血清条件下传代培养3周的GFAP阳性细胞 (400X) 图4. 在无血清传代培养中的Nestin阳性神经球(400X)
三种实验材料
雌性SD大鼠
雄 性 大 鼠
阴道脱落细胞涂片 排卵期
合笼
0.5天胚鼠（精子+）
（2） 大鼠、猫、家犬骨髓 （1） 10.5-14.5日胚鼠（作对照）
（ 3）
恒河猴 / 成人骨髓
骨髓穿刺
主要移植过程
动物神经干细胞
BrdU或GPF标记）
观察 经立体定向或 静脉或脑室注 射，移植到模 型动物或病员 体内