实验5蛙心灌流
05_蛙心灌流
蛙心灌流绍兴文理学院生命科学学院☞实验目的☞实验原理☞关键技术☞注意事项☞实验对象与器材☞思考题☞实验步骤☞创新与探索一．实验目的◆学习用斯氏(strub)蛙心套管制备离体心脏的方法◆学习离体蛙心灌流的方法◆观察内环境理化因子对心脏正常节律性活动的影响◆通过实验对递质、受体、受体阻断剂的概念有进一步的认识二．实验原理动物的离体心脏，用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时，在一定的时间内，仍然保持有节律的舒缩活动。
改变灌流液的理化特性，这种节律性的舒缩活动也随之发生改变，说明内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件。
0.65％NaCl灌流液虽然是等渗的，但心脏的收缩强度和频率降低，这是由于缺乏其它的与细胞兴奋性有关的一些离子，如Ca2+离子，虽然细胞外含有大量Na+，不影响肌细胞形成动作电位时去极化过程，但在复极化(２期)时因环境中缺乏Ca2+而受到影响，更主要是心肌细胞内肌质网甚少Ca2+贮量，兴奋－收缩偶联减弱。
◆Ca2+：外环境中Ca2+浓度增大，使之有足够量内流，偶联加强。
◆K+：K+浓度增高，影响到静息电位形成时，K+外流使静息电位随之降低，接近于阈电位水平，这时兴奋性增高。
但由于静息电位过低Na+通道不能被激活，影响Na+内流，去极化，影响兴奋性。
◆心脏受植物性神经--交感和迷走神经双重支配，神经兴奋时，其末梢释放递质作用于心肌细胞上的受体，从而调节心脏活动。
☯交感神经兴奋时其末梢释放的递质为去甲肾上腺素(NA)，与心肌膜上的β受体结合后，使胞膜对Ca2+通透性升高，可促进细胞外的Ca2+内流，使心脏起搏点自动除极加快，产生扩布性动作电位所需时间较短，节律性兴奋增多。
因此心率加快，收缩和加强。
肾上腺素(Adr)有似NA的作用。
迷走神经兴奋时，其末梢释放的递质为乙酰胆碱(Ach)，能与心肌细胞膜上M受体结合，提高对K+通透性，使K+外流加速，静息电位增大，形成超极化状态，I K衰减↓,因而降低窦房结的自动节律性，抑制房室传导，减弱心房肌的收缩力，结果引起心率减慢减弱。
蛙心生理实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习离体蛙心灌流的方法。
2. 观察理化因素对蛙心活动的影响。
3. 探究心脏节律性活动的生理机制。
二、实验原理蛙心灌流实验是一种常用的生物学实验方法，通过将蛙心取出并置于人工灌流液中，使其在一定时间内保持节律性收缩。
实验中，通过改变灌流液的成分，可以观察不同理化因素对心脏活动的影响，从而了解心脏生理活动的调节机制。
蛙心无营养性血管，离体后采用人工灌流的方法，仍可保持其新陈代谢，心脏仍能有节律的自动收缩、舒张，并维持较长时间。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、实验材料与仪器1. 实验动物：青蛙2. 实验器材：蛙心夹、常用手术器械、蛙板（或蜡盘）、任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱、3%乳酸、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿（或小烧杯）、棉线、套管夹。
3. 生理信号采集系统、计算机。
四、实验方法与步骤1. 暴露蛙心：取一只青蛙，双毁髓后背位置于蛙板上，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管，在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。
2. 插管：用斯氏蛙心插管法，将蛙心夹插入心脏，并通过蛙心夹上的管道与灌流系统连接。
3. 灌流：将蛙心置于任氏液中，开始灌流，调节灌流速度和压力，使心脏保持节律性收缩。
4. 观察与记录：观察心脏的收缩、舒张情况，记录心率和心搏曲线。
5. 改变灌流液成分：分别用0.65%NaCl、2%CaCl2、1%KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰胆碱、3%乳酸等灌流液替换任氏液，观察心脏活动的变化。
6. 分析与讨论：分析不同灌流液对心脏活动的影响，讨论心脏生理活动的调节机制。
五、实验结果与分析1. 在正常任氏液中，心脏保持节律性收缩，心率为60-100次/分钟。
实验5蛙心灌流
几种离子及药物对离体心脏活动的影响
注意事项
1、实验过程中始终保持蛙心插管内液体 恒定，以排除负荷对心脏活动的影响。
2、摘出心脏时切勿伤及静脉窦。 3、每次加药后一旦出现明显效果后，立
即吸出插管内灌流液，然后用任氏液反 复冲洗，直至心脏活动恢复正常后再进 行下一实验项目。
实验步骤
1、破坏蟾蜍脑和脊髓后呈仰卧位固定在 蛙板上。剪开胸骨表面皮肤，沿正中线 剪开胸骨，仔细剪开心包膜，暴露心脏 。
实验步骤
2、用连线的蛙心夹在心舒期夹住心尖 。用橡皮泥将蛙心夹的连线固定于 蛙板上。
实验步骤
3、插管：结扎右主动脉。在左主动脉干下穿一棉线 达一松结备用。用眼科剪刀剪开左主动脉根部的 前壁，开口呈“V”字形，将盛有任氏液的蛙心插 管由此开口处向动脉圆锥方向插入左主动脉，当 心室收缩时再经主动脉瓣向心室内插入。不可插 得过深，以免心壁堵住插管下口。此时可见插管 中液面随心脏搏动而上下移动，用滴管吸去插管 中的血液，更换新鲜任氏液，提起备用线，将左 、右主动脉连同插入的插管扎紧（不得漏液）， 再将结线固定在插管的小玻璃钩上。
实验步骤
右心房
静脉窦
左心房 房室沟 心室
实验步骤
4、游离心脏：剪断结扎线上方的血管。轻 轻提起插管和心脏，在心脏下方绕一线， 将左右肺静脉、前后腔静脉一起结扎，注 意保留静脉窦与心脏的联系，切勿损伤静 脉窦，于结扎线的外侧剪去所有牵连的组 织，将心脏离体。用任氏液反复冲洗心室 内余血，使灌流液内不再有血液。保持插 管内液面高度恒定（1.5—2cm），即可
动物与器材
实验对象 ：蟾蜍 实验药品 ：任氏液 、0.65%NaCl溶液、
2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶100000肾上 腺素溶液、1∶1000000乙酰胆碱溶液 仪器与器械 ：蛙板、蛙类常用手术器械一套、蛙钉 、玻璃分针、蛙心夹、蛙心插管、试管夹、张力 换能器、铁支架、BM6240实验系统、电脑、滴 管等。
实验5蛙心灌流
实验步骤
5、连接试验仪器：将插好离体心脏的插管 固定在支架上， 将蛙心夹上的系线绕过一 个滑轮与张力换能器相连。打开实验系统 进行记录。
注ห้องสมุดไป่ตู้：勿使灌流液滴到换能器上。
观察项目
(1)打开实验系统记录正常心搏曲线。 (2)将插管内全部更换为0.65%NaCl溶液，观
察心搏曲线的频率及振幅的变化。当曲线出现明 显变化时，立即吸去插管中的灌流液（作好冲洗 标记），用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复 正常。 (3)向插管内加入1滴2%CaCl2溶液，观察并记 录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更 换任氏液（方法同上），待心搏恢复正常。 (4)向插管中加1－2滴1%KCl溶液，记录心搏 曲线的变化。当心搏曲线变化时，立即同(2)法 更换灌流液，待心搏恢复。 (5)同(2)法记录插管中加入1—2滴 1∶100000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。 (6)同(2)法记录插管中加入1—2滴 1∶1000000乙酰胆碱溶液后心搏的变化。
实验步骤
1、破坏蟾蜍脑和脊髓后呈仰卧位固定在 蛙板上。剪开胸骨表面皮肤，沿正中线 剪开胸骨，仔细剪开心包膜，暴露心脏 。
实验步骤
2、用连线的蛙心夹在心舒期夹住心尖 。用橡皮泥将蛙心夹的连线固定于 蛙板上。
实验步骤
3、插管：结扎右主动脉。在左主动脉干下穿一棉线 达一松结备用。用眼科剪刀剪开左主动脉根部的 前壁，开口呈“V”字形，将盛有任氏液的蛙心插 管由此开口处向动脉圆锥方向插入左主动脉，当 心室收缩时再经主动脉瓣向心室内插入。不可插 得过深，以免心壁堵住插管下口。此时可见插管 中液面随心脏搏动而上下移动，用滴管吸去插管 中的血液，更换新鲜任氏液，提起备用线，将左 、右主动脉连同插入的插管扎紧（不得漏液）， 再将结线固定在插管的小玻璃钩上。
动物生理学-蛙心灌流实验报告
一、实验结果1.正常心搏曲线2、滴加0.65%NaCl溶液3、滴加2%CaCl2溶液2滴4、滴加1%KCl溶液5、滴加0.01%Adr溶液6、滴加0.01%Ach溶液二、分析与讨论2、1.正常心搏曲线3、从图中可以看出本组牛蛙心跳比较微弱, 再结合本组牛蛙心脏外表上有不规则小黑斑这一点, 可推断出这只牛蛙可能患有心脏疾病。
4、滴加0.65%NaCl溶液滴加0.65%NaCl溶液后, 心跳减弱, 这是由于用0.65%NaCl溶液灌注蛙心时, 灌注液中缺乏Ca2+, 以致心肌细胞动作电位期内流Ca2+减少, 细胞质Ca2+浓度减少, 心肌的收缩活动也随之减弱。
3.滴加2%CaCl2溶液2滴加入CaCl2后, 心跳略微增强。
细胞外Ca2＋在细胞膜上对Na＋内流有竞争性抑制作用, 称为膜屏障作用。
Ca2＋浓度增高时, Na＋内流受抑制, 细胞0期除极速度与幅度减小, 使兴奋性及传导性均降低。
Ca2＋浓度增高使Ca2＋内流增多, 心肌收缩能力增强。
4.滴加1%KCl溶液滴加1％KCl后, 曲线的频率逐渐减小, 愈来愈疏, 幅度也逐渐下降。
这是因为当细胞K+浓度增高时, K+与Ca2+有竞争性拮抗作用, K+抑制细胞膜对Ca2+的转运, 使进入细胞内Ca2+减少, 心肌的兴奋—收缩偶联过程减弱, 心肌收缩力降低。
所以心搏曲线振幅减小。
5.滴加0.01%Adr溶液滴加肾上腺素后, 蛙心收缩增强, 心脏舒张完全, 描记的心搏曲线幅度明显增大。
其作用机理是, 肾上腺素可与心肌细胞膜上的B受体结合, 提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性, 导致肌浆中Ca2+浓度增高, 使心肌收缩增强。
另外, 肾上腺素还有降低肌钙蛋白与Ca2+亲和力, 促使肌钙蛋白对Ca2+的释放速率增加, 提高肌浆网膜摄取Ca2+的速度, 刺激Na+与Ca2+交换, 使复极期向细胞外排出Ca2+的作用加速, 这样, 将使心肌舒张速度增快, 整个舒张过程明显增强。
蛙心灌流实验结果分析
蛙心灌流实验结果分析一、蛙心灌流：1、用0．65％Nacl溶液灌注蛙心出现心跳减弱心肌的收缩活动是由Ca2+排触发的，由于心肌细胞的肌浆网不发达，故心肌收缩的强弱与细胞外Ca2+浓度呈正比。
用0．65％NaCL溶液灌注心，由于灌注液中缺乏Ca2+，以致心肌细胞动作电位二期内流Ca2+减少，胞浆Ca2+浓度减少，心肌的收缩活动也随之减弱。
如果长时间用0．65％NaCL溶液灌流蛙心，心脏最终会停止收缩，但心肌仍能产生动作电位（即产生兴奋），这种现象称为兴奋一收缩脱耦联，是心肌细胞内缺少Ca2+后的表现。
2、用高K+任氏液灌注蛙心时，心跳减弱用高K+任氏液灌注蛙心时，心跳明显减弱，甚至出现心脏停止于舒张状态的现象。
因为细胞外K+浓度增高时K+与Ca2+有竞争性拮抗作用，K+可抑制细胞膜对Ca2+的转运，使进人细胞内Ca2+减少，心肌的兴奋一收缩耦联过程减弱心肌收缩力降低。
当细胞外K+浓度显著增高时，膜内外的K+浓度梯度减小，静息电位的绝对值过度减少，Na+通道失活，心肌的兴奋性完全丧失，心肌不能兴奋和收缩，停止于舒张状态。
3、滴加2％CaCL2后，离体蛙心收缩力增强用高Ca2+任氏液灌注蛙心，可见蛙心收缩力增强，但舒张不完全，以致收缩基线上移。
在Ca2+浓度较高的情况下，心脏会停止在收缩状态。
这种现象称为“钙僵”。
心肌的舒缩活动与心肌肌浆中Ca2+浓度高低有关。
当Ca2+浓度升高至10-5M水平时，作为钙受体的肌钙蛋白结合了足够的Ca2+，这就引起肌钙蛋白分子构型的改变，从而触发肌丝滑行，肌纤维收缩。
当肌浆中Ca2+浓度降至10-7时，Ca2 任氏液灌注蛙心,使得肌浆中Ca2+浓度不断升高，Ca2+与肌钙蛋白结合数量不断增加，甚至达到只结合而不解离的程度，于时心肌将持续收缩，因而出现“钙僵”。
4、滴加肾上腺素后，蛙心收缩增强向蛙心滴加肾上腺素后，可见蛙心收缩增强，心脏舒张完全，其机理为肾上腺素与心肌细胞膜的β受体结合，提高心肌细胞和肌浆网膜Ca2+通透性导致肌浆中Ca2+浓度增高，使心肌改缩增强。
试验五蛙心灌流一目的要求1观察细胞外液离子成分的改变对心肌
[实验步骤]
5 连接实验仪器及标本
五 观察项目
（1）描记正常蛙心收缩曲线 曲线幅度：代表心脏收缩的强度。 曲线疏密：代表心率。 曲线的规律性：代表心室的节律性。 曲线的顶点水平：代表心室收缩的程度。 曲线的基线：代表心室舒张的程度。 （2）离子的影响 ①吸出插管内全部灌流液，换入0.65%NaCl观察心缩曲线变化，待效应明 显后，吸出灌流液，用新鲜林格液换洗3次，直至心缩曲线恢复正常。 ②加入1~2滴2%CaCl2于新换入的林格液中，观察心缩曲线的变化。待出 现效应后，用新鲜林格液换洗3次至曲线恢复正常。 ③加1~2滴1%KCl于新换入的林格液中，待出现效应后，再用林格液换洗 至曲线恢复正常。 （3）递质的作用 ①加入2~3滴1:10000在肾上腺素溶液于灌流液中，待效应出现后，用林格 液换洗至曲线恢复正常。 ②加入1~2滴1:10000乙酰胆碱于灌流液中，待效应出现后，用林格液换洗 至曲线恢复正常。
六 注意事项
1. 蛙心夹应一次就夹住心尖，不宜夹多次，以免损伤心脏。 2. 每次换液时，插管内的液面均应保持恒定高度。 3. 在加化学药物与调换溶液时，须及时做好标记。 4. 各种溶液的吸管要分开，不可混淆，以免影响结果。 5. 每进行一项实验时，先记录一段正常对照曲线，然后再加入待试液， 并记录其效应。 6. 注意滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 7. 在实验过程中，基线位置及放大倍数、扫描速度等参数不要再变动。
将心脏回复至原位用眼科剪刀在左主动脉上靠近动脉圆椎处剪一斜口将盛有少量林格液的蛙心插管由切口插入主动脉插至动脉园锥时略向后退尖端转向蟾蜍的背侧及左下方于心缩期插入心室内不可插入过深以免心室壁堵住插管下口
实验五 蛙心灌流
一 目的要求
1、观察细胞外液离子成分的改变对心肌运动的
蛙心灌流实验报告
一、实验目的1. 学习离体蛙心灌流的方法。
2. 观察理化因素对蛙心活动的影响。
3. 掌握实验操作技巧，提高实验技能。
二、实验原理蛙心灌流实验是研究心脏生理功能的一种常用方法。
在实验中，通过离体蛙心灌流装置，将蛙心置于人工灌流液中，模拟心脏在体内的生理环境，观察和分析不同理化因素对心脏活动的影响。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：青蛙、任氏液、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:10000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、3%乳酸溶液。
2. 实验仪器：手术器械、蛙板、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿、棉线、套管夹。
四、实验方法与步骤1. 制备蛙心标本：将青蛙进行双毁髓处理后，置于蛙板上，暴露心脏。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎。
游离心脏，用蛙心夹固定于支架上。
2. 连接实验装置：将蛙心标本与张力传感器连接，张力传感器连接计算机采集系统。
3. 灌流液准备：将任氏液、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:10000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、3%乳酸溶液分别装入培养皿中。
4. 观察不同灌流液对蛙心活动的影响：a. 以任氏液作为正常对照组，观察蛙心收缩活动。
b. 将灌流液更换为0.65%NaCl溶液，观察蛙心收缩活动变化。
c. 将灌流液更换为2%CaCl2溶液，观察蛙心收缩活动变化。
d. 将灌流液更换为1%KCl溶液，观察蛙心收缩活动变化。
e. 将灌流液更换为1:10000肾上腺素溶液，观察蛙心收缩活动变化。
f. 将灌流液更换为1:10000乙酰胆碱溶液，观察蛙心收缩活动变化。
g. 将灌流液更换为3%乳酸溶液，观察蛙心收缩活动变化。
五、实验结果与分析1. 任氏液灌流：蛙心收缩活动正常，表现为规律性的收缩和舒张。
2. 0.65%NaCl溶液灌流：蛙心收缩幅度稍微减小，舒张幅度稍微减弱，表现为细胞外环境中缺乏Ca2+，动作电位2期Ca2+内流减少，胞浆中Ca2+减少，心肌收缩力降低。
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学时数：4学时
实验目的
1、学习离体蛙心灌流法。 2、观察Na+、K+、Ca2+及肾上
腺素、乙酰胆碱等对离体心脏 活动的影响。
实验原理
心肌具有自动节律性收缩活动的特 性，可用人工灌流的方法研究心脏活动 的规律及其特点，还可通过改变灌流液
的成分或加入某些药物来观察其对心脏
1、此实验说明心肌有哪些生理特性？
2、以本实验为例说明内环境相对恒定的
重要意义。
3、各种离子和药物对心搏有何影响，为
什么？
几种离子及药物对离体心脏活动的影响
注意事项
1、实验过程中始终保持蛙心插管内液体 恒定，以排除负荷对心脏活动的影响。 2、摘出心脏时切勿伤及静脉窦。 3、每次加药后一旦出现明显效果后，立 即吸出插管内灌流液，然后用任氏液反 复冲洗，直至心脏活动恢复正常后再进 行下一实验项目。
思考题
活动的影响。
动物与器材
实验对象 ：蟾蜍 实验药品 ：任氏液 、0.65%NaCl溶液、 2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶100000肾上 腺素溶液、1∶1000000乙酰胆碱溶液 仪器与器械 ：蛙板、蛙类常用手术器械一套、蛙钉、
玻璃分针、蛙心夹、蛙心插管、试管夹、张力换
能器、铁支架、BM6240实验系统、电脑、滴管 等。
管内液面高度恒定（1.5—2cm），即可
进行实验。。
实验步骤
5、连接试验仪器：将插好离体心脏的插管 固定在支架上， 将蛙心夹上的系线绕过一
个滑轮与张力换能器相连。打开实验系统
进行记录。
注意：勿使灌流液滴到换能器上。
观察项目
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
(1)打开实验系统记录正常心搏曲线。 (2)将插管内全部更换为0.65%NaCl溶液，观 察心搏曲线的频率及振幅的变化。当曲线出现明 显变化时，立即吸去插管中的灌流液（作好冲洗 标记），用新鲜任氏液清洗2—3次，待心搏恢复 正常。 (3)向插管内加入1滴2%CaCl2溶液，观察并记 录心搏曲线的变化。当出现明显变化时，立即更 换任氏液（方法同上），待心搏恢复正常。 (4)向插管中加1－2滴1%KCl溶液，记录心搏 曲线的变化。当心搏曲线变化时，立即同(2)法 更换灌流液，待心搏恢复。 (5)同(2)法记录插管中加入1—2滴 1∶100000肾上腺素溶液后心搏曲线的变化。 (6)同(2)法记录插管中加入1—2滴 1∶1000000乙酰胆碱溶液后心搏的变化。
实验步骤
1、破坏蟾蜍脑和脊髓后呈仰卧位固定在
蛙板上。剪开胸骨表面皮肤，沿正中线
剪开胸骨，仔细剪开心包膜，暴露心脏。
实验步骤
2、用连线的蛙心夹在心舒期夹住心尖。 用橡皮泥将蛙心夹的连线固定于蛙 板上。
实验步骤
3、插管：结扎右主动脉。在左主动脉干下穿一棉线 达一松结备用。用眼科剪刀剪开左主动脉根部的 前壁，开口呈“V”字形，将盛有任氏液的蛙心插 管由此开口处向动脉圆锥方向插入左主动脉，当 心室收缩时再经主动脉瓣向心室内插入。不可插 得过深，以免心壁堵住插管下口。此时可见插管 中液面随心脏搏动而上下移动，用滴管吸去插管 中的血液，更换新鲜任氏液，提起备用线，将左、
右主动脉连同插入的插管扎紧（不得漏液），再 将结线固定在插管的小玻璃钩上。
实验步骤
右心房 左心房
房室沟
心室 静脉窦
实验步骤
4、游离心脏：剪断结扎线上方的血管。轻 轻提起插管和心脏，在心脏下方绕一线，
将左右肺静脉、前后腔静脉一起结扎，注
意保留静脉窦与心脏的联系，切勿损伤静 脉窦，于结扎线的外侧剪去所有牵连的组 织，将心脏离体。用任氏液反复冲洗心室 内余血，使灌流液内不再有血液。保持插