体内药物分析 薄层色谱法
药物分析考点总结
名词术语含义避光系指用不透光的容器包装，例如棕色容器或黑纸包裹的无色透明、半透明容器密闭系指将容器密闭，以防止尘土及异物进入密封系指将容器密封以防止风化、潮解、挥发或异物进入熔封或严封阴凉处凉暗处系指将容器熔封或用适宜的材料严封，以防止空气与水分的侵入并防止污染系指不超过20℃系指避光并不超过20℃第一章药典1.国家药品标准包括：《中国药典》、《药品标准》、药品注册标准。
2.药品标准的制定原则（1）检测项目的制定要有针对性（2）检验方法的选择要有科学性（3）限度规定的规定要有合理性3.《中国药典》，缩写为Ch.P。
我国现已出版了九版药典。
现在每五年制定一次。
4.组成：一部、二部、三部及其增补本。
第一部收载中药材及饮片，植物油脂和提取物，成方制剂和单味制剂。
第二部收载化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品及其制剂及药用辅料。
第三部收载生物制品。
5.《中国药典》内容：凡例、正文和附录6.“凡例”是为正确使用《中国药典》进行药品质量检定的基本原则，是对《中国药典》正文、附录及与质量检定有关的共性问题的统一规定。
7.《中国药典》正文收载的中文药品名称系按照《中国药品通用名称》收载的名称及其命名原则命名，为药品的法定名称。
英文名均采用国际非专利药名（INN）。
8.名称单位长度体积质量压力动力黏度运动黏度波数密度放射性活度m, dm, cm, mm, μm, nm L,ml,μlKg, g, mg, μg，ng Mpa, kPa, PaPa.s，mPa.sm2/s mm 2/scm-1kg/m 3 g/cm 3GBq MBq kBq Bq9.原料药的含量（%），除另有注明者，均按重量计。
如规定上限为100%以上时，系指用药典规定的分析方法测定时可能达到的数值，它为药典规定的限度或允许偏差，并非真是含量；如未规定上限时，系指不超过101.0%。
10.标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质。
由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。
薄层色谱法在药物分析中的应用
薄层色谱在药物分析中的应用摘要：随着高效液相色谱法的兴起与发展，薄层色谱法曾一度被忽略，直至高效薄层材料和预制板的出现，特别是20世纪80年代后期薄层色谱扫描仪的出现，形成现代仪器化薄层色谱法，才得到了更多的关注。
TLC法被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面，且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一，具有设备简单、操作简便、分离速度快，灵敏度和分辨率较高等优点。
关键词：薄层色谱，药物分析薄层色谱法(The layer chromatography，TLC)是将固定相均匀的涂布在具有光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法，它属于平板色谱，是一种常用的色谱分离方法。
但随着高效液相色谱法的兴起与发展，薄层色谱法曾一度被忽略，直至高效薄层材料和预制板的出现，特别是20世纪80年代后期薄层色谱扫描仪的出现，形成现代仪器化薄层色谱法，才得到了更多的关注。
TLC法被许多国家药典用于药物中杂质的检查、药物分析等方面，且是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一，具有设备简单、操作简便、分离速度快，灵敏度和分辨率较高等优点。
其中，薄层色谱法用于药物中杂质检查常用的方法有：杂质对照品法（适用于已知杂质并能制备得到杂质对照品的方法）、供试品溶液自身稀释对照法（适用于杂质的结构不能不能确定，或无杂质对照品的情况）、杂质对照品法和供试品溶液自身稀释对照法并用、对照药物法（前两种方法不适用时可用此方法）。
而薄层色谱在药物分析中我们则常用薄层色谱扫描法，其主要用于以下几个方面：1.中药材与中成药的鉴别与成分分析薄层色谱扫描法在中药材与中成药上的应用，主要是药材品种的鉴别、含量的测定、成分研究、采收期与炮制方法等对成分与含量的影响，以及成药中药味的鉴别与含量的测定等。
此方法可以直接在薄层板上进行中药成分的定量分析，其扫描图谱也可作为中药材的质量评价、鉴别依据。
例如：用薄层扫描法可以鉴别黄连品种并对对其所含生物碱进行定量的测定；用薄层扫描法测定土荆皮中乙酸的含量，以帮助鉴别其真伪等。
(完整版)药物分析简答题[部分来自历年]
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1.简述采用紫外分光光度法鉴别药物时常用的方法，以及薄层色谱法检查药物中特殊杂质的方法。
答： 1)测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长2)规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度3)规定吸收波长和吸收系数法4）规定吸收波长和吸收度比值法5）经化学处理后,测定其反应产物的吸收光谱特性1）杂质对照品法2)供试品溶液自身稀释对照法3）杂质对照品与供试品溶液自身稀释对照并用法4）对照药物法2.试述古蔡法测砷原理。
操作中为何要加碘化钾试液和酸性氯化亚锡试液？醋酸铅棉花起什么作用？答:1)原理：金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量的砷盐反应生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸，产生黄色至棕色的砷斑,与一定量标准溶液所生成的砷斑比较，判断供试品中重金属是否符合限量规定。
2）五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢，但生成的砷化氢的速度较三价砷慢，故反应中加入碘化钾及氯化亚锡将五价砷还原为三价砷,碘化钾被氢化生成的碘又可被氯化亚锡还原为碘离子，后者与反应中产生的锌离子能形成稳定的配位离子，有利于生成砷化氢的反应进行,还可抑制锑化氢的生成，因锑化氢也能与溴化汞试纸作用生成锑斑.3)锌粒及供试品种可能含少量硫化物,在酸性液中能产生硫化氢气体，与溴化汞作用生成硫化汞的色斑，干扰试验结果，故用醋酸铅棉花吸收硫化氢3.简述薄层色谱法检查药物中的杂质，可采用高低浓度对比法检查，何为高低浓度对比法?答: 先配制一定浓度的供试品溶液,然后将供试品溶液按限量要求稀释至一定浓度作为对照溶液，将供试品溶液和对照溶液分别点样于同一薄层板上，展开、斑点定位。
供试品溶液所显示杂质斑点与自身稀释对照品溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的相应主斑点比较，不得更深。
4.药物分析在药品的质量控制中担任着主要的任务是什么？答：保证人们用药安全、合理、有效，完成药品质量监督工作.5.常见的药品标准主要有哪些，各有何特点？答：国家药品标准（药典)；临床研究用药质量标准;暂行或试行药品标准;企业标准。
薄层色谱法实验报告
薄层色谱法实验报告一、实验目的1、掌握薄层色谱法的基本原理和操作方法。
2、学习利用薄层色谱法分离和鉴定混合物中的成分。
二、实验原理薄层色谱法（Thin Layer Chromatography，TLC）是一种快速、简便、灵敏的分离和分析方法。
它基于混合物中各组分在固定相（吸附剂）和流动相（展开剂）之间的分配系数不同，从而在薄层板上实现分离。
吸附剂通常是硅胶、氧化铝等具有吸附性能的物质，它们均匀地涂布在玻璃板或塑料板上形成薄层。
展开剂则是一种能够在吸附剂上移动的溶剂系统。
当样品点在薄层板的一端，放入装有展开剂的层析缸中时，展开剂在毛细作用下沿着薄层上升，样品中的各组分随着展开剂的移动而在薄层上发生不同程度的吸附和解吸，导致它们在薄层上的移动速度不同，最终实现分离。
通过与已知标准物质在相同条件下的色谱行为进行比较，可以对样品中的成分进行定性分析。
同时，根据斑点的大小和颜色深浅，可以进行半定量分析。
三、实验仪器与试剂1、仪器玻璃板（5×20cm）层析缸点样毛细管（内径 05mm）喷雾器紫外光灯（254nm 和 365nm）烘箱2、试剂硅胶 G羧甲基纤维素钠（CMCNa）水溶液（05%）展开剂（石油醚乙酸乙酯体系，不同比例）样品溶液（混合有机化合物）标准物质溶液（已知有机化合物）四、实验步骤1、制板将硅胶 G 与适量的 05% CMCNa 水溶液在研钵中充分研磨，调成均匀的糊状。
用涂布器将糊状物均匀地涂布在玻璃板上，厚度约为 025 05mm。
置于水平台上晾干，然后在 105℃烘箱中活化 30 分钟，取出后置于干燥器中备用。
2、点样用点样毛细管吸取样品溶液和标准物质溶液，在距薄层板一端 1 15cm 处轻轻点样，点样直径一般不超过 2mm，每次点样后用电吹风冷风吹干，重复点样 2 3 次，以保证样品量足够。
3、展开在层析缸中倒入适量的展开剂，使其高度不超过 1cm。
将点样后的薄层板小心放入层析缸中，盖上盖子，使展开剂蒸气饱和层析缸 5 10 分钟。
体内药物研究分析的方法和重要性
体内药物分析的方法和重要性————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：2浙江大学远程教育学院本科生毕业论文（设计）开题报告题目体内药物分析的方法和重要性专业药学学习中心衢州姓名袁奕艺学号710013222002指导教师周新高2012 年03月24日一、文献综述体内药物分析是指通过分析手段了解药物在体内的数量和质量的变化，获得药物动力学的各种参数，以及药物在体内转变、代谢的方式、途径等信息。
从而为药物的生产、医疗临床、实验研究等方面对所研究的药物做出估计与评价，对药物改进和发展做出贡献。
随着体内药物分析的深入，必将对药物和人的内在关系作出更准确的表达和描述。
体内药物分析的首要任务是为临床药学和临床实际工作提供分析数据，这就决定了其独特的分析方法。
1样品必须净化。
供分析的样品来自不同生物体，组成复杂，干扰物质多。
如体液和组织中的内源性物质的成分可以与药物结合，且干扰测定。
因此测定前需进行不同程度分离、纯化，方可进行测定。
2样品浓缩。
一般而言，能供分析的样品量较少，其中所含药物及其衍生物的量更少，实际进行的是微量分析，另外，样品不易重新获得，所以经进化后的样品还应进行必要浓缩。
3方法简便、快速和准确。
样品若是临床药物浓度监测的分析，由于工作量大，故分析方法越简单越好；若为有关科研提供数据，则要准确性高；若与中毒解救有关，则要求越迅速越佳。
4还需有一定为检测服务的仪器设备。
总之体内药物分析的首要是适合体内样品中药物的灵敏性高、选择性好、准确可靠地分析方法。
生物样品经过适当的前处理后，选择合适的方法进行定性定量分析。
常用的体内药物分析方法包括：色谱法、各种联用技术、免疫分析法、光谱分析法、放射性核素标记法和微生物法等，其中色谱法和色—质联用技术是体内药物分析的最常用方法。
1色谱法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法、薄层色谱法等，是分析混合组分最有效的方法，尤其是当色谱与质谱、色谱与核磁共振波谱联用时，更显示出其强大的分离分析、定性定量的功能。
生物样品的常用分析方法
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紫外分光光度法（UV）
原理同比色法。适用于测定具有紫外 吸收的药物。 体内药分中母体药物与代谢物的紫外 吸收光谱非常相似，易产生干扰。受灵敏 度和选择性的限制，其在体内药分中的应 用也呈下降趋势。
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荧光分析法 （Fluorescence method） 利用物质经光照射后能发射荧光的特性 进行分析的光学分析法。
参考文献：涡流色谱技术在生物样品分析中的应用 刘朋，周建良，安婧婧，李萍，Chinese Journal of Chromatography
1
光谱法(Spectroscopy)
光谱法是基于检测能量（电磁辐射） 作用于待测物质后产生的辐射信号或所 引起的变化的分析方法。
特点
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薄层扫描法 (TLCS)
实例：薄层扫描色谱法检测血清中对乙酰氨基酚 采用TLCS法检测患者血清中对乙酰氨 基酚的浓度，为临床急诊中毒分析和血药浓 度监测提供了快速简便的方法。 该法板间测定误差小、回收率高、线 性范围宽，能准确测定患者血药浓度。与文 献报道的HPLC和GC法相比，具有简便快 速、样品用量少、费用低和不需要进行衍生 化等优点 。
体内药分专题之五—— 生物样品常见分析方法
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思考
1.在体内药物分析中所采用的生物 样品有哪些? 2.最常用的生物样品是什么? 3.药物分析中常见分析方法包括哪 些?哪些适用于体内药物分析?
生物样品的常用分析方法
体内药物分析是借助于现代化的仪器 与技术来分析药物在体内数量与质量的变 化，以获得药物在体内的各种药代动力学 参数、代谢方式、代谢途径等信息。目前， 用于生物样品分析的方法有很多，归纳起 来主要有以下几类：
色谱法在药物分析中的应用
色谱法在药物分析中的应用
色谱法是一种用于药物分析的常用方法。
它是一种将混合物中的化学物质分离和定量
分析的技术，通过分离和识别药物中的成分，可以确定其纯度、含量和杂质。
色谱法在药
物研发过程中有广泛应用，被广泛用于新药研究、质量控制、药代动力学、药物代谢和药
物相互作用研究等领域。
色谱法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（LC）、超高效液相色谱法（UPLC）等。
气相色谱法主要用于揭示气态或挥发性化合物的成分，常用于药物中挥发性成分的分析。
液相色谱法主要用于分离非极性和极性化合物，常用于大多数药物分析。
超高效液相色谱
法是一种新兴的分离技术，以其分离效率高、分析速度快等优点被广泛应用于药物研究中。
还有高效液相色谱法（HPLC）、等温点和薄层色谱法等其他色谱技术。
药物分析中，一般首先根据药物的特性选择合适的色谱方法。
然后，样品预处理，如
提取、稀释、制备等，以充分发挥色谱分离和定量的优势。
通过使用色谱柱、色谱仪和检
测器进行分离和检测，获得药物样品的分离和定量结果。
得出的结果可以用于判断药物的
质量、纯度和含量。
还可以用于药物代谢动力学、药物相互作用和体内外药物转运研究
等。
色谱法可以用于药物中有毒物质的定量分析。
有些药物在体内代谢后会产生有毒代谢物，使用色谱法可以定量分析这些有毒物质的含量，从而评估药物的安全性。
色谱法还可
以用于药物的质量控制，例如检测药品中的杂质。
使用色谱法可以确定杂质的种类和含量，以确保药物的安全性和有效性。
体内药物分析薄层色谱法
对样品量和分离能力有一定的限制，某些 复杂样品需要结合其他分析方法进行确定。
TLC的样品制备和染色方法
在进行薄层色谱之前，样品需要经过适当的制备处理，如溶解、浓缩和纯化， 并进行染色以便观察分离效果。
实验操作技巧和注意事项
• 保持实验环境清洁，避免杂质对试验结果的干扰。 • 准确控制溶剂的流动速度和温度，以获得可靠的分离和定性分析。 • 在解释结果时要考虑实验条件和其他可能影响的因素，以获得准确有效的结论。
体内药物分析薄层色谱法
体内药物分析薄层色谱法是一种常用的分析技术，通过薄层色谱纸上的化学 反应与样品分离，实现对药物成分的定性和定量分析。
什么是薄层色谱法？
薄层色谱法是一种分离技术，通过固定相（薄层色谱板）和移动相（溶剂）的相互作用，实现对物质混 合物中成分的分离和ayer Chromatography）技术基于不同物质在固定相上的亲 疏水性差异，利用游离和吸附作用原理实现物质的分离。
TLC的步骤
1
样品预处理
样品必须充分溶解并去除不需要的杂质，以获得准确的分离和识别结果。
2
样品施加
将待分析的样品分子施加在薄层色谱板上的固定相区域，通常使用微量注射器或 标准样品施加方法。
3
运移过程
将带有样品施加的薄层色谱板放入移动相中，待溶剂沿薄层色谱板上升，并在固 定相上分离样品。
TLC在药物分析中的应用
成分鉴定
薄层色谱法可用于药物中成分的鉴定，帮助确定药物的质量和效力。
含量测定
通过标准曲线法，薄层色谱法可用于测定药物中活性成分的含量。
控制质量
薄层色谱法可用于检测药物制剂中的杂质和未反应原料，确保药物的质量和安全性。
TLC的优点和限制
1 优点
体内药物分析常用的分析方法
体内药物分析常用的分析方法体内药物分析是借助于现代化的仪器与技术来分析药物在体内数量与质量的变化，以获得药物在体内的各种药代动力学参数、代谢方式、代谢途径等信息。
目前，用于体内药物分析的方法有很多，归纳起来主要有以下几类：1.色谱分析法体内药物分析中,色谱技术(Chromatography)一直是研究体内药物及其代谢物最强有力的手段，其在体内药物分析中的应用始于上世纪八十年代。
由于其具有分离和分析的双重功能，且有很高的选择性和较高的灵敏度，因而可同时分析结构相似的药物和代谢物等。
色谱法可分为薄层色谱法、薄层扫描法、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)及高效毛细管电泳法(HPCE)等。
色谱法中以高效液相色谱法最为常用，特别是反相高效液相色谱法(RP-HPLC)更具有试剂价廉、方法简单和适应范围广等优点，现已成为体内药物分析方法中最重要的方法，并常作为体内药物分析中评价其它方法的参比方法。
GC法在体内药物分析方法中也占有重要地位，虽然该法只限于高挥发性、热稳定性的化合物，但通过化学衍生化技术可使应用范围大大增加。
特别值得一提的是毛细管气相色谱法，由于其柱效高，可分析复杂的混合物，因而在体内药物分析中具有很好的应用前景。
高效毛细管电泳(HPCE)是20世纪80年代后期发展起来的经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物,是一类以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力的新型液相分离分析技术。
它分离模式多,分离效率高,速度快,适用范围广,所需样品、试剂用量少,在体内药物分析中得到广泛应用。
根据分离模式的不同，又可分为毛细管区带电泳(CZE)，毛细管凝胶电泳(CEC)，毛细管等电聚焦(CIEF)，胶束电动毛细管色谱(MEKC)等，CZE是目前应用最广泛的毛细管电泳分离模式。
2.联用分析法目前使用较广泛的为色谱联用分析法和色谱与核磁共振联用分析法。
色谱与质谱的联用是应用于药物分析中最为活跃的技术,能够使样品的分离、定性、定量一次完成。
药物分析实验药物鉴别
药物分析鉴别方法总结一、葡萄糖注射液1、用斐林试剂〔0.1 g/ml的氢氧化钠和0.05 g/ml的硫酸铜试剂〕反响生成砖红色沉淀加热的条件下原理：具有醛基，醛基遇斐林试剂有砖红色沉淀生成。
2、班氏试剂：在试管中参加葡萄糖注射液0.1mL，参加班氏糖定性试剂1mL，混合均匀后，将试管放入盛有开水的烧杯中，加热煮沸1min~2min，假设试管中溶液在加热后产生了砖红色沉淀，说注射液中含有葡萄糖。
3、可用溴水来鉴别葡萄糖，葡萄糖能被溴水氧化成葡萄糖酸，使溴水褪色。
原理：葡萄糖的醛基具有复原性，溴水能将其氧化，使溴水褪色。
结果：三小时后，溴水褪色。
4、分光光度法：利用分光光度计测量简单的吸光度，与标准溶液吸光度比拟。
5、银镜反响：葡萄糖分子中的醛基，有复原性，能与银氨溶液反响：被氧化成葡萄糖酸。
6、比旋度测定法：原理：葡萄糖分子结构中有5个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。
比旋度是旋光性物。
7、红外光谱：测量样品溶液的红外光谱，与标准溶液的红外光谱图比拟。
8.薄层色谱法9.高效液相色谱法二、阿司匹林肠溶片1、三氯化铁法：本品水溶液加热放冷后，与三氯化铁溶液反响，呈紫堇色。
原理：受热分解产生水杨酸和乙酸，水杨酸的酚羟基与三氯化铁，呈紫堇色。
2、水解反响：阿司匹林与碳酸钠溶液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则生成白色水杨酸沉淀，并产生醋酸的臭气。
3、红外光谱法4、薄层色谱5、高效液相色谱法：在含量测定项下记录的色谱中，供试品溶液主峰的保存时间应与对比品溶液主峰的保存时间一致。
6.紫外光谱法7.核磁共振法三、维生素E软胶囊1.氧化复原法：原理：维生素E侧链上的叔碳原子易自动氧化，生成相应的羟基化合物，本品的乙醇溶液与硝酸供热，则生成生育酚，溶液显橙红色。
2、维生素E具有较强的复原性，与三氯化铁作用，被氧化成生育酚，后者与2,2'-联吡啶作用生成血红色的络合物。
3、薄层色谱法，结果供试品溶液色谱中在与对比品溶液色谱相应位置上显深蓝色的斑点，空白对比无干扰。
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展开
薄层色谱有别于其他色谱技术， 除了都有固定相和流动相外， 还存在气相。气相会对分离结 果产生显著影响。展开室预先 用展开剂饱和 展开距离 由于TLC中流动相的速度不是固 定的，而是随展开时间和展开 距离增加而降低，所以展开距 离有一定限制。通常在HPTLC 板上5cm展距分辨率较高
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薄层色谱条件
样品与标准品分别点于同 一含羧甲基纤维素钠(为粘合 一含羧甲基纤维素钠 为粘合 的硅胶60 GF254薄层板 剂)的硅胶 的硅胶 薄层板 以无水乙醇一氨水(50： 上，以无水乙醇一氨水 ： 1)为展开剂水平展开，取出 为展开剂水平展开， 为展开剂水平展开 晾干，置紫外灯(254nm)下 晾干，置紫外灯 下 确定斑点位置。 确定斑点位置。斑点颜色为 黑褐色
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血清标准曲线的制备
分别精密吸取对照品 溶液(浓度为 浓度为1.0g／ 溶液 浓度为 ／ mL)0.5、1.0、2.0、 、 、 、 3.0、4.0、6.0L加人 、 、 加人 磨口试管中， 磨口试管中，再加人血 清l.0mL，按供试品溶液 ， 的制备方法操作
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稳定性试验、板内误差测定、仪器精密度测定、回收率试 验 都很好
2
薄层色谱法（TLC） 第一节 薄层色谱法（TLC）
是指将固定相均匀地涂布在具有光洁表面 的玻璃、塑料或金属膜等表面上形成薄层， 的玻璃、塑料或金属膜等表面上形成薄层，将 被分离物质点在薄层板的一端，置展开室中， 被分离物质点在薄层板的一端，置展开室中， 展开剂借毛细管作用从薄层点样的一端展开到 另一端， 另一端，在此过程中不同物质可以进行色谱分 离。 根据不同的分离机制， 根据不同的分离机制，薄层色谱法可以分为 吸附薄层色谱、分配薄层色谱、 吸附薄层色谱、分配薄层色谱、离子交换薄层色 谱和凝胶薄层色谱。 谱和凝胶薄层色谱。
第六章 色谱法
P168
色谱法是一种物理或物理化学的分离分析 方法， 方法，其分离原理主要是利用物质在流动相和 固定相中的分配系数、或吸附能力等的差异 差异而 固定相中的分配系数、或吸附能力等的差异而 得到分离。 得到分离。 分离 随着临床药学的迅速发展，色谱法在体内药 随着临床药学的迅速发展，色谱法在体内药 物分析中的应用更为广泛， 物分析中的应用更为广泛，具有不可取代的重要 地位， 地位，已成为体内药物分离检测最重要的方法
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瑞士卡玛CAMAG公司的仪器 公司的仪器 瑞士卡玛
全自动、
半自动、
手动点样仪
条带状喷雾式样品点样
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薄层板切割器:
全自动展开仪（ CAMAG全自动展开仪（ADC2）
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Visualizer数码成像系统
西洋参在UV366下的色谱图（指纹图谱）
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薄层色谱扫描仪、 薄层色谱扫描仪、工作站 可进行薄层色谱光密度分析 可进行薄层色谱光密度分析
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NH2：丙氨基改性
C18： 弱极性
Diol: 二醇 醚改性
CN：丙基腈 改性
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点样
两个基本要求： 两个基本要求： 第一，点样位置需精确； 第一，点样位置需精确； 第二，尤其对于定量分析，点样体积需要精确和准确。 第二，尤其对于定量分析，点样体积需要精确和准确。 为了提高分离效率，原点在展开方向应该尽可能小， 为了提高分离效率，原点在展开方向应该尽可能小， 对于HPTLC，应小于 对于 ，应小于1.5mm， ， 点状点样：体积受到严格限制。 点状点样：体积受到严格限制。在HPTLC板上点状点样体 板上点状点样体 积通常为0.1-1L。溶剂在板上扩散会“环形色谱”。 积通常为 。溶剂在板上扩散会“环形色谱” 非接触喷雾式条带状点样：均匀，可提高解析度和检测限。 非接触喷雾式条带状点样：均匀，可提高解析度和检测限。 由于HPTLC扩散小，10*10cm板可点 个样品 扩散小， 板可点16个样品 由于 扩散小 板可点
板间误差测定： 板间误差测定：
取同一对照品溶液，分别点于5块含羧甲基纤维素 (为粘台剂)的硅胶60GF 薄层板上(4种不同点样 量)．依法展开后扫描测定。吸收数据见表3。 ) 3
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中国卫生检验杂志2005年4月 年 月 中国卫生检验杂志 血清中乐果的高效薄层色谱快速分析方法和气相色谱方法比 对研究 潘亚娟 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所， 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，北京 [基金项目 国家十五科技攻关项目 基金项目] 国家十五科技攻关项目(2001BA704B06) 基金项目 样品预处理： 样品预处理：TLC法直接取离心后血清 法直接取离心后血清 测定TLC法：用微量注射器分别取乐果标准溶液和血清样品各 法 测定 2L ，点在薄层板上，展开剂 1：1(v／v)正己烷：丙酮 点在薄层板上， 正己烷： ： ／ 正己烷
1-5，10、50、100、200、500 g/ml乐果标准溶液 ， 、 、 、 、 乐果标准溶液
31
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供试品溶液的制备
精密量取血清1. 置磨口试管中， 精密量取血清 0 mL置磨口试管中， 置磨口试管中 盐酸溶液， 加入 l.0 mL pH3盐酸溶液，再加人 盐酸溶液 再加人3.0 mL的氯仿，振荡，移出氯仿层。提取两次。 的氯仿，振荡，移出氯仿层。提取两次。 的氯仿 将两次氯仿液合并， 将两次氯仿液合并，于55°水浴上蒸干， °水浴上蒸干， 点样前用约0.1 mL 氯仿溶解。 氯仿溶解。 点样前用约
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薄层扫描条件
采用双波长反射 法锯齿扫描： 法锯齿扫描：测定波 242nm， 长242nm，参比波长 370rim；背景补偿； ；背景补偿； 线性参数Sx： ； 线性参数 ：3；扫 描步距Y=0．04；狭 描步距 ． ； 缝宽度 0.4mm×0.4mm。 × 。 薄层扫描图见图2。 薄层扫描图见图 。
与传统TLC相比，高效薄层色谱法在薄层制备、展 相比，高效薄层色谱法在薄层制备、 与传统 相比 开方式、 开方式、分析鉴定手段以及相配套的仪器设备等方面进 许多改革，其中最根本的是固定相的改进 固定相的改进。 行了 许多改革，其中最根本的是固定相的改进。
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而在TLC、HPTLC和UPTLC三种规 、 而在 和 三种规 格的预制硅胶薄层板中，又以HPTLC最 格的预制硅胶薄层板中，又以 最 能体现出薄层色谱分析效率高且经济实 用的特点。 用的特点。其应用在目前的科研和日常 分析中越来越得到普及。无定形HPTLC 分析中越来越得到普及。无定形 硅胶的平均粒径和粒径分布范围相对 TLC有较大改善，以较短的展开距离和 有较大改善， 有较大改善 时间就可以获得较高的理论塔板数和分 离度。 由于成分斑点更为集中， 离度。 由于成分斑点更为集中，因此所 需的有效涂层厚度也大为减少， 需的有效涂层厚度也大为减少，检测灵 敏度也因而较TLC有一个数量级的提高。 有一个数量级的提高。 敏度也因而较 有一个数量级的提高
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薄层色谱的特点： 薄层色谱的特点： 可以同时平行分离多个样品；分析成本低； 可以同时平行分离多个样品；分析成本低；对样品预 同时平行分离多个样品 处理要求低；薄层板一次性使用，对样品要求不高； 处理要求低；薄层板一次性使用，对样品要求不高； 对固定相、展开剂的选择自由度大。 对固定相、展开剂的选择自由度大。 传统的TLC法缺点： 传统的TLC法缺点： 法缺点 展开时间长、展开剂体积需求大和分离结果差等。 展开时间长、展开剂体积需求大和分离结果差等。其 色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、层 色谱结果易受铺板质量、点样技术、展开剂配制、 析环境中展开剂的饱和度、环境温、 析环境中展开剂的饱和度、环境温、湿度等因素的影 有时难于重复；显色易受均匀性、灵敏度、 响，有时难于重复；显色易受均匀性、灵敏度、稳定 性等影响，这均使测定结果偏差较大。 性等影响，这均使测定结果偏差较大。
显色
1、显色剂显色法：喷雾显色，借助喷雾器喷 、显色剂显色法：喷雾显色， 细雾至板面湿润。 细雾至板面湿润。 2、紫外线照射法：如AFTB1在WL365nm 、紫外线照射法： 在 观察； 观察； 3、对本身是有色的斑点则不需显色。 、对本身是有色的斑点则不需显色。
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定性定量
1、定性：斑点显色后量出高度，求得Rf值 、定性：斑点显色后量出高度，求得 值
2、定量方法 、
目视直接比较法 洗脱测定法 薄层扫描法
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薄层扫描法一般由薄层扫描仪完成。 薄层扫描法一般由薄层扫描仪完成。该仪器一 般由下列部分组成计算机、光源、单色光器、 般由下列部分组成计算机、光源、单色光器、 监测器、打印机、记录仪。 监测器、打印机、记录仪。按测定方法分可分 为透射法、反射法。 为透射法、反射法。按其扫描方式可分为线性 扫描法、锯齿扫描法、 扫描法、锯齿扫描法、飞点扫描法或称之为微 光点快速扫描法。 光点快速扫描法。瑞士和日本岛津类型仪器所 采用的是锯齿扫描或飞点扫描法。 采用的是锯齿扫描或飞点扫描法。目前是以锯 齿扫描和飞点扫描法为佳。 齿扫描和飞点扫描法为佳。
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高效薄层色谱法
high performance thin-layer chromatography (HPTLC)
是近年来迅速发展的一种高效、快速、 是近年来迅速发展的一种高效、快速、操作 简便、结果准确、 简便、结果准确、灵敏度高和重现性好的薄层色 谱新技术，它采用更细、 谱新技术，它采用更细、更均匀的改性硅胶和纤 维素等为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性， 维素等为固定相，对吸附剂进行疏水和亲水改性， 可以实现正相和反相薄层色谱分离， 可以实现正相和反相薄层色谱分离，提高了色谱 的选择性，已广泛用于各个领域。 的选择性，已广泛用于各个领域。
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色谱法包括纸色谱、薄层色谱、凝胶色谱、 色谱法包括纸色谱、薄层色谱、凝胶色谱、 气相色谱和液相色谱 液相色谱法是应用最广的分离分析方法， 液相色谱法是应用最广的分离分析方法， 是应用最广的分离分析方法 特别是对于复杂样品的分析尤为重要。 特别是对于复杂样品的分析尤为重要。液相色 谱法的分支很多， 广义的液相色谱法包括： 谱法的分支很多， 广义的液相色谱法包括：高 效液相色谱法、薄层色谱法、 效液相色谱法、薄层色谱法、超临界流体色谱 毛细管电泳法等类别， 法、毛细管电泳法等类别， 而它们又各自包括 多种方法。 多种方法。