酚氯仿法提取DNA实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。
2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。
3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。
4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。
二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。
核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。
DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。
酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。
盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。
RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。
Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。
核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。
紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。
A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。
琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。
大肠杆菌菌液。
2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。
酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。
无水乙醇、75%乙醇。
3M 醋酸钠（pH 52）。
Trizol 试剂。
异丙醇。
RNA 酶抑制剂。
琼脂糖。
50×TAE 电泳缓冲液。
核酸染料（如 EB 或 GelRed）。
酚氯仿抽提
酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。
步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。
二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。
步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。
自己整理外周血DNA 提取-酚氯仿法
DNA 提取实验目的：外周血DNA提取实验试剂：1×RBC裂解液、1×细胞核裂解液、20%SDS、蛋白酶K、Tris饱和酚、氯仿、无水乙醇、70%酒精、TE缓冲液实验耗材：15ml、1.5ml离心管、枪头实验流程：1.将EDTA抗凝贮冻血液于室温解冻后移入15ml离心管中，加满1×RBC裂解液，充分混匀（上下颠倒100次），冰上静置30min，直至溶液变透明，离心机4℃3000rp离心12min，去上清液，留白色沉淀（约3-4ml），再次重复上述步骤。
2.在沉淀（2-3ml）中加入1×细胞核裂解液3ml，20%SDS 150-200μL，混匀至粘稠透明状，再加入20mg/ml的蛋白酶K 25-35μL，充分混匀后，37℃50rpm的恒温摇床过夜。
3.加入等体积的Tris饱和酚（约6ml）反复充分摇匀后，置离心机4℃3000rp离心10min4.将上清移至另一离心管中，加入等体积的酚/氯仿（各3ml左右），混匀，室温下离心10min5.再次将上清液移至另一离心管中，加入2倍体积（约10ml）的无水乙醇，轻轻摇晃上下倒转混匀，可析出白色沉淀物（gDNA），离心20℃3000rp 5min 6.用1000μL移液器小心吸出gDNA置于1.5ml的灭菌Ep管中，用70%的酒精漂洗2次，离心4℃10000rp 5min7.用gDNA溶解于200μL TE缓冲液中8.用10μL移液器取2μL TE缓冲液滴入紫外线分光光度计，调零，然后再取2μL直接读数。
9.测量好DNA的浓度后，将gDNA稀释至50ng/μL，用200μL无菌EP管分装，每管分装50μL置-80℃冰箱保存10.DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE做空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280的光密度值。
按下面公式计算浓度：DNA浓度(ug/ul)= A260*50*稀释倍数/1000 DNA纯度的判定：A260/A280 比值应介于1.7-2.0之间。
植物基因组dna的提取实验报告
植物基因组dna的提取实验报告植物基因组DNA的提取实验报告。
植物基因组DNA的提取是分子生物学实验中的一项重要步骤，对于研究植物的遗传特性和基因表达具有重要意义。
本实验旨在通过提取植物细胞中的DNA，为后续分子生物学实验提供基础支持。
在本次实验中，我们选择了小麦叶片作为实验材料，采用CTAB法提取植物基因组DNA，并对提取的DNA进行质量评估。
首先，我们收集了新鲜的小麦叶片样品，并将其置于液氮中迅速冷冻保存，以保持DNA的完整性。
接着，将叶片样品磨成细末状，并加入预冷的CTAB提取液中，进行细胞破裂和DNA的溶解。
随后，通过酚/氯仿提取法分离DNA与蛋白质，最终得到DNA的沉淀物。
在实验过程中，我们注意到了一些关键的操作细节。
首先，样品的冷冻保存和研磨过程需要迅速进行，以防止DNA的降解。
其次，在加入CTAB提取液后，充分混合样品并保持恒温，有助于细胞破裂和DNA的溶解。
最后，在进行DNA的沉淀时，需要注意避免将上清液一同转移，以保证提取得到的DNA纯度。
提取得到的DNA样品经过紫外分光光度计检测，结果显示其纯度较高，吸光比值（A260/A280）约为1.8，符合DNA的纯度要求。
随后，我们进行了琼脂糖凝胶电泳实验，观察到明显的DNA条带，并通过对照DNA分子量标准品的迁移情况，初步评估了提取得到的DNA片段大小。
通过本次实验，我们成功地提取到了小麦叶片样品中的基因组DNA，并对其质量进行了评估。
下一步，我们将利用提取得到的DNA样品，开展进一步的分子生物学实验，包括PCR扩增、基因克隆等，以深入研究小麦的遗传特性和基因表达。
本次实验为我们提供了可靠的DNA样品，为后续实验奠定了坚实的基础。
总之，植物基因组DNA的提取是分子生物学研究中的重要步骤，本次实验通过CTAB法成功提取了小麦叶片样品中的DNA，并对其进行了质量评估。
提取得到的DNA样品具有较高的纯度和完整性，为后续实验提供了可靠的基础支持。
DNA提取与测序实验报告
DNA提取与测序实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取 DNA 的基本原理和方法。
2、熟悉 DNA 测序的基本流程和操作要点。
3、学会对 DNA 提取和测序结果进行分析和评估。
二、实验原理DNA 提取原理DNA 在细胞中以与蛋白质结合的状态存在。
提取 DNA 的基本思路是通过裂解细胞，使细胞膜和核膜破裂，释放出 DNA，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，得到纯净的 DNA。
常用的裂解方法包括物理方法（如研磨、超声破碎）、化学方法（如使用去污剂）和酶解法（如使用蛋白酶K）。
去除杂质的方法则包括使用酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等。
DNA 测序原理目前常用的 DNA 测序技术是 Sanger 测序法。
其基本原理是在DNA 合成过程中，通过掺入特定的双脱氧核苷酸（ddNTP）来终止DNA 链的延伸。
由于 ddNTP 缺少3’OH 基团，一旦掺入到 DNA 链中，链的延伸就会终止。
通过在多个反应中分别加入不同的 ddNTP，可以得到一系列不同长度的 DNA 片段。
这些片段经过电泳分离，根据条带的位置可以读取 DNA 的碱基序列。
三、实验材料与设备实验材料1、新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）或植物组织（如叶片）。
2、细胞培养物（如细菌、酵母）。
实验试剂1、细胞裂解液（包含去污剂、蛋白酶 K 等）。
2、酚/氯仿/异戊醇混合液（25:24:1）。
3、无水乙醇、70%乙醇。
4、 TE 缓冲液（10 mM TrisHCl，1 mM EDTA，pH 80）。
5、 DNA 测序试剂盒（包含引物、dNTP、ddNTP、DNA 聚合酶等）。
实验设备1、离心机。
2、移液器。
3、恒温水浴锅。
4、电泳仪。
5、凝胶成像系统。
6、 DNA 测序仪。
四、实验步骤DNA 提取步骤1、样本处理对于动物组织，将其剪碎后加入适量的裂解液，在匀浆器中匀浆。
对于植物组织，先在液氮中研磨成粉末，然后加入裂解液。
对于细胞培养物，离心收集细胞，加入裂解液重悬。
DNA提取(苯酚-氯仿小体法)
苯酚-氯仿法小提DNA试剂配制：1：细胞裂解液：0.32 M 的蔗糖；5 mM 的MgCl22：DNA稀释缓冲液：0.375 M的NaCl；12 mM的Tris-HCl [PH 7.5]3：10%的SDS [PH 7.2]4：5 M的NaCl5：苯酚-氯仿混合液V/V = 1:16：无水乙醇和70%的乙醇DNA 抽提：1、收集白细胞:500 μl新鲜/冻存全血(EDTA-2Na抗凝),加入1 ml的细胞裂解液充分混匀后孵育10分钟，,13000 rpm离心15 sec/3min；2、洗涤白细胞:离心后弃去上清液,加入1ml双蒸水重悬沉淀,将沉淀充分吹打使起完全溶解后, 13000 rpm离心1 /5min；3、稀释DNA，去除蛋白:弃离心后上清液，加入80 μl DNA 稀释缓冲液,重悬沉淀，完全溶解后，加入10 μl 10% SDS 和5 M NaCl 100μl，用手摇匀,再加双蒸水240 μl稀释DNA；4、加入300 μl苯酚-氯仿-异戊醇溶液(V/V=25:24:1,PH=7.5).盖紧试管,彻底混合均匀后, 13000 rpm离心12 min;5、取上清相转至另一1.5 ml EP管中，加入上清液体积比的1.5-2倍体积的预冷无水乙醇。
反复颠倒数次后,可见有絮状DNA沉淀析出；6、13000 rpm离心5 min,去上清水相。
加入和无水乙醇等量的70%预冷乙醇洗去DNA中的盐后,离心5 min。
用100 μl ddH2O或50 μl TE保存DNA备用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。
实验报告DNA提取与纯化
实验报告DNA提取与纯化实验报告：DNA 提取与纯化一、实验目的本次实验的主要目的是从不同的生物样本中提取并纯化 DNA，以获取高纯度、高质量的 DNA 用于后续的分子生物学实验，如 PCR 扩增、基因测序等。
二、实验原理DNA 存在于细胞核内，与蛋白质等成分结合形成染色质。
在提取过程中，需要通过裂解细胞，使 DNA 释放出来，然后去除蛋白质、RNA 等杂质，从而获得纯净的 DNA。
常用的提取方法包括酚氯仿抽提法、盐析法、硅胶膜吸附法等。
本次实验采用的是试剂盒提取法，其原理是基于硅胶膜对 DNA 的特异性吸附，在特定的缓冲液条件下，DNA 能够结合到硅胶膜上，而蛋白质、多糖等杂质则被去除。
经过洗涤去除杂质后，用洗脱液将 DNA 从硅胶膜上洗脱下来，从而得到纯化的 DNA。
三、实验材料与设备1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉）植物叶片细菌培养液DNA 提取试剂盒无水乙醇异丙醇氯仿蛋白酶 KRNA 酶 A2、实验设备离心机移液器恒温振荡器电泳仪紫外分光光度计四、实验步骤1、样本处理动物组织：称取适量的动物组织，剪碎后加入裂解液和蛋白酶 K，在 55℃恒温振荡器中孵育，直至组织完全裂解。
植物叶片：取新鲜的植物叶片，用液氮研磨成粉末，加入提取缓冲液和蛋白酶 K，在 65℃水浴中孵育。
细菌培养液：离心收集细菌沉淀，加入裂解液和溶菌酶，重悬后在37℃孵育。
2、 DNA 提取将处理后的样本加入到吸附柱中，离心使液体通过吸附柱，DNA 被吸附到硅胶膜上。
加入洗涤液，离心洗涤吸附柱，去除杂质。
加入洗脱液，离心洗脱 DNA，收集洗脱液。
3、 DNA 纯化向洗脱液中加入等体积的异丙醇，混匀后离心沉淀 DNA。
用 70%的乙醇洗涤 DNA 沉淀，离心去除乙醇。
干燥 DNA 沉淀，用适量的 TE 缓冲液溶解 DNA。
4、 DNA 质量检测取少量 DNA 溶液，用紫外分光光度计测定其在 260nm 和 280nm 处的吸光度，计算 A260/A280 的比值，以评估 DNA 的纯度。
提取目的基因实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握从细胞中提取目的基因的方法。
2. 了解目的基因提取过程中的原理和操作步骤。
3. 通过电泳检测目的基因的提取效果。
二、实验原理目的基因提取实验主要利用DNA的碱基互补配对特性和分子生物学技术，通过以下步骤实现目的基因的提取：1. 细胞裂解：利用去垢剂（如SDS）和蛋白酶K等试剂，破坏细胞膜，使细胞内的DNA释放出来。
2. 去除蛋白质：通过酚/氯仿抽提法，去除细胞裂解液中蛋白质等杂质。
3. DNA沉淀：通过乙醇或异丙醇等试剂，使DNA沉淀，从而纯化DNA。
4. DNA溶解：将沉淀的DNA溶解于适量的水中，以便后续实验使用。
三、实验材料1. 细胞样本：大肠杆菌或其他细胞株。
2. 试剂：SDS、蛋白酶K、酚/氯仿、乙醇、异丙醇、NaCl、Tris-HCl、EDTA等。
3. 仪器：离心机、电泳仪、紫外分光光度计等。
四、实验步骤1. 细胞裂解：- 将细胞样本加入含有SDS和蛋白酶K的裂解液中，混匀，室温放置30分钟。
- 12,000 rpm离心10分钟，收集上清液。
2. 去除蛋白质：- 将上清液与等体积的酚/氯仿混合，混匀，12,000 rpm离心10分钟。
- 取上清液（即酚/氯仿相）转移至新管中。
3. DNA沉淀：- 向酚/氯仿相中加入1/10体积的3M NaCl和2.5倍体积的乙醇，混匀。
- -20℃放置1小时或过夜。
- 12,000 rpm离心10分钟，收集沉淀。
4. DNA溶解：- 将沉淀溶于适量的Tris-HCl（pH 8.0）缓冲液中，即为提取的目的基因。
5. DNA浓度测定：- 利用紫外分光光度计测定DNA的浓度。
6. 电泳检测：- 将提取的目的基因进行琼脂糖凝胶电泳，观察DNA条带。
五、实验结果1. DNA浓度测定：利用紫外分光光度计测定DNA的浓度为50 ng/μl。
2. 电泳检测：在琼脂糖凝胶电泳中，观察到一条清晰的DNA条带，与目的基因大小相符。
六、实验讨论1. 本实验成功提取了目的基因，说明实验操作步骤正确。
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酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告
一、实验目的
实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K
消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白
质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化
DNA。
蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在
下保持很高的活性。
在匀浆后提取DNA的反应体
系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白
与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性
而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸
晶使DNA分子完整地分离出来。
氯仿-异戊醇溶
液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出
来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析
出。
氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化
研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶
氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层
异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。
而
DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙
醇沉淀来纯化和浓缩DNA
二、实验用品
试剂：
1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl）
Tris饱和酚（PH8.0）
氯仿/异戊醇（V/V=24/1）
10％SDS
5mg/ml Protease K
70％乙醇、无水乙醇
TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0）
1mM E DTA(PH8.0)
10mg/mL 溴化乙锭（EB）
耗材：
仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。
三、实验步骤
4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采
血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸）
4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中
用于酚氯仿法提取DNA。
1) 破除RBC：
用移液器将采血管中剩余的3ml血样中的血凝块取出转移到组织匀浆器中研磨粉碎，再移入50ml 离心管B中，再加入5倍体积无菌水，颠倒混匀，冰上静置十分钟，用于试剂盒法提取DNA。
同样方法破除离心管A中的红细胞。
2）离心管A：4℃，3000rpm，离心10min，弃上清，留沉淀，重复低渗、离心处理一次。
3）离心管A：加入30ml 生理盐水，上下轻轻混匀以重新悬浮、洗涤WBC沉淀，4℃，3000rpm，离心10min，弃上清，留沉淀。
转移到１．５ｍｌ离心管中。
（注意尽可能将上清弃净，同时不要丢失WBC沉淀）
4）用Protease K消化WBC：
在离心管中加入4ml TES，立即用移液器吹打，将细胞团块吹散。
加入100%SDS 350 ul，5mg/ml Protease K 100ul，充分混匀，65℃消化6 h。
４．２试剂盒法提取ＤＮＡ
１）向离心管B加入3倍体积的Buffer RBL 轻轻涡旋或颠倒混匀，3000rpm离心10min，小心弃上清，留沉淀。
２）向沉淀中加入400ul Buffer GR，并转移到1.5ml离心管中，混匀；在此基础上加入40ulProteaseK，混匀；再加入400ul Buffer GL ，颠倒混匀，剧烈旋涡震荡一分钟。
３）用塑料膜密封离心管管口，放入恒温箱中70℃10min，（延长孵育时间）至溶液清亮。
４）加入400ul无水乙醇，颠倒混匀，4℃，3000rpm，离心1 min。
５）将上步所得溶液加入到已装入收集管（Collection Tube）的吸附柱（Spin Column DL）中，8000g离心1min，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
６）向吸附柱中加入500ul BufferＧＷ１（使用前检查是否加入无水乙醇），１００００ｒｐｍ离心１ｍｉｎ，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
７）向吸附柱中加入500ul BufferＧＷ２（使用前检查是否加入无水乙醇），１００００ｒｐｍ离心１ｍｉｎ，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
８）再次１００００ｒｐｍ离心２ｍｉｎ，弃废液，将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
９）将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入５０ｍｌＢｕｆｆｅｒＧＥ，１００００ｒｐｍ离心一分钟，收集ＤＮＡ溶液，－２０℃保存。
４．３酚氯仿法法ＤＮＡ提取
１）消化６ｈ后的细胞悬液中加入等体积的Ｔｒｉｓ饱和酚，上下轻轻颠倒混匀，冰浴静置１０ｍｉｎ，４℃，３０００ｒｐｍ，离心１０ｍｉｎ。
２）将上层水相转移到一个新的离心管中，加入等体积的Ｔｒｉｓ饱和酚，上下轻轻颠倒混匀，冰浴静置１０ｍｉｎ，４℃，３０００ｒｐｍ，离心１０ｍｉｎ。
３）将上层水相转移到一个新的离心管中，加入等体积的氯仿／异戊醇（体积比２４:１），上下轻轻颠倒混匀，冰浴静置１０ｍｉｎ，４℃，３０００ｒｐｍ，离心１０ｍｉｎ。
４）将上层水相转移到一个小烧杯中，加入２．５倍体积的无水乙醇，冰上放置３０ｍｉｎ，可见网状ＤＮＡ白色沉淀析出，轻旋小烧杯，网状ＤＮＡ聚集成团。
５）用ｔｉｐ头将ＤＮＡ捞出，放入１．５ｍｌ的Ｅｐ管中，用预冷的７０％乙醇洗涤一次，４℃，１００００ｒｐｍ，离心１０ｍｉｎ，弃上清，放入－２０℃中用吸水纸片盖住Ｅｐ管口，过夜干燥。