酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理
提取dna的方法及原理
提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA提取是生物学和遗传学研究中的一项基础操作，它是获取DNA样本的过程。
DNA提取的方法有很多种，下面将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。
1. 高盐法高盐法是一种简单且常用的DNA提取方法。
其原理是利用高盐溶液中DNA与其他细胞组分（如蛋白质）之间的亲和性差异。
在高盐环境下，DNA更容易溶解而不与蛋白质结合，从而实现DNA的提取。
具体步骤包括细胞破碎、加入高盐溶液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种经典的DNA提取方法。
其原理是利用酚和氯仿两种溶剂的密度差异，将DNA从细胞中分离出来。
具体步骤包括细胞破碎、加入酚/氯仿混合液、离心分离DNA和去除蛋白质等。
3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高纯度DNA提取方法。
其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性差异。
DNA样本在经过一系列处理后，通过硅胶柱，DNA能够与硅胶颗粒结合，而杂质则被洗脱。
最后，通过洗脱DNA，即可获得高纯度的DNA。
硅胶柱法的优点是提取纯度高、操作简单，适用于分子生物学研究和临床诊断。
4. 磁珠法磁珠法是一种高效、快速的DNA提取方法。
其原理是利用带有亲和基团的磁珠与DNA之间的亲和性，实现DNA的选择性吸附和洗脱。
具体步骤包括磁珠悬浮液制备、样本加入、磁珠与DNA结合、磁珠分离、洗脱DNA等。
除了上述常用的DNA提取方法外，还有其他一些特殊的DNA提取方法，如酶解法、离心法、凝胶切割法等。
这些方法在不同的实验和应用中具有各自的特点和优势。
总结起来，DNA提取的方法多种多样，选择适合的方法取决于实验目的、样本类型和实验条件等。
无论采用哪种方法，都需要严格控制实验操作，以确保提取到高质量的DNA样本。
DNA提取的成功与否直接影响到后续的实验结果，因此在进行DNA提取时，需要注意样本的保存、细胞破碎的方式、溶解液的选择等因素，以获得可靠且高纯度的DNA。
DNA的提取的原理和方法
DNA的提取的原理和方法DNA的提取的原理和方法一、实验原理DNA是生物体遗传信息的主要载体，它是一种长链的生物高分子，由四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤、胞嘧啶）按照特定的顺序排列组成。
DNA主要存在于细胞的细胞核中，也有一些存在于线粒体和叶绿体中。
DNA提取的原理主要是利用不同物质在特定溶剂中的溶解度不同，通过控制溶剂的种类和条件，将DNA从细胞中分离出来。
在DNA提取过程中，通常需要使用一些化学物质，如苯酚、氯仿等，来破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
同时，还需要使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质，以便更好地分离DNA。
二、实验方法1.材料准备提取DNA的材料可以是动物组织、植物组织、微生物等。
不同的材料需要采用不同的处理方法，以最大限度地获得高质量的DNA。
例如，对于植物组织，可以使用液氮研磨法或CTAB法等方法进行提取。
2.细胞裂解细胞裂解是DNA提取的关键步骤之一，目的是破坏细胞膜和核膜，使DNA释放出来。
常用的裂解方法有机械法、化学法和酶法。
机械法包括研磨、超声波等；化学法使用化学物质如苯酚、氯仿等；酶法使用蛋白酶等酶类物质来消化蛋白质。
3.蛋白质去除在细胞裂解后，蛋白质也会随着DNA一起释放出来。
为了获得纯净的DNA，需要去除蛋白质。
常用的去除蛋白质的方法有苯酚/氯仿抽提法和盐析法。
苯酚/氯仿抽提法利用苯酚和氯仿的特性，将蛋白质和DNA分离开来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使蛋白质沉淀，而DNA则溶解在上清液中。
4.DNA沉淀去除蛋白质后，需要通过一定的方法将DNA沉淀下来。
常用的沉淀方法有乙醇沉淀法和盐析法。
乙醇沉淀法利用乙醇能够使DNA沉淀的特性，将DNA从溶液中分离出来；盐析法则是利用高浓度的盐溶液使DNA沉淀，然后通过离心等方法将DNA 收集起来。
5.DNA洗涤和溶解DNA沉淀后，需要用70%乙醇洗涤数次以去除杂质，然后用适量的TE缓冲液或去离子水溶解DNA。
TE缓冲液是一种常用的维持DNA稳定的缓冲溶液，含有Tris-HCl和EDTA二钠等成分。
提取dna的实验步骤原理
提取dna的实验步骤原理DNA提取是一项重要的实验技术，用于从细胞中分离纯净的DNA。
它在生物学、医学、犯罪学等领域具有广泛的应用。
DNA提取的过程可以分为以下几个步骤：样品收集、细胞破碎、蛋白质消化、DNA分离、洗涤、溶解和纯化。
首先，样品收集是DNA提取的第一步。
样品可以来自不同的来源，如血液、唾液、组织样本等。
对于血液样品，静脉采血是最常见的方式。
收集的血液样品需要采用抗凝剂进行预处理，以防止凝血。
细胞破碎是DNA提取的关键步骤之一。
细胞破碎的目的是将细胞膜以及核膜破坏，释放细胞内的DNA。
常用的细胞破碎方法有物理破碎、化学破碎和酶解法。
物理破碎一般采用高速离心仪或超声波处理，通过机械力量破坏细胞结构。
化学破碎使用适当的溶液，如细胞裂解液（例如EDTA、SDS、蛋白酶K等）来分解膜脂质和蛋白质。
酶解法则通过酶的作用来降解膜和核酸。
蛋白质消化是为了去除提取过程中的蛋白质杂质。
蛋白质会干扰DNA的纯化和测定。
在蛋白质消化过程中，常用的方法是加入蛋白酶K或肾脏酸性蛋白酶等蛋白水解酶，通过其酶解作用将蛋白质降解。
DNA分离是将DNA与其他细胞组分分离的过程。
DNA在细胞破碎后呈现为线性或环状的形态。
为了分离DNA，一般采用盐溶液和有机溶剂共同作用的方案，如添加高浓度的盐类（如NaCl）和异丙醇。
这些溶剂会沉淀细胞残渣和蛋白质，而DNA则溶于水相中。
洗涤过程是为了去除残留的蛋白质和盐类。
洗涤液一般为酒精溶液，如酒精和醋酸盐。
洗涤时，将沉淀的DNA加入洗涤液中，通过离心使DNA沉淀，然后去除上清液。
此过程重复一至三次可以有效去除杂质。
溶解是将沉淀的DNA重新溶解于缓冲液中，以便于后续的操作。
溶解液可以是Tris-EDTA缓冲液、无菌纯水等。
在加入缓冲液后，将溶液置于水浴中进行搅拌和温度控制，使DNA彻底溶解。
纯化是最后一步，目的是去除DNA提取过程中的杂质，获得纯净的DNA。
常见的纯化方法有酚-氯仿抽提法和硅胶纯化法。
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理
酚氯仿抽提原理是一种常见的有机物提取方法，该方法通过酚氯仿与样品中的目标化合物发生化学反应，将目标化合物从样品中分离出来。
下面将详细介绍酚氯仿抽提原理：
1.溶剂选择：酚氯仿是一种有机溶剂，对许多有机物具有良好
的溶解能力，因此在酚氯仿抽提过程中常常选择酚氯仿作为抽提溶剂。
2.抽提原理：酚氯仿可以与目标化合物发生亲油性反应，形成
可溶于酚氯仿的复合物，并从样品中抽提出来。
这是因为酚氯仿的化学性质使其能够与许多有机物形成相互作用，例如氢键、氧化还原反应等。
3.抽提条件：酚氯仿抽提的条件包括温度、pH值、搅拌速度等。
适当的条件可以促进酚氯仿与目标化合物的反应，并提高抽提效果。
4.抽提步骤：酚氯仿抽提的步骤通常包括样品制备、酚氯仿溶
液制备、抽提过程和目标化合物的分离。
其中，在样品制备过程中需要将样品研磨或者加入适当的溶剂溶解，以便更好地与酚氯仿反应。
5.分离纯化：一般情况下，酚氯仿抽提得到的溶液中还包含有
一些杂质。
为了得到纯净的目标化合物，需要进行进一步的分离纯化步骤，例如溶剂挥发、晶体生长等。
总之，酚氯仿抽提原理通过酚氯仿与目标化合物的化学反应来分离目标化合物。
通过优化溶剂的选择、抽提条件的控制以及后续的分离纯化步骤，可以得到纯净的目标化合物。
酚氯仿法提取DNA原理及方法
酚氯仿法提取DNA原理及方法酚氯仿法是一种常用的DNA提取方法，其原理是利用酚氯仿溶液对细胞和细胞碎片进行破碎，然后通过离心分离DNA。
以下是详细的步骤：1.细胞裂解：将待提取DNA的样本（细胞、组织等）加入含有酚氯仿的裂解缓冲液中，将溶液均匀混合。
酚氯仿是一种有机溶剂，能够破坏细胞膜和核膜，使细胞释放出DNA。
2.蛋白质沉淀：加入混合溶液中的蛋白质会和酚氯仿相互分离，形成一个物理屏障。
离心沉淀后，由于DNA密度比蛋白质低，DNA会上浮到上层，而蛋白质则沉淀在下层。
3.DNA沉淀：将上层液体转移到新的离心管中，加入同等体积的冷乙醇或异丙醇，然后轻轻振荡以促使DNA沉淀。
酒精能够与DNA相互作用，使DNA分子变得更加疏水，从而沉淀下来。
4.清洗：离心沉淀后，将上清液倒掉，加入70%乙醇洗涤沉淀。
乙醇通过去除残留的酚氯仿和其他杂质，使沉淀的DNA纯化。
5. 溶解：将洗涤后的DNA沉淀干燥或用适量的缓冲液溶解，最常用的是TE缓冲液（含有10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA），以便后续的DNA浓度测定和实验操作。
总结来说，酚氯仿法利用酚氯仿溶液破坏细胞膜和核膜，将DNA从细胞中释放出来。
离心分离蛋白质和DNA，然后通过酒精沉淀和乙醇洗涤纯化提取的DNA。
这种方法简单快速，并且能够获得较纯的DNA样品。
不过，酚氯仿法在提取DNA时会同时提取到RNA和蛋白质，因此在一些需要高纯度DNA的实验中可能不适用。
在使用酚氯仿法提取DNA时，还需要注意避免DNA的降解，避免污染和交叉污染，以及正确保存提取的DNA样品。
酚氯仿抽提
酚氯仿抽提一、DNA抽提试剂：1.酚/氯仿/异戊醇（25:24:1）；2.3M NaAc（pH 5.2）；3.80%乙醇。
步骤：1. 样品加去离子水至总体积100 μL；2．加入100 μl已配好的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），充分震荡后，10,000 rpm离心10 min；3. 转移上清于新的离心管中，按体积的1/10加入3M NaAc（pH5.2），按体积的2倍加入100%乙醇，轻轻混匀后，-20 ︒C静至至少30 min沉淀DNA；4. 4 ˚C，12,000 rpm离心10 min，弃去上清；5. 1 mL的80%乙醇洗沉淀，10,000 rpm离心2 min；6. 弃去乙醇，风干后，加入适量去离子水或TE溶解质粒。
二、RNA抽提试剂：1.水饱和酚；2.氯仿；3.3M NaAc（pH 5.2，DEPC水配制）；4.75%乙醇（DEPC水配制）。
步骤：1. 加入DEPC水至总体积为100 μL；2. 加入水饱和酚/氯仿(1:1)，室温混匀；3. 4°C, 12, 000 rpm, 15 min；转移上清至新的离心管中；4. 加入等体积的氯仿，4 ︒C, 12, 000 rpm, 15 min, 取上清；5. 加入上清体积1/10的3M NaAc（pH5.2, DEPC水配制）和2.5倍体积的100%的乙醇，-80 ︒C沉淀过夜；6. 4 ︒C离心，12, 000 rpm, 30 min；7. 去上清，加入100 μL 75%乙醇(DEPC水配制)，洗涤沉淀；8. 12, 000 rpm 离心5 min，去乙醇；风干，溶于适量DEPC水中，-20 ︒C保存。
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿抽提dna原理
酚氯仿（Phenol-Chloroform）抽提DNA是一种常用的DNA 提取方法。
其原理是基于酚在酸性条件下具有与DNA高度亲和性的特点，可以将DNA从细胞溶液中抽提出来。
具体的步骤如下：
1. 细胞溶解：首先将待提取DNA的细胞样品加入适量的细胞裂解缓冲液中，通过机械或化学方法使细胞壁破裂，释放出细胞内的DNA。
2. 酚抽提：加入相同体积的酚溶液，并进行充分混合。
酚能与DNA形成复合物，并与其他细胞组分（如蛋白质和脂质）发生分层，形成一个DNA上层和一个下层。
3. 脱水：将抽提产物转移至新管中，加入酒精或异丙醇，通过离心将DNA沉淀下来。
脱水过程可以去除溶液中的多余酚，提高DNA沉淀的纯度。
4. 酯化：将DNA沉淀物溶解在适量的TE缓冲液（含有EDTA和Tris）中，经过一定的时间酯化，使DNA变得更为稳定。
5. 沉淀：通过低温离心将DNA沉淀下来，去除上清液。
6. 洗涤：用70%的乙醇洗涤并去除残余的盐、酚和脏物质。
洗涤过程中，可以多次进行离心和上清液倒掉操作。
7. 干燥：最后，将DNA输送液置于干燥器中或者自然风干，以去除溶剂中的残留物质，得到纯度较高的DNA。
通过酚氯仿抽提DNA的方法，可以从复杂的细胞中提取出高质量、高纯度的DNA，以供后续分子生物学研究使用。
核酸提取纯化方法
核酸提取纯化方法引言核酸提取是分子生物学研究中的一个重要步骤，它主要包括纯化 DNA 和 RNA 两种核酸的过程。
在研究领域，纯化高质量的核酸样品对于准确分析和解读生物信息至关重要。
本文将介绍几种常用的核酸提取纯化方法，包括酚-氯仿法、离心柱法和磁珠法，并对每种方法的优缺点进行评述。
1. 酚-氯仿法酚-氯仿法是一种传统的核酸提取纯化方法，它基于核酸在酚和氯仿两相体系中具有不同溶解度的原理。
具体步骤如下：1.收集待提取的样品，如细菌培养物或组织样品。
2.加入等体积的酚-氯仿溶液，同时加入破碎剂（如玻璃珠或硅胶），彻底混合。
3.离心样品，使得酚相和氯仿相分离。
4.分离上层透明的水相，其中富含 DNA 或 RNA。
5.加入冷异丙醇或乙醇，沉淀核酸。
6.通过离心将沉淀的核酸分离。
7.用缓冲液溶解核酸沉淀，获得纯化后的 DNA 或RNA 样品。
酚-氯仿法提取的核酸样品质量较高，适用于小规模样品的提取。
然而，由于该方法对操作者的技巧要求较高，并且在操作过程中可能存在酚和氯仿对人体的损害风险，所以目前已逐渐被离心柱法和磁珠法取而代之。
2. 离心柱法离心柱法是一种基于硅胶膜和纤维素膜的核酸提取纯化方法，凭借其简单、快速和高效的特点已经成为目前最常用的核酸提取方法之一。
具体步骤如下：1.添加细胞裂解缓冲液到待提取样品中，通过细胞裂解将核酸释放到溶液中。
2.准备离心柱，将离心柱放入收集管中。
3.将样品溶液加到离心柱中，使其通过硅胶膜或纤维素膜。
4.通过洗涤液洗去杂质。
5.加入低盐缓冲液或水，洗脱核酸。
6.将洗脱的核酸收集到新的收集管中。
离心柱法的优点在于简单、快速且对样品的处理量较大，能够同时提取多个样品。
然而，该方法对于某些特殊样品（如富含多酚化合物或多糖的样品）可能会产生一定的干扰。
3. 磁珠法磁珠法是一种新兴的核酸提取纯化方法，它利用了磁珠的磁性和高亲和性，能够快速、高效地提取纯化核酸。
具体步骤如下：1.准备磁珠混悬液，并加入样品。
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酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。
6.吸取上层液体加入新的离心管。
7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。
8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。
9.离心：12000R，7min，4℃。
10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。
11.离心：12000R，7min，4℃。
12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。
-20℃过夜。
13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。
14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。
15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。
16.提取DNA完成。
溴氯仿法提取DNA的原理：用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。
用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。
蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。
使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。
缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。
2. 不能完全抑制RNase 的活性。
氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。
最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。
（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。
异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。
用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。
原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。
将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。
加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。
加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。
最后用95%乙醇沉淀DNA。
溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。
加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。
加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟；除杂质：加等体积氯仿-异戊醇混合液，充分震荡10分钟， 8000 r/min离心7分钟，取上层液量好体积，倒入烧杯中（离心管），加同体积的氯仿-异戊醇混合液，重复上次操作。
直至界面不出现蛋白凝胶为止；沉淀：准确量取上清液体积，加2倍体积95％冷乙醇，搅拌后，置冰箱静止冷却，待有白色丝状物出现，约10-15分钟，离心8000 r/min离心7分钟，得白色沉淀；溶解：将沉淀物用0.1mol/L NaOH约10毫升溶解,得DNA溶液。
溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。
当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
溶液II－NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。
它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。
但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。
溶液III--3mol／L NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。
所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。
用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。
而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。
为什么用无水乙醇沉淀DNA？用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。
乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。
一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。
因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇（因为无水乙醇的价格远远比95％乙醇昂贵）。
但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。
折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙酵，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。
也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。
一般在室温下放置15－30分钟即可。
在用乙醇沉淀DNA时，为什么一定要加NaAc或NaCl至最终浓度达0.1～0.25mol/L？在pH为8左右的溶液中，DNA分子是带负电荷的，加一定浓度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA钠盐沉淀，当加入的盐溶液浓度太低时，只有部分DNA形成DNA钠盐而聚合，这样就造成DNA沉淀不完全，当加入的盐溶液浓度太高时，其效果也不好。
在沉淀的DNA中，由于过多的盐杂质存在，影响DNA的酶切等反应，必须要进行洗涤或重沉淀。
加核糖核酸酶降解核糖核酸后，为什么再要用SDS与KAc来处理？加进去的RNase本身是一种蛋白质，为了纯化DNA，又必须去除之，加SDS可使它们成为SDS-蛋白复合物沉淀，再加KAc使这些复合物转变为溶解度更小的钾盐形式的SDS-蛋白质复合物，使沉淀更加完全。
也可用饱和酚、氯仿抽提再沉淀，去除RNase。
在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到较好效果。
7．为什么在保存或抽提DNA过程中，一般采用TE缓冲液？在基因操作实验中，选择缓冲液的主要原则是考虑DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作用。
磷酸盐缓冲系统（pKa＝7.2）和硼酸系统（pKa=9.24）等虽然也都符合细胞内环境的生理范围(pH)，可作DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与Ca2＋产生Ca3(PO4)2沉淀；在DNA反应时，不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，有的要求高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用Tris-HCl（pKa=8.0）的缓冲系统，由于缓冲液是TrisH+/Tris，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存DNA时，大都采用Tris-HCl 系统，而TE缓冲液中的EDTA更能稳苯酚、氯仿、异戊醇在DNA提取时的作用抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。
经过离心，变性蛋白质的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA分开。
而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。
作为表面变性的酚与氯仿，在去除蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。
所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果最好。
经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次变性蛋白质，此时一起将酚带走。
也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。
为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。
加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。
一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。
也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1酚氯仿法提取DNA主要步骤：1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。
每个梯度脱水时间为5-10min2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。
3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。
4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。
5.离心：12000R，7min，4℃。
离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。