【CN110055188A】一株产抑菌肽的多粘类芽孢杆菌XW4及其分离筛选和应用【专利】
一株生防芽孢杆菌的分离与鉴定
一株生防芽孢杆菌的分离与鉴定作者：广泽宇来源：《乡村科技》 2018年第11期植物病害一直在农业生产中有较大影响，化学防治是控制植物病害的有效方法，其具有见效快、杀菌谱广、成本低、使用简便等优点［1］，但长期大量使用化学农药致使病原菌产生了耐受性，并且农药对人、畜和环境都有一定的危害。
随着近年来人们对食品安全及环境污染问题关注度的提高，一些化学杀菌剂在许多发达国家和地区已被严格限制使用［2］。
生物防治技术是一种无残留无污染、不杀伤天敌、不会产生抗药性［3］、有利于人畜安全及环境保护的无公害环保技术，有利于提高经济、社会、生态效益，有广阔的发展前景［4］。
因此，生物防治尤其是微生物防治在将来可能替代化学药剂成为一个环保安全的选择［5］。
本研究旨在从植物根际土壤中分离筛选对植物病原微生物具有生防作用的芽孢杆菌，对其进行鉴定。
分离筛选出高效生防的芽孢杆菌，为以后拮抗型生物肥料以及生物农药的生产提供高效的菌种，同时为菌种的工业化发酵生产提供科学的试验数据。
1 材料和方法1.1 试验材料1.1.1 供试植物病原菌株。
立枯丝核菌Rhizoctoniasolani、葫芦科刺盘孢Colletotrichum lagenarium、灰葡萄孢（Botrytis cinerea）、玉蜀黍离蠕孢（Bipolaris maydis）、链格孢（Alternaria Nees）、尖孢镰刀（Fusarium oxysporum）、腐皮壳霉（Fusarium solani）、交链孢霉（Alternariasp.），试验室保藏。
1.1.2 主要试剂NA。
固体培养基、NB液体培养基、马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、FastDNA? SPIN Kit forSoil DNA试剂盒，Trans 2K Plus Ⅱ DNA Marker、6×DNALoading B uffer、Agarose、50×TBE。
1.1.3 仪器设备。
一株解淀粉芽孢杆菌抑菌成分的分离与抑菌特性
步法農划律2019年第60卷第9期文献著录格式：徐燕尔，丁鹏辉，陈明路.一株解淀粉芽抱杆菌抑菌成分的分离与抑菌特性[J]•浙江农业科学，2019,60(9)：1516-1520.DOI：10.16178/j.issn.0528-9017.20190908一株解淀粉芽抱杆菌抑菌成分的分离与抑菌特性徐燕尔，丁鹏辉，陈明路(浙江农林大学农业与食品科学学院，浙江临安31300)摘要：以马藻、金鱼藻等水藻为材料，分离得到24株芽抱杆菌，从中筛选得到1株对金黄色葡萄球菌有较强抑菌作用的解淀粉芽抱杆菌，该菌的抑菌成分主要集中在培养液的酸沉组分中+通过硅胶柱层析对酸沉组分进行初步分离，100%甲醇洗脱组分对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强+理化特性分析结果表明，该菌抑菌组分热稳定性高，对蛋白酶不敏感，pH对其抑菌活性无明显影响。
关键词：生物防治；金黄色葡萄球菌；解淀粉芽抱杆菌；抑菌成分中图分类号：TQ465.92文献标志码：A文章编号：0528-9017(2019)09-1516-04微生物污染作为生活中的常见污染问题对人类的生活产生了极大影响，它不但会导致食品腐败变收稿日期：2019-06-25基金项目：浙江农林大学创新创业项目(2013200039)作者简介：徐燕尔(1997—)，女，浙江湖州人，学士，研究方向为食品微生物，E-mail：522217978@qq.gm。
笋根腐病是引起芦笋连作障碍的重要原因，芦笋根腐病病原为镰刀菌，是一种土壤习居真菌，易在土壤中累积+在设施栽培中，由于环境条件适宜，更易累积+芦笋是引进作物，芦笋根腐病的主要病原是尖抱镰刀菌石刁柏专化型[2-，芦笋根腐病菌可能由引种进入我国；根据对笋区长期的实践经验，20世纪90年代前，芦笋根腐病很少见，此后渐多，现已成为一种常见的芦笋病害+3.2蚕沙对设施连作土壤改良和对芦笋根腐病的防病作用本研究表明，蚕沙有较强的抑制芦笋根腐病菌生长和产抱作用，可能是蚕沙中含有的异槲皮苷、芦丁、紫云英苷等黄酮类和生物碱类等物质具有抑菌作用有关[7-+蚕沙是一种安全、优质的有机肥，在很多作物上都有应用[%-。
一株芽孢杆菌的分离、鉴定及其抗菌效果研究
安徽农业科学 ，ｏｒａ ｏ Ａ ｈ ｉ ｔ Ｓｉ ０８ ３ （）２２ —２２ 。３６ Ｊｕｎｌｆ ｎｕ Ａｅ． ｃ． ０ ，６ ６ ：３ １ ３２２ ２ ２
责任编辑
李晓玉
责任校对
李晓玉
一
株 芽 孢 杆 菌 的 分 离 、 定 及 其 抗 菌 效 果 研 究 鉴
摘要 从 健康牙鲆肠道 内分 离到一株 芽孢杆 菌（ —） Ｈ １和鳗弧 菌 ｗ 株进行拮抗 实验 ， 明该菌对鳗弧 菌具有较强的拮 抗作 用（ 菌直径 ｌ 表 抑 ３ 、 ， ｒ。应用形 态学、 ３∞ －－ ｒ） Ⅱ 生理生化及 １ Ｎ ６ ｒ Ａ序 列分析 方法 对该菌进 行 了综合 鉴 定 ， ＳＤ 结果 显示 ， 菌株 Ｈ ｌ — 与枯 草 芽孢 杆菌标 准 菌株 同 源性 高达 ９ ％． ８ 故将其确 定为 Ｂ ｃｌｓｓｂｉｓ ａｉｕ ｕｔｉ。 ｌ ｌ 关键词 芽孢杆 菌； 菌效果 ； 抗 鉴定 中图分 类号 Ｑ９６ ３ 文献标识 码 Ａ 文章编号 ０ １ —６ １（Ｏ８ ０ ５ ７ ６ ｌ２Ｏ ）６—０３ １ ２ ２２ —０
黄 ， 剑飞 ， 李健２ 刘 淇 ， 群 （上 水 大 生 科 与 术 院上 ｏ９２ 国 产 学 究 黄 水 研 － ， ２ 王 ２ １ 海 产 学 命 学 技 学 ，海２ ｏ． 水 科 研 院 海 产 究 ． ０ ；中 ｏ
所 ， 业 部 海 洋 渔业 资源 可 持 续 利用 重点 开 放 实 验 室 ， 东青 岛 ２ ６７ ） 农 山 ６０ １
模板 ， ２ ｍ ｌＬＭ 。循 环参数 ：４℃预热 ４ｍｎ ９ ８ ５ｍ ｏ ／ ９ ｉ，４ ℃变性 １ ｉ， 退火 １ ｉ，２ｏ 延伸 ２ｍｎ ３ ｎ５ ｏ ｍ ０Ｃ ｎ７ Ｃ ｍ ｉ，６个循环 ，２ ７ ℃延伸 １ ｉ。扩增 产 物经 电泳 检 测后 送 大连 宝生 物公 司 ０ｍｎ
一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定
一株产抗菌活性物质解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定杨胜远;韦锦;李云;姚虹;黄月丹【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2010(031)021【摘要】从菜园土壤中分离筛选到1株产广谱抗菌活性物质的菌株K6,其抗菌活性物质对藤黄微球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、酿酒酵母、匍枝根霉和白色念珠菌均有抑制作用,其中对革兰氏阳性菌的抑菌作用最强,对霉菌的抑制作用相对较弱.通过形态特征、16SrDNA序列分析和系统发育分析,菌株K6与B.amyloliquefaciens位于同一簇群,同源性达99%,将其初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌.【总页数】5页(P208-212)【作者】杨胜远;韦锦;李云;姚虹;黄月丹【作者单位】韩山师范学院生物系,广东,潮州,521041;韩山师范学院图书馆,广东,潮州,521041;韩山师范学院生物系,广东,潮州,521041;韩山师范学院生物系,广东,潮州,521041;韩山师范学院生物系,广东,潮州,521041【正文语种】中文【中图分类】Q939【相关文献】1.一株抗木霉菌解淀粉芽孢杆菌的筛选与鉴定 [J], 努尔孜亚;管建华;贾培松;魏鹏;罗影;贾文捷;郝敬喆2.一株高产淀粉酶枯草芽孢杆菌的筛选、鉴定及产酶条件的优化 [J], 陈相达;戴慧慧;刘燕;李圆圆;翁丛丛;茹波;曾爱兵3.一株抗烟草赤星病解淀粉芽孢杆菌的筛选及鉴定 [J], 司世飞;宋莉莎;任静;刘仁祥;李忠4.一株具有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌的筛选、鉴定及生物学特性研究 [J], 蒋凯丽; 周新丽; 高海燕5.一株具有产IAA能力的解淀粉芽孢杆菌的分离鉴定及功能评价 [J], 陈迪;芮凯;曾涛;田威;马瑞;谢圣华;罗诗彤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定
一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定
高兆建;樊陈;陈尚龙;巫友华
【期刊名称】《徐州工程学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2012(027)002
【摘要】采用异步培养法，从土壤样品中筛选到一株产抗菌物质活性较强的菌株
F69．结合菌落形态、生理生化指标和16SrDNA序列分析对菌株F69进行菌种鉴定．菌株F69在系统发育上属于芽孢杆菌属，它和地衣芽胞杆菌菌株的16SrDNA 序列相似性最高为99％，该菌株被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）．菌株F69可作为抗菌物质产生菌进行进一步深入研究．【总页数】5页(P40-44)
【作者】高兆建;樊陈;陈尚龙;巫友华
【作者单位】徐州工程学院,江苏徐州221008;徐州工程学院,江苏徐州221008;徐
州工程学院,江苏徐州221008;徐州工程学院,江苏徐州221008
【正文语种】中文
【中图分类】Q93-331
【相关文献】
1.广谱抗菌芽孢杆菌的筛选及其抗酵母物质的纯化和鉴定 [J], 石举然;别小妹;吕凤霞;陆兆新
2.一株絮凝剂产生菌死谷芽孢杆菌Z11的筛选和鉴定 [J], 张晓飞;于茹;曲杰;宋峰;李正华;孙云龙;韩国红;李刻秦;师晓喆;胡加超;董淑敏;王铮;赵哲
3.一株高产α-淀粉酶的地衣芽孢杆菌的筛选及鉴定 [J], 亓秀晔;刘乃芝;郭杨丽;徐
海燕;程福亮;谷巍
4.一株广谱抗菌甲基营养型芽孢杆菌的筛选及其产抗菌脂肽的鉴定 [J], 杨艳宇;冀倩倩;孙建东;王健伟;齐洪庆;刘影;简凡杰;李成
5.产广谱抗菌物质芽孢杆菌的筛选与鉴定 [J], 彭研;陈蕾蕾;裘纪莹;杨革
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农业部免作安全鉴定一级菌种——多粘类芽孢杆菌简述
胞膜的渗透性，造成细菌内含物的流失，最终导致 细 菌 死 亡。 ② 作 用 于 真 菌 细 胞 壁， 多 粘 芽 孢 杆 菌 产 生 的 拮 抗 蛋 白 质 大 多 数 为 细 胞 壁 降 解 酶 类， 如 β-1,3- 葡聚糖酶、几丁质酶等。β-1,3- 葡聚糖酶 可水解 β-1,3- 葡聚糖中的 β-1,3- 糖苷键，从而 抑制植物病原真菌的生长与增殖。同时，分泌的核 苷类抗菌素多氧霉素作用于病原真菌细胞壁，能引 起真菌生长时的菌丝尖端形成膨胀泡而破裂。③活 菌体直接抑制，多粘类芽孢杆菌活菌体能抑制镰刀 菌的生长，而无菌滤液对镰刀菌无作用。这说明这 株多粘类芽孢杆菌对镰刀菌的抑制是活菌体直接起 抑制作用。④保护作用，多粘类芽孢杆菌可以产生 胞外多糖，保护植物免受病原体侵害；该菌和植物 根系的相互作用也会导致根毛发生物理变化。 3. 诱导作用：多粘类芽孢杆菌不仅能直接杀死 病原菌，还能通过与植物之间的互作来起到抗病效 果。诱导植物系统抗性是植物被环境中的非生物或 生物因子激活产生的对随后的病原菌侵染具有抵抗 性的特征。 4. 提供营养：多粘类芽孢杆菌能够通过固氮和 溶磷为植物提供植物自身难以吸收的氮源和磷肥养 料。多粘类芽孢杆菌能在植物根尖定殖并形成生物
农化科技
农业部免作安全鉴定一级菌种 ——多粘类芽孢杆菌简述
多 粘 类 芽 孢 杆 菌（Paenibacillus polymyxa Ash, Priest ＆ Collins）是一种产芽孢、具有固 氮能力的革兰氏阳性细菌，多粘类芽孢杆菌及其代 谢产物广泛应用于农业、医学、工矿业及废水处理 等方面，美国环境保护署（EPA）已将其列为可商业 上应用的微生物种类之一，此外我国农业农村部也 将其列为免做安全鉴定的一级菌种。
高产抗菌脂肽芽孢杆菌的分离鉴定筛选及发酵工艺优化
纪帅奇，乌日娜，张淘崴，等. 高产抗菌脂肽芽孢杆菌的分离鉴定筛选及发酵工艺优化[J]. 食品工业科技，2024，45（4）：101−108.doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023040051JI Shuaiqi, WU Rina, ZHANG Taowei, et al. Isolation, Identification, Screening and Fermentation Process Optimization of Bacillus Producing High Antimicrobial Lipopeptide[J]. Science and Technology of Food Industry, 2024, 45(4): 101−108. (in Chinese with English abstract). doi: 10.13386/j.issn1002-0306.2023040051· 生物工程 ·高产抗菌脂肽芽孢杆菌的分离鉴定筛选及发酵工艺优化纪帅奇1,2，乌日娜1,2,3，张淘崴2,3，娄梦雪1,3，贺凯茹2,3，张 妍1,2，武俊瑞1,2,3,*（1.沈阳农业大学食品学院，辽宁沈阳 110866；2.辽宁省食品发酵技术工程研究中心，辽宁沈阳 110866；3.沈阳市微生物发酵技术创新重点实验室，辽宁沈阳 110866）摘 要：为了筛选出高产抗菌脂肽的芽孢杆菌并确定其最佳发酵工艺条件，研究从传统发酵豆酱中分离和鉴定产抗菌脂肽芽孢杆菌菌株，通过正交试验研究了发酵接种量、发酵填液量、发酵时间、发酵温度等发酵条件对芽孢杆菌脂肽产量的影响。
结果表明，从9份东北传统发酵豆酱中分离筛选得到27株芽孢杆菌，经16S rDNA 鉴定，其中6株芽孢杆菌具有合成脂肽的基因sfp 、fenB 和ituA 。
通过单位菌体脂肽产量和抑菌效果测定发现，贝莱斯芽孢杆菌SN-20和解淀粉芽孢杆菌SN-46表现优异，单位菌体脂肽产量达106和72 mg ，且对革兰氏阳性和阴性指示菌均有较强的抑菌效果。
一株产脂肽类抗生素bacillopeptinA深海芽孢杆菌的筛选与鉴定
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７８ ３
中 国抗 生 素 杂 志 ２ １年 ｌ 月第 ３ 卷 第 ｌ 期 ０１ Ｏ ６ ０
文 章 编 号 ： １ ０ —６ ９２ １）ｏ０ ３—７ ０ １８ ８（０ １ 一７ ８０ １
一
株 产 脂 肽 类抗 生 素ｂ ｃｌ ｐ ｐｉ 海 芽 孢 杆 菌 的筛 选 与鉴 定 ａ ｉｏ ｅ ｔ Ａ深 ｌ ｎ
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910174227.0
(22)申请日 2019.03.07
(83)生物保藏信息
CGMCC No.16780 2018.11.26
(71)申请人 南京师范大学
地址 210024 江苏省南京市鼓楼区宁海路
122号
(72)发明人 周涛 满文曾 胡容 封嗣中
罗海波
(74)专利代理机构 南京苏高专利商标事务所
(普通合伙) 32204
代理人 孙斌
(51)Int.Cl.
C12N 1/20(2006.01)
A23B 4/22(2006.01)
A23B 4/20(2006.01)C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称
一株产抑菌肽的多粘类芽孢杆菌XW4及其分
离筛选和应用
(57)摘要
本发明公开了一株产抑菌肽的多粘类芽孢
杆菌XW4及其分离筛选和应用，该产抑菌肽的菌
株X W 4，经鉴定为多粘类芽孢杆菌
(Paenibacillus polymyxa)，已保藏于中国微生
物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时
间为2018年11月26日，保藏编号为C G M C C
NO.16780。
本发明的多粘类芽孢杆菌XW4具有良
好的耐受性，在高温条件下稳定，产生的抑菌肽
具有广谱抑菌效，并且对克氏原鳌虾优势腐败菌
具有良好的抑菌效果，其在食品防腐中具有广阔
的应用前景。
权利要求书1页 说明书6页序列表2页 附图2页CN 110055188 A 2019.07.26
C N 110055188
A
权 利 要 求 书1/1页CN 110055188 A
1.一株产抑菌肽的菌株XW4，经鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2018年11月26日，保藏编号为CGMCC NO.16780。
2.一种权利要求1所述的产抑菌肽的菌株XW4的筛选方法，其特征在于,包括如下步骤：
(1)多粘类芽孢杆菌XW4的分离纯化：将湖泥样品悬液水浴处理后，用LB培养基从样品中分离出耐热菌株，通过平板划线法纯化菌株，对纯化后菌株进行革兰氏染色和过氧化氢酶实验，选取革兰氏染色为阳性、过氧化氢酶实验为阴性的菌株；
(2)产抑菌肽多粘类芽孢杆菌XW4的筛选：将步骤(2)完全纯化的菌株接种到液体LB培养基中，静置培养得到菌株发酵液，发酵液离心后保留上清液，用打孔器打孔法进行抑菌实验，实验过程中排除过氧化氢的作用，最后筛选出排除过氧化氢作用后仍有抑菌活性的产抑菌肽多粘类芽孢杆菌XW4。
3.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)水浴处理处理的温度为80-90℃，时间15-20min。
4.根据权利要求2所述的筛选方法，其特征在于，所述步骤(1)分离出耐热菌株，通过平板划线法纯化菌株为采用平板稀释法，将稀释后的样品菌悬液涂布于固体LB平板培养，选取培养基平板单菌落进行四区划线。
5.一种权利要求1所述的产抑菌肽的菌株XW4在抑制食物优势腐败菌中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于，所述食物优势腐败菌包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌。
7.一种权利要求1所述的产抑菌肽的菌株XW4在抑制克氏原鳌虾优势腐败菌中的应用。
8.根据权利要求6所述的应用,其特征在于，所述克氏原鳌虾优势腐败菌为赖氨酸芽孢杆菌。
9.一种利用权利要求1所述的产抑菌肽的菌株XW4生产的抑菌肽。
10.一种利用权利要求1所述的产抑菌肽的菌株XW4生产的抑菌肽在抑制克氏原鳌虾优势腐败菌中的应用。
2。