多粘芽孢杆菌产甘露聚糖酶的发酵条件研究
_嗜热枯草芽孢杆菌TT68产β-甘露聚糖酶发酵条件的优化
嗜热枯草芽孢杆菌 TT68产 B-甘露聚糖酶发酵条件的优化*
唐荦, 唐艳斌, 江正强, 周鹏
(中国农业大学食品科学与 营养工程学院, 北京, 100083)
摘 要 研究了嗜热枯草芽孢杆菌 TT 68的发酵条件的 优化。经碳源、氮源、碳氮 比、氨 基酸和 添加维 生素 5个 单因素发酵条件的优化, 得到枯 草芽孢杆菌 TT68发酵产 B-甘露聚糖酶的最适摇瓶 发酵培养条 件: 4 g /L 魔芋精 粉为碳源, 01 7 g /L 豆粕粉为氮源, 碳氮比为 6B1, 2 g /L L-缬氨酸 和 0175 m g /L 盐酸吡哆 辛。在上述 条件下培养 6 d, 胞外 B-甘露聚糖酶活性最高, 可达 7 500 U /mL。采用 5 L 发酵罐进行放大培养, 48 h酶活即达到最高, 可达 9 870 U /mL。该嗜热枯草芽孢杆菌能利用廉价的碳源和氮 源高产甘 露聚糖酶, 且发 酵周期 短, 在 工业化 生产甘 露聚糖酶中具有很大的应用潜力。 关键词 嗜热枯草芽孢杆菌, B-甘露聚糖酶, 发酵, 魔芋精粉
摇瓶 发酵条件 为: 在 250 mL 三角 瓶中装入 50 mL 发酵产酶培养基, 接种量 1% ( V /V ) , 在 50e 恒温 空气浴摇床上以 200 r /m in振荡培养 3 d。 113 B-甘露聚糖酶活性、蛋白质含量和生物量的测
2010年第 36卷第 3期 (总第 267期 ) 15
甘露聚糖是植物半纤维素的重要组分, 是由 B1, 4-D-甘露糖连接而成的线状多聚体, 在多糖的侧链 上主要 有 葡萄 糖 基、乙酰 基 和半 乳 糖 基等 取 代 基 团 [ 1] , 其来源丰富, 在魔芋粉、槐豆胶、沙蒿胶、瓜 儿 豆胶中都有不同种类 的甘露聚糖存在。 B-1, 4-D-甘 露聚糖 ( B-1, 4-D-m annanm annohydro lase; EC1 31 21 11 78), 简称 B-甘露聚糖酶 ( B-m annanase) , 是一类能 够水解含有 B-1, 4-D-甘露糖苷键的甘露寡糖和甘露 多糖的内切水解酶, 广泛存在于动物、植物和微生物 中 [ 2- 3] , 其中微生物来源的 B-甘 露聚糖酶具有活 性 高、成本低、来源稳定、提取方便等显著特点, 具有广 阔的应用前景。
小麦内生多黏类芽孢杆菌hu-4产β-1,3-葡聚糖酶发酵工艺研究
饲料 添加剂 、 母提 取物 生产及 医疗 等行 业［ ． 酵 ２ － １６ ８ ６年 ， ｅＢ ｒ Ｄ ａｙ首先 将 生活 在植 物 组织 内的微 生物 与 生 长在 植 物 表 面 的表 生 菌 （ｐｐ ｙ ） 区 别 ， ｅ ｉｈ ｔ 相 ｅ 提 出了 内生 菌 （ｎ ｏ ｈ ｔ） ｅ ｄ ｐ ｙｅ 的概 念 ．此 后 ， 由于 内生 细菌 能够 定 植 于植物 组 织 内部发 挥 生物 防 治作 用而 成 为一
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第２ ６卷 第 ９期
２ ０ 年 ９月 ０８
河
南
科
学
Ｖｏ ＿６ ｏ ９ ｌ Ｎ ． ２
Ｓ ｐ ２０ ｅ．０８
ＨＥＮＡＮ Ｓ ＥＮＣＥ ＣＩ
文 章 编 号 ：０ ４ ３ １ （０ ８ ０ — ０ ０ ０ １０ — ９ ８ ２０ ）９ １５ —４
小麦 内生 多黏类芽孢杆 菌 ｈ 一 ｕ４产 １ １３葡聚糖 ３ ，． ．
酶 发酵工艺研 究
刘安邦 １３ 王 刚 陈国参 １， 周伏忠 － 宁 萌 ，， ２ ， ， ， ２ ， ， ，
（． １ 河南省微生物 工程 重点实验室，郑州 ４ ０ ０ ； ２ 河南省科学 院 生物研究所，郑州 ５ ０ ８ ．
的 产 ｐ １ ３葡聚 糖 酶微 生物 主 要 来源 于 自然 界 ， ． ，． 如土 壤 、 际 和植 物 体表 等 ［］ 对产 ｐ １３葡 聚 糖酶 内生 根 ５． － ７ ． ，．
细 菌 的分 离及 其 产 ｐ１３葡聚 糖 酶相关 信 息 的 了解 还 非常 有 限 ， ．，． 内生细 菌产 ｐ１３葡 聚糖 酶 的抑 菌 过 程及 ．，． 机理 亦不 十 分清 楚 ， 在 生物 防 治领域 应用 的相 关研 究 有待 于 深入 开展 ．本 研 究对 从 小麦根 内分离 获得 的 其 内生 多黏芽孢 杆 菌 ｈ． ｕ４产 Ｂ１３葡聚 糖酶 工 艺进 行 了研 究 ， 过 正交 实 验优 化 ， 定 了该 菌 株 的产 酶培 养 ．，． 通 确 基 配方 和 发酵 工 艺条 件 ， 建立 其 液态 发酵 工 艺 ， 生物 防 治 用 内生细 菌 菌 剂或 Ｂ１３葡 聚 糖酶 制 剂 的 开发 为 ．，．
β-甘露聚糖酶发酵条件的优化、酶的纯化和性质研究开题报告
β-甘露聚糖酶发酵条件的优化、酶的纯化和性质研究开题报告一、选题背景β-甘露聚糖酶是一种能够水解β-甘露聚糖的酶，属于多糖酶的一类。
β-甘露聚糖是一种由果胶酸和乳酸组成的多糖，广泛存在于植物细胞壁中，具有多种生物学功能。
β-甘露聚糖酶的应用领域非常广泛，如在食品、化妆品、医药等领域具有广泛的应用前景。
目前，β-甘露聚糖酶的生产主要通过发酵的方式实现。
因此，对β-甘露聚糖酶发酵条件的优化，酶的纯化和性质研究具有重要的意义。
二、选题目的本项目旨在通过对β-甘露聚糖酶发酵条件的优化，获得高效的β-甘露聚糖酶生产菌株；在此基础上，对β-甘露聚糖酶进行纯化和性质研究，为β-甘露聚糖酶的应用提供重要的基础研究信息。
三、主要研究内容1.优化β-甘露聚糖酶发酵条件，确定最佳培养条件；2.筛选高效的β-甘露聚糖酶生产菌株；3.对β-甘露聚糖酶进行纯化，利用柱层析等方法提高酶的纯度；4.研究β-甘露聚糖酶的性质，如酶的分子量、酶活性、底物特异性、pH和温度等对酶的影响，探究酶的催化机理；5.探讨β-甘露聚糖酶在食品、化妆品和医药领域的应用前景。
四、论文结构本论文包括绪论、研究设计和实验方法、结果与分析、结论和展望、参考文献等几部分。
1. 绪论：介绍β-甘露聚糖酶的相关知识，说明研究背景、目的和意义，阐明研究的现状和发展趋势，明确本研究的工作内容和研究思路。
2. 研究设计和实验方法：包括对β-甘露聚糖酶发酵条件的优化实验设计、对β-甘露聚糖酶生产菌株的筛选和培养、β-甘露聚糖酶的纯化方法和应用、β-甘露聚糖酶性质研究的实验方法和步骤。
3. 结果与分析：对实验结果进行系统的描述和分析，包括β-甘露聚糖酶产酶量的变化、最佳培养条件的确定、β-甘露聚糖酶生产菌株的筛选和鉴定、酶的纯化和特性分析等方面。
4. 结论和展望：总结研究工作的基本内容和主要结果，评价研究的成果和不足，提出今后进一步开展研究的展望和建议。
5. 参考文献：列举文中引用的文献，格式严格按照规范要求执行。
β-甘露聚糖酶发酵条件的优化、酶的纯化和性质研究中期报告
β-甘露聚糖酶发酵条件的优化、酶的纯化和性质研究中期报告本次中期报告将介绍β-甘露聚糖酶的发酵条件优化、酶的纯化和性质研究进展。
一、β-甘露聚糖酶发酵条件优化β-甘露聚糖酶是一种重要的酶，广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。
为了提高酶的产量，本研究对β-甘露聚糖酶的发酵条件进行了优化。
优化过程中，首先通过单因素实验确定了发酵时间、发酵pH、发酵温度和发酵基质浓度等因素对β-甘露聚糖酶的影响。
然后采用响应面法对这些因素进行优化，最终确定了β-甘露聚糖酶的最佳发酵条件为：发酵时间为48小时、发酵pH为6.5、发酵温度为50℃、发酵基质浓度为2%。
通过以上优化，β-甘露聚糖酶的产量大大提高，为后期的酶的纯化和性质研究提供了充足的原料。
二、β-甘露聚糖酶的纯化对于β-甘露聚糖酶的纯化，本研究采用了离子交换和凝胶过滤两种层次的分离纯化方法。
首先通过离子交换柱的分离纯化得到β-甘露聚糖酶初步纯化物，然后通过凝胶过滤柱的层次分离纯化进一步提高了纯度。
经过纯化，β-甘露聚糖酶的比活力得到了显著提高，而且纯度也达到了95%以上。
这为酶的性质研究提供了可靠的实验条件。
三、β-甘露聚糖酶的性质研究酶的性质研究方面，本研究对β-甘露聚糖酶的酶活性、pH稳定性和热稳定性进行了分析。
结果表明，β-甘露聚糖酶的最适工作pH为6.5，最适工作温度为50℃。
同时，β-甘露聚糖酶的pH稳定性和热稳定性也比较好，可以在pH6.0-8.0和50℃条件下保持较高的活性。
综合以上结果，本研究对β-甘露聚糖酶的生产、纯化和性质进行了全面的研究，为该酶的应用开发提供了可靠的实验基础。
_甘露聚糖酶产生菌的分离_鉴定及产_甘露聚糖酶最适条件的研究
enzyme ac tiv ity of 50. 37 U /m lwas obta ined a fter the enzyme activ ity assay . T he stra in was identified as P seudo m onas sp. by m orpho log ica l and physio log ica l character istics ana lysis and 16S r DNA BLAST. T he opti m a l conditions fo r producing the ac tiv ity of h ighest acid ic m annanase w as up to 185. 37 U /m , l 3. 68 ti m es as before . The stra in which rapid ly produced stra in we re deter m ined 1 g / l00 m lm a izena , 2 g /100 m l kon jak powder , pH 6 . 0 and the opti m a l temperature w as 32 mannanase activ ity after cu lturing fo r 12 h. T he study of the enzyma tic character of the
收稿日期 : 2008 12 26 基金项目 : 重庆市科技计划项目 ( 2007AC 1060 ), 重庆大学重点实验室对本科生开放创新基金 作者简介 : 黄俊丽 ( 1974 ) , 女 , 副教授 , 主要从事微生物分子学研究 ; E m ai: l huang_ jun l@ i 126 . com, Te: l 023 65120497
多粘类芽孢杆菌的研究进展_苍桂璐
基金项目 作者简介
收稿日期
辽宁省教育厅科学技术研究项目( 2009A164) ; 大连市科学 技术基金( 2010J21DW107) 。 苍桂璐( 1986 － ) ，女，黑龙江双城人，硕士研究生，研究方 向: 海洋微生物资源的综合利用。* 通讯作者，副教授，博 士，硕士生导师，从事海洋微生物活性物质开发利用以及水 产品、农产品贮藏技术方面的研究，E-mail: zhangfuyun2002 @ yahoo． com． cn。 2012-11-13
李伟研究表明一株分离自海胆的多粘好的防治效果芽孢杆菌的发酵液对真菌菌丝孢子萌发有明显的抑制作用其中对苹果粉红的菌丝抑制率达92对西瓜枯萎的孢子萌发抑制率达89对部分植物病害有很好抑制作用17
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41（ 2） ： 487 － 489
甘露聚糖酶液体发酵及酶解反应
甘露聚糖酶液体发酵及酶解反应
甘露聚糖酶是一种能够水解甘露聚糖的酶类，它在液体发酵和
酶解反应中扮演着重要的角色。
在液体发酵过程中，首先需要选择
合适的微生物菌种，例如酵母菌、霉菌或者细菌，然后将这些微生
物菌种接种到含有适量营养物质的培养基中进行培养。
培养基的成
分需要根据具体的微生物菌种和发酵条件进行调整，以提供充足的
营养物质和适宜的环境条件来促进微生物的生长和产酶。
在培养过
程中，需要控制好发酵温度、pH值、氧气供应等参数，以确保微生
物菌种能够高效地产生甘露聚糖酶。
一旦微生物菌种产生了足够的甘露聚糖酶，接下来就是酶解反
应的过程。
在酶解反应中，液体培养物会被加入到含有甘露聚糖的
基质中，甘露聚糖酶会作用于甘露聚糖分子，将其水解成较小的糖
分子，如葡萄糖和果糖。
这些糖分子可以被进一步利用来生产酒精、乳酸、酢酸等有用的化合物，或者用于食品工业中的糖化反应和生
产功能性食品添加剂等。
总的来说，甘露聚糖酶液体发酵及酶解反应涉及到微生物的培养、发酵条件的控制、酶的生产和酶解反应的进行等多个环节，需
要综合考虑微生物菌种的选择、培养基的配方、发酵条件的优化等
因素，以实现高效的甘露聚糖酶生产和应用。
同时，这一过程也需要严格控制卫生条件，确保产品的质量和安全性。
芽孢杆菌M-21β-甘露聚糖酶的产生、纯化与性质研究的开题报告
芽孢杆菌M-21β-甘露聚糖酶的产生、纯化与性质研究的开题报告一、研究背景甘露聚糖是一种在生物体内广泛存在的多糖，其结构具有重要的生物学功能。
目前已有许多研究表明，甘露聚糖在癌症、糖尿病、炎症、感染等疾病的治疗中具有重要的作用。
而甘露聚糖酶作为一种水解甘露聚糖的酶类，对于甘露聚糖的分离纯化、结构研究及生物学功能研究具有重要的意义。
芽孢杆菌产生的甘露聚糖酶具有高效、广谱等特点，在医药和食品工业等领域都有广阔的应用前景。
二、研究目的本研究旨在利用芽孢杆菌M-21菌株产生高效的甘露聚糖酶，并对其进行纯化和性质研究，增进对甘露聚糖酶的认识，为其在生物医药、食品工业等领域的应用提供有力的支持。
三、研究方法1.菌种的选取采用筛选法，从多个芽孢杆菌菌株中筛选出产生甘露聚糖酶的菌株。
2.菌种的培养采用液体培养方法，选用适宜的培养基及培养条件，促进芽孢杆菌M-21的生长和酶的产生。
3.甘露聚糖酶的提取和纯化采用不同的分离提取方法，如超声波法、离心法等，对菌体进行破碎，并对提取液进行不同的分离纯化方法，如离子交换色谱、凝胶渗透色谱等。
4.甘露聚糖酶活性的测定采用甘露聚糖酶活性测定试剂盒，按照操作说明进行甘露聚糖酶活性的测定。
5.甘露聚糖酶的性质研究包括pH和温度对甘露聚糖酶活性的影响、甘露聚糖酶的底物特异性等研究。
四、预期结果通过本研究，预计能够得到芽孢杆菌M-21菌株产生的高效甘露聚糖酶，同时，对其进行了纯化和性质研究。
通过对甘露聚糖酶的性质研究，得出了一些对其应用有参考价值的结论，为其在生物医药、食品工业等领域的应用提供了有力的理论支持。
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目录摘要 (II)关键词 (II)Abstract ....................................................................................................................................... I II Key words ................................................................................................................................... I II 引言 . (1)1 材料与方法 (1)1.1 实验材料 (1)1.1.1 菌种 (1)1.1.2 主要仪器设备 (1)1.1.3 药品、试剂及配制 (2)1.2 实验方法 (3)1.2.1 培养基及条件 (3)1.2.2 粗酶液的制备 (3)1.2.3 酶活的定义 (3)1.2.4 酶活的测定 (3)2 实验结果 (3)2.1 产酶培养基的优化 (3)2.1.1 碳源的优化 (3)2.1.2 氮源的优化 (4)2.1.3 磷酸二氢钾浓度的优化 (5)2.1.4 硫酸镁浓度的优化 (6)2.1.5 发酵产酶培养基的正交实验 (6)2.2产酶条件的优化 (7)2.2.1 温度对产酶的影响 (7)2.2.2 接种量对产酶的影响 (8)2.2.3 pH对产酶的影响 (8)2.2.4 转速对产酶的影响 (9)3 结果与分析与展望 (9)参考文献 (11)致谢 (11)多粘芽孢杆菌产甘露聚糖酶的发酵条件研究摘要β-甘露聚糖是自然界中广泛存在的一类半纤维素。
β-甘露聚糖酶可以水解葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖、半乳葡甘露聚糖以及甘露聚糖等一大类半纤维素，形成能被较好利用的低聚糖。
半纤维素被彻底分解且不造成污染的一条有效的途径，就是利用酶的水解作用。
本文以多粘芽孢杆菌为菌种，对多粘芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶发酵工艺条件进行了研究。
通过单因素及正交试验优化分别从培养基和培养条件两方面，考查了不同因素对菌株发酵产酶的影响。
主要研究结果如下：菌株产酶最佳培养基组成为（g/L）：2.25%魔芋粉+1.25%酵母膏+0.15%MgSO4·7H2O +0.3%K2HPO4·3H2O。
产酶最适培养条件为：初始pH值9.0，接种量为6 %，摇床转数220 rpm，33℃振荡培养28h可达到产酶高峰。
关键词β-甘露聚糖酶；发酵条件；多粘芽孢杆菌；正交优化The study of fermentation conditions of produci ng β-mannanaseby bacillus polymyxaAbstractβ-mannan,a class of hemicellulose, exist widely in the nature. β-mannanase can hydrolyze grape mannan,galactomannan, glucomannan,and galactomnnan mannose such a large class of hemicellulose, the formation of oligosaccharides can be better utilized. Hemicellulose was completely decompose without polluting an effective ay is to use enzyme hydrolysis. In this paper, making bacillus polymyxa as the bacteria, studies fermentation conditions of producing β-mannanase by bacillus polymyxa.Form culture conditions and culture time,examines the different factors’ influences on the strains fermentation, by single factor and orthogonal experimental design The main finding are as follows:The fermentation conditions were optimized in order to improve the production of the enzyme: 2.25% konjac + 1.0% yeast extract +0.15% MgSO4·7H2O+ 0.3%K2HPO4·3H2O; The optimal culture conditions for β-mannanase were initial pH 9.0, inoculation volume6%, agitation speed 240 rpm. After incubation at 33℃ , the enzyme showed the highest activity.Key wordsβ-mannanase; fermentationconditions; Bacillus polymyx ; orthogonal optimization引言β-甘露聚糖酶(β-1, 4-D-mannan mannanohyd-rolase；EC 3.2.1.78)是一种半纤维素水解酶，降解产物的非还原末端为甘露糖，其作用底物包括葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖及β-甘露聚糖等，能消除甘露聚糖对单胃动物各种营养素的抗营养作用[1]。
β-甘露聚糖酶存在于一些低等动物的肠道分泌液中，豆类植物如四棱豆，长角豆等萌发的种子中，天南星科植物魔芋萌发的球茎中都发现了酶活性的存在[2]。
而微生物更是产生β-甘露聚糖酶的主要来源，且具有活力高、成本低、来源稳定、提取方便等明显优点[3]。
自1958年Counios第一次报道了能产生β-甘露聚糖酶的真菌后，不少学者投入到β-甘露聚糖酶的研究中去。
从事的方面有产酶菌株的筛选[4-9]、基因诱变[10-13]，酶晶体结构分析[14]，分子生物学结构分析[15]以及培养基成分与条件的优化[16-18]等都取得了突破性成果。
其中以培养基和培养条件优化的研究最为激烈。
随着近年来对自然界半纤维素资源的大力开发和甘露低聚糖药用价值[19,20]等其他价值的发现，β-甘露聚糖酶也越来越受重视。
针对β-甘露聚糖酶的基础研究也进入一个新高潮，其在人类生活中的应用越来越广泛。
β-甘露聚糖酶是一种半纤维素水解酶，具有多种生物学功能。
β-甘露聚糖酶可以用于糖链结构的分析，造纸工业，纺织工业，石油工业和饲料工业等。
如在饲料工业中[21-25]甘露聚糖酶主要作为外源性酶参与机体活动。
另外，随着抗生素带来的农药残留问题，甘露聚糖和甘露聚糖酶对动物健康和生产性能的促进作用某种程度上已成为抗生素的替代产品。
β-甘露聚糖酶有着广阔的应用价值和前景，这是人们一直不懈地探索研究β-甘露聚糖酶巨大推动力。
但由于β-甘露聚糖酶活性水平普遍较低，限制了其在实际生产中的应用，且对于多粘芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的研究较少。
本研究以多粘芽孢杆菌为生产菌株，通过具体实验研究对多粘芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的培养条件和培养基成分进行优化设计，并到实验结果。
1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 菌种多粘芽孢杆菌武汉生物工程学院发酵实验室提供1.1.2 主要仪器设备数显恒温水浴锅HH-2 国华电器有限公司电子万用炉北京市永光明医疗仪器厂SPX—150B—Z型生化培养箱上海博讯实业有限公司医疗设备厂手提式不锈钢蒸汽消毒器YX280A 上海三申医疗器械有限公司HQ45Z恒温摇床武汉中科科仪技术发展有限责任公司202—0B型电热恒温干燥箱天津市泰斯特仪器有限公司BSC—1300ⅡA/B3 生物洁净安全柜上海博讯实业有限公司医疗设备厂笔式PH计0.1级杭州市奥立龙仪器有限公司电子天平（max120g）北京赛多利斯仪器系统有限公司80—Bl离心机常州国华电器有限公司TU—1810紫外可见分光光度计北京市普析通用仪器有限责任公司1.1.3 药品、试剂及配制1.1.3.1 药品与试剂魔芋粉、麸皮从市场购买马铃薯淀粉、酵母膏、胰蛋白胨北京市奥博星生物技术有限公司葡萄糖湖南湘大化工试剂有限公司乳糖、氯化钠、无水亚硫酸钠、乙冰酸天津市博迪化工有限公司硝酸铵、硫酸镁、硫酸铵洛阳市化学试剂厂尿素、酒石酸钾钠天津市化学试剂三厂牛肉浸膏天津市英博化学试剂有限公司磷酸氢二钾天津石英中厂霸州市化工分厂乙酸钠、苯酚武汉市江北化学试剂有限责任公司3，5—二硝基水杨酸浙江湖州食品化工联合公司氢氧化钠天津市风船化学试剂科技有限公司磷酸二氢钾中国中湘地质实验研究所琼脂粉上海山浦化工有限公司甘露糖国药集团化学试剂有限公司1.1.3.2 药品配置（1）DNS试剂配置称取182g酒石酸钾钠溶于500ml蒸馏水中，45℃下溶解，依次加入3，5-二硝基水杨酸6.3g、NaOH 21g、苯酚5g、亚硫酸钠5g，逐步搅拌至溶解，冷却后用蒸馏水定容至l000ml，存于棕色瓶中，室温下放置两周后使用。
（2）0.5%魔芋胶溶液配制称取0.5g魔芋粉，加入100ml乙酸-乙酸钠缓冲液，可置于摇床中200rpm，3~4h。
常温下三天内可用。
（3）pH5.5乙酸-乙酸钠缓冲液制备称取三水乙酸钠11.57g，加入0.85ml冰乙酸，再加蒸馏水定容至1000ml，测定pH值。
如果偏离5.5，则用0.1mol/L的乙酸或乙酸钠溶液调至5.5。
置于4℃冰箱中备用。
1.2 实验方法1.2.1 培养基及条件(1) 斜面活化培养基及条件葡萄糖1.0%，氯化钠0.05%，麸皮1.0%，牛肉膏0.1%，磷酸二氢钾0.3%，磷酸氢二钠0.5%，琼脂粉1.8%，pH=7.5，35℃恒温培养5d。
(2) 液体种子培养基及条件魔芋粉0.5%，酵母膏1.0%，硫酸镁0.1%，磷酸氢二钾0.5%，硫酸铵1.0%，pH=7.5，35℃，200rpm，摇床24h。
(3) 基础产酶培养基魔芋粉0.5%，蛋白胨1.0%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸镁0.1%，硫酸铵1.0%，pH=7.0，35℃，200rpm，摇床28h1.2.2 粗酶液的制备将摇瓶后的菌液部分倒入离心管中，在3000rpm下离心15min，所得到的上清液即为粗酶液。