多粘类芽孢杆菌 (1)
多粘类芽孢杆菌 原料
多粘类芽孢杆菌原料
多粘类芽孢杆菌又称多细胞类芽孢杆菌，是一种常见的细菌。
它具有较大的细胞体，通常呈杆状或椭圆形，并具有多个环节。
多粘类芽孢杆菌广泛存在于自然界中，可以在土壤、水体、植物和动物体内找到。
多粘类芽孢杆菌具有多个特点，使其在应用领域具有广泛的潜力。
首先，它能够产生多种生物活性物质，如抗菌物质和抗肿瘤物质，对病原微生物和恶性肿瘤具有一定的抑制作用。
其次，多粘类芽孢杆菌在生物修复领域也有重要应用，可以通过分解有机废物和吸附重金属等方式帮助净化环境。
此外，多粘类芽孢杆菌还能够促进植物生长，并提高植物的抗逆性。
为了充分发掘多粘类芽孢杆菌的应用潜力，科学家们正在进行深入研究。
他们通过分离和鉴定，筛选出高产特性的菌株，并优化培养条件，提高产量。
同时，还开展了基因工程的研究，通过基因的改造和表达，使多粘类芽孢杆菌产生更多、更强的生物活性物质。
综上所述，多粘类芽孢杆菌作为一种常见的细菌，在生物技术和生物医药等领域具有广泛的应用前景。
科学家将继续探索其潜力，并努力推动其产业化和应用化进程，以促进人类社会的可持续发展。
海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株50L发酵罐发酵工艺
海洋多粘类芽孢杆菌L_1-9菌株50L发酵罐发酵工艺马桂珍;王淑芳;暴增海;吴少杰;夏振强;付泓润【摘要】为了提高海洋细菌L1-9菌株液体发酵的生物量和抑菌活性,进行了50 L 发酵罐的分批发酵和补料发酵工艺研究。
结果表明：L1-9菌株在50 L发酵罐中分批发酵工艺为：接种量8%（菌龄24 h、浓度为109个细胞/mL）、初始搅拌速度250 r/min、通气量为3 L/min,发酵时间为11～12 h,生物量达2.40×1010CFU/mL;补料分批发酵工艺为：在分批发酵的条件下,发酵13 h开始流加60 g/L葡萄糖溶液,使还原糖浓度保持在0.4 g/L左右,发酵周期30 h,生物量达到4.63×1010CFU/mL,比分批发酵提高了78.07%;抑菌时效测定结果表明,发酵液对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抑菌作用伴随着生物量的增加不断加强,20 h抑菌活性达到高峰,抑菌带宽度为17.75 mm,抑菌活性与生物量呈正相关,为生长关联型。
%To higher biomass and antimicrobial activities of marine bacteria Paenibacillus polymyxa L1-9 in a 50 L fermenter,the technological processes were optimized with batch and fed-batch fermentation.The result showed that the best process for batch fermentation was following.Inoculum size was 8 % with culturing after 24 h and cell concentration was 109 cell/mL.Initial rotating speed and ventilator capacity were 250 r/min and 3 L/min respectively.The maxbiomass,2.40×1010 CFU/mL,was achieved after 11~12 h fermentation.For fed-batch process,the max biomass,4.63×1010 CFU/mL,was obtained after 30 h.This result was based on keeping 0.4g/ L reducing sugar in medium by adding 6g/L glucose after 13h paring to batch fermentation,fed-batch fermentation yielded increasing 78.07%products.The antimicrobial activity of L1-9 to Staphlococcus aureaus was tested here.There was an ascending trend when the biomass increased.The activity reached its top at 20h when the inhibition zone was 17.75 mm.The conclusion is that there is a positive correlation between antimicrobial activity and biomass of L1-9 and it is a growth associated strain.【期刊名称】《食品与发酵工业》【年(卷),期】2011(037)012【总页数】5页(P6-10)【关键词】海洋多粘类芽孢杆菌;生物量;抑菌活性;发酵【作者】马桂珍;王淑芳;暴增海;吴少杰;夏振强;付泓润【作者单位】淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005／江苏省海洋资源开发研究院,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005／江苏省海洋资源开发研究院,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005;淮海工学院海洋学院,江苏连云港222005【正文语种】中文【中图分类】TS262.2多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)中有很多菌株可作为重要的生防资源，用于多种植物病害的生物防治［1－5］，该菌对人畜安全，无环境污染，对植物非致病性，美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。
多粘类芽孢杆菌的研究进展
多粘类芽孢杆菌的研究进展
窦龙涛;胡基华;刘春燕;曲晓军;姜威;闫更轩;张淑梅
【期刊名称】《黑龙江科学》
【年(卷),期】2024(15)4
【摘要】多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)是可产内生孢子具有生物防治功能的植物根际促生菌,在自然界中广泛存在,能够产生多肽、多糖、蛋白质等代谢活性物质,是挖掘天然抗菌素的宝库。
随着生物技术的发展,多粘类芽孢杆菌在农业、工业及医药等领域均表现出广泛的应用价值。
综述了多粘类芽孢杆菌的代谢活性物质、基因研究及其在农业与工业领域中的应用,对其未来的研究前景进行了展望,为进一步挖掘其作为生防制剂提供参考。
【总页数】6页(P8-13)
【作者】窦龙涛;胡基华;刘春燕;曲晓军;姜威;闫更轩;张淑梅
【作者单位】黑龙江省科学院微生物研究所;黑龙江省科学院
【正文语种】中文
【中图分类】S917.1
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多粘类芽孢杆菌菌落形态
多粘类芽孢杆菌菌落形态
多粘类芽孢杆菌是一类常见的革兰氏阳性细菌。
它们具有很强的益生功能，对于维护肠道健康有着重要的作用。
在实验室中，我们可以通过观察菌落形态等特征来判断多粘类芽孢杆菌的种类和特性。
多粘类芽孢杆菌的菌落形态受到许多因素的影响，比如培养基成分、温度、氧气浓度等。
不同种类的多粘类芽孢杆菌的菌落形态也各不相同。
一般来说，多粘类芽孢杆菌的菌落形态可以分为以下几类：
1.大肠杆菌样菌落：这种菌落比较大，呈现出浑浊的白色或淡黄色，有时会产生有臭味的气体。
2.黄色或金黄色菌落：这是属于一类金色色素菌。
菌落呈现出黄色或金黄色，有丰富的黄色色素。
3.白色或奶白色菌落：这种菌落很常见，呈现出白色或奶白色，有时会有一些颗粒状的物质。
4.粉红色菌落：这种菌落一般比较大，颜色比较深，呈现出粉红色，有时也会产生异味。
5.浅灰色菌落：这种菌落比较小，呈现出淡淡的灰色，菌落表面光滑。
6.黏稠菌落：这种菌落比较粘稠，呈现出乳白色色素，质地较为柔软。
综上所述，多粘类芽孢杆菌的菌落形态具有多样性和多变性，它受到
环境等多种因素的影响，因此需要我们在培养和观察过程中做好控制
和记录。
同时，对于选用不同种类的多粘类芽孢杆菌，我们也需要注
意它们的特性和生长条件等因素，以确保实验结果的准确性和可靠性。
多粘类芽孢杆菌在植物生产中的应用及作用机制
4.防治植物病害：多粘类芽孢杆菌可以产生抗生素和其他生物活性物质，抑制或杀死一些植物病原菌，从而起到防治植物病害的作用。多粘类芽孢杆菌在植物生产中的作用机制主要包括以下几个方面：
5.产生植物生长素和其他生长因子，促进植物的生长和发育。
6.与植物根系共生，提供一定量的氮、磷和其他营养物质。
7.产生抗生素和其他生物活性物质，抑制或杀死一些植物病原菌。
8.分解土壤中的有机物和无机物质，提高土壤肥力和水分保持能力。
综上所述，多粘类芽孢杆菌在植物生产中具有广泛的应用前景，可以促进植物生长、提高产量和品质，同时还可以改善土壤环境和防治植物病害。
多粘类芽孢杆菌是一种常见的土壤细菌，它具有多种生物学特性，并且在植物生产中具有重要的应用。以下是多粘类芽孢杆菌在植物生产中的应用及作用机制：
1.促进植物生长：多粘类芽孢杆菌可以产生植物生长素和其他生长因子，这些物质可以促进植物生长和发育，提高植物的产量和品质。
2.抗逆性增ห้องสมุดไป่ตู้：多粘类芽孢杆菌可以提高植物的抗逆性，使植物能够更好地应对环境中的各种胁迫因素，如干旱、盐碱等。
多粘类芽孢杆菌分类_解释说明以及概述
多粘类芽孢杆菌分类解释说明以及概述1. 引言1.1 概述多粘类芽孢杆菌（Multicellular Sporogenic Bacilli）是广泛存在于自然环境中的一类细菌。
它们具有独特的生态角色和功能，对各个领域包括医学、农业和环境等都有重要的应用价值。
对多粘类芽孢杆菌进行正确的分类研究，不仅有助于深入了解它们的分类学特征和系统发育关系，还能揭示其对生物多样性和环境影响的作用机制。
1.2 文章结构本文主要围绕多粘类芽孢杆菌分类展开论述。
首先介绍了文章的整体结构，包括引言、多粘类芽孢杆菌分类、解释说明多粘类芽孢杆菌分类意义、现状与挑战以及结论五个部分。
在每个部分中，会详细描述相应内容并提供相关研究和发展现状。
1.3 目的本文旨在全面阐述多粘类芽孢杆菌分类的重要性，并深入讨论其生态角色、应用价值以及对于环境和生物多样性的影响。
同时，对多粘类芽孢杆菌分类研究的现状和挑战进行回顾，并对未来的发展方向提出建议和展望。
以上为文章“1. 引言”部分的内容，旨在概述论文的主题、结构和目的。
2. 多粘类芽孢杆菌分类2.1 定义与特征多粘类芽孢杆菌（viscous spore-forming bacteria）是一类革兰氏阳性细菌，它们具有形成气囊状芽孢和薄层黏液的特征。
这些细菌通常在土壤、水体和动植物体表等环境中广泛存在，并且对于生态系统的平衡和功能发挥着重要作用。
在形态上，多粘类芽孢杆菌呈长杆状或丝状，其表面覆盖着黏液层，使得它们能够吸附并固定在环境中的不同介质上。
2.2 分类方法与标准多粘类芽孢杆菌的分类主要依据其生理学和生化学特征进行。
常见的分类方法包括形态观察、生长条件和代谢产物分析等。
其中，最常用的鉴定手段是通过16S rRNA基因序列分析进行系统发育研究，从而确定其亲缘关系和进化演化。
2.3 分类系统与进化关系根据现有研究成果，多粘类芽孢杆菌可分为多个属，如黏杆菌属（Viscillium），蓝杆菌属（Cyanobacterium）等。
多粘类芽孢杆菌农用菌肥的制备及应用研究 -回复
多粘类芽孢杆菌农用菌肥的制备及应用研究-回复关于多粘类芽孢杆菌农用菌肥的制备及应用研究。
多粘类芽孢杆菌，又称多胞类芽孢杆菌，是一种广泛存在于自然界中的一类重要细菌，具有多种生理功能，尤其在农业上具有重要的应用潜力。
目前，研究人员将多粘类芽孢杆菌应用于农用菌肥的制备中，其具备促进植物生长、增加土壤肥力和防治植物病害等优点，成为农业生产中的一项重要科研研究方向。
一、多粘类芽孢杆菌的筛选和培养1. 筛选：通过采集不同土壤样本，从中分离得到多粘类芽孢杆菌，并通过生理和生化特性的鉴定，确定其属于多粘类芽孢杆菌属。
2. 培养：将筛选得到的多粘类芽孢杆菌进行培养，培养基的选择可以采用适宜的营养基质，如液体培养基或固体培养基。
培养条件包括温度、pH 值以及氧气浓度等。
二、多粘类芽孢杆菌菌株的纯化和保存1. 纯化：从培养基的菌落中挑选单个菌株，进行单菌株纯化。
此过程应注意消毒和无菌操作，以避免外源菌株的污染。
2. 保存：纯化后的多粘类芽孢杆菌菌株可以选择冷冻保存，也可以进行分离保存。
冷冻保存可在-20或-80的冷库中，分离保存可采用琼脂糖块或石蜡板的保存方法。
三、多粘类芽孢杆菌菌肥的制备1. 菌种活化：将保存的多粘类芽孢杆菌菌株取出，通过适宜的激发剂和培养基，进行活化处理，使菌株活跃起来。
2. 发酵培养：将菌种转移到液体发酵培养基中，培养温度、培养时间和培养条件的调节可以提高菌株的生物量和次级代谢产物的产量。
3. 半固态发酵：将发酵液与固态载体（如膨润土）混合，在适宜的条件下进行半固态发酵，通过菌株的生长和代谢来制备菌肥。
四、多粘类芽孢杆菌菌肥的应用研究1. 植物生长促进：多粘类芽孢杆菌菌肥中含有多种生长调节物质和抗生素活性物质，可以促进植物的生长和发育。
2. 土壤改良：多粘类芽孢杆菌菌肥能够分解有机肥料，释放植物所需的养分，提高土壤的肥力，并改善土壤结构。
3. 生物防治：多粘类芽孢杆菌菌肥中具有抑制病原菌生长和繁殖的能力，可以用于防治植物病害。
多粘类芽孢杆菌
Pesticide Science and Administration2019,40(1)多粘类芽抱杆菌多粘类芽抱杆菌(Paenibacillus polymyxa Ash,Priest&Collins)是一种产芽抱,具有固氮能力的革兰氏阳性细菌.多粘类芽抱杆菌及其代谢产物广泛应用于农业、医学，工矿业及废水处理等方面，美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一，此外我国农业农村部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。
作用机理：1.营养和空间位点的竞争：多粘类芽抱杆菌的芽抱利用植物叶面和根部的营养和水分繁殖，与植物病原菌争夺同一环境内的空间、营养、氧气等，其芽抱优势在于营养竞争能力强、抗菌物质产生量高、生长速度快及适应性强等特性，快速生长成为优势菌群，占据生态优势，在植物表面形成保护膜，阻止病菌侵染，使病菌没有生存空间，表现其持效期长2.产生抗菌活性物质：①作用于细菌细胞膜,产生肽类抗菌物质，如多粘菌素，粘菌素，环杆菌素等，其作用位点为细菌的细胞膜，如多粘菌素分子中的环状结构能插入细菌细胞膜从而改变细菌细胞膜的渗透性，造成细菌内含物的流失，最终导致细菌死亡。
②作用于真菌细胞壁，多粘芽抱杆菌产生的拮抗蛋白质大多数为细胞壁降解酶类，如P-1,3-葡聚糖酶、几丁质酶等。
P-1,3-葡聚糖酶可水解卩-1,3-葡聚糖中的B-1,3-糖昔键，从而抑制植物病原真菌的生长与增殖。
同时分泌的核昔类抗菌素多氧霉素作用于病原真菌细胞壁，能引起真菌生长时的菌丝尖端形成膨胀泡而破裂:③活菌体直接抑制，多粘类芽抱杆菌活菌体能抑制镰刀菌的生长，而无菌滤液对镰刀菌无作用。
这说明这株多粘类芽抱杆菌对镰刀菌的抑制是活菌体直接起抑制作用。
④保护作用，多粘类芽抱杆菌可以产生胞外多糖，保护植物免受病原体侵害；该菌和植物根系的相互作用也会导致根毛发生物理变化。
3.诱导作用：多粘类芽抱杆菌不仅能直接杀死病原菌，还能通过与植物之间的互作来起到抗病效果。
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多粘类芽孢杆菌
1.基本特性
1.1中文通用名称：多粘类芽孢杆菌
1.2英文通用名称（或拉丁名称）：Paenibacillus polymyxa
1.3毒性：低毒
1.4应用作物：棉花、玉米、水稻、花生、马铃薯、黄瓜、青椒
1.5防治对象：棉花黄萎、黑根腐、炭疽病、赤霉病；玉米全蚀病；水稻白叶枯病；花生青枯病；马铃薯软腐病；黄瓜角斑；青椒疮痂
1.6生防特点：多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)对植物黄萎病、鹰嘴豆枯萎病、油菜腐烂病、黑松根腐病等多种植物病害均具有一定的控制作用。
美国环境保护署(EPA)已将其列为可商业上应用的微生物种类之一。
无论是采用HY96-2（P. polymyxa）发酵液，还是由HY96-2制成的细粒剂(KDLD)，在温室内和田间都取得了稳定的防治效果，并且KDLD细粒剂在田间表现的效果更为突出。
2.定性鉴别试验
2.1菌株的形态及培养特征
类芽孢杆菌属。
菌株接种于 LB固体培养基上，28ºC培养 18～24 h，观察其菌落形态。
利用光学显微镜观察在LB培养基上生长菌体形状和革兰氏染色情况，利用电镜观察菌体大小、荚膜和鞭毛着生情况。
菌体大小为(0．6～ 0．8) μm ×(2．0～5．0) μm，革兰氏阳性、阴性或可变，兼性厌氧，杆状，产芽孢，芽孢椭圆形，端生，膨大，有荚膜，鞭毛侧生或周生。
在 PDA平板上，菌落较小、白色或淡黄色、圆形、菌面稍凸或不凸起，边缘整齐，表面有光泽、光滑、湿润、半透明到不透明；在肉汁琼脂培养基上生长菌落较薄，无菌膜，液体澄清；在斜面培养基上生长良好，菌苔线状、扁平，表面光滑、半透明。
最适合生长温度30-35 ºC
表1 菌株在不同培养基中的培养特征（30ºC ，2天）
培养特性LB琼脂营养琼脂酵母浸膏琼脂牛肉汁琼脂菌落颜色乳白色杏仁白色淡黄白色灰白色
菌落形状湿润光滑粘稠状有小突起，粘性湿润光滑
菌落直径mm 2.5 2.8 3 2.6
2.2生理生化特征
由表2可知，菌株的接触酶、厌氧生长、酪朊水解、淀粉水解、V—P反应和硝酸盐还原均为阳性；氧化酶、酪氨酸水解、脲酶、卵黄卵磷脂水解、吲哚产生、柠檬酸盐利用均为阴性；可利用D葡萄糖、D一木糖、D一甘露醇、甘油，且均产酸、产气。
菌株在pH 5．6条件下生长；在45℃上不生长。
超过7%含量的NaCl中不生长。
表2 生理生化特征
接触酶+
厌氧生长+
D一葡萄糖++
D一木糖++
D一甘露醇++
甘油++
酪朊水解+
淀粉水解+
酪氨酸水解-
脲酶试验-
卵黄卵磷脂水解-
V—P反应+
吲哚产生-
硝酸盐还原+
柠檬酸盐利用-
氧化酶-
2%NaCL +
7%NaCL -
45ºC -
50ºC -
55ºC -
注：“+”．阳性，“一”．阴性；“++”．产酸、产气。
2.3 16S rDNA片断扩增和序列分析
（1）基因组DNA的提取：当菌株在LB液体培养基培养至OD600=0．8时，离心收集菌体，采用CTAB法提取基因组DNA
（2）16S rDNA片断的扩增：以提取的基因组DNA作为模板，采用扩增细菌16S rDNA 的一对通用引物。
正向引物16Sf：AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG；反向引物16Sr：ACG GCT ACC TTG TTA CGA CT。
这对引物可扩增约1．6 kb 的16S rDNA全序列。
（3）PCR反应体系(30 L)为：10×Buffer(Mg。
)2．5 ttL，10 mmol／L dNTP 2 ttL。
10 ttmol／L引物各1 L，Taq酶0．15 L，模板1 L，ddH2O 22．35 L。
（4）PCR程序为；95℃：4 min；94C 1 min，56 C 1 min，72 C 2 min，循环30次；72 C 20 min。
将PCR产物用质量分数1的琼脂糖凝胶电泳，电泳缓冲液为1×TAE，选取Lambda DNA／EcoR I+Hind m Marker一3作为Marker。
（5）克隆与筛选：将PCR产物经DNA胶回收试剂盒纯化后，连接克隆载体pUCm —T，转化到大肠杆菌(Escherichia coli DH 5a)，在加有Amp／IPTG／X—Gal的LB平板上进行蓝白斑筛选。
挑取白色菌落，进行PCR鉴定，分析插入片段的大小，挑出重组克隆
（6）DNA序列测定：将重组克隆测序。
（7）菌株16Sr DNA序列系统发育树的构建：将测序所得序列与GenBank中核酸数据库进行BLAST 同源序列检索，然后利用DNAMAN Version 5．1 软件中的Multiple Sequence Alignment程序进行多序列同源性分析并构建系统发育树。
与已知多粘类芽孢杆菌同处一个最小分支且同源性超过98%可以确定为多粘类芽孢杆菌。
3.多粘类芽孢杆菌定量分析
3.1 试剂与溶液
3.1.1 无菌水、蒸馏水；
3.1.2 酵母浸膏培养基（用于鉴别与计数）：
蔗糖 1.0％酵母浸膏0.45％
KH2PO40.05％MgSO4·7H2O 0.05％
NaCl 0.05％琼脂粉 1.5～1.6％
pH 7.2～7.4
121℃高压蒸汽灭菌15-20min。
3.2 仪器
显微镜、天平（精确至0.01g）、量筒、搪瓷缸、电炉、pH计、酒精灯、无菌三角烧瓶和培养皿（90mm）、超净工作台、培养箱（30±1）℃。
3.3 检验步骤
3.3.1平板培养基的制备：待融化后的培养基冷却至45℃左右后，在超净工作台中迅速将此培养基倒于无菌培养皿内，待凝固后备用。
3.3.2 在超净工作台中称取试样10.0g（精确至0.01g）放入装有90mL无菌水的灭菌三角烧瓶中（瓶内预先加有玻璃珠20个左右），在30℃的旋转式摇床上以150r/min充分振荡0.5h，即得1：10的菌悬液母液。
3.3.3 用无菌移液管吸取上述1：10的稀释液5ml于45ml无菌水中，充分振荡，混合均匀，得到1：102的稀释液。
另取一支灭菌移液管，按上述顺序操作，直到比所需最高稀释度低一个数量级为止。
则分别得到一系列稀释度的稀释液(每个稀释度必须更换无菌移液管)。
3.3.4 选择1:106、1:107、1:108、1:109 4个连续的稀释度，分别用移液器吸取0.1mL 稀释液于平板培养基上，并用无菌玻璃刮刀在琼脂表面均匀涂布，每个稀释度5个重复。
将涂布均匀的平板培养基置于30℃的培养箱中培养24h～36h后进行计数。
3.3.5结果计算
以平板上出现30个～300个菌落数的稀释度平板为计数标准。
当只有一个稀释度的平均菌落数在30个～300个之间时，则以该平均菌落数为计数标准。
若有两个稀释度，其平均菌落数均在30个～300个之间，应按两者菌落总数之比值来决定。
如其比值小于2应计数两者的平均值，若大于2则以其中稀释较小的为计数标准。
若四个稀释度的平均菌落数均大于300个，则应以稀释度最高的平均菌落数为计数标准。
若四个稀释度的平均菌落数均小于30个，则应以稀释度最低的平均菌落数
为计数标准。
若四个稀释度的平均菌落数均不在30个～300个之间，则以最接近300个或30个的平均菌落数为计数标准。
根据式（1）计算试样中多粘类芽孢杆菌总数：
多粘类芽孢杆菌活菌总数（c f u/g）＝菌落平均数×总稀释倍数×10 (1)
3.3.6 结果报告
多粘类芽孢杆菌活菌总数在100个以内时，按其实有数报告；大于100个时，采用两位有效数字，取其算术平均值为检验结果。
3.4 杂菌率计算
按GB/T 4789.2—2003中的菌落总数测定方法进行。
根据菌落特征判定，并按下式计算出试样中杂菌率：
杂菌数
杂菌率=------------------------------------------ ×100
多粘类芽孢杆菌数+杂菌数。