血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定
溴甲酚绿法测定血清白蛋白标准物与反应时间的选择
溴甲酚绿 法测定血 清 白蛋 白， 以定值 参考血 清作标 准物 ， 应 反应
［ 关键词］ 溴 甲酚 绿 ； 白蛋 白； 白蛋 白标 准液 ； 定值参考血清 ； 反应 时问
［ 中图分 类号】 Ｒ ４ ６ １ ［ ４ ． １ 文献标识码 ］ Ｂ ［ 文章编号 ］ １７ ６４—３０ （ ０２ ０ ０５ ０ ８ ６ ２ １ ） ８— ７ ７— ３
中 国 第 ５卷
第 ８期
・７ ７ ・ ５
溴 甲酚 绿 法 测 定 血 清 白蛋 白标 准 物 与 反 应 时 间 的选 择
黄新根 ， 孙桂 莲 ， 伍 军根 ， 陈春 秀
作者单位 ：３ １０ 江西 ， ３４９ 峡江县人民医院检 验科
作者简介 ：黄新根（ ９ ８ ， ， 学本科 ， １６ 一）男 大 医学学士 ， 主管技 师 ， 研究方向 ： 临床生化 。Ｅ ｍ ｌ ｕｎ ｘ ｇｎ ６ ．ｏ — ￣ ： ａｇｉ ｅ ＠１３ ｃｍ ｈ ｎ
ｍｉ Ｈ Ａ ＧＸｎｇｎ Ｓ Ｎ ｕ・ａ ， ｕ－ｅ ，ｔ １Ｄｐ ｒ ｅｔｆＬ ｂｒｔｙ ｈ ｅｐｅ ＳＨ ｓｉ ｌ Ｘａ ｎ Ｕ Ｎ ｄ —ｅ ，Ｕ Ｇ ｉｉｎ ＷＵ Ｊｎｇｎ ｅ ａ． ｅａｔ ｎ ｏ ａ ｏ ｏ ，ｔｅＰｏｌ’ ｏ ｔ ｉ— ｌ ｍ ａｒ ｐａ ｏ ｆ
ｓ ｌｉ ｈ ｒｍｏ ｒ ｓ ｌｇ ｅ ｎ ｍｅｌ ｏ ｅｅ ｍｉ ｉ ｇ ｓ Ｆ ｍ ｌ ｕ ｎ，ｎ ｏ ｄ ｒｔ ｅｅ ｔｔｅ ｂ ｓ ｓａ ｄ ｒ ｔｒａ ｎ ｕ ｔｅ ｂ ｏ ｃ ｅ ｏ ｒｅ ｔ ｎ ｍｄ ｆ ｒｄ ｔｒ ｎ ｎ ｅ ｌ ａｂ ｍｉ ｉ ｒ ｅ ｏｓ ｌ ｃ ｈ ｅ ｔ ｔ ｎ ａｄ ｍａｅ ｌａ ｄ ｌ ｉ
应时 间 ３ 、０ １０Ｓ ０ ６ 、２ 三者之 间结果 比较差异无统计学意义（ ０ ０ ） １０ ３ ０Ｓ ３ 组测定值 比较 差异有 Ｐ＞ ． ５ ，８ 、０ 与 ０ Ｓ 统计学意义（ ０ ０ Ｐ＜ ．５或 Ｐ＜ ． １ 。结论 ００ ）
白蛋白溴甲酚绿法作业指导书
白蛋白（溴甲酚绿法）作业指导书1概述白蛋白是肝脏合成的，因此血清白蛋白浓度可以反映肝脏的功能，同时血清白蛋白水平的改变能导致一系列的病理性继发症，因此，测定血清白蛋白常用于病人状态的非特异监视。
病理性降低：(1) 蛋白质丢失，常见于大量出血或严重烧伤和肾脏疾病。
(2) 合成障碍，肝脏功能异常。
(3) 营养不良或吸收不良。
空腹12小时取静脉血[1]。
2标本的收集新鲜无溶血标本，血清或血浆样本均不溶血。
血浆样本只能采用肝素或EDTA抗凝。
样本在4摄氏度可稳定7天。
采血前病人应禁食12小时，采集静脉3ml,待凝固后（最好放在37摄氏度水浴箱内45分钟）通常为加抗凝剂的血液在30-60分钟凝血析出血清。
3000r/min离心5-10分钟，分离出血清备用。
不建议采用血浆标本。
3：方法原理本法以溴甲酚绿染料为最常用，即采用溴甲酚绿染料，在ph为4.0—4.2条件下，白蛋白与溴甲酚绿结合成蓝绿色化合物，反应生成的蓝绿色化合物与样本中白蛋白的浓度成正比，通过测定580-630nm处吸光度值的变化，即可计算出样本中白蛋白的浓度。
4剂来源，配置及储存试剂来源：迪瑞试剂配置：试剂一和试剂二均为液体试剂，可直接使用。
启用后在2-8度可稳定30天。
若试剂混浊，或以蒸馏水为空白在6300nm处的光吸收值低于0.2A,应予丢弃。
试剂储存：试剂避光储存2-8摄氏度可稳定至标签所示失效期。
5分析仪器CS-600B全自动生化分析仪分析参数：样品量2 u/l 试剂量：300 u/l测光点15 测定模式：1点终点法正反应分析波长：600nm/700nm(主波长/副波长)6计算方法白蛋白浓度（g/L）=样本管吸光度×校准液浓度（g/L）校正管吸光度7 线性范围：本实验的线性范围：0---60g/L8参考范围成人37—53g/L9 失控控理1：立即重测同一质控品，如重测后结果仍不再允许范围，请进行下一步。
2：新开一瓶质控品，重测失控项目，如新开的质控血清结果正常，那么原来质控血清可能过期或在室温防止时间过长而变质，如结果仍不再允许范围，则进行下一步。
溴甲酚绿法测定血清清蛋白及批内重复性试验 - 浙江中医药大学
【实验目的】
掌握： 1、溴甲酚绿法测定血清清蛋白的基本原理。
2、学习方法学评价之一批内重复性试验。
熟悉：1、 血清清蛋白测定的临床意义。
2、 批内重复性试验测定意义。 了解：溴甲酚绿法测定血清清蛋白的特点和注
意事项 。
【实验原理】
1．血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷，在有
非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料 溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物，在波长600nm处 有吸收峰，其颜色深浅与清蛋白浓度成正比例，与 同样处理的清蛋白标准比较，可求得血清中清蛋白 含量。
0.01 0.01 0.01 0.01
----- --- ---
3.0
3.0 3.0 3.0
37℃孵育10分钟后，在波长600nm处用空白管调零，读取 吸光度。
2. 如标本因严重高脂血症而混浊，需加做标本空白管：
取血清0.01ml，加入BCG空白试剂3.0ml，在波长 600nm处用BCG空白试剂调零，测定标本空白管吸 光度。用测定管吸光度减去标本空白管吸光度后， 再计算结果。
在630nm处测定的吸光度应为0.811土0.035，如达不到此 值，表示灵敏度较差。
5. 蛋白质标准是一个复杂问题。实验证明，BCG不但与清蛋
白呈色，而且与血清中多种蛋白质成分呈色，其中以a1球蛋白、运铁蛋白、结合珠蛋白更为显著，其反应速度较 清蛋白稍慢。由于在30s内呈色对清蛋白特异，故BCG与 血清混合后，在30s读取吸光度，可明显减少非特异性呈 色反应。为了减少本法基质效应的影响，最好用参考血清 作标淮。
如：32，32.5， 42，43，42.5，42.3，43.5…… ，先检测 32.5是否是离群值。
(3) 如果离群值有两个或两个以上,而且又分布于均数两侧,例如 X1和Xn都同属于离群值,则分别检验X1和Xn是否应该舍去. 如有一个数据决定舍去,那么再检验另一个数据时,测定次数 应该作为减少一次来处理,而且此时应该选择99%的置信水平。
BCG试剂对血清白蛋白检测影响因素的探索_
关键词：血清白蛋白；BCG试剂；吸光度；比色法
人血浆白蛋白（albumin ,ALB）是血浆含量最多的蛋白质［1］，是血浆中多种物质重要的结合物与运输蛋白，并且是维持血浆胶体渗透压的重要组分，临床上测定血清白蛋白具有重要意义[2]。因此，其检测是临床实验室的常规检测项目之一[3]，其常用检测的方法为溴甲酚绿法和溴甲酚紫法[4]。目前BCG法是临床实验室应用最广泛的一种测定清蛋白的染料结合法[5], ALB作为一种阳离子,结合阴离子染料BCG形成蓝绿色复合物,在628 nm处有吸收峰,其吸光度与ALB浓度成正比[6]。且BCG试剂是一种PH指示剂，变色域为PH3.8（黄色）-5.4（蓝色）[7]，试剂的PH改变可使染料与白蛋白结合率改变。溴甲酚绿（BCG）法因其灵敏度高、操作简单、重复性好，能自动化等优点被广泛应用于临床实验室[8]。按姜旭淦主编的第2版《临床生物化学检验实验指导》可知，显色时间与PH值改变对溴甲酚绿法测定血清白蛋白结果有显著的影响。据文献显示BCG浓度对清白蛋白测定准确度也有明显的影响[9]。但目前还没有文献表明BCG试剂在室温条件下储存时间长短因素对血清白蛋白的检测结果是否有影响，为此我们设计了BCG试剂的贮存液与应用液在室温条件下储存时间对血清白蛋白测定进行探究，通过研究表明BCG试剂在室温条件下储存2年对血清白蛋白测定结果没有太大的影响。实验研究报告如下：
实验六 血清白蛋白测定(精美课件)
甲胎蛋白
血浆蛋白质概述
血浆蛋白质的分类：
按分离方法分类 盐析法 ：可将血浆蛋白质分为清蛋白和球蛋白两大类。
清蛋白
血浆蛋白质概述
清蛋白(Alb)是血浆中含量最多的蛋白质，约占血
浆蛋白总量的57％～68％。在pH7.4的环境中，每分子
可带200个以上的负电荷，可作为许多物质的运输载体。
Alb由肝细胞合成，合成速度受蛋白质摄入量及血
实验六 血清白蛋白测定
学习要求
1 掌握溴甲酚绿法测定血清白蛋白的基 本原理和方法
2 了解血清白蛋白的测定方法
3 掌握血清白蛋白的参考区间和临床意义
血浆蛋白质概述
血浆中几种主要的蛋白质：
前清蛋白
清蛋白
铜蓝蛋白
转铁蛋白
结合珠蛋白
α1-酸性糖蛋白 C-反应蛋白 癌胚抗原
蛋白质
α1-抗胰蛋白酶
α2 -巨球蛋白 纤维蛋白原
BCP结合法
优点 灵敏度高，与人及动物 与Alb以外的血浆蛋白质结合少， 标本中的Alb结合力差异 干扰小 不大
缺点
除了与Alb结合外，还可 灵敏度较低，与动物标本中的
与血清中其他多种蛋白 Alb结合力相当弱，质控血清多
质也可结合
采用动物血清制备，因此应用
ห้องสมุดไป่ตู้
受限
试剂与器材
试剂与标本 1、0.5 mol/L 琥铂酸缓冲贮存液（PH4.1） 2、BCG贮存液（10mmol/L）（溴甲酚绿、NaOH 溶液） 3、叠氮钠贮存液 4、BCG试剂 5、白蛋白标准液（40g/L） 主要器材 分光光度计
第二节 体液蛋白质检验
血清清蛋白测定：
测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法 与Alb结合的染料有多种，其中溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚
两种检测方法测定质控血清及样本血清白蛋白的结果分析
两种检测方法测定质控血清及样本血清白蛋白的结果分析范德胜
【期刊名称】《实验与检验医学》
【年(卷),期】2006(024)006
【摘要】目的了解白蛋白(ALB)两种测定方法测定质控血清和临床样本血清存在的偏倚及省室间质评ALB成绩不理想的原因.方法用溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)两种方法,每天测定10份临床样本,每份测定两次,共测定5天,记录检测结果,进行相关分析和偏差的评估,同时进行质控血清的测定.结果不同厂家、不同批号质控血清偏差不同,有的质控品相对偏倚达45.6%;临床样本血清ALB的浓度分别为50、40、30、20g/L时,各阶段的相对偏倚分别为5.8%、113%、20%、38%.结论用溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)两种方法测定质控血清白蛋白时,由于方法学的不同和基质原因,测定结果偏倚不同,有的质控品偏倚很大;用两种方法测定临床标本时,随白蛋白浓度的降低,偏倚逐渐增大.
【总页数】3页(P535-536,559)
【作者】范德胜
【作者单位】23500,安徽省淮北市矿工总医院检验科
【正文语种】中文
【中图分类】R4
【相关文献】
1.血清淀粉样蛋白A两种检测方法相关性的比对及相关疾病样本检测结果分析 [J], 黄建央;沈敏敏;刘东海
2.水中氟化物两种检测方法测定结果分析 [J], 赵妙珍;张秋霞
3.不同质控血清在同一生化分析仪上的测定结果分析 [J], 夏克明
4.BCG试剂配方与测定温度对测定猪质控血清白蛋白的影响 [J], 王时南
5.自备胰岛素,C肽质控血清测定结果分析 [J], 储小宏;丛安丽
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血清清蛋白测定(溴甲酚绿发)
授课对象：06级检验1-5班课时：1学时血清清蛋白测定(溴甲酚绿法)目标：1.掌握BCG法测血清清蛋白的原理及注意事项。
2.熟练进行实验操作。
3.了解血清清蛋白测定的主要临床意义。
实验用品：721型分光光度计，BCG试剂，生化质控血清，蛋白标准液（40g/L）等。
内容：原理:清蛋白具有与阴离子染料结合的特性，在pH4.2的环境中,在有非离子去垢剂聚氧乙烯月醚存在时，带有正点荷的清蛋白(PI4.7)可与阴离子染料溴甲酚绿形成蓝绿色复合物，颜色的深浅在一定的范围内与清蛋白含量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清清蛋白量。
试剂:1.10mol/L溴甲酚绿储存液(BCG储存液)：称取溴甲酚绿 1.75g，溶于5mL 1mol/LNaOH溶液中，加蒸馏水至250mL，置棕色瓶保存。
2.0.5mol/L琥珀酸缓冲储存液(pH4.0)：称取氢氧化钠10g，琥珀酸56g，溶解于800mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至4.10±0.05，加蒸馏水至1L，置4℃保存。
3.叠氮钠储存液：称取叠氮钠40g溶于1000mL蒸馏水中。
4.聚氧乙烯月桂醚(Brij-35)溶液：称取聚氧化乙烯月桂醚25g，加蒸馏水80mL，置60℃左右水浴使其溶液，然后加蒸馏水至100mL。
5.BCG试剂：于1L容量瓶中加蒸馏水400mL，琥珀酸缓冲储存液100mL，用吸管准确加入BCG试剂储存液8mL，再加入叠氮钠储存液2.5mL，最后用蒸馏水稀释至刻度，配好的BCG试剂的pH应为4.10±0.05。
6.清蛋白标准液：市售。
操作:见下表加入物(mL) R S B待测血清0.02——清蛋白标准液(40g/L) —0.02—蒸馏水——0.02BCG试剂 4.0 4.0 4.0充分混匀，置温室10min,，以B管校(0)，λ=630nm比色。
计算：血清清蛋白（g/L）＝ＡR／ＡS×Ｃs结果报告：被检者＿＿＿血清清蛋白（Ａ）_______g/L [35g/L~55g/L]检验者___ , 年___月____日注意事项：1.BCG与蛋白质结合的特异性较低。
血清浆蛋白质测定
第七章血清(浆)蛋白质测定实验34双缩脲法测定血清总蛋白【原理】血清(浆)中蛋白质的肽键(-CO-NH-)在碱性溶液中能与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物。
此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲(H2N-OC-NH-CO-NH2)在碱性溶液中与铜离子作用形成紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。
这种紫红色络合物在540nm处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
【试剂与器材】可购商品试剂或自配。
1．6 mol/L NaOH溶液称取NaOH 240g，溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)约800ml中，冷却后定容至1 L，贮于有盖塑料瓶中。
若用非新开瓶的NaOH，须先配成饱和溶液，静置2周左右，使碳酸盐沉淀，其上清饱和NaOH溶液经滴定后，算出准确浓度再使用。
2．双缩脲试剂称取硫酸铜结晶(CuSO4·5H2O) 3g溶于新鲜制备的蒸馏水(或刚煮沸冷却的去离子水)500ml中，加入酒石酸钾钠(NaKC4H4O6·4H2O，用以结合Cu2+，防止CuO在碱性条件下沉淀)9g和KI(防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu2O的离析)5g，待完全溶解后，在搅拌下加入6mol/L NaOH溶液100ml，并用蒸馏水定容至1L，置塑料瓶中盖紧保存。
此试剂室温下可稳定半年，若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
3．双缩脲空白试剂除不含硫酸铜外，其余成分与双缩脲试剂相同。
4．60～70g/L蛋白质标准液常用牛血清白蛋白或收集混合血清(无黄疸、无溶血、乙型肝炎表面抗原阴性、肝肾功能正常的人血清)，经凯氏定氮法定值，亦可用定值参考血清或标准白蛋白作标准。
但定值质控血清定值准确性较差，不能用作血清总蛋白测定的标准物。
5．仪器 自动生化分析仪或分光光度计。
【操作步骤】1．生化自动分析仪法 按试剂盒说明书提供的参数进行操作。
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血清白蛋白ALB溴甲酚绿BCG法测定
1.实验原理
在pH值4.2时，白蛋白和溴甲酚绿染料结合产生蓝绿色复合物，在630nm处比色，颜色的深度与白蛋白浓度成正比。
pH4.2
白蛋白+溴甲酚绿--------------绿色化合物
2. 标本采集
2.1 病人准备：无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆。
3. 标本存放留取标本后请尽快分离血清/血浆。
在室温条件下（15～25℃）可以稳定一周，在冰箱保存的条件下（2～8℃）稳定一个月，-20℃保存至少可以稳定3个月。
4. 标本运输室温条件下运输
5. 标本拒收标准：细菌污染的不能做测定。
6. 实验材料:
6.1 上海奥林巴斯白蛋白测定试剂盒
6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。
6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为24个月。
试剂不可冰冻。
开盖后应避免污染。
6.1.3 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.4 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪
8. 操作步骤
8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以TruCal U复合校准品白蛋白校准值或标准品标准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。
手工测定计算方法为：
Au
白蛋白(g/L)= ×校准液浓度
As
12. 参考值范围
成人35～52g/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13. 临床意义：白蛋白是血浆中多种物质重要的结合与运输蛋白，并是维持血浆渗透压的主要组分。
血清白蛋白可用于众多疾病的诊断。
血清白蛋白升高通常见于脱
水的。
血清白蛋白降低多见于营养不良、肾脏疾病，肝脏疾病，感染性疾病，严重的烧伤和癌症。
白蛋白的定量测定有助于对肝脏疾病如肝硬化的诊断与监视。
此外，白蛋白量反映了个体的健康与营养状况，因此可用于营养不良的诊断及老年住院患者的预后评估。
14. 操作性能
14.1 线性范围2～60g/L
14.2 精密度：重复性的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内重复性小于3%，总不精密度小于3%。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密
度
n=20
x
(g/L)
s
(g/L)
CV
(%)
天间精密
度
n=20
x
(g/L)
s
(g/L)
CV
(%)
样品1 35.2 0.3 0.91 样品1 33.5 0.5 1.58 样品245.0 0.5 1.12 样品243.2 0.6 1.44 样品368.9 1.2 1.79 样品367.3 1.1 1.60
14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对59个样品进行ALB检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-1.1g/L；r=0.998 14.4 灵敏度：2g/L。
14.5 病人结果可报告范围：2～60g/L，如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
15. 超出范围结果处理本法线性上限为60g/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
16. 病危报警值的处理
17. 方法局限性
17.1本法线性上限为60g/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，胆红素浓度≤684μmol/L，血红蛋白浓度≤ 4.00g/L，甘油三酯浓度≤5.63mmol/L时没有观察到干扰。
18. 补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19. 参考文献
1.DOUMAS, B., WATSON, W. A., BIGGS, H. G., CLIN CHIM ACTA 1971; 31: 87-96
2. WEBSTER, D., CLIN CHIM ACTA 1974; 53: 109-115
3. TIETZ, N. W.: TEXTBOOK OF CLINICAL CHEMISTRY, 2N D EDITION, W. B. SAUNDERS COMPANY, PHILADELPHIA, 1994: 703
4.A ACC Press Friendman,R.B.,and Young,D.S.,Effects of Disease on Clinical Laboratory Tests,2nd Edition,1989.
5.R odkey,F.L.,Clin Chem,2:478;1965
6.D oumas,B.T.,Watson,W.A.and Biggs,H.G.,Clin Chem Acta 31:87-96,1971.
7.T ietz,N.W.,Clinical Guide to Laboratory Tests,2n d Edition,W.B.Saunders,1990.
8.N CCLS,Interference Testing in Clinical
Chemistry,EP7-P,1986.
9.Y oung,D.S.,Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests,4t h Edition,AACC Press,1995.
10.NCCLS,Guideline EP5-T2,1992.
20. 其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。