动物细胞培养的注意事项
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告第一篇：一、实验目的1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。
动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。
被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。
孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。
制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
动物细胞培养及海水鱼类细胞系的建立-中山大学
原代细胞的分离和制作
人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细 胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于 周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块 充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下：
一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方 法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时 间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞， 离心沉淀用无钙、镁PBS洗两次，用培养基洗一次后，调整适当细胞浓 度后再分瓶培养，若选用悬液中某些细胞，常采用离心后的细胞分层液， 因为，经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这 样可根据需要收获目的细胞 ．
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二、实体组织材料的分离方法
（一）机械分散法
所取材料若纤维成分很少，如脑组织，部分胚胎组织可采用剪刀剪切、用吸管吹打分 散组织细胞或将已充分剪碎分散的组织放在注射器内（用九号针），使细胞通过针头 压出，或在不锈钢纱网内用钝物压挤（常用注射器钝端）使细胞从网孔中压挤出。此 法分离细胞虽然简便、快速，但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差。此法仅适 用于处理纤维成分少的软组织。
肿瘤学、病毒学、分子生物学
等领域已得到广泛的应用。
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动物细胞培养基本流程
剪碎，胰蛋白酶
动物组织 分离细胞
单个细胞 原代培养
原代细胞 传代培养
细胞株 （遗传物质没有发生改变）
细胞系 （遗传物质发生改变） 4
细胞培养的材料准备 1 细胞培养液 2 胰酶消化液 3 PBS缓冲洗涤液 4 洁净无菌的细胞培养瓶、培养板
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细胞培养基应用选择精要
L6细胞培养注意事项
尚恩生物| L6细胞(大鼠骨骼肌成肌细胞)培养教程细胞名称： L6(大鼠骨骼肌成肌细胞)细胞别称： L-6; L-6 myoblast细胞货号： SNL-030生长特性：贴壁培养条件： DMEM+10% FBS+1% P/S培养环境：空气，95%；二氧化碳(CO2)，5%；37℃细胞简介： L6成肌细胞是由Yaffe从大鼠大腿肌的原代培养物在3-甲基胆蒽存在下培养2代后分离得到，Yaffe称其为L6，因为他和Sara Neuman在1967年的六日战争中建立了该细胞系。
L6细胞在培养基中可融合形成多核的肌管和横纹肌纤维，细胞融合的程度随着代数的增加而下降，因而L6细胞应冷冻于低代次阶段并周期性地重新克隆以选择融合能力强的细胞。
如果让培养容器中的细胞长满，L6细胞的成肌组分将迅速耗尽。
L6细胞表达肌球蛋白基因，是一种合适的转染宿主，经测试，鼠痘病毒呈阴性。
▲细胞正常生长形态照片L6细胞培养注意事项1细胞贴壁较弱该细胞贴壁比较弱，消化时间偏短，注意控制消化时间。
另外，在遇到运输震荡、低温、室温静置太长时间、添加的培养基或其他试剂过冷等情况时会出现明显的细胞回缩变粗变短甚至脱落的现象，及时放回培养箱静置培养后可恢复正常。
2注意控制细胞密度密度过高和过低都会影响细胞状态。
密度过低时，细胞生长速度减慢；长满后长时间高密度培养将导致细胞受损，且成肌组分将耗尽影响后续实验。
建议细胞生长至80%密度时立即传代。
3细胞生长较快注意每天观察细胞密度和培养基颜色，及时换液或传代。
应注意每天传代对细胞不利，通过控制接种密度将传代频率保持在2天左右传一次为宜。
4容易聚集成团该细胞传代容易聚集成团，传代的时候注意尽量吹散细胞。
动物细胞培养实验2
实验题目：动物细胞培养教师：XXX实验类型：综合学时：26(参考)内容：一、实验目的通过本实验了解原代细胞与传代细胞培养的基本方法以及在细胞培养过程中严格的操作程序。
初步掌握无菌操作的基本原则，认识无菌操作在细胞培养中的重要性。
二、实验原理原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。
这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官）经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。
细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。
要使细胞能在体外生长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。
二是严格控制无菌操作。
三、试剂与器材1.材料出生后2-3天的乳鼠2.试剂平衡盐液－Hank液细胞消化液 0.5%水解乳蛋白-Hank液犊牛血清碳酸氢钠 1万单位/ml青、链霉素 3%谷氨酰胺磷酸盐缓冲液3.实验器材镊子解剖刀剪眼科剪眼科镊纱布块玻璃漏斗量筒记号笔试管试剂瓶三角瓶移液管培养皿培养瓶吸管橡皮头显微镜血细胞计数板计数器酒精灯酒精棉球试管架试管解剖板碘酒棉球口罩二氧化碳培养箱超净工作台灭菌锅倒置显微镜四、实验内容原代培养：取肾→消化分散组织→计数与稀释→分装培养→观察。
传代培养：配置培养液→消化细胞→细胞计数→培养观察。
培养细胞冷冻保存。
五、关键步骤及注意事项1. 注意无菌操作，及时更换培养液。
六、思考题1. 简述细胞传代培养的操作程序注意事项？2. 细胞培养获得成功的关键要素是什么？3. 简述体外培养细胞的形态特征及其生长阶段。
动物细胞培养
实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。
细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。
本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。
Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。
二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
三、实验材料、用品材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜(直径25)：孔径为0．22μm，微孔滤膜(直径90)：孔径为0．22 μm，过滤器(直径25)。
药品：70％或75％酒精，0．1％新洁尔灭，煤酚皂溶液(来苏儿水)，0．5％过氧乙酸，乳酸，37％甲醛，高锰酸钾，NaOH，盐酸，重铬酸钾，浓硫酸(工业)，DEPC水[体积分数0．1％的焦炭酸二乙酯(diethylpyroearbonate)]。
动物细胞培养方法
动物细胞培养方法
动物细胞培养是一种常用的实验手段，广泛应用于细胞生物学、药物研发、生物医学研究等领域。
以下是一般性的动物细胞培养方法：
1.细胞系的选择：选择合适的动物细胞系是动物细胞培养的第一步。
细胞系的选择要考虑细胞类型、来源、生长特性和用途等因素。
2.细胞培养基的准备：准备适用于所选细胞系的培养基。
培养基包括基本培养基和补充物，如生长因子、抗生素等。
不同的细胞系需要不同的培养基。
3.细胞的解冻：从冷冻保存的细胞库中取出细胞，进行解冻。
解冻过程要尽可能快速，以减少细胞对冷冻损伤的敏感性。
4.细胞传代：当细胞达到一定的密度时，需要将其传代，以维持细胞的生长状态。
传代过程包括细胞的分离、计数和重新接种。
5.细胞培养条件的控制：控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
通常细胞培养箱会提供稳定的培养环境。
6.细胞的观察和检测：定期观察细胞的形态、生长状态，并进行必要的细胞检测，如细胞计数、细胞周期分析等。
7.防止细胞污染：严格遵循无菌操作规程，防止培养物受到细菌、真菌、支原体等的污染。
使用无菌操作室和经过无菌处理的实验器材。
8.制备细胞冻存物：定期制备细胞冻存物，以备将来使用。
冻存物的制备需要使用适当的冻存液和合适的冷冻保存温度。
9.特殊操作：针对具体实验需求，可能需要进行细胞转染、感染、药物处理等特殊操作。
在进行动物细胞培养时，实验者需具备丰富的培养经验和相关技能，同时需按照实验室的标准操作规程进行操作，以确保实验的准确
性和可重复性。
动物细胞培养
概念动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。
细胞培养是指细胞在体外条件下的生长，动物细胞在单独细胞培养的过程中不再形成个体。
2简介动物细胞培养液的成分体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素等。
将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。
由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。
[1]动物细胞培养液的特点液体培养基、通常含动物血清。
动物细胞培养的条件1.无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。
此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
2.营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等）3.血清和血浆(提供细胞生长必须的营养成份)4.温度和pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4）5.气体环境（95%的空气+5%CO动物细胞培养2的混合气体）其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定基本过程取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。
将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。
悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。
当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现接触抑制。
此时需要将出现接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。
再配成一定浓度的细胞悬浮液。
另外，原代培养就是从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。
当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大以后，科学家接着进行传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。
动物细胞培养管理制度
动物细胞培养管理制度一、培养基的准备和管理1.1 培养基的准备1.1.1 培养基成分的准备应严格按照配方进行，精确称量各种成分，尽量避免因操作不当或器皿受到污染导致成分比例出错。
1.1.2 培养基成分的保存应在密封、阴凉、干燥、无异味的条件下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.1.3 开启新瓶或新袋的培养基前，应先用无菌液体将外包装表面消毒，避免外包装受到污染，然后在洁净无菌的操作台上打开瓶盖，尽量避免让空气中的微生物进入培养基内。
1.2 培养基的管理1.2.1 包装好的培养基应有清晰的标签，标注成分、配制日期、有效期等信息，并存放于适当的温度下，避免受到阳光直射和高温影响。
1.2.2 一旦发现培养基外观发生变化，如颜色、透明度等明显异常，应停止使用，并将问题培养基送至实验室进行分析检测。
1.2.3 使用的培养基应记录每次使用的日期、批号、制备者等信息，以便后期的追踪和管理。
二、细胞的培养和传代2.1 细胞的培养2.1.1 在细胞培养前，应先对工作台、培养箱等培养环境进行必要的消毒处理，保证操作环境的无菌。
2.1.2 培养细胞前，应仔细查看细胞培养饲养瓶或培养皿，检查是否有异物或污染，如有，应立即处理或更换合适的饲养瓶或培养皿。
2.1.3 细胞培养进程中，应定期检查细胞的状态，如细胞的形态、密度、生长速度等，一旦发现异常应及时进行处理。
2.2 细胞的传代2.2.1 传代前，应先对饲养瓶或培养皿中的细胞进行观察和计数，掌握细胞的状态和数量，以确定需要传代的细胞数目。
2.2.2 传代操作时，应注意操作的轻柔、迅速和无菌，避免对细胞造成机械性损伤或污染。
2.2.3 传代后，应对培养皿或饲养瓶进行标记，记录传代的日期、次数等信息，以便后期的追踪和管理。
三、细胞的冻存与解冻3.1 细胞的冻存3.1.1 冻存前应检查细胞的状态、数量和培养基的成分是否符合冻存要求，然后进行冻存液的配置和标记，避免出错。
3.1.2 冻存过程中，应确保细胞在冻存容器内的均匀分布，避免出现细胞团或细胞沉积现象，影响细胞的存活率。
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动物细胞培养的注意事项
动物细胞培养是生物学研究和医学实验中重要的工具之一。
在进行动物细胞培养时，需要注意以下几个方面的问题，以确保实验的顺利进行和结果的准确性。
1. 培养基的选择
选择适当的培养基是动物细胞培养的基础。
不同种类的动物细胞对培养基的要求不同，因此在培养细胞前需要了解所使用细胞的特点，选择合适的培养基。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等，可以根据实验需求添加适当的补充物。
2. 细胞的来源
细胞的来源对实验结果有重要影响。
通常，细胞可以从动物组织中分离得到，也可以通过购买商业化的细胞株获得。
在选择细胞来源时，需要考虑细胞的纯度、稳定性和应用范围等因素。
3. 细胞的处理和传代
在进行细胞培养时，需要注意细胞的处理和传代方法。
细胞的处理包括细胞的分离、传代和冻存等步骤。
分离细胞时应注意使用适当的酶或缓冲液，避免对细胞造成损伤。
传代时要控制细胞的密度和培养时间，避免细胞过度增长或老化。
4. 培养环境的控制
细胞的培养环境对细胞的生长和功能表达有重要影响。
在培养细胞时，需要控制培养箱的温度、湿度和二氧化碳浓度等因素。
通常细胞培养温度为37摄氏度，CO2浓度为5%。
同时，还需要注意培养器具和培养基的无菌操作，避免细胞受到外源性微生物的污染。
5. 细胞的检测和鉴定
在进行动物细胞培养时，需要对细胞进行检测和鉴定，以确保细胞的纯度和功能。
常用的细胞检测方法包括形态学观察、细胞计数、细胞周期分析和免疫细胞化学等。
此外，还可以使用PCR和酶切等分子生物学方法对细胞进行鉴定。
6. 细胞的存储和传输
细胞的存储和传输是细胞培养的常用操作。
存储细胞时，可以使用液氮冻存或干冰冻存等方法，注意选择适当的冻存液和冻存温度。
传输细胞时要注意包装和运输条件，避免细胞受到振动和温度变化等因素的影响。
7. 实验的伦理和安全
在进行动物细胞培养实验时，需要遵守伦理规范和安全操作。
尊重动物权益，遵循实验动物使用的伦理原则。
同时，要注意实验室的安全措施，如佩戴实验手套、口罩和实验服，避免对自身和他人造成伤害。
动物细胞培养是一项复杂而重要的实验技术，在进行动物细胞培养
时，需要注意培养基的选择、细胞的处理和传代、培养环境的控制、细胞的检测和鉴定、细胞的存储和传输、实验的伦理和安全等方面的问题。
只有在严格遵守操作规范和注意事项的前提下，才能获得准确可靠的实验结果，为科学研究和医学实践提供有力的支持。