芸香苷的提取分离和鉴定优秀课件
芸香苷的提取精制水解和鉴定(共9张PPT)
• 实验器材：
• 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏水、
浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%盐酸溶 液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、1%醋酸镁甲醇
溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、
层析筒、试管
第2页，共9页。
实验内容与方法：
第6页，共9页。
• 2．呈色反应 • 取芸香苷和槲皮素约10mg，各用5ml乙醇溶解，制成样品溶
液，按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。 • （1）Molish反应 取样品溶液1ml，加10%α-萘酚溶液1ml，振摇
后斜置试管，沿管壁滴加浓硫酸，静置，观察并记录液面交界处颜 色变化。
实验内容与方法：
1%氢氧化钠
溶液数滴，振摇使芸香甙全部溶解成为黄色澄明溶液，然 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、烧杯、层析筒、试管
实验二 芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
（2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色变化。
后再滴加1%盐酸溶液数滴至成酸性反应，溶液则由澄 （3）醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1%醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外灯下观察荧光变
取槐花米20g（ห้องสมุดไป่ตู้碎），置于1000ml圆底烧瓶中，加0.
渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰 实验注意事项
（2）盐酸镁粉反应 芸香甙与槲皮素溶液分别置于试管中，加入金属镁粉少许，浓盐酸2~3滴，观察并记录颜色变化。
箱中析晶（一夜以上），待全部结晶析出，抽滤，得 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时，开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定二.ppt
香苷的乙醇液作为供试液做芸香苷化学检识反应。
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 1、盐酸—镁粉反应：取供试液2ml于试管中，加 入少许镁粉，再向试管中滴加浓盐酸数滴，观察 现象。
• 2、三氯化铝反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液 （注意相互不要晕染），其中一滴作为空白对照， 另一滴上面滴一滴三氯化铝溶液。观察二者颜色 变化，并在紫外灯下观察荧光。
• 3、氨熏反应：在滤纸片上分别滴两滴供试液，其 中一滴作为空白对照，将另一滴点有供试液的部 分倒扣在浓氨水的瓶口上。观察二者颜色变化。
槐花中芸香苷的提取分 离、精制、鉴定（二）
Байду номын сангаас
槐花中芸香苷的提取分离、精制、鉴定（二）
• 一、实验目的：使芸香苷在水中重结晶，去除杂质达到精 制的目的。
• 二、实验原理：芸香苷粗品易溶于热水，难溶于冷水。 • 三、操作步骤： • （一）抽滤得到芸香苷粗品。 • （二）芸香苷的精制 • 取芸香苷粗品5/6份，置于500ml烧杯中，加蒸馏水300ml
芸香苷的提取、精制、水解和鉴定
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• 实验器材： • 试药：槐花米、0.4%硼砂水溶液、石灰乳、蒸馏
水、浓盐酸、2%硫酸、乙醇、1%氢氧化钠溶液、 1%盐酸溶液、10%α-萘酚溶液、浓硫酸、镁粉、 1%醋酸镁甲醇溶液、正丁醇、醋酸 • 仪器：电炉、漏斗、紫外分析仪、锥形瓶、量筒、 烧杯、层析筒、试管
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实验内容与方法：
• 一、芸香苷的提取 • 取槐花米20g（研碎），置于1000ml圆底烧瓶中，
加0.4%硼砂水溶液200ml，在搅拌下加石灰乳调PH8， 加热微沸30分钟，静置几分钟倾出上清液，用棉花 过滤，药渣同上重复一次。合并滤液用6N盐酸调 PH2~3，放置冰箱中析晶（一夜以上），待全部结 晶析出，抽滤，得粗芸香苷（滤饼用水洗3~4次）， 放置空气中自然干燥得粗品，称重、计算提取率。
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实验内容与方法：
• 二、芸香苷的精制
• 取2g加蒸馏水400ml，加热煮沸溶解，趁热 抽滤，滤液放置过夜，析晶，抽滤，得精制 芸香甙。烘干。
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实验内容与方法：
• 三、芸香苷的水解
• 取精制芸香甙1g，置250ml圆底烧瓶中，加 2%H2SO4溶液80ml，加热回流30分钟至1小时， 开始加热10分钟为澄清液，逐渐析出黄色小针状结 晶，即为槲皮素。放冷抽滤得结晶，滤液保留作为 糖的检查，沉淀物用蒸馏水洗至中性，抽干水份， 晾干称重，得粗制槲皮素。必要时可用稀乙醇重结 晶。
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• 五、芸香苷及槲皮素的纸层析鉴定 • 层析材料：层析滤纸 • 点 样：（1）提取的芸香苷乙醇溶液
（2）提取的槲皮素乙醇溶液 • 展开剂：正丁醇∶醋酸∶水（4∶1∶5）上层溶液 • 显色：（1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在
芸香苷的提取分离和鉴定
四、基本原理
HO O
OH
OH
OR OH O
芦丁
R=-Glu-Rha
冷水：1： 8000 热水：1：200
槲皮素 R=H
五、提取、分离流程
槐米(压碎) 20 g
沸水300 ml, 加热30 min,棉花过滤 两次滤液合并
室温放置，析晶
抽滤
粗制芦丁
取 2 g，加水400 ml，煮沸 趁热抽滤 冷却后，析晶，抽滤
精制芦丁
六、芦丁的水解
精制芦丁1 g 置于250 ml 圆底烧瓶， 加入2%H2SO4100ml， 加热回流30min
生成黄色沉淀（注意观察现象） 放冷，析晶，抽滤
滤液 沉淀（槲皮素） 取10ml,加饱和Ba(OH)2中和， 至中性，过滤 滤液 水浴60℃，浓缩至2~3ml，乙醇溶解
（糖的供试液）
紫外光谱：加入诊断试剂，分析光谱 数据，解析结构 参数：200～600 nm
核磁共振谱： 归属芦丁和槲皮素的氢谱和碳谱信号
七、化合物的检识
呈色反应
色谱分析
呈色反应
Molish 反应
盐酸-镁粉 反应 ຫໍສະໝຸດ 三氯化铝 反应色谱分析 聚酰胺色谱：检测芦丁，槲皮素
展开剂： 甲醇－水（8：2）
显色剂：三氯化铝试剂
纸色谱：检测糖 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4：1：5）上层 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸
波谱鉴定
芦丁的提取、精制和鉴定
中药化学实验室
一、实验目的
1、熟悉苷类化合物的提取、精制及鉴定方法。 2、掌握黄酮苷水解制苷元的方法。
3、掌握紫外光谱在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。
二、实验内容
• • • • 芦丁的提取和精制 芦丁水解制取苷元槲皮素 化合物的检识 波谱鉴定
槐米中芸香苷提取分离及检识
沉淀物为芸香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽
干水分，烘干，称重。得槲皮素。
OH OH
H+
HO
O OH OH O
芸香苷 芸香苷
槲皮素
CH2OH O OH OH OH OH
+
OH CH3
O
OH OH OH
葡萄糖
鼠李糖
O
H C l H O 2
C l + O
O O H
芸香苷的水解
槲皮素
将上次实验所得溶液抽滤，在60～70℃烘干，得精制 芸香苷。 取精制芸香苷1g，置250ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸 80ml，加几粒沸石，加热回流1h，瓶中浑浊液逐渐变 为澄清的棕黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷， 抽滤，丢弃滤液（应为澄清无色液体），沉淀物为芸 香苷苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分， 烘干，称重。得槲皮素。
展开剂：乙醇 : 水 : 乙酸乙酯（3:1:0.5）约4ml，上行展开。 展距：6cm。
显色剂：①在可见光下观察斑点颜色，再在紫外灯下观察斑点颜色。 ②用氨水熏，记录斑点颜色和位置。 结果：记录图谱，斑点颜色，并计算芸香苷和槲皮素的Rf值。
聚酰胺色谱法是利用作为固定相的聚酰胺 分子内存在的许多酰胺基，能与酚类的羟
槐米中芸香苷提取分离及检识
OH HO O OH H 2C OH O O O OH OH 槲皮素 OH 葡萄糖 芸香糖 芸香苷 鼠李糖 O OH O OH CH 3
实验原理： 1.芸香苷分子中含具有酚羟基，能与 碱成盐而溶于碱液中，加酸酸化后又 可沉淀析出，可用碱溶酸沉法提取芸 香苷。
OH
2.在热水中溶解度大, 冷水中溶解度
槲皮素
OH
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定芦丁（Rutin）亦称芸香甙（Rutisude）,广泛存在于植物界中。
现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、养麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。
尤以槐花米和养麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。
槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L）的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~ 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。
芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。
临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。
槐花米中主要化学成分的结构及性质：1. 芦丁（Rutin）淡黄色细小针状结晶，C ~178C （含三分子结晶），188C （无水物）。
溶解度：水：1:100（冷），1:200（热）甲醇：1:100（冷），1:9（热）乙醇：1:650（冷），1:60（热）吡啶：1:（冷），易溶（热）不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。
可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。
2. 槲皮素（Quercetin）即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313C ~314C （含2分子结晶水），316C （无水物）。
溶解度：乙醇：1:290（无水乙醇），1:23（热）可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。
不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。
3. 皂甙粗品为白色粉末，mp.210C ~220C （分解）。
易溶于水、吡啶，能溶于200咅的甲醇中。
酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。
（1）白桦脂醇（Betulin）无色针晶，°C ~252C。
能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、苯、乙醚等溶剂，难溶于石油醚及水。
(2) 槐二醇(Sophoradiol)无色针晶，C ~220C或224E。
能溶于石油醚、苯、丙酮、甲醇中，难溶于水。
实验芸香苷的提起
【实验材料】槐花米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、乙醇、70%乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%三氯化铝乙醇溶液、2%氯氧化锆甲醇溶液、2%枸椽酸甲醇溶液、10% α-萘酚乙醇溶液、浓硫酸、2%硫酸溶液、葡萄糖标准品、鼠李糖标准品、芸香苷标准品、槲皮素标准品、碳酸钡、氨制硝酸银试液、广泛pH试纸、中速层析滤纸（4cm×15cm）。
【实验原理】（一）芸香苷又名芦丁（Rutin），维生素P，紫槲皮苷。
分子式C27H30O16，分子量610.51。
浅黄色针晶（水），mp.176℃～178℃，[]23Dα+13.82°(乙醇)，[]23Dα-39.43°（吡啶）。
在各种溶剂中的溶解度为：难溶于冷水（1∶8000～10000）、可溶于热水（1∶200）、热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶60）、冷乙醇（1∶650）、可溶于吡啶及碱性溶剂，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
由于分子中含有多个酚羟基，易被氧化，在空气中久置会使芸香苷颜色加深，尤其在碱性溶液中更易氧化。
OHOO glu OHOHO rha芦丁（二）槲皮素（Quercetin）又名栎精，槲皮黄素。
分子式C15H10O2，分子量 302.23。
为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，在95℃～97℃成为无水物。
mp.314℃（分解）。
能溶于冷乙醇（1∶290），易溶于沸乙醇（1∶23），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸及吡啶等溶剂，不溶于水、苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。
（三）其他成分槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）、白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、单宁等。
本实验利用芸香苷分子结构中含有多个酚羟基，显弱酸性，能与碱作用生成盐而溶于碱水，加酸酸化后又能沉淀析出的性质，采用碱溶酸沉淀法进行提取。
利用芸香苷在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质，用水作溶剂进行重结晶精制。
实验一槐花米中芸香甙的提取
实验一槐花米中芸香甙的提取、精制和检识芸香甙亦称芦丁（Rutin），广泛存在于植物界，已发现的芦丁植物至少在70种以上，以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，本实验以槐花米作为提取芦丁的原料。
槐花米系豆科植物Sophora joponia L的未开放花蕾，其中芦丁含量高达23.5%，槐花开放后降至13.0%。
芦丁除用作治疗毛细管脆弱引起的出血症和高血病的辅助治疗剂外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Ruercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啉芦丁、6-二乙胺基芦丁等。
槐花米中除含有芦丁外，还含有白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、皂甙以及槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）和多糖粘液质等。
芸香甙的结构一、槐花米主要成份的理化性质1. 芦丁：是槲皮素3位羧基与芸香糖（Rutinose）脱水缩合成的甙。
浅黄色粉末或极细的针状结晶，含3分子结晶水（C27H36O16·3H2O），mp ll7~178℃。
在110℃ 10mmHg下真空干燥12小时变成无水物，无水物易吸湿，可从大气中吸收约2.5分子水份。
无水芦丁在125℃变褐，在190~192℃变成胶状，当温度升至214~215℃发泡分解。
芦丁溶解度在冷水中1∶10000，热水中1∶200，冷乙醇中1∶300，热乙醇中1∶30，沸甲醇中1∶7，冷吡啶中1∶12，微溶于丙酮、乙醇乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
UV λmax nm：259，266（sh），299（sh）。
芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中，酸化后又析出，因此可以用碱溶液沉的方法提取芦丁。
芦丁分子因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中，在光的作用下，能缓缓分解，变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解，硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的，故在碱性条件溶液中加热提取芦丁时，往往在加入少量硼砂，就是保护芦丁减少氧化分解。
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e. 锆－柠檬酸反应 取样品溶液2 ml，加入2%二氯氧锆甲醇溶液3滴～4 摘，观察颜色，然后加入2％柠檬酸甲醇溶液3滴～4滴，观察并记录颜色变 化。
2.色谱鉴定 a. 芸香苷和槲皮素的纸色谱 层析材料：定性滤纸。 点 样：提取的槲皮素承芸香苷的乙醇溶液和对照品的乙醇溶 液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：预饱和后，上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外光灯、 （365nm）下检视色斑的变化。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。 b. 芸香苷与槲皮素的聚酰胺色谱 层析材料：聚酰胺薄膜。
点 样：提取的芸香苷与槲皮素的乙醇溶液和对照品的乙醇溶液。 展开剂：乙醇－水（7:3）或甲醇－水（8:2）。 展开方式：上行展开。 显 色：喷洒三氯化铝试剂前后，置日光及紫外灯光（365nm）下检视色斑 的变化。 观察记录：记录图谱及斑色颜色。 c. 糖的色谱鉴定 层析材料：定性滤纸。 点 样：糖的供试液及葡萄糖、鼠李糖对照品溶液。 展开剂：正丁醇－醋酸－水（4:1:5）上层溶液。 展开方式：上行展开。 显 色：苯胺－邻苯二甲酸试液，喷洒后先用电吹风冷吹至于，再吹热风 至出现斑点为止。 观察记录：记录图谱及斑点颜色。
a. Molish反应 取样品溶液l ml，加10％α-萘酚溶液0.5 ml，振摇后斜置 处颜色变化。
b. 盐酸－镁粉反应 芸香苷与槲皮素溶液分别置于两试管中，加入金属 镁粉少许，盐酸2滴～3滴，观察并记录颜色变化。
c. 醋酸镁纸片反应 取两张滤纸条，分别滴两滴芸香苷、槲皮素的乙醇 溶液，然后各加1％醋酸镁甲醇溶液两滴，于紫外光灯下观察荧光变化，记 录现象。
芸香苷的提取分离和鉴定
二、实验原理
主要是利用芸香苷的物理化学性质对其进行提取分离。
三、操作要点
1.芸香苷的提取－水提取法
称取槐花米粗粉20 g（压碎），加沸水300 ml，加热煮沸 30 min，纱布趁热过滤，残渣同法再操作一次，合并两次滤 液，室温放置析晶，待全部析出后，减压抽滤，用蒸馏水洗 涤芸香苷结晶，抽干，得粗制芸香苷，置空气中干燥后，称 重。
取芸香苷水解后的滤液10 ml，加饱和氢氧化钡溶液（或 碳酸钙粉末）中和至中性，滤去白色的硫酸钡沉淀，滤液水 浴60℃浓缩至2～3 ml，加2～3 ml乙醇溶解，作为糖的供试液。
四、鉴定
1.呈色反应
取芸香苷及槲皮素精品约10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成样品溶液， 按下列方法进行试验，比较苷元和苷的反应情况。
2.芸香苷的精制
取粗制芸香苷2 g，加蒸馏水400 ml，煮沸至芸香苷全部 溶解，趁热抽滤，冷却后即可析出晶体，抽滤，得芸香苷精 制品，置空气中干燥后，称重。
3.芸香苷的水解
取精制芸香苷1g，研细后置于250ml圆底烧瓶中，加入2% 硫酸100ml，加热回流30min，瓶中混浊液逐渐变为澄清的棕 黄色液体，最后生成鲜黄色沉淀。放冷沉淀，抽滤，保存滤 液（应为澄清无色液体），用做糖的检查，沉淀物为芸香苷 苷元（槲皮素），用蒸馏水洗至中性，抽干水分，晾干，称 重。粗制槲皮素再用50%乙醇重结晶得精制的含2分子结晶水 的槲皮素。