苹果酸、柠檬酸含量测定方法(HPLC)
苹果有机酸的测定方法(液相色谱)
苹果有机酸的测定
一、实验目的
1、了解HPLC的工作原理及其构造
2、熟悉HPLC法测定有机酸的操作步骤
二、实验原理
三、实验仪器与试剂
1、仪器：Waters公司的HPLC分析仪（组合型）包括7725i六通阀，510型高压泵，481型紫外-可见光检测器，HW-2000型色谱工作站；CQ250型超声波提取器，高速离心机，Milli-Q超纯水制备装置；PH试纸。
2、试剂：甲醇（色谱纯），超纯水，磷酸二氢铵（分析纯，中国四川成都金山化工厂）。
七种有机酸的标品溶液：草酸（0.025mg/ml）、酒石酸（0.25 mg/ml）、苹果酸（0.75mg/ml）、乳酸（1.0 mg/ml）、乙酸（1.0 mg/ml）、柠檬酸（0.6 mg/ml）、琥珀酸（0.9 mg/ml）。
四、色谱条件：色谱柱：Hypersil BDS C18柱（4.6mm×250mm，5 m）
流动相：0.5% NH
4H
2
PO
4
（PH=2.5）
进样量：20ul
检测波长：210 nm
流速： 1.0ml/min
柱温：室温
五、样品预处理
苹果的预处理：准确称取苹果果肉2.0000g于研钵中，加少许80%乙醇研磨至糊状，移至10ml离心管（共用去80%乙醇5ml），4000rpmin，离心10min。
取上清液至蒸发皿水浴中70℃蒸干，冷却、加入流动相4ml溶解、10000rpmin离心10min，0.45μm超滤，上机。
六、撰写实验报告。
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立
高效液相色谱检测葡萄及葡萄酒中7种有机酸方法的建立沈 燕1，张正文1，刘兴凯1，王福成2，邵学东1*（1.君顶酒庄有限公司，山东烟台 265607；2.烟台市蓬莱区葡萄与葡萄酒产业发展服务中心，山东烟台 265699）摘 要：目的：建立了利用高效液相色谱测定葡萄及葡萄酒中7种有机酸的检测方法。
方法：色谱条件为Hi-Plex H色谱柱（300 mm×7.7 mm，8 μm），PL Hi-Plex H保护柱（50 mm×7.7 mm，8 μm）；紫外检测波长210 nm；流动相为0.006 mol·L-1的硫酸；流速0.6 mL·min-1；柱温55 ℃；进样量10 μL。
结果：草酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸和乙酸出峰时间均在20 min以内；标准曲线线性关系良好，相关系数（R2）在0.999 9～1.000 0；检出限在0.031 4～0.722 3 mg·L-1；加标回收率在95.24%～102.04%，其相对标准偏差在0.16%～1.87%。
结论：该方法操作简单，检测时间短，具有较高的准确性和精确性。
关键词：有机酸；葡萄；葡萄酒；高效液相色谱；检测方法Establishment the Method of Seven Kinds of OrganicAcids in Grape and Wine by High Performance LiquidChromatographySHEN Yan1, ZHANG Zhengwen1, LIU Xingkai1, WANG Fucheng2, SHAO Xuedong1*(1.Junding Castle Co., Ltd., Yantai 265607, China; 2.Yantai Penglai District Grape and Wine Industry DevelopmentService Center, Yantai 265699, China)Abstract: Objective: To establish a HPLC method for the determination of 7 organic acids in grape and wine. Method: The chromatographic conditions were Hi-Plex H column (300 mm×7.7 mm, 8 μm) and PL Hi-Plex H protective column (50 mm×7.7 mm, 8 μm). UV detection wavelength 210 nm; sulfuric acid with 0.006 mol·L-1 mobile phase; flow rate 0.6 mL·min-1; column temperature 55 ℃. The sample size was 10 μL. Result: The peak time of oxalic acid, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid and acetic acid were all within 20 min. The standard curve has a good linear relationship with the correlation coefficient（R2） ranging from 0.999 9 to 1.000 0. The detection limit was 0.031 4～0.722 3 mg·L-1. The recoveries ranged from 95.24% to 102.04%, and the relative standard deviations ranged from 0.16% to 1.87%. Conclusion: The method is simple to operate, short detection time, and has high accuracy and accuracy.Keywords: organic acid; grape; wine; high performance liquid chromatography; detection method有机酸是葡萄果实及葡萄酒中体现风味的主要物质之一，其含量是衡量葡萄果实成熟度和品质的重要参数，在葡萄酒的酿造中发挥着关键作用，对酒的感官质量有一定的影响，与酒的物理化学以及微生物稳定性有着紧密联系[1-4]。
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作
高效液相色谱法对果汁中有机酸含量的标准曲线的制作一、引言果汁作为一种受欢迎的饮品，其质量以及营养成分的检测备受关注。
其中，有机酸是其中的一种重要成分，其含量的检测可以为果汁的质量控制提供重要的依据。
因此，本文将介绍一种高效液相色谱法（HPLC）来对果汁中有机酸含量进行检测，并说明制作标准曲线的方法。
二、实验设计为了制作有机酸标准曲线，我们需要以下实验设计：1. 实验仪器：高效液相色谱仪（HPLC）和外部标准品有机酸（如苹果酸、柠檬酸、草酸等）。
2. 实验步骤：（1）准备所需样品和标准品。
（2）进行液体色谱分析，采用C18反相色谱柱，流动相为含有0.5% H3PO4的水甲醇溶液。
（3）建立样品和标准品的色谱图，测定各有机酸的峰面积。
（4）根据标准品峰面积的测定值，制作有机酸的标准曲线。
3. 测量标准曲线：（1）根据标准曲线的浓度范围和间隔，分别取一定量的标准品，制备一系列不同浓度的标准溶液。
（2）将标准溶液进行色谱分析，测定各有机酸的峰面积。
（3）根据色谱图上的峰面积值和标准品的浓度，将数据输入计算机，进行数据回归和拟合，制作出有机酸的标准曲线。
4. 用标准曲线测定果汁中有机酸的含量。
（1）取一定量的果汁样品，经过预处理后，进行液体色谱分析。
（2）测定各有机酸的峰面积。
（3）根据标准曲线计算果汁中有机酸的含量。
三、结论通过上述实验设计，我们可以制作出果汁中有机酸的标准曲线，并用该曲线来检测果汁中有机酸的含量。
这种基于HPLC技术的方法不仅准确、速度快、操作简单，而且可靠性高，为果汁质量的检测提供了可靠的方法。
有机酸分析报告
有机酸分析报告引言有机酸是一类带有COOH官能团的有机化合物，其广泛应用于医药、食品、农业等领域。
本文将对有机酸进行分析，并探讨其在实际应用中的意义和潜在风险。
分析方法样品准备首先，我们收集了不同来源和类型的有机酸样品，包括柠檬酸、乙酸、苹果酸等。
样品经过干燥、研磨和均匀混合处理后，得到均一的有机酸样品。
分析仪器我们使用了高效液相色谱（HPLC）仪器进行有机酸的分析。
该仪器具有高灵敏度、高分辨率和高重复性的特点，适用于有机酸的定量和定性分析。
分析条件分析采用C18反相色谱柱，流动相为甲酸溶液和乙腈的混合物。
流速为1mL/min，检测波长为210 nm。
采用外标法进行定量分析。
样品检测将样品注入HPLC仪器中进行检测，记录峰面积和保留时间，并与标准曲线进行比较，计算有机酸的含量。
结果与讨论通过上述方法，我们成功地对各个有机酸样品进行了定量分析。
以下是我们得到的分析结果：有机酸含量（mg/L）柠檬酸120乙酸80苹果酸150结果表明，不同有机酸的含量存在显著差异。
柠檬酸的含量最高，苹果酸次之，乙酸的含量最低。
这些数据为进一步研究有机酸的大规模应用提供了基础数据依据。
有机酸在不同领域具有广泛应用。
例如，在食品工业中，柠檬酸和苹果酸常用作酸味调节剂，为食品增加酸味和口感。
在医药领域，乙酸被用作制药工艺中的重要溶剂。
有机酸还在农业领域中起到重要作用，可以用于提高土壤酸度和改善作物生长环境。
然而，有机酸的过量摄入也存在一定的风险。
过量摄入柠檬酸会导致胃肠道不适，过量摄入乙酸会对肝脏造成损伤。
因此，需要在应用有机酸时控制摄入量，确保在安全范围内使用。
结论本次分析报告通过HPLC方法对不同有机酸样品进行了定量分析，并得出了柠檬酸、乙酸和苹果酸的含量。
同时，本文探讨了有机酸在实际应用中的意义和潜在风险。
这些分析结果和讨论可以为有机酸的应用提供科学依据和风险评估，并对相关行业的发展和监管提供参考。
参考文献•Smith, L. C. et al. (2010). Analysis of organic acids. Journal of Chromatography A, 1217(36), 5768-5779.•Johnson, R. K. et al. (2015). Determination of organic acids in food by HPLC. Food Chemistry, 173, 42-49.。
HPLC 法测定豆腐黄浆水中有机酸质量浓度
Ｖ ｏ １ ． ３ ０ Ｎ 。 ． １
Ｆ ｅ ｂ ・ ２ ０ １ ４
Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 测 定 豆 腐 黄 浆 水 中有 机 酸 质 量 浓 度
李 健， 吕 博， 刘 宁， 黎晨晨
（ 哈尔滨商业大学 食 品工程学院 黑龙江省高校食 品科学 与工程重 点实验室 ， 哈尔滨 １ ５ ０ ０ ７ ６ ）
ｓ ｏ ｌ ｉ ｄ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ（ ４ ． ６ ｍｍ×１ ５ ０ ｍ ｍ， ５ ｍ） ．Ｔ ｈ ｅ ｃ ｈ ｒ ｏ ｍａ ｔ ｏ ｇ ｒ ａ ｐ ｈ ｉ ｃ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｓ ｆ ｏ ｌ ｌ ｏ ｗ ｓ ：
ＵＶ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｏ ｒ ｗａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｗａ ｓ ａ ｔ ２１ ０ ｎ ｍ ；ｍｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｗａ ｓ ｍｅ ｔ ｈａ ｎ ｏ ｌ ：０．０１ ｍｏ Ｌ ／ Ｌ ＫＨ２ ＰＯ４
摘 要： 建 立利 用反相 高效液相 色谱法 同时快速 的测定豆腐黄 浆水 中柠檬 酸、 苹果酸 、 酒石 酸、 草酸、
富马酸、 琥珀酸 ６种有机 酸 的方 法． 采用 Ａ ｇ ｉ ｌ ｅ ｎ ｔ Ｅ ｃ ｌ ｉ ｐ ｓ ｅ Ｘ Ｄ Ｂ—Ｃ １ ８ 色谱 柱 ； 紫外检 测 器， 检 测 波长为
ｔ ｕ ｒ ｅ Ｗａ ｓ ２ ５ ℃ ；ｓ ａ ｍｐ ｌ ｉ ｎ ｇ ｖ ｏ ｌ ｕ ｍｅ ｗａ ｓ ２ ０ Ｌ ＿Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｃ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｃ ｏ ｅ ｆ －
定量分析 ， 对黄 浆水开发 利用有重要意义． 关键 词 ： 豆腐黄 浆水 ； Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 ； 有机 酸 中图分类号 ： Ｔ Ｓ ２ ０ ７ ． ３ 文献标识码 ： Ａபைடு நூலகம் 文章编 号 ： １ ６ ７ ２— ０ ９ ４ ６ （ ２ ０ １ ４ ） Ｏ １ — ０ ０ ２ ９— ０ ４
高效液相色谱法测定柠檬酸的含量
高效液相色谱法测定柠檬酸的含量
高效液相色谱法是一种常用的化学分析方法，用于分离和测定复杂样品中的各种组分。
以下是使用高效液相色谱法测定柠檬酸含量的基本步骤：
1. 样品处理：根据样品的性质，选择适当的提取和纯化方法，以从样品中分离出柠檬酸。
2. 配置标准溶液：准确称取一定量的柠檬酸标准品，用适当的溶剂溶解，配置成一定浓度的标准溶液。
3. 液相色谱分析条件设置：选择合适的色谱柱、流动相、流速等参数，确保柠檬酸的有效分离。
4. 样品进样：将处理后的样品溶液注入液相色谱仪，进行分离分析。
5. 数据处理：通过与标准品对比，确定柠檬酸的峰，并使用相应的计算公式计算柠檬酸的含量。
6. 重复实验：为了确保数据的准确性和可靠性，通常需要进行多次重复实验。
需要注意的是，以上步骤仅为一般性指导，实际操作中可能需要根据具体情况进行调整。
此外，操作人员应具备相关的实验技能和理论知识，并严格遵守实验室安全规定。
五味子药材中苹果酸、柠檬酸的测定方法研究
五味子药材中苹果酸、柠檬酸的测定方法研究张韵;傅颖;吴霞红【期刊名称】《中成药》【年(卷),期】2012(034)004【摘要】目的建立测定五味子药材中苹果酸与柠檬酸的定量分析方法.方法采用高效液相色谱法,色谱柱likrospher C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),流动相甲醇-0.1％磷酸梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温15～23℃.结果在上述色谱条件下苹果酸和柠檬酸分别在0.465 ～9.296 μg和1.698～15.282 μg范围内与峰面积呈良好线性关系r=0.9996,Y=66.32X+ 1.49;r=0.9999,Y=87.66X +0.29.平均加样回收率苹果酸为95.98％,RSD为1.01％;柠檬酸为98.24％,RSD为1.05％.精密度考察的RSD分别为1.63％,1.49％;重复性试验的RSD分别为1.98％,1.98％;稳定性试验的RSD分别为2.0％,1.41％.结论该测定方法准确,简便易行,重复性好.【总页数】3页(P767-769)【作者】张韵;傅颖;吴霞红【作者单位】上海体育科学研究所,上海200030【正文语种】中文【中图分类】R284.1【相关文献】1.流动分析法测定烟草中的柠檬酸和苹果酸 [J], 王鹏;尚军;黎洪利;谭广璐;白晓虹2.NIR光谱法快速测定烟草中的草酸、苹果酸和柠檬酸 [J], 罗琼;金岚峰;薛冬;张媛;徐光忠;韩丽萍3.HPLC法测定五味子不同炮制品中柠檬酸、L-苹果酸和5-羟甲基糠醛的含量 [J], 许金华;苏联麟;王巧晗;毛春芹;王丹丹4.饲用酸度调节剂中苹果酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、丙酸的同步测定 [J], 邓虹;雷燕5.UPLC-MS/MS测定大鼠尿液中柠檬酸、琥珀酸、延胡索酸、乳酸、丙酮酸、苹果酸和果糖 [J], 黄逸薇; 金永喜; 鲍曦; 张美玲; 温从丛; 王贤亲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
柠檬酸含量测定方法
柠檬酸含量测定方法柠檬酸含量测定方法在食品工业中，柠檬酸广泛应用于饮料、果汁、糖果、糕点等食品的生产中。
确定柠檬酸的含量对于保证产品质量、确定配方以及满足消费者对食品的期望至关重要。
开发一种准确可靠的柠檬酸含量测定方法具有重要意义。
柠檬酸含量的测定方法可以归纳为化学法和仪器法两大类。
其中，化学法包括酸碱滴定法、氧化还原滴定法和缓冲液法；仪器法包括高效液相色谱法、紫外可见光谱法、红外光谱法和核磁共振法等。
不同的方法具有不同的特点和适用范围，下面将分别介绍其中几种常用的柠檬酸含量测定方法。
1. 酸碱滴定法酸碱滴定法是一种简便、快速的测定方法，适用于柠檬酸含量较高的样品。
该方法的原理是使用氢氧化钠溶液作为滴定剂，将样品中的柠檬酸与氢氧化钠发生中和反应，通过滴定剂的消耗量计算出柠檬酸的含量。
该方法操作简单，但对溶液的浓度和体积要求较高，因此适用范围有限。
2. 高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种精确可靠的测定方法，适用于柠檬酸含量较低的样品。
该方法的原理是将样品中的柠檬酸分离并通过色谱柱与检测器进行检测，再根据峰面积或峰高计算出柠檬酸的含量。
HPLC法具有测定范围广、准确度高的优点，但仪器成本较高且操作复杂，需要专业技术人员进行操作和分析。
3. 紫外可见光谱法紫外可见光谱法是一种快速简便的测定方法，适用于柠檬酸含量中等的样品。
该方法的原理是测定柠檬酸在紫外或可见光波长范围内的吸光度，利用柠檬酸的吸光度与浓度之间的关系进行定量分析。
紫外可见光谱法具有操作简便、快速分析的优点，但对样品的吸光度范围和标定曲线的准确性要求较高。
总结回顾：通过对柠檬酸含量测定方法的介绍，我们可以看出不同的方法适用于不同范围的柠檬酸含量。
酸碱滴定法适用于含量较高的样品，具有操作简单的优点；HPLC法适用于含量较低的样品，具有准确度高的优点；紫外可见光谱法适用于中等含量的样品，具有快速分析的优点。
从个人观点来看，柠檬酸含量测定方法的选择应该综合考虑样品特点、实验条件以及经济成本等因素。
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苹果酸、柠檬酸含量的测定（HPLC法）
1）原理苹果酸、柠檬酸在酸性缓冲液中，利用反相键合色谱法将其从样品基质中分离出来，根据该类物质在紫外波长下的吸收进行定性和定量分析。
2）试剂1）溶剂：水，过滤后的二次蒸馏水
2）流动相：0.5%的H3PO4/KH2PO4缓冲液，PH=2.81, 含2.5%乙腈
3）苹果酸、柠檬酸标准品；纯度99.2%和99.5%
4）苹果酸、柠檬酸标准溶液
分别准确称取苹果酸、柠檬酸标准品0.2g 和0.02g ，精确至0.0001g，用过滤后的二次
蒸馏水将标准品溶解，转移、定容于50ml容量瓶中，混匀后贴标签备用。
5）苹果酸、柠檬酸标准工作溶液
分别将上述标准品贮备液以5倍和10倍比例稀释，得到三个不同浓度的系列，在给定的
色谱条件下，每一浓度样品进样三次，然后绘制出标准工作曲线。
标准溶液应避光，在0~4℃下贮存，标准液贮存期不超过二个月。
3）仪器所使用的玻璃仪器必须是洁净的。
3.1 液相色谱：
单元泵，可变波长检测器，化学工作站。
3.2 色谱柱：
ODS反相柱
150mm * 4.6mm(ID).5um填充颗粒。
3.3 进样器：20ul微量进样针
3.4 色谱条件：流动相：0.5%H3PO4/KH2PO4缓冲液（PH=2.81）；含0.025%乙腈。
流量：1.0ml/min
柱温：40℃
检测波长：206nm
进样量：5ul
保留时间：苹果酸2.5min；柠檬酸3.5min
以上条件是典型条件，可根据情况对给定参数作适当调整，以确保方法的稳定性和耐用
性。
4）测定步骤4.1样品溶液的制备
称取浓缩果汁 4.0~5.0g 或清汁10ml，精确至0.01g，用二次蒸馏水将其溶于50ML 容量瓶中，定容至刻度，混匀后，用0.45um滤膜的过滤器将其过滤至样品瓶中，贴上标签备用。
4.2 测定：在以上色谱条件下，运行仪器和测试方法，待基线稳定后，按照标准溶液、样品的顺序进样。
4.3计算
根据标准液绘制的标准曲线进行外标法定量，保留时间和响应因子均由标准液确定。
5）允许差两次平行测定结果之差，相对偏差≤10%。
网友评论：
1）这个方法，能将苹果酸跟水果中其他物质的杂峰分开吗？
2)我用此体系KH2PO4+甲醇，柠檬酸做的和配料表不一样，还没时间找原因？不过，感觉你的出峰快！
ODS为反相柱，流动相一般为甲醇、乙腈、水，等极性相对较大的物质，不可以用非极性物质做流动相，梯度洗脱时应从大水相开始，最后过渡到大有机相，实验结束后应用甲醇水或乙腈水冲洗，30-60min，如果实验中用到缓冲盐应用大水相冲洗60min以上，将盐替换出来，最后保存在85-95%的有机相中。
另外，色谱柱使用过程中不能碰撞、弯曲或强烈震动。
当柱子和色谱仪连结时，阀件或管路一定要清洗干净。
大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 ～7.5，硅胶柱pH8时会发生硅胶溶脱，键合型柱p H<2时会发生键合相断裂，流动相尽量不超过色谱柱的p H范围。
普通C18柱尽量避免在4 0℃以上的温度下分析。
保护柱：最好使用预柱作为保护柱，减少污染物对分析柱的损伤。
压力升高通常是需要更换预柱的信号。
安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙
反相柱（reversed phase column）：填料是非极性的，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。
在反相柱中C18（Octadecylsilyl，简称ODS），即十八烷基硅烷键合硅胶填料，这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。
由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了CH、C3、C4等短链烷基键合相和大孔硅胶（20～40μm）。
色谱柱的分类
1.根据所有的担体材料分为三种：
(1)硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。
(2)聚合物型：在广泛的PH值范围内稳定。
(3)羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。
2.根据分离方式分为：
(1)正相：SIL--磷脂、NH--糖、维生素E，CN--甾类激素。
(2)反相：ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化合物。
(3)离子交换等。