苹果酸含量的测定苹果酸含量
苹果有机酸的测定方法(液相色谱)
苹果有机酸的测定
一、实验目的
1、了解HPLC的工作原理及其构造
2、熟悉HPLC法测定有机酸的操作步骤
二、实验原理
三、实验仪器与试剂
1、仪器：Waters公司的HPLC分析仪（组合型）包括7725i六通阀，510型高压泵，481型紫外-可见光检测器，HW-2000型色谱工作站；CQ250型超声波提取器，高速离心机，Milli-Q超纯水制备装置；PH试纸。
2、试剂：甲醇（色谱纯），超纯水，磷酸二氢铵（分析纯，中国四川成都金山化工厂）。
七种有机酸的标品溶液：草酸（0.025mg/ml）、酒石酸（0.25 mg/ml）、苹果酸（0.75mg/ml）、乳酸（1.0 mg/ml）、乙酸（1.0 mg/ml）、柠檬酸（0.6 mg/ml）、琥珀酸（0.9 mg/ml）。
四、色谱条件：色谱柱：Hypersil BDS C18柱（4.6mm×250mm，5 m）
流动相：0.5% NH
4H
2
PO
4
（PH=2.5）
进样量：20ul
检测波长：210 nm
流速： 1.0ml/min
柱温：室温
五、样品预处理
苹果的预处理：准确称取苹果果肉2.0000g于研钵中，加少许80%乙醇研磨至糊状，移至10ml离心管（共用去80%乙醇5ml），4000rpmin，离心10min。
取上清液至蒸发皿水浴中70℃蒸干，冷却、加入流动相4ml溶解、10000rpmin离心10min，0.45μm超滤，上机。
六、撰写实验报告。
食品添加剂 L-苹果酸标准文本(食品安全国家标准)
食品安全国家标准食品添加剂L-苹果酸1 范围本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的食品添加剂L-苹果酸。
2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量2.1 化学名称L-羟基丁二酸2.2 分子式C4H6O52.3 结构式2.4 相对分子质量134.09（按2007年国际相对原子质量）3 技术要求3.1 感官要求感官要求应符合表1的规定。
表1 感官要求3.2 理化指标理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标附录A检验方法A.1 警示试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。
操作者应采取适当的安全和健康措施。
A.2 一般规定本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。
试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。
试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
A.3 鉴别试验A.3.1 试剂和材料A.3.1.1 氨水溶液：2+3。
A.3.1.2 对氨基苯磺酸溶液：10 g/L。
A.3.1.3 亚硝酸钠溶液：200 g/L。
A.3.1.4 氢氧化钠溶液：40 g/L。
A.3.2 鉴别方法A.3.2.1 苹果酸氨盐呈色试验称取0.5 g试样，精确至0.01 g，置于50 mL试管中，加入10 mL水溶解。
用氨水溶液中和至中性，加入1 mL对氨基苯磺酸溶液，在沸水浴中加热5 min。
加入5 mL亚硝酸钠溶液，再置于水浴加热3 min 后，加入5 mL氢氧化钠溶液，试验溶液应立即呈红色。
A.3.2.2 旋光特性试验试验方法同A.5，试样水溶液应呈左旋特性。
A.4 L-苹果酸(C4H6O5)含量的测定A.4.1 方法提要以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定试样水溶液，根据氢氧化钠标准滴定溶液的用量，计算以C4H6O5计的总酸含量为L-苹果酸含量。
A.4.2 试剂和材料A.4.2.1 无二氧化碳的水。
项目五食品酸度的测定(苹果)资料
第二部分 分组讨论 制定方案
测定苹果的总酸度。
第三部分 分组讨论 制定方案
具体内容：样品的预处理；测定的具体步骤； 实验所需的材料、试剂、溶液及设备；组内人 员的分工。
第四部分 操作
各组根据自己设计的方案，进行苹果总酸 度的50 ml，注入三角瓶中，加入酚酞指
示剂3~5滴。用 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液滴定至浅（微）红色且
30 秒不褪色。记录消耗的 NaOH 量。 注：用碱式滴定管，先用水洗净，检查是否漏液，排气泡，再使 用。
（四）计算 P109
C (V1 V2 ) K F X 1000 m C (V1 V2 ) K V3 X 1000 m V4
一、 酸度的概念 1. 食品中的几种酸度 ①总酸度——指食品中所有酸性成分的总量。包括
在测定前已离解成 H 的酸的浓度（游离态），
也包括未离解的酸的浓度（结合态、酸式盐）。
+
其大小可借助标准碱液滴定来求取，故又称可滴
定酸度。
②有效酸度——指被测溶液中H 的浓度。反映的是已离解的
+
酸的浓度，常用pH值表示。其大小由pH计测定。 pH的大
• • • • • • • • X---每千克试样中酸的克数，g/Kg或g/L C---标准氢氧化钠溶液的浓度mol/L V1---滴定所消耗标准碱液的体积ml V2 ---空白所消耗标准碱液的体积ml V3 ---样品稀释液总体积ml V4---滴定时吸取的样液的体积ml m---样品质量或体积（g或ml） K---换算为适当酸的系数，即1mmol氢氧化钠相当于主要酸的系数
反应式：RCOOH+NaOH→RCOONa+H2O
（二）试剂
l-苹果酸质量标准
l-苹果酸质量标准
苹果酸是一种有机酸，也被称为苹果酸或2-羟基丁二酸。
它是
一种常见的食品添加剂，具有酸味和抗氧化性质，常用于食品和饮
料工业中。
关于苹果酸的质量标准，通常是根据不同国家或地区的
法规和标准来制定和执行的。
在美国，苹果酸的质量标准通常由美国食品药品监督管理局（FDA）监管。
根据FDA的规定，苹果酸必须符合《食品添加剂法典》（Food Chemicals Codex，FCC）中的规定。
这些规定包括苹果酸的
纯度、杂质含量、重金属含量等方面的要求。
另外，苹果酸作为食
品添加剂还必须符合《食品添加剂法》（Food Additives Amendment）中的相关规定，确保其在食品中的使用安全。
在欧盟，苹果酸的质量标准由欧洲食品安全局（EFSA）和欧盟
委员会制定和监管。
根据欧盟的规定，苹果酸必须符合《食品添加
剂法规》（Regulation on Food Additives）中的要求，包括纯度、残留溶剂限量、重金属残留限量等方面的规定。
同时，苹果酸作为
食品添加剂还必须通过EFSA的评估，确保其对人体健康安全。
除了以上提到的两个地区外，其他国家和地区也都有针对苹果
酸的质量标准，这些标准通常由当地的食品药品监管机构或标准化
组织制定和监管。
总的来说，苹果酸的质量标准通常涉及到其纯度、杂质含量、重金属残留、微生物限量等方面的要求，以确保其安全
有效地用于食品和饮料工业中。
苹果酸检测方法
制Hale Waihona Puke 每 1ml 中约含富马酸 10µg，马来酸 4µg，DL－苹果酸 1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取 20µl，注入液相色谱仪，理论板数按 DL－苹果酸峰计算不低于 2000，富马酸和马来酸及 DL－苹果酸峰的 分离度均应符合规定。 测定法 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每 1ml 中约含 1mg 的溶液，作为供试品溶 液；另取富马酸和马来酸对照品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每 1ml 中含富马酸 5µg，马来 酸 2µg 的溶液，作为对照品溶液。精密量取上述两种溶液各 20µl 注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保 留时间的 4.5 倍。 供试品溶液的色谱图中如有与富马酸和马来酸峰保留时间一致的峰， 按外标法以峰面积 计算，其含量分别不得过 1.0％和 0.05％。其它单个杂质峰面积不得过对照品溶液中马来酸峰面积的 0.5
DL－苹果酸检测方法介绍
——恒信检测
O HO O OH OH
C4H6O5 恒信检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪 器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以 下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典 2005 年版二部附录 VI C）为 128℃～132℃。
【鉴别】 （1） 取本品约 0.5g，加水 10ml 使溶解，用氨水调 pH 值至中性，加 1%对氨基苯磺酸溶液 1ml，在沸水浴中加热 5 分钟，加 20%亚硝酸钠溶液 5ml，置水浴中加热 3 分钟，加 4%氢氧化钠溶液 5ml， 溶液应立即呈红色。 （2） 本品的红外光吸收图谱应与 DL－苹果酸对照品的图谱一致 （中国药典 2005 年版二部附录Ⅳ C） 。 【检查】 比旋度 取本品， 精密称定， 加水溶解并稀释制成每 1ml 中含 0.2g 的溶液， 依法测定 （中国药典 2005 年版二部附录 VI E） ，比旋度为－0.10～＋0.10。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典 2005 年版二部附录 V D）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂， 以 0.005mol/L 硫酸溶液为流动相； 检测波长为 210nm；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释
d苹果酸质量标准
d苹果酸质量标准
苹果酸是一种有机酸，常用于食品添加剂、食品酸味调节剂和饮料制造中。
以下
是苹果酸的质量标准：
1.外观：应为白色结晶性粉末或颗粒。
2.纯度：苹果酸的纯度应不低于99.0%。
3.水分：水分含量应不超过0.5%。
4.重金属：重金属（以铅计）的含量应不超过10毫克/千克。
5.铅：铅（Pb）的含量应不超过2毫克/千克。
6.砷：砷（As）的含量应不超过3毫克/千克。
7.汞：汞（Hg）的含量应不超过1毫克/千克。
8.微生物：总菌落数不得超过1000个/克。
以上是一般的苹果酸质量标准，不同国家和地区可能会略有差异，具体的标准应以当地法规为准。
在购买苹果酸时，应注意查看产品的质量标准，并选择符合要
求的产品。
苹果酸含量测定方法----酸碱滴定法
苹果酸含量测定方法----酸碱滴定法
以娃哈哈果奶中苹果酸含量的测定为实训案例，介绍酸碱滴定法测定苹果酸含量的方法。
1. 测定原理
在酚酞指示剂存在的前提下，用已知浓度的碱标准溶液滴定试样中的水溶液，测出试样中的总酸度（以C4H6O5计）。
2.试剂
（1）0.1mol/L的氢氧化钠标准溶液
（2）1%的酚酞指示剂
3.仪器
（1）锥形瓶，250mL；
（2）碱式滴定管
4. 操作步骤
称取试样1.5g，精确至0.0002g，加水溶解，移至2 50mL的容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。
用移液管取25mL置于锥形瓶中，加酚酞指示剂2滴，用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，保持30s不退色，为滴定终点，同时做空白试验。
5. 结果计算
将实验结果记录在下表（表8）
表8：苹果酸含量测定结果记录表
相对平均偏差/%
计算公式：
w—苹果酸含量（以C4H6O5计），%
V1--试样消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL
V2--空白滴定消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，mL
c—氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，mol/L
m—称取样品质量
0.06704—与1.00mL的1mol/L氢氧化钠标准溶液相当的以克表示的苹果酸质量。
25/250----从250mL溶液中取25mL溶液进行测定。
两种方法测定苹果汁中总酸的含量的比较
两种方法测定苹果汁中总酸的含量的比较发布时间：2021-03-04T10:51:45.677Z 来源：《科学与技术》2020年10月29期作者：张冰清戚培培董敏王林邰亮刘天左[导读] 目的探究两种方法测定苹果汁中总酸的区别。
方法用滴定法和酸度计法分别测定张冰清戚培培董敏王林邰亮刘天左宝应县产品质量综合检验检测中心江苏宝应 225800摘要：目的探究两种方法测定苹果汁中总酸的区别。
方法用滴定法和酸度计法分别测定，计算得出总酸含量。
结果滴定法和pH计法测得苹果汁总酸含量皆为5.27和2.82，相对偏差为0%。
结论两种方法测得苹果汁总酸含量一致。
关键词：苹果汁；总酸；酸碱滴定法；pH计法 Abstract:Object To explore the differences between two methods for the determination of total acid in apple juice.Methods Titrimetric method and pH meter were used to determine the content then calculated The total acid。
Results The total acid content of apple juice was 5.27 and 2.82 by titration and pH meter. The relative deviation is 0% Conclusion The two methods was consistent. KEY WORDS:Apple Juice;Total acid;Acid base titration;pH meter 1 引言苹果汁中含有人体所需的多种维生素、矿物质、糖、蛋白质、脂肪和氨基酸等成分。
有机酸对人体的主要作用是维持体内酸碱平衡，刺激胃肠道消化液分泌，有利于食物消化吸收。
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学生姓名：
学号：
专业：应用化学
年级班级：12级C班
课程名称：现代仪器分析实验实验时间：2015年4月24日
0.02mo l/L KH2PO4溶液
的配制：磷酸二氢钾（KH2PO4，M=136）
将磷酸二氢钾溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.02mol／L，PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4溶液。
计算：有公式m=cv*M=(0.02mol／L*1000ml/1000)*136
需要磷酸二氢钾的质量m=2.72g
苹果酸样品
的配制：将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。
纯甲醇CH3OH(M=34)
2实验所得高效液相谱图：
高效液相图
特殊实验条件
泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐）泵A浓度5.0%（纯甲醇）标准谱图
山西谱图山东谱图
甘肃谱图浓度
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），泵A浓度10.0%（纯甲醇）高效液相图
特殊实验条件
标准图谱
山西谱图
山东图谱甘肃图谱
3苹果酸含量计算
实验1：实验2：
苹果产地：山西样品
称取量：
1.0903
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
山西样品
称取量：
1.0903
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐
酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓
冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压
力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量计算苹果酸含量计算
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。
所以用保留时间5.604，峰面积为69562计算得出浓度为13.96ug/ml。
用外标法计算。
函数为F(x)=4975.23*X+123.23
得X=13.96ug/ml
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=13.96*25*134/1.0903
=42892ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.357，峰面积10835时测得苹果酸浓度为2.334ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=2.334*25*134/1.0903
=7171ug/g
实验1：实验2：
苹果产地：山东样品
称取量：
1.2084
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
山东样品
称取量：
1.2084
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐
酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓
冲盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压
力17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量苹果酸含量
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。
所以用保留时间5.593，峰面积为20080计算得出浓度为4.011ug/ml。
用外标法计算。
函数为F(x)=4975.23*X+123.23
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=4.011*25*134/1.2084
=11120ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.410，峰面积6672时测得苹果酸浓度为1.522ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=1.522*25*134/1.2084
=4219ug/g
实验1：实验2：
苹果产地：甘肃样品
称取量：
1.0123
g
容量瓶
体积：
25
ml
苹果
产地：
甘肃样品
称取量：
1.0123
g
容量瓶
体积：
25
ml
实验条件：流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波
分析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸
调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲
盐，并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
实
验
条
件：
流速为1ml/min，温度为 25℃, 用全波分
析, 采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调
节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度缓冲盐，
并加以适量的纯甲醇，限制最大压力
17.0MPa最小压力0.0MPa。
LC停止时间10min，PDA停止时间10min，
模式为二元高压梯度。
特殊实验条件：泵B浓度95.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度5.0%（纯甲醇）
特殊
实验
条件：
泵B浓度90.0%（KH2PO4低浓度的缓冲盐），
泵A浓度10.0%（纯甲醇）
苹果酸含量苹果酸含量
标准曲线：
由于峰往后移了，检测出来的含量为零。
所以用保留时间5.599，峰面积为69577计算得出浓度为13.36ug/ml。
用外标法计算。
函数为F(x)=4975.23*X+123.23
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=13.36*25*134/1.0123
=44874ug/g 标准曲线
正常出峰
在保留时间4.410，峰面积5657时测得苹果酸浓度为1.324ug/ml
用外标法计算
函数为F(X)=5123.99*X-1125.04
苹果酸含量为W苹果酸=CVM/m
=1.324*25*134/1.0123
=4381ug/g。