LC色谱柱的选择方法
液相色谱教程液相色谱方法开发
液相色谱教程液相色谱方法开发液相色谱(Liquid Chromatography，简称LC)是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
液相色谱方法的开发是为了解决特定问题和满足特定需求而进行的，本文将介绍液相色谱方法开发的一般步骤和注意事项。
液相色谱方法的开发步骤如下：1.确定分离目标：首先确定需要分离和分析的目标化合物，包括确定化合物的物理化学性质和分离特性等。
2.选择色谱柱：根据分离目标，选择合适的色谱柱。
色谱柱的选择应考虑样品的性质、分离机理、应用要求等因素。
3.选择流动相和梯度条件：根据分离目标，选择合适的流动相（包括溶剂和缓冲剂等）和梯度条件（包括流动相的组成和梯度程序等）。
4.优化色谱条件：通过改变流动相组成、流速、柱温等参数，优化色谱条件，达到最佳分离效果。
5.建立分析方法：根据样品的特点和分析需求，建立分析方法。
包括确定检测器的波长或离子选择器、设置进样量和检测浓度范围等。
6.方法验证：对开发的液相色谱方法进行验证，包括准确度、精密度、线性范围、检出限等指标的确定。
液相色谱方法开发过程中需要注意的事项如下：1.样品制备：样品的制备要充分考虑到样品的性质和分析方法的要求，如需要进行前处理、提取、洗脱、浓缩等。
2.色谱柱保养：液相色谱柱的保养对于保证色谱方法的重复性和稳定性至关重要。
包括定期清洁、适当的保存和使用。
3.流动相准备：流动相的配制要严格按照要求，注意流向的调整、PHA值的调节、气泡和杂质的排除等。
4.柱温控制：柱温对色谱分离的效果有很大影响，需要根据分析需求对柱温进行控制和调节。
5.检测器选择：根据分析的目标和样品的特性，选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
6.数据处理：对色谱结果进行正确的数据处理和解释，包括峰面积计算、峰识别和归一化等。
总结来说，液相色谱方法的开发是一个系统的工程，需要综合考虑样品特性、分析需求和分离机理等因素。
液相色谱介绍
液相色谱介绍液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分离和分析样品成分的实验室技术，属于色谱分析方法的一种。
它是利用样品在固定相和移动相之间分配系数的不同，实现成分分离和检测的方法。
液相色谱因其高灵敏度、高分辨率、广泛的应用范围等特点，在化学、生物、食品、环境等领域具有重要意义。
液相色谱的主要组成部分包括：1. 色谱柱：色谱柱是液相色谱的核心部件，用于分离样品成分。
它由固定相（stationary phase）和填充物组成，固定相的选择取决于分离目标和样品性质。
2. 流动相：流动相是液相色谱中用于载带动态成分的溶液。
其选择和配比对于色谱分离效果至关重要。
通常，流动相由溶剂、缓冲液和添加剂组成。
3. 进样器：进样器用于将样品引入色谱柱。
常见的进样器有手动进样器和自动进样器。
4. 检测器：检测器用于检测分离后的样品成分。
常见的检测器有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等。
5. 泵：泵用于驱动流动相在色谱系统内循环，保证样品分离过程的进行。
液相色谱的保养知识包括：1. 色谱柱保养：长时间不用时，色谱柱内应充满溶剂，两端封死。
正相色谱柱使用相应的有机相，如ACN。
2. 手动进样器：使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
3. 流动相：使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
4. 带seal-wash的1100，要配制90%水10%异丙醇，以每分23滴的速度虹吸排出，溶剂不能干涸。
5. 定期检查和维护：根据说明书或现场工程师的建议，定期检查液相色谱仪的性能，确保其在良好状态下运行。
总之，液相色谱技术的应用领域广泛，可为科研和生产提供准确、有效的分析手段。
了解液相色谱的原理、保养方法以及相关应用，有助于更好地利用这一技术进行科学研究和生产实践。
UPLC色谱柱技术介绍
• AAA, OST, PST, PrST and Glycan
Transferability between HPLC and UPLC
HSS T3 HSS C18
HSS C18 SB HSS PFP HSS Cyano
XBridge HPLC and ACQUITY UPLC BEH columns
• BEH 130Å C18, C8, Shield RP18, Phenyl, HILIC and Amide • BEH 300Å C18 and C4 • BEH 200Å SEC
BEH HILIC BEH Amide
• HSS C18, T3, C18 SB,PFP,Cyano • CSH C18, Fluoro-Phenyl and Phenyl-Hexyl
3x107 2x107 1x107
Without VanGuard™ Pre-column
H3C O
H
H
S
HO
ON
With VanGuard™
Pre-column
N H3C
CH3
0
0.60
0.80
1.00
Diltiazem
2.0x106 SIR m/z 415.2
1.20
1.40
Minutes
1.5x106
色谱柱使用维护
©2014 Waters Corporation
23
ACQUITY UPLC 颗粒平台
BEH 亚乙基桥杂化颗粒
130Å, 200Å, 300Å
HSS 高强度硅胶颗粒
100Å
CSH 表面带电杂化颗粒
最新UPLC色谱柱技术介绍
UPLC色谱柱沃特世科技（上海）有限公司赵嘉胤Jiayin_zhao@ACQUITY UPLC色谱柱背景知识简介—UPLC色谱柱技术—VanGuard™ 保护柱如何选择ACQUITY UPLC色谱柱—ACQUITY UPLC BEH色谱柱—ACQUITY UPLC HSS色谱柱—ACQUITY UPLC CSH色谱柱色谱柱使用维护ACQUITY UPLC色谱柱背景知识简介—UPLC色谱柱技术—VanGuard™ 保护柱如何选择ACQUITY UPLC色谱柱—ACQUITY UPLC BEH色谱柱—ACQUITY UPLC HSS色谱柱—ACQUITY UPLC CSH色谱柱色谱柱使用维护原产厂家化学键合厂柱填充厂分销商硅胶颗粒和杂化颗粒合成填料键合Source & control of silica gel can make a big difference in your chromatography填料键合Waters分拨与销售柱填充分拨与销售柱填充分拨与销售分拨与销售柱填充•Manufactures under cGMP , ISO 9001 and ISO 13485 guidelines •Registered with FDA as a medical device manufacturer填料颗粒的合成坚固高效的1.7 µm BEH 、CSH 和1.8 µm HSS 颗粒迄今为止技术最先进的全多孔颗粒柱效最高，PH 使用范围最宽和卓越的机械强度设计特点全新硬件设计低谱带展宽新型过滤片色谱柱装填柱床稳定，耐受UPLC 工作压力沃特世专有的新型装填技术新的测试仪器软件采用eCord TM 技术无纸追踪色谱柱使用历史支架系绳包嵌式16 mm 微芯片eCord 永久附在色谱柱上智能芯片自动下载关键参数到色谱柱历史文件提供色谱柱全程使用历史 信息不可删除存在芯片上的信息可减少记录纸张色谱柱无纸使用记录VanGuard™ 保护柱特为UPLC®使用而设计ACQUITY UPLC色谱柱背景知识简介—UPLC色谱柱技术—VanGuard™ 保护柱如何选择ACQUITY UPLC色谱柱—ACQUITY UPLC BEH色谱柱—ACQUITY UPLC HSS色谱柱—ACQUITY UPLC CSH色谱柱色谱柱使用维护BEH亚乙基桥杂化颗粒130Å, 200Å, 300ÅHSS高强度硅胶颗粒100ÅCSH表面带电杂化颗粒130Å行业领先的化学稳定性•宽pH范围，耐受性最强•通用性极佳•固定相种类与柱规格丰富•除通用于小分子化合物，还有专用于生物制药行业的BEH柱产品提高选择与保留•T3 ：增强对极性分子的反相保留能力•C18：提供常规硅胶C18选择性•C18SB:高硅醇活性以增强对碱性分析物的保留，而同时维持好的峰形•Cyano，PFP：提供不同的选择性同时保证色谱峰形使选择性最大化•独特的选择性•低离子强度酸性条件下，对碱性化合物的高载量与优异峰形•较宽pH范围，高低pH条件切换时平衡迅速BEH C 18BEH C 8BEH Phenyl BEH Shield RP18BEH HILICFive particle substrates•130Å, 200Å and 300Å BEH [Ethylene Bridged Hybrid], HSS [HighStrength Silica] and CSH [Charged Surface Hybrid]•All are available in HPLC and UPLC particle sizes Wide and growing selection of column chemistries•15 stationary phases•BEH 130Å C 18, C 8, Shield RP 18, Phenyl, HILIC and Amide •BEH 300Å C and C BEH Amide CSH C 18CSH Fluoro-Phenyl 184•BEH 200Å SEC•HSS C 18, T3, C 18SB,PFP ,Cyano•CSH C 18, Fluoro-Phenyl and Phenyl-HexylProven application-based solutions•AAA, OST, PST, PrST and GlycanTransferability between HPLC and UPLCXBridge HPLC and ACQUITY UPLC BEH columns HSS HPLC and ACQUITY UPLC HSS columnsXSelect HPLC and ACQUITY CSH columnsVanGuard Pre-columns CSH Phenyl-HexylHSS T3HSS C 18HSS C 18SB HSS PFP HSS CyanoACQUITY UPLC色谱柱背景知识简介—UPLC色谱柱技术—3.0mm ID UPLC色谱柱—VanGuard™ 保护柱如何选择ACQUITY UPLC色谱柱—ACQUITY UPLC BEH色谱柱—ACQUITY UPLC HSS色谱柱—ACQUITY UPLC CSH色谱柱UPLC-HPLC方法无缝转换UPLC生物分子分析方案New 2.5 µm eXtended Performance Columns 介绍U.S. Patent No. 6,686,035 B2Bridged Ethanes within a silica matrixWide pH range (1-12)High pressure toleranceEnhanced efficiency (1.7 µm)XTerra ®MS C 18BEH C 18测试终止(估计>250 h)测试终止(估计>250 h)BEH HILIC 050100150200250300在50mM TEA 中实验时数(pH 10, 50°C)Symmetry ® C 18Silica C 18–品牌A Silica C 18–品牌BOH -OH -•仅需打断四个硅氧键即可腐蚀一个硅单位•表面腐蚀所产生的硅酸离子在流动相中溶解度大,使硅胶基体溶解的反应向右移动, 从而加快了溶解速度•pH >7时上述腐蚀过程容易发生•须同时断裂六个键才可以去除经乙基桥键连接的两个硅单位(该过程极难发生)•填料基体溶解所产生的有机硅离子在流动相中的溶解度较低, 因此容易累积在填料微孔表面, 有时可能会重新连接回颗粒表面, 形成所谓的‘自我修复’机制。
正确选购色谱柱需要注意哪些方便
正确选购色谱柱需要注意哪些方便色谱柱是气相色谱、液相色谱等分析仪器的核心部件，其性能直接影响到分析结果的准确性和可靠性。
因此，在选购色谱柱时，需要关注以下几个方面的注意事项：1、确定分析目的和样品类型首先，需要明确分析的目的和样品类型，以便选择合适的色谱柱。
例如，假如需要进行环境监测、食品安全、药物分析等领域的分析，可以选择相应的专用色谱柱；假如需要进行石油、化工、制药等行业的分析，可以选择相应的行业专用色谱柱。
2、选择合适的固定相固定相是色谱柱的核心部分，其性能直接影响到色谱柱的分别效果和稳定性。
常见的固定相有硅胶、氧化铝、聚合物等。
硅胶固定相具有较好的耐高温性和化学稳定性，适用于各种类型的样品分析；氧化铝固定相具有较高的选择性和分别度，适用于多而杂样品的分析；聚合物固定相具有良好的亲水性和选择性，适用于生物样品、食品等亲水性样品的分析。
3、选择合适的柱尺寸和内径色谱柱的尺寸和内径直接影响到色谱柱的分别效果和分析速度。
一般来说，柱尺寸越大，分别效果越好，但分析时间越长；柱内径越小，分别效果越好，但分析时间越长。
因此，需要依据实际需求选择合适的柱尺寸和内径。
4、选择合适的柱温柱温对色谱柱的分别效果和分析速度有很大影响。
一般来说，柱温越高，分别效果越好，但分析时间越长；柱温越低，分别效果越差，但分析时间越短。
因此，需要依据实际需求选择合适的柱温。
同时，还需要考虑色谱柱的热稳定性，以确保在高温下仍能保持良好的分别效果。
5、选择合适的流动相流动相是推动样品在色谱柱中移动的动力，其性能直接影响到色谱柱的分别效果和分析速度。
常见的流动相应有甲醇、乙腈、水等。
在选择流动相时，需要考虑其与固定相的兼容性、极性、粘度等因素，以确保在实际应用中能够获得良好的分别效果。
6、考虑色谱柱的品牌和价格市场上有很多不同品牌和型号的色谱柱，价格差别较大。
在选择色谱柱时，需要综合考虑品牌、价格、性能等因素，选择性价比较高的产品。
色谱柱基础知识的总结
色谱柱基础知识的总结色谱柱是色谱分析中的重要工具，它是用来分离混合物中不同化合物的设备。
色谱柱的选择和使用对于色谱分析结果的准确性和灵敏度起着至关重要的作用。
下面将对色谱柱的基础知识进行总结。
色谱柱的种类主要包括气相色谱柱（GC柱）和液相色谱柱（LC柱）。
GC柱使得样品在高温下蒸发成为气态，然后通过柱子的分离效应进行分离。
LC柱是将可溶于液相的样品通过柱子的分离效应进行分离。
色谱柱的工作原理是样品分离的基础。
色谱柱的分离效应由固定填充物和流动相的选择决定。
固定填充物是色谱柱中的重要组成部分，分为填充型和包袋型。
填充型色谱柱常用的填充物有硅胶、氧化铝、氮化硅等。
填充型色谱柱适用于对极性物质的分离。
包袋型色谱柱通常是指薄层涂布型的液相色谱柱，常见的包袋型色谱柱有C18、C8、C4等。
包袋型色谱柱适用于对非极性以及中等极性物质的分离。
流动相的选择也是色谱柱分离效应的关键因素。
在GC柱中，通常使用气体作为流动相，常用的有氢气、氦气等。
在LC柱中，流动相一般是有机溶剂和缓冲液的混合物，常见的有甲醇、乙腈等。
流动相的选择要根据要分离的物质的属性，如极性、溶解度等进行合理选择，以提高分离效果。
色谱柱的选择要根据需要分离的物质的性质进行。
对于GC柱的选择，常见的指标有极性、温度范围、长度和内径等。
相对于液相色谱柱，GC柱的选择范围较窄，通常根据物质的极性选择合适的GC柱。
液相色谱柱的选择相对较为复杂，常见的指标有固定相类型、粒径、孔径、长度和内径等。
固定相的选择要根据样品的性质进行，如极性的物质选择极性固定相，非极性物质选择非极性固定相。
粒径和孔径的选择会影响柱子的分离效果和分析时间。
总之，色谱柱是色谱分析中的重要工具，其选择和使用对于色谱分析结果至关重要。
合理选择柱子的类型和填充物，以及优化流动相的组成和条件，能够提高色谱分离效果和分析灵敏度。
同时，良好的色谱柱的使用与保养也是保证色谱分析质量的重要环节。
只有不断深入了解和熟悉色谱柱的基础知识，才能更好地进行色谱分析工作。
液相色谱操作过程和特点
液相色谱操作过程和特点液相色谱（Liquid Chromatography，简称LC）是一种分析技术，它利用液体流动相在固定相上的分配作用，将溶液中的化学物质分离、分析和定量。
液相色谱的操作过程通常包括样品制备、进样、色谱柱选择、流动相选择、洗脱条件优化、检测器选择、数据采集和处理等步骤。
具体操作过程如下：1. 样品制备：将待分析样品制备成溶液，通常需要进行样品提取、前处理、稀释等步骤，以获得适合进样的样品。
2. 进样：将样品溶液通过进样装置引入色谱系统中。
进样装置可以是自动进样器，也可以是手动进样装置。
3. 色谱柱选择：根据样品的特性和分离要求选择适合的色谱柱。
色谱柱通常有不同的分离机理，如反相、离子交换、大小排阻、手性和亲合等。
4. 流动相选择：根据样品特性和分离要求选择适当的流动相。
流动相可以是有机溶剂、水、缓冲液等，需要根据色谱柱和待分离化合物的相容性选择。
5. 洗脱条件优化：调整流动相的成分、比例和洗脱梯度，以实现化合物的分离和增强分离效果。
6. 检测器选择：选择适合的检测器，对色谱柱洗脱出的化合物进行检测。
常用的检测器有紫外-可见光谱检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
7. 数据采集和处理：通过检测器将得到的信号转换为电信号，并进行数据采集和处理，包括峰面积计算、质谱数据解析等。
液相色谱的特点包括：1. 高分离效率：液相色谱的分离效率较高，可以实现多组分混合物中的化合物快速准确分离。
2. 分析速度快：相比气相色谱，液相色谱的分析速度较快，样品制备和进样过程较简单，分析时间短。
3. 适应性广：液相色谱适用于多种化合物的分离和分析，包括有机物、无机物、生物大分子等。
4. 分析灵敏度高：液相色谱常与灵敏的检测器（如质谱检测器）联用，可以实现低浓度物质的快速准确分析。
5. 操作简便：相比其他分析技术，液相色谱的操作比较简便，不需要高度专业技术人员。
总之，液相色谱是一种广泛应用于分析化学领域的分离和分析方法，具有高分离效率、快速分析速度、广泛适应性、高分析灵敏度和简便操作等特点。
watersxbridge苯基柱使用说明
watersxbridge苯基柱使用说明摘要：1.简介2.苯基柱的安装与拆卸3.流动相的选择与配制4.流速的设置5.分析条件的优化6.常见问题与解决方法7.注意事项正文：Waters XBridge 苯基柱是一款高效液相色谱柱，适用于液相色谱（LC）分析。
在使用前，请确保充分了解并遵循以下使用说明。
1.简介Waters XBridge 苯基柱是一款用于液相色谱（LC）的高效液相色谱柱。
它具有柱效高、柱压低等优点，广泛应用于生物制药、食品分析等领域。
2.苯基柱的安装与拆卸在安装苯基柱时，请确保柱温低于30 摄氏度。
首先，将柱芯插入色谱柱入口，然后顺时针旋转至柱芯无法继续旋转。
在拆卸时，请逆时针旋转柱芯以松开，然后轻轻取出。
3.流动相的选择与配制流动相是液相色谱分析过程中样品在柱子中移动的介质。
根据需要分析的样品选择合适的流动相，如水、乙腈、甲醇等。
流动相需要使用去离子水和有机溶剂（如乙腈）配制，以获得适当的离子强度和极性。
4.流速的设置流速是液相色谱分析过程中样品在柱子中移动的速度。
根据色谱柱的规格和样品的要求设置流速，流速过快可能导致峰形变差，流速过慢则可能导致分析时间延长。
5.分析条件的优化分析条件的优化包括温度、流速、有机溶剂比例等因素。
根据样品分离的需要，调整这些条件以获得更好的分离效果。
6.常见问题与解决方法在使用苯基柱过程中，可能会遇到峰形异常、出峰时间过长等问题。
检查流动相、柱温是否合适，尝试调整流速，以解决这些问题。
7.注意事项在使用苯基柱时，请遵循液相色谱的操作规程。
避免柱子在高温下长时间存放，以免影响柱效。
总之，正确使用Waters XBridge 苯基柱，可以提高液相色谱分析的准确性和效率。
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色谱柱的参数 色谱柱的参数
粒径
粒径越小，分离越快, 柱效越高。但柱压力越高，柱容易被污染， 寿命低 LC-MS和常规分析柱通常使用5 μm填料。3 μm填料使用的困难程 度大，一般非必要时不使用(ODS-100V) Super-ODS为2 μm 填料，UPLC为1.7 μm填料 3cm以下的制备色谱柱通常使用5-10 μm填料 更大内径的制备色谱柱通常使用更大的粒径，如10 μm, 或20 μm
一般柱长2.0-250mm，柱越长，分离度越高，但柱压更高，分离所 需时间更长 分离度与理论 塔板数的平方根成正比，所以增加柱长并不是最有 效的分离手段。一般情况下15cm, 5um的填料可以提供足够的塔板 数 内径：1-2mm LC-MS柱，4.6mm分析柱，10mm以上的半 制备和 制备色谱柱 HPLC仪器的柱外效应-不同的仪器设备配置有相应的最佳流速，因 此适用于不同内径的色谱柱
柱的化学性质
样品性质决定柱的化学性质 样品性质决定柱的化学性质
样品结构 溶解性（有机溶剂、水） pH值 极性 酸碱性 分子量
分离目的决定柱的物理性质 分离目的决定柱的物理性质
分析? 制备? 快速分析?（如Super-ODS） 含量分析? 杂质检验? 所有组分分离?
色谱柱的参数 色谱柱的参数
柱长、内径
高纯硅胶表面的重金属含量，一般为ppm级，液相系统的金属部件 也会产生重金属（ODS-100V\Z为高纯硅胶） 待测组分与重金属发生螯合反应会导致色谱峰形不佳，产生前伸或 拖尾 能与金属形成5或6元环螯合物的待测组分特别容易受重金属影响 可以使用EDTA溶液或稀酸冲洗色谱柱消除重金属影响
色谱柱的参数 色谱柱的参数
硅胶表面性质-硅醇基
硅醇基的酸性较大,可与碱性化合物牢固的结合, 因此含有较多残留 硅醇基的填料在分离碱性化合物时容易产生脱尾、变宽、保留延长 等现象（ODS-100V\Z都进行了彻底封端） 加入适当的扫尾剂如三乙胺可以掩蔽残留的硅醇基, 使碱性化合物 峰形变好 降低流动相pH值小于3,可以减小硅醇基的反应, 从而减小拖尾现象
HPLC 色 谱 柱 选 择
东曹达（上海）贸易有限公司
色谱柱的选择 色谱柱的选择
HPLC 方法开发时首先要: 了解方法的目的（分析？制备？） 了解样品性质（极性？酸碱性？） 选择合适的色谱柱
色谱柱的选择 色谱柱的选择
色谱柱和流动相的选择是色谱技术的核心之一 色谱柱的选择是方法开发的一个重要环节 选择合适的色谱柱可以缩短方法开发所需要的 时间、并且使开发的方法更稳定 在不合适的色谱柱上进行方法开发通常需要更 长的时间、并且成功率较低
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端的效果：
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端-高封端的ODS色谱柱
pH使用范围宽 极性基团封端的色谱柱可以在高水相流动相条件下使用，适合分离 极性化合物 残留的硅醇基影响最小，碱性化合物不拖尾 改善选择性 一般优先使用高封端的色谱柱
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端-低封端或不封端的ODS色谱柱
ODS-100V
C18
3,5
15% (单层)
100
高
好
彻底
好
ODS-100Z
C18
5
20% (单层)
100
高
好
彻底
好
ODS-100S
C18
5
18% (多层)
100
高
好
较好
好
ODS-120T
C18
5
22% (多层)
120
高
好
一般
一般
ODS-120A
C18
5
20% (多层)
120
高
好
未处理
一般
可用于100%的水相（C18链疏水，在纯水相中会倒塌 导致保留降低，因此AQ色谱柱中都有极性的亲水集团 或低封端） 因为硅醇基的影响，对极性相同的化合物有特殊选择性
如何选择合适的色谱柱 如何选择合适的色谱柱
选用高纯硅胶基质的色谱柱 对碱性化合物，选择高封端的色谱柱 高pH值使用时，需要使用特殊封端的色谱柱， 以保证柱寿命，改善峰形(ODS-100S) 大分子量的化合物，需要大孔径的色谱柱 尽量使用低pH值，以减少硅醇基的作用 不同品牌的色谱柱往往有不同的选择性
monomeric bonding
R Si (CH2)17 CH3 R
柱效高, 平衡快
OH + OH CH3
polymeric
O
bonding
CH3 Si (CH2)17 CH3
X Si (CH2)17 CH3 X
O
稳定性好， 制备上样量大
色谱柱的参数 色谱柱的参数
ODS柱的特征结构
色谱柱的参数 色谱柱的参数 封端
色谱柱的参数 色谱柱的参数
孔径
孔径小，含孔率高，则 比表面积大，载碳量高 化合物在孔内分离 孔径大小必须和分子大小相匹配，分子必须能进入孔内，一般小分 子使用80-120A， 大分子通常使用300A。为了达到最佳分离,一般 要求孔径直径是分子直径的3倍以上
色谱柱的参数 色谱柱的参数
比表面积
每克填料的表面积 与粒度、含孔率有关 比表面积大，会增加样品与键合相之间的反应，增加保留、分离 度和制备时的上样量 比表面积小可以缩短分析时间和梯度时的平衡时间 并不是比表面积大或者小就更好，选择适合目的的比表面积
色谱柱的参数 色谱柱的参数 载碳量
硅胶表面键合相的比例 与比表面积，键合覆盖度等有关 对ODS，载碳量从7-18%（ODS-100Z为20%）不等 ODS的载碳量高， 则保留增加，适合分析非极性化合 物。制备色谱的上样量也可以增加 载碳量通常影响选择性
色谱柱的参数 色谱柱的参数
硅胶表面性质-纯度
色谱柱的参数 色谱柱的参数 键合相
超过80%的样品可以使用反相色谱分离，一般方法开发也首先使用 反相色谱 C18， C8，C4等反相色谱，从C18到C8，C4，对化合物的保留降 低 NH2， CN等可用于正相，也可以用于反相 键合试剂不同，对化合物的选择性不同
方法开发时, 长链的烷基键合相(C18,C8)比短链的(C4,C3) 稳定；非极性的键合相比极性的键合相(-NH2)稳定
色谱柱的参数 色谱柱的参数
色谱柱的参数远比一般认为的要多：
柱长， 内径， 例如250*4.6mm. 粒径， 3um, 5um, 10um等 柱的物理性质 孔径，60A，80A，100A，120A等 比表面积， 180m2/g-350m2/g（ODS-100V为450m2/g） 基质：硅胶，聚合物等 硅胶表面性质 载碳量， 10-20%(ODS-120T为22%) 键合试剂， C18,C8, CN等 封端
色谱柱的参数 色谱柱的参数
基质
硅胶： 最通用的基质，强度大，化学修饰容易，但使用的pH值范围 有限（一般为2-8， 特殊修饰的可以使用到1-12）。 下面的介绍也 主要是基于硅胶基质的色谱柱技术 聚合物基质：化学稳定，应用 pH范围宽, 但强度不够大， 批重复 性相对较差。 商品化的色谱柱不多，价格较贵，如Octadecyl-2PW 球型: HPLC 使用 无定型: 中压色谱使用
如何选择合适的色谱柱 如何选择合适的色谱柱
详细阅读色谱柱的说明，了解各种色谱柱的参 数和性质 了解化合物性质：极性，酸碱性，杂质的性质 等 强极性化合物使用AQ色谱柱(ODS-100V) 高比表面积和载碳量可以提高制备色谱的上样 量
TSKGEL反相色谱柱选择一览表 TSKGEL反相色谱柱选择一览表
目的： 减小残留硅醇基
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端
未封端的Si-OH 基团是碱性化合物拖尾的主要原因 酸性条件下，氢离子通过未封端的Si-OH 的间隙进攻O-Si键，导致填料水解 封端的基团会影响色谱柱的使用pH值、对化合物的选择 性等
色谱柱的参数 色谱柱的参数
封端技术
使用小分子硅烷保护残留Si-OH 通过R1基团空间位阻保护残留Si-OH 如使用异丙基代替甲基 通过键合相之间的连接保护残留Si-OH 多次封端
色谱柱的参数 色谱柱的参数
R
最常用的ODS色谱柱
R为非极性基团, 为通用型色谱柱
Si (CH2)17 CH3 R
如果R为强极性基团, 为通常说的AQ”水性”柱, 可以走纯 水,用于强极性化合物（ODS-100V可以走纯水）
色谱柱的参数 色谱柱的参数
键合方式
CH3 OH + X Si (CH2)17 CH3 CH3
硅胶填料： TSK-GEL 固定相 粒径 (μm) 炭含量 孔径（埃） 理论塔 板数 保 持 力 封端处理 耐久 性 主要特征、用途 ODS首选柱；对碱性化合 物分析效果特别好；适于 极性化合物的分析；可适 用100%水相；LC/MS系统 通用型ODS柱；对酸性、 中性、碱性化合物分析效 果好；适于中性和疏水性 化合物的分析 通用型、多层ODS柱的标 准；良好的化学稳定性（ 耐酸、碱） 通用型高性能柱；炭含量 最高；在有机溶剂多的流 动相中发挥威力 炭含量高的高性能柱；可 发挥填料的离子作用；表 面识别能力强，适于分析 芳香族化合物等