邻苯二甲酸酯样品前处理方法和色谱柱选择
高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯实验报告
高效液相色谱法测定邻苯二甲酸酯实验报告实验目的：1.学习掌握高效液相色谱法（HPLC）的基本原理和操作方法；2.通过测定邻苯二甲酸酯的含量，了解其在环境中的污染状况。
实验原理：高效液相色谱法是一种常用的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高重复性的特点。
此实验中使用的HPLC仪器由进样系统、流动相系统、色谱柱和检测器组成。
样品进样后，通过流动相在色谱柱中分离，不同组分按照特定的时间顺序通过，再通过检测器检测并计算得到定量结果。
实验步骤：1.仪器和色谱柱的准备：打开和保持HPLC仪器的电源，并预热至工作温度。
选择合适的色谱柱，并平衡至稳定状态。
2.样品的制备和进样：取一定质量的待测样品，加入适量的提取液，并充分混合。
用适当的过滤器进行过滤，将过滤后的样品进样到色谱柱中。
3.进样和流动相参数的设置：根据样品的性质和分析要求，设置进样量和流动相组成。
常用的流动相为二氯甲烷和甲醇的混合物。
4.色谱柱运行：开启HPLC仪器，并调整流动相的流速和温度。
根据不同的物质特性，选择合适的梯度程序进行分离。
在分离过程中，对流动相温度和流速进行实时监测和调整。
5.检测器的设置和数据处理：选择合适的检测器，并设置检测参数。
在检测过程中，记录不同时间点的信号强度，并输入到计算机软件中进行峰面积和浓度的计算。
实验结果：根据上述实验步骤，测定了待测样品中邻苯二甲酸酯的含量。
根据HPLC测定结果，经过数据处理和计算，得到待测样品中邻苯二甲酸酯的浓度为x mg/L。
结论：通过本实验，成功地应用高效液相色谱法测定了待测样品中邻苯二甲酸酯的含量，得到了可信的分析结果。
该方法操作简便、准确可靠，可用于环境监测和化学分析中对邻苯二甲酸酯的定量测定。
食品中塑化剂样品前处理GPC／SPE全解决方案——适用于GC／MS,LC／MS检测方法
邻苯二甲酸酯是一种脂溶 ｆ物质 生 提 取样品时多采用非捌 生溶剂进行提取 ， 含 脂肪等杂质较多的食品提取时会有大量
的脂类物质一同被提取出来 ， 干扰后续的
分￣ ｚｆ ， ／ ￣ 因此提取的样 品溶液在仪器检 Ｆ
测前必须进行净化处理。 应用Ｇ Ｃ Ｐ 净化系
平台， 保证实验室和操作人员的安全 。
（） ３ 采用国际标准方法制造 的Ｇ Ｃ Ｐ 色谱柱并带有安全防护外套、 螺旋柱塞
图１德 国Ｌ Ｔｃ Ｆｅｓ ｌ Ｓｒｓ 自 ＳＥ Ｏｅｈ ｒ ｔ ｅ ｅｉ全 动 Ｐ ／ ｅ ｙ ｅ
统进行样品前处理 能够有效去除油脂等
大分子干扰物质； 由于样品提取物中不仅 有大分子杂质还有小分子杂质 所以有时
世界先进的前处理平台， 将预 浓缩 、 Ｐ ＳＥ
种环境激 素 长期摄入可 以影响男性
Ｓ ｒ ｓ 自动Ｓ Ｅ Ｇ Ｃ 精确定量浓缩全 ｅｉ 全 ｅ Ｐ／ Ｐ ／ 在线 多联 机系统 管线经过 测试完全不 含增塑剂 ， 杜绝了样 品净化处理过程 中
引入 污染 的问题 大大提高了分析的灵 敏度和可靠性。
机系统 除了可 以针对 油脂样 品外还适
填料 并自由改变溶剂体系， 方便用户准
确调整柱长 ． 特殊 螺口以及 多层刮片式
Ｓ ｒ ｓ 自动Ｓ Ｅ Ｇ Ｃ 精确定 量浓缩全 ｅｉ 全 ｅ Ｐ／ Ｐ ／
设计保证填充后Ｇ Ｃ Ｐ 柱的重现性 。
０、 Ｏ， 食品安全导刊 ２１ １ 刊 ０１ 月 年１
预 以按 照预设 的程序 自动完成Ｇ Ｃ 可 Ｐ
Ｆ ｅｔｌ Ｓ ｒ ｓ ｒ ｓ ｅ ｅｉ 全自动Ｓ Ｅ Ｇ Ｃ ￣确定 ｅ ｙ ｅ Ｐ／ Ｐ ／
量浓缩全在线预浓缩 、 凝胶净化 、 量 定
邻苯二甲酸液相色谱检测方法
邻苯二甲酸液相色谱检测方法邻苯二甲酸是一种广泛使用于工业生产中的有机化合物，在塑料制造、涂料、酯类等领域有着广泛的应用。
然而，如果大量的邻苯二甲酸被释放到环境中，可能会对生态环境带来不利的影响。
因此，对邻苯二甲酸的检测方法的研究变得非常重要。
本文就邻苯二甲酸的液相色谱检测方法进行系统的介绍。
一、液相色谱技术。
液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种将待测物质通过柱上填充物（色谱柱）与移动相进行分离和纯化的分析技术。
因为液相色谱系统具有分离和分析效果好，灵敏度高，样品的准确性和重现性强等特点，因此在各种化学分析、制药、食品和环境分析领域都有着广泛的应用。
二、邻苯二甲酸检测方法的研究。
1.液相色谱-紫外检测法。
液相色谱-紫外检测法（Liquid chromatography – Ultraviolet detection, LC-UV）是常见的邻苯二甲酸检测方法之一、该方法的原理基于邻苯二甲酸对紫外光的吸收，在液相色谱分离后，用紫外光检测器检测邻苯二甲酸吸收的光谱强度，计算浓度。
然而，由于邻苯二甲酸的结构中不含有芳香环，其在紫外光的吸收较弱，检测灵敏度较低，因此该方法并不是最理想的检测方法。
2.液相色谱-质谱检测法。
液相色谱-质谱检测法（Liquid chromatography – Mass spectrometry, LC-MS）通过将邻苯二甲酸离子化，利用其分子结构特征通过质量分析对其进行检测。
该方法具有高效、高灵敏度、高选择性、精确度高等优点，但该方法仪器的设备和维护成本较高。
3.液相色谱-荧光检测法。
液相色谱-荧光检测法（Liquid chromatography – Fluorescence detection, LC-FL）可以通过邻苯二甲酸荧光检测器检测邻苯二甲酸分子不同的荧光特征。
该方法的检测灵敏度较高，而且有很好的选择性和准确性。
适合邻苯二甲酸水准较低的检测。
邻苯二甲酸酯的测试气质联用
邻苯二甲酸酯的分析标准品溶液的配制：1，一级储备液的配制：准确称取DBP、DIBP、BBP、DEHP标准品0.1g（精确至0.0001g）于小烧杯中，用正己烷定容至100ml，配制成浓度为1000mg/L的标准品溶液。
将该溶液置于冰箱中，4℃以下避光保存。
2，二级储备液的配制：分别取1000mg/L的DBP、DIBP、BBP、DEHP标准品溶液各1ml于10ml容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成浓度为100mg/L的混合标准品溶液。
3，工作曲线的配制：分别取上述100mg/L的邻苯二甲酸酯混合标准品溶液0.2、0.5、1、2、3ml于10ml容量瓶中，正己烷定容至刻度，配制成浓度为2、5、10、20、30mg/L的邻苯二甲酸酯的混合标准品溶液。
仪器方法分析仪器：气相色谱质谱联用仪1，气相色谱部分：进样口温度：280℃色谱柱：Rtx-5MS，0.25mm×30m×0.25μm程序升温：150℃保存1min，20℃/min升温至300℃，保持8min进样体积：1.0μl恒线速度：40cm/sec进样模式：分流分流比：9.02，质谱部分传输线温度：290℃离子源温度：230℃MS模式：Scan溶剂延迟时间：3.5min扫描范围:45-400测试结果判断及计算1，六种邻苯二甲酸酯的定量离子和定性离子分别如下所示：2，结果判定：用特征离子149提取后再根据保留时间、峰形和质谱图来确认，也可与标准谱图对照确认。
3，样品结果计算：样品浓度=C×V/W×DF/10000其中，C= 根据标准曲线得到的各个邻苯二甲酸酯的浓度，ppmV= 定容体积，mLW= 样品质量，gDF= 稀释倍数样品前处理1，ASTMD 3421:1975 方法：(1)将待测样品剪成3mm×3mm×2mm的碎片。
准确称取1.5g剪碎的样品（±0.0100g），置于滤纸桶中。
邻苯二甲酸酯及GCMS检测基本知识
迁移实验设计
模拟食品包装材料在实际使用过程中的迁移条件，如温度、时间、 食品类型等，研究邻苯二甲酸酯从包装材料向食品的迁移规律。
GCMS分析方法
采用GCMS技术对迁移实验中的样品进行分析，通过比较迁移前后样 品中邻苯二甲酸酯的含量变化，评估包装材料的安全性。
ABCD
回收率实验
在已知浓度的样品中加入一定量的目标化合物， 测量回收率以评估方法的准确性。
仪器性能检查
定期对GCMS仪器进行性能检查和维护，确保仪 器处于良好状态并获得可靠的结果。
XX
PART 05
GCMS检测邻苯二甲酸酯 应用实例
REPORTING
环境水样中邻苯二甲酸酯检测
采样与前处理
采集不同环境水样，如河水、湖水、地下水等，经过滤、 浓缩等前处理步骤，以去除杂质并富集目标化合物。
开发能够同时检测多种邻苯二甲酸酯的方法， 提高检测效率。
实际应用拓展
GCMS检测邻苯二甲酸酯的应用领域将进一步拓展，如环境监测、食品安全、 生物医学等。
XX
THANKS
感谢观看
REPORTING
前处理流程优化
提取方法
根据样品性质选择合适的 提取方法，如液液萃取、 固相萃取等。
净化步骤
通过硅胶、氧化铝等吸附 剂进行净化，去除干扰物 质。
浓缩与定容
将提取液浓缩至适当体积 ，并用有机溶剂定容，以 便于后续进样分析。
色谱条件设置
色谱柱选择
选用极性适中、对邻苯二甲酸酯有较好分离效果的色 谱柱。
流动相选择
XX
PART 06
GCMS检测邻苯二甲酸酯 挑战与展望
邻苯二甲酸酯 食品限量标准
邻苯二甲酸酯食品限量标准
一、范围
本标准规定了食品中邻苯二甲酸酯的限量要求、检验方法、标识要求和监管措施。
本标准适用于各类食品的生产、加工、运输、销售等环节。
二、限量要求
1. 邻苯二甲酸酯类物质的总含量不得超过0.05mg/kg。
2. 单一种类的邻苯二甲酸酯含量不得超过0.01mg/kg。
三、检验方法
1. 样品前处理：将样品粉碎，混合均匀，取适量样品进行提取。
2. 提取：将样品放入索氏萃取器中，用正己烷萃取，收集萃取液。
3. 净化：用硅胶柱分离萃取液，用正己烷洗脱，收集洗脱液。
4. 检测：用气相色谱仪检测洗脱液中的邻苯二甲酸酯含量。
四、标识要求
1. 食品生产者应在产品标签上明确标识邻苯二甲酸酯的含量。
2. 进口食品应注明原产国或地区的相关限量要求。
3. 食品添加剂生产企业应在其产品标签上注明邻苯二甲酸酯的含量。
五、监管措施
1. 食品生产者应遵守本标准规定，不得生产、销售超过限量要求的食品。
2. 食品添加剂生产企业应遵守本标准规定，不得生产、销售超过限量要求的食品添加剂。
3. 监管部门应对食品生产和销售环节进行监督检查，发现超过限量要求的食品和添加剂应立即采取措施予以处理。
4. 对于故意违反本标准规定的生产者和销售者，监管部门应依法予以处罚。
邻苯二甲酸酯的分析方法研究进展
邻苯二甲酸酯的分析方法研究进展作者：陈朝琼严平李茂全魏敏陈卫中【摘要】本文介绍了环境中邻苯二甲酸酯类化合物分析方法的研究进展，对大气、水体、土壤、植物、食品和塑料产品中的邻苯二甲酸酯的样品的预处理方法和检测技术作了综述，并提出了检测中存在的问题和研究前景。
【关键词】邻苯二甲酸酯；样品前处理；气相色谱法；液相色谱法Abstract：The analysis methods of phthalate esters in environment were reviewed.The pretreatment technology and determination methods of different samples in water,soil,air and so on were compared in this paper.Furthermore,the problems in determination and research prospect were mentioned in this paper.Key words：phthalate esters；sample pretreatment；gas chromatography；high performance liquid chromatography1 前言邻苯二甲酸酯(Phthalic Acid Esters,简称PAEs,别名酞酸酯)是一类重要的有机化合物质，常见的有邻苯二甲酸二甲酯(DMP)、邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、邻苯二甲酸二正丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二正辛酯(DOP)、邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)和邻苯二甲酸丁基苄酯(BBP)。
PAEs主要用作塑料的增塑剂，增大产品的可塑性和提高产品的强度，也可用作农药载体，驱虫剂、化妆品、香味品、润滑剂和去泡剂的生产原料。
近年来，随着工业生产和塑料制品的使用，邻苯二甲酸酯不断进入环境，普遍存在于土壤、底泥、水体、生物、空气及大气降尘物等环境样品中，成为环境中无所不在的污染物。
GC-MS测试多聚物中邻苯二甲酸酯的分析方法
GCMS测试多聚物中邻苯二甲酸酯的分析方法1.样品前处理步骤：a.索氏提取：参考EPA3540C将样品研磨至1.0mm粒径的颗粒，称取0.5g,将样品包裹在滤纸内，加入200mL二氯甲烷，进行6-12h索氏抽提，将抽提液浓缩至10ml。
b．微波萃取：参考EPA3546将样品研磨至1.0mm粒径的颗粒，称取0.5g放入微波萃取罐中，放入14mL丙酮/正己烷（1：1）保持温度：100-115度，保持功率：800w,微波萃取20分钟。
c．超声波萃取：参考EPA3550B对于油漆、色粉等物料，称取0.5g，加入约10mL甲苯或丙酮/正己烷（1：1），60度水浴萃取60分钟。
2.样品溶液净化：向玻璃层析柱中顺序填入去活石英棉、3g无水硫酸钠，5g活性硅胶,3g无水硫酸钠。
使用30mL正己烷洗柱并弃去。
将样品溶液放入柱内并使用130mL正己烷淋洗层析柱。
收集流出液、浓缩并用正己烷定容至10mL或适当体积。
3.仪器条件：色谱柱：Rtx-5MS石英毛细管柱，30m×0.25mm×0.25µm进样口温度：290℃，色谱-质谱接口温度：290℃，离子源温度：250℃柱流量：1.2mL/min隔垫吹扫流量：3mL/min色谱柱温度：150℃保持1min,20℃/min升至300℃,保持8min。
进样量：1μL,进样方式：分流进样，分流比:30:1采用全扫描模式,扫描范围：50-500，进行定性分析。
采用选择离子模式，进行定量分析。
见表1DBP，DNHP，BBP，DEHP，DNOP的曲线为5，10，30ppm DINP，DIDP的曲线为20，40，120 ppm1．标准品母液配制：分别准确称取0.01g DBP，DNHP，BBP，DEHP，DNOP，于5个10mL容量瓶中，正己烷定容，得DBP，DNHP，BBP，DEHP，DNOP浓度为1000 ppm。
分别准确称取0.02g DINP，DIDP于2个10mL容量瓶中，正己烷定容，得DINP，DIDP浓度为2000 ppm2．7种标准混合储备液配制：分别取1000 ppm 的DBP，DNHP，BBP，DEHP，DNOP标液1mL，DINP，DIDP标液2mL正己烷定容至10mL,得DBP，DNHP，BBP，DEHP，DNOP浓度为100 ppm，DINP，DIDP浓度为400 ppm。
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605-54-9 131-18-0 84-75-3 85-68-7 117-83-9 84-61-7 117-81-7 3648-21-3 84-62-8 117-84-0 68515-48-0 26761-40-0
分子式
C10H10O4 C12H14O4 C14H18O4 C14H14O4 C14H18O4 C16H22O4 C16H22O4 C14H18O6 C18H26O4
Bis(2-ethylhexyl) phthalate
18 邻苯二甲酸二庚酯
Di-n-heptyl phthalate
19 邻苯二甲酸二苯酯
Diphenyl phthalate
20 邻苯二甲酸二正辛酯
Di-n-octyl phthalate
21 邻苯二甲酸二异壬酯 22 邻苯二甲酸二异癸酯
Diisononyl ortho-phthalate Diisodecyl ortho-phthalate
C20H30O4
C16H22O6 C18H26O4 C20H30O4 C19H20O4 C20H30O6 C20H26O4 C24H38O4 C22H34O4 C20H14O4 C24H38O4 C26H42O4 C28H46O4
含量 ≧（%）
99.5 99.0 98.5 97.0 98.0 99.0 99.0 94.0 99.5
190
15
22种邻苯二甲酸酯化合物谱图
In te n s ity , c p s
XIC of +MRM (44 pairs): 195.3/163.1 amu from Sample 6 (std200ppb) of 20110618paes.wiff (Turbo Spray)
3 邻苯二甲酸二异丙酯
Diisopropylo-phthalate
4 邻苯二甲酸二烯丙酯 5 邻苯二甲酸二丙酯 6 邻苯二甲酸二异丁酯 7 邻苯二甲酸二丁酯 8 邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯
Diallyl phthalate Dipropyl phthalate Diisobutyl phthalate Dibutyl phthalate Bis(2-methoxyethyl) phthalate
参考保留时间
离子对
4.82 4.89 5.88 5.93 6.36 6.87 7.06 7.67 8.77 8.83
195.3/163.1 195.3/133.1 283.4/207.1 283.4/59.1 311.4/22.1 311.4/149 223.3/149.3 223.3/177.0 247.3/189.2 247.3/149.0 251.2/209.0 251.2/167.0 251.2/149.0 251.2/191.1 319.4/225.2 319.4/77.0 279.4/223.2 279.4/267.2 313.3/205.1 313.3/149.1
9 邻苯二甲酸二异戊酯
Di-iso-amyl phthalate
10 邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯 Bis(4-methyl-2-pentyl) phthalate
11 邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯 Bis(2-ethoxyethyl) phthalate
12 邻苯二甲酸二戊酯
Dipentyl phthalate
0.7
100
1
100
1
70
0.7
70
0.7
LC-MS方法推荐色谱柱： Poroshell 120 EC-C18, 2.1mm, 100 mm, 2.7 um
22种邻苯二甲酸酯
序 中文名称
号 1 邻苯二甲酸二甲酯 2 邻苯二甲酸二乙酯
英文名称
Dimethyl phthalate Diethyl phthalate
*必要时可在样品中加入0.1 mL磷酸离心沉淀蛋白后，再取清液过Chem Elut 小柱净化
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Phthalates analysis with 5975C GC/MSD June 2011
糕点，饼干类食品基质
使用Agilent Bond Elut QuEChERS 试剂包， 5982-5555： 可处理15g样品： 6 g MgSO4；1.5g NaCL 5982-5122 ：50 mg PSA，50 mg C18EC，150 mg MgSO4
10.39
335.5/251.4
170
12
335.4/149.1
210
21
17
DHXP
334.45
10.53
335.4/233.3
170
11
363.4/149.3
170
21
18
DHP
362.51
10.82
363.4/247.3
170
11
391.3/148.7
270
25
19
DEHP
390.56
11.05
98.0
99.5 99.2 99.0 97.0 98.5 99.5 99.0 97.0 99.5 97.5 98.5 99.5
质谱条件
离子化模式：电喷雾电离，正离子模式； b）质谱扫描方式：多反应监测（MRM）。 c）分辨率：单位分辨率。 d）气帘气压力（CUR）：30Psi（氮气）； e）离子源喷雾电压（IS）：5500V； f）雾化温度（TEM）：550°C； g）雾化气压力(GAS1)：50Psi（氮气）； h）加热辅助气(GAS2)：50Psi（氮气）； i）碰撞气流速比（CAD）：4； j) 其他参数见表
306.4
10.11
307.4/237.2
100
13
307.4/167.2
100
20
14
DPP
306.4
10.21
307.4/149.1
190
16
331.4/167.0
170
20
15
DCHP
330.43
10.25
331.4/249.3
150
14
335.5/167.2
170
17
16
BMPP
334.43
邻苯二甲酸酯样品前处理方法 和色谱柱选择
吴翠玲 2011/6/24
各种样品基质中邻苯二甲酸酯样品前处理推荐方案
1、饮料等水性基质 2、糕点类固体基质 3、含油类较多的食品基质 4、血样和尿液
饮料中邻苯二甲酸酯
推荐样品前处理产品： Chem Elut 5g（12198006）
Chem Elut HDPE（订货号12198022 ,20mL）
22种邻苯二甲酸酯化合物LC-MS/MS特征选择离子及质谱参数
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
化合物 DMP DMEP DEEP DEP DAP DIPrP DPrP DPHP DIBP BBP
分子量 194.19 282.30 310.3 222.24 246.27 250.29 250.29 318.33 278.35 312.36
样品
1. 试剂空白 2. 样品空白 3. 100 ppb 10 mL Y 4. 100 ppb 15 mL Y 5. 100 ppb 10 mL H 6. 100 ppb 15 mL H 从谱图来看，空白除了仪器 本身本底外，试剂1没有。 样品有可能DINP。 除了DEHP, DNOP, DHXP, DIDP, DIDP，100 ppb加标回 收率在50%以上，有可能与本 底较高有关。
样品
实验同时比较了带塑料管的QuEChERs kit， 发现有较高的DEHP本底。
尿液和血液中邻苯二甲酸酯
推荐产品： Bond Elut NEXUS 60mg，3mL （12103101）
含油类较多的食品基质：Packaged lunches，方便面油 包等
推荐SPE柱： Bond Elut FL，1g，6mL（12256014/124007,不锈钢筛板）+ Bond Elut PSA 500mg，3mL（12102042/12124039不锈钢筛板}
22种邻苯二甲酸酯化合物LC-MS/MS特征选择离子及质谱参数(续）
367.4/249.3
130
11
11
DBEP
366.45
8.92
367.4/101.1
130
18
279.4/205.1
140
11
12
DBP
278.35
9.05
279.4/149.2
140
20
307.4/219.2
190
12
13Байду номын сангаас
DIPP
去簇电压/V
105 100 150 150 150 100 130 130 150 100 70 70 120 120 100 100 100 100 170 170
碰撞气能量/V
14.3 32 10 16 10 41 24 11.6 11 23 13 16 23 13 14 50 13 15.5 10.3 18
GB/T21911-2008推荐凝胶柱
含油类样品推荐凝胶柱： 1、Ecospheres glass column, 450 x 25 mm 填料：100gPL1460-4M03整套玻璃珠：PL1310-0054 2、EnviroPrep, 300 x 25 mm (PL1210-6120EPA)
HPLC-MS/MS分析22种邻苯二甲酸酯
391.3/113.0
250
14
391.6/149.2
190
19
20
DNOP
390.56
11.22
391.6/261.4