病毒载量检测方法及其意义
浅谈昆明慢性丙型肝炎高病毒载量基因的分型及临床意义
１ 资料 与方 法 １１ 一般资料 １ 例 为慢 性丙型肝 炎高病毒 载量患者 ， ． ｌ ｌ ＨＣ —ＲＮＡ＞１ ０ Ｅ ０ Ｉ ＭＬ。 Ｖ ． ３ ＋ ６Ｕ／ 男性６ 例， ０ 女性５ 例 ， ｌ 年龄
ｌ－ ３ 。 １７ 岁
１２ ． 方法
１ ２． Ｈ ＣＶ ． １ ＲＮＡ提 取 取 患者 血 清 ｌ Ｏ ｌＩ ｕ ￣ 人 Ｏ １ ２ ０ ｌ ＮＡ提取液 ， 合摇匀，ｒｉ后８ ０ 离 ｍｉ 去除 ０ｕＲ ｔ 昆 ５ ｎ ０ ０Ｘ ａ ｇ ６２ ｎ， 上清 液 。 Ｏ ｕＲＮＡ提取 液 ， 合摇 匀 ，０ ０ 离 ２ ｎ， 加２ ｏ ｌ 混 ８ ０ ｇ ６ ｍｉ 去 Ｘ 除上 清 液 。 ７ ％乙醇 （ Ｆ Ｃ 溶 解 ）０ｕ ？合 摇 匀 ，０ ０Ｘ 加 ５ Ｄ Ｐ 水 ４０ ｌ Ｎ ８ ０ ｇ离 ２ｍｉ 去 除上 清 液 ， 复 一 次 。 开 管 盖 ， ５℃ 干 燥 ６ ｎ， 重 打 ６ １ｍｉ 盖 上 管 盖 备 用 或一７ ℃冻 存 备 用 。 ０ ｎ， Ｏ １ ２２ ＲＮＡ逆转录及扩增 在上述提取 的ＲＮＡ管中分 ． ．
《 求医问药 半月刊 Ｓｅ 下 ｅｋＭｅｉ ｌ ｎ ｓ ｈ Ｍｅｉｎ ２ １ 年 第 ９ ｄ ａ Ａ ｄＡ ｋＴ ｅ ｄｃ ｅ ０ １ ｃ ｉ 卷 第 ９ 期
３ ３
℃）轻摇（０ ５ Ｘ ）避 光反应 ｉｍｉ， ， ３— ０ ｇ ， ０ ｎ 去除结合 液。 加入３ｍｌ ０ 杂交液 （０ ３ ＂ ， ２－ ０ Ｃ）室温轻摇 ， 重复洗涤３ ， 次 每次５ ｎ 去除杂 ｍｉ， 交液 。 加入 新 配 制 的 显 色 液 ， 光 反 应 ５ ０ ｎ 去 除显 色 液 。 避 —１ｍｉ ， 加 入 ３ ｍｌ 液 ， 温 轻 摇 ３ ｎ， 去 溶 液 。 入 ３ｍｌ 除 离子 ０ 溶 室 ｍｉ 弃 加 ０ 去 水， 室温轻摇３ ｎ 取出杂交膜条 ； 吸水纸吸去膜条表 面水 ｍｉ ， 用 分 。 用 扫 描 仪 扫 描 膜 条 得 出信 号 值 ， 使 根据 信 号 值 采 用 专 业 分 析软件进行基 因型结果判断（ 各基因型别位点ｃ ｔｆ值根据统 ｕ ｏｆ 计学方法计算得 出 ， 已预设在分析软件 中） 。
EBV+DNA定量检测在诊断儿童EB病毒感染中的临床意义
Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ＥＢＶ
ｌｏａｄ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ２０５ ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ．Ａｔｙｐｉｃａｌ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｓｈａｐｅｄ
ｔｏ ６ ｙｅａｒｓ
０（２＝１．０２４６．Ｐ＝０．３ １ １ ４）．ＥＢＶ
ｏｌｄ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ，ｔｈｅｒｅ ｗａｓ
ｃａｓｅｓ
ＤＮＡ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｆｒｏｍ ｌ ｔｏ ３ ｙｅａｒｓ ａｎｄ ｆｒｏｍ ４
ｎｏ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｍｏｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｇｅｓ
ｌｙｌｎｐｈｏｃｙｔｅｓ
ｒａｔｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ＥＢＶ ＤＮＡ—ｎｅｇａｔｉｖｅ
ｃｈｉｌｄｒｅｎ ｗｉｔｈ
ｆｅｖｅｒ．ａｎｄ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｘ２：３１．３５５１，Ｐ＜０．Ｏ００１）．④Ｔｈｅ ４２
Ｒｅｓｕｌｔｓ：＠Ｔｈｅ
４２ ｏｕｔ ｏｆ ２０５
ｃａｓｅｓ
ｗｉｔｈ ｆｅｖｅｒ ｗｅｒｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｆｏｒ ＥＢＶ ＤＮＡ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ
ｂｌｏｏｄ，ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ２０．５％，ａｎｄ ２３ ｍａｌｅｓ ａｎｄ １ ９ ｆｅｍａｌｅｓ，ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ Ｗａｓｈ’ｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
Ｃｈｉｌｄｒｅｎ
目
录
引言……………………………………………………………………………………．１
儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在病情评估中的临床意义
儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测在病情评估中的临床意义蔡勉珊;方炳雄;黄丽旋;游丽莎;秦泽鸿;谢城【摘要】目的探讨儿童外周血单个核细胞EB病毒(EBV)DNA载量检测在病情评估中的临床意义.方法统计2016年1月～2017年12月本院儿科收治的1171例发热患儿EBV检测阳性率.将符合纳入标准的146例EBV阳性的患儿,分为高病毒载量组和低病毒载量组,分析两组患儿的临床资料和实验室指标.结果以发热为主诉的患儿,EBV阳性率为20.32％,其中7岁以内的儿童比大龄儿童EBV阳性检测率高(P<0.05);高病毒载量组患儿扁桃体炎发生率、淋巴结肿大发生率和外周血异常淋巴细胞比例、淋巴细胞计数、淋巴细胞比例,以及血清中TBA、LD、LDH和CK-MB水平,均比低病毒载量组高(P<0.05);高病毒载量组患儿热退时间和住院天数比低病毒载量组长(P<0.05).结论儿童外周血单个核细胞EB病毒DNA载量检测有助于病情评估,EBV载量可预测患儿的临床转归情况.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2018(008)014【总页数】5页(P7-11)【关键词】儿童;EBV病毒DNA;外周血单个核细胞;病情评估【作者】蔡勉珊;方炳雄;黄丽旋;游丽莎;秦泽鸿;谢城【作者单位】广东省普宁市人民医院儿科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院检验科,广东普宁 515300;广东省普宁市人民医院儿科,广东普宁 515300【正文语种】中文【中图分类】R720.5EB 病毒（Epstein-barr virus， EBV）为双链DNA病毒，是一种嗜人B淋巴细胞病毒。
EBV感染是儿科比较常见的一类病毒性传染病，感染时，症状轻重不一，多以扁桃体炎、淋巴结肿大、肝脾肿大为主要临床特征[1-2]。
病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值分析
Mod Diagn Treat现代诊断与治疗2021Jan32（1）艾滋病是由于感染人类免疫缺陷病毒（HIV）而引发的全身性疾病，该疾病可导致人体出现不同程度的免疫缺陷，且随着病程越长，免疫缺陷越严重，因此应早诊断早治疗，以降低疾病损伤［1］。
HIV分为HIV-1型和HIV-2型，以HIV-1为主。
目前临床多采用免疫印迹实验（WB）确诊艾滋患者，但诊断过程中，仍会出现部分不确定感染患者［2］。
根据技术要求，HIV抗体不确定的样本需要结合同时期流行病学资料，并于4周后进行随访检测，且在随访期间，带型患者有进展但是检测结果并不满足阳性标准的患者，仍需随访至第8周，再次检测，整体耗时2个月，时间较长，可能会增加病毒传播风险，同时可能延误患者早期治疗。
当人体被HIV-1感染后，病毒载量随之增加，且会对淋巴系统进行攻击，从而对机体免疫系统造成损伤，而有部分研究学者认为，病毒载量检测可提高HIV-1的检出率［3］。
基于此，本研究选取我院治疗的128例疑似艾滋病患者作为研究对象，旨在分析病毒载量检测对1型艾滋病病毒的诊断价值。
报道如下。
1资料与方法1.1一般资料选取2018年8月~2020年3月我院收治的128例疑似艾滋病患者，所有患者均进行酶联免疫吸附试验、WB检测，不确定患者进行病毒载量检测。
其中男82例、女46例；年龄26~39（32.31±5.80）岁。
1.2纳入与排除标准纳入标准：（1）近3个月内未服用免疫抑制剂等药物；（2）首次检查；（3）患者同意翻阅病历资料。
排除标准：（1）抗病毒药物治疗史；（2）依从性差、无法完全配合检查；（3）无其他免疫系统疾病。
1.3方法HIV抗体检测程序和方法根据《全国艾滋病检测技术规范（2015年修订版）》［4］进行。
1.3.1筛查阳性复试实验分别使用北京金豪公司HIV-1+2抗体和珠海丽珠公司HIV-1+2抗原抗体进行两种不同酶联免疫吸附试验。
操作严格按照试剂盒说明书进行。
艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范
艾滋病检测技术HIV-1核酸检测规范1 范围本章规定了HIV-1核酸定性和定量检测（病毒载量）的意义、实验室要求、检测方法、质量控制及结果判定标准，适用于HIV-1核酸的定性检测和定量的测定。
2 核酸检测的意义核酸检测可用于HIV感染诊断、血液筛查、病程评估及抗病毒治疗效果监测。
2.1 感染诊断2.1.1 作为补充试验：用于筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性样本的判定；对筛查试验有反应但抗体确证试验不确定或阴性的疑似艾滋病晚期患者需将核酸检测、临床病史和CD4+T淋巴细胞计数检测结果综合判断。
对于抗体筛查试验阴性但免疫功能低下者，也可进行核酸检测，结合临床综合判断。
2.1.2 急性期诊断：对近期有明确流行病学史的个体，包括患有性病或有性病史，有同性和异性性接触不安全性行为，有共用注射器吸毒史，有医源性暴露史，有职业暴露史，HIV/AIDS 患者的配偶或性伴侣，HIV/AIDS 母亲所生子女等，如抗体筛查试验无反应，可通过核酸检测判定是否为急性期感染。
核酸检测结果阴性或低于最低检测限不能排除HIV-1感染。
2.1.3 HIV-1暴露婴儿感染早期诊断HIV-1感染母亲所生小于18个月龄的婴儿，不同时间的两次HIV-1核酸检测均为阳性即可作出诊断。
18个月龄以上儿童诊断与成人相同。
2.2 血液筛查：对献血者及采供血机构的原料血浆进行核酸检测，可及时发现窗口期感染，降低输血的“残余危险度”，减少二代传播。
2.3 抗病毒治疗效果监测HIV感染者和艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1病毒载量检测，可判断抗病毒药物治疗的疗效。
病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用。
一般启动抗病毒治疗6个月后应进行病毒载量检测，以监测治疗效果，每年应检测一次。
治疗前进行检测可了解病人的病毒载量基线，有助于评价治疗后效果。
如适时重复检测病毒载量，没有低于检测限，需要考虑治疗是否失败。
病毒载量检测方法及其意义
工效率
6.5小时48份标本
48小时192份标本
二、病毒载量检测的意义
早期诊断 婴儿的早期诊断：感染HIV的母亲所生婴儿小 于18个月时，不能按照常规检测程序进行抗体检测 来确证是否感染了HIV。这种情况下，采集婴儿不 同时间的样本进行HIV核酸检测。 也可使用集合法对采供血机构的原料血浆及 HIV抗体阴性的高危人群样品进行核酸检测，及时 发现窗口期感染者，降低“残余危险度”，预防传 播。
指导抗病毒治疗及疗效判定
通常在病毒载量达到一定水平后（如>3500050000拷贝/毫升）抗病毒治疗才显示良好的 治疗效果。治疗后通过病毒水平的检测能够 确定治疗是否有效。理想的结果是治疗24周 后，病毒水平会控制在检测线以下。
.耐药性监测
可用于HIV耐药性检测和监测。治疗后病毒载 量得不到有效控制时被认为治疗失败。引起 治疗失败的原因之一是病毒对治疗药物的敏 感性降低或不敏感，也就是产生了耐药。对 病毒载量>1000拷贝/毫升的样本进行耐药性 检测对临床医生修改治疗方案有一定的帮助。
Roche
Simens(Bayer)
RT-PCR bDNA 产物为DNA，易发生污染，不对目标进行扩增，只进 对实验室区域划分严格 行信号放大
检测
辣根过氧化物酶标记检测 探针，TMB底物显色 用样品OD值和定标物OD 值的比值计算结果，需要 稀释扩增产物，检测范围 小，并且受酶活性、底物 氧化显色的影响 每次检测12或24个标本 需要设一个阴性、一个弱 阳性和一个强阳性对照 48人份/盒 每次试验12人份分装 一旦打开试剂盒，需要在 1个月内使用完48人份， 否则试剂失效 8小时24份标本
标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度与
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
包3-病毒载量试剂（东北制药）
东北制药HIV病毒载量检测试剂技术参数
1.原理和方法：采用磁珠法提取血清或血浆样本中病毒RNA，采用Taqman探针法进行HIV-1的实时荧光定量RT-PCR检测。
2.定量方法：外部标准品定量
3.检测项目：HIV－1RNA定量检测
4.最低检出限：≤50IU/mL（约28copies/mL,置信度≥95%。
）
5.线性范围：2×102~1×109IU/mL
6.特异性：100%。
7.性能指标：Ct值的变异系数＜10%，浓度变异系数＜50%
8.样品类型：血清或血浆
9.样品体积和规格：可选0.2mL、0.4mL；48T/盒
10.样品处理能力：可以同时进行检测8~96个样品
11.检测效率：96个样品的检测时间约为4小时
12.检测亚型：HIV-1A，B，C，D，AE，F，G，AG-GH和O组，共9个亚型
13.抗污染方案：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。
14.检测平台：核酸提取及反应体系建立设备：Hamilton Microlab STAR，TECAN EVO全自动液体工作站；核酸扩增设备：ABI7500荧光定量PCR仪。
15.注册资格：须提供国食药监械（准）字号注册证。
16.供货计划：按用户要求数量准时分批次供货，到货试剂有效期大于10个月。
艾滋病实验室检测【最新】
艾滋病实验室检测HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。
HIV⁃1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准，HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV 感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。
1.HIV⁃1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。
HIV⁃1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。
补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法，条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。
筛查试验呈阴性反应可出具HIV⁃1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体，但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。
若呈阳性反应，用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或ELISA)或两种试剂进行重复检测，如均呈阴性反应，则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应，需进行补充试验。
补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生，报告HIV⁃1/2抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定，可进行核酸试验或2~4周后随访，根据核酸试验或随访结果进行判断。
补充试验HIV⁃1/2 抗体阳性者，出具HIV⁃1/2抗体阳性确证报告。
核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV⁃1核酸阳性，结果阴性报告HIV⁃1核酸阴性。
病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测，临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。
2.CD4+T淋巴细胞检测CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞，HIV感染人体后，出现CD4+T淋巴细胞进行性减少，CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置，细胞免疫功能受损。
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COBAS Amplicor HIV-1 Monitor 1.5
扩增：RT-PCR 检测：底物显色 先扩增再检测
普通方法：400-750,000 Copies/ml 超敏方法：50-75,000 Copies/ml 线性范围有限，高浓度 样本需稀释检测，超敏 方法需要用低温超速离 心机离心1个小时
? NucliSens EasyQ HIV-1实验 是使用NASBA技术的靶扩增试验。NASBA技术选 择性地直接扩增RNA而没有PCR步骤，用2个寡核苷酸引物、3个酶、三磷酸脱 氧核苷和合适的缓冲液进行一步夹心杂交。首先用异硫氰酸胍和氧化硅颗粒提取 高纯度RNA，RNA通过重复的合成和转录双链DNA中间体得到扩增。在AMVRT的作用下，HIV-1gag区的引物P1介导由标本RNA合成cDNA，RNA链被 RNAse降解。引物P2结合启动第二条DNA链合成，反义RNA通过T7多聚酶启动 双链DNA合成，这个循环不断重复，使得靶RNA在等温条件下大量扩增100万到 1000万倍，然后直接用化学发光法确定核酸量，通过HIV特异的gag和pol区的3 个内标同时扩增而达到定量目的。它具有高度敏感性和广阔的动态范围。 最近 NucliSens HIV-1定量实验有了较大改进，将NASBA核酸扩增技术与实时(realtime)检测技术结合起来,能够对检测进行实时监控。结果表达方式由每毫升标本 的拷贝数（cp/ml）改变为每毫升国际单位（IU/ml）。
AMPLICOR 分析仪根据HIV-1定量标准品的 数据计算每一个样本的HIV-1RNA 的含量。 可扩增HIV-1 M组的A-H基因亚型。
? 标准试验：能够定量400-750000拷贝/毫升的 HIV RNA，需要0.2毫升血浆。
? 超敏试验：能够定量50-75000拷贝/毫升的 HIV RNA,需要0.5毫升血浆。
Hale Waihona Puke 厂家 商品名 扩增和检测原理 线性范围
核酸提取
bioMerieux
Roche
Simens(Bayer)
Nuclisens Easy Q
扩增：NASBA 检测：Real Time. Molecular Beacon 实时扩增检测
50-3,000,000IU/ml(v1.1) 线性范围广，无需稀释标本重复检测， 报告国际单位，易于统一标准 25-10,000,000IU/ml(v2.0)
病毒载量检测方法及检测意义
新疆疾病预防控制中心 佐合拉.吐尔地 2012-05-16 伊宁市
? 病毒载量（viral load）代表的是病毒的负荷， 即体内复制的病毒的数量。实际上，体内复 制的病毒的数量是不能直接测量的，一般用 每毫升血浆中HIV RNA的拷贝数代表HIV的 病毒载量。
一、通常的病毒载量测定方法
可扩增HIV-1 M组的A-G亚型。
NucliSens 核酸分析系统利用三项技术： ?专利的BOOM核酸提纯技术:手 工 manual
半自动miniMAG 自 动 easyMAG ? “扩增RNA”的NASBA技术 ?使用荧光分子信标（molecular beacon)对扩 增产物的实时检测技术
三种病毒载量检测技术比较
COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR实验包 括以下步骤： ? 样本制备 ? 靶RNA的逆转录产生cDNA ? 用HIV-1特异互补引物进行靶cDNA PCR扩增 ? 通过比色进行与探针结合的扩增产物的测定
? COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR 试剂 对HIV-1病毒RNA的定量检测是采用HIV-1定 量标准品来完成的。HIV-1定量标准品是包括 作为HIV-1靶RNA引物结合部位和HIV-1扩增 子单一探针结合区的非感染性RNA转录物。 将已知拷贝数的HIV-1定量标准品加到每一个 样本中和HIV-1靶序列一起共同进行样本制备、 逆转录、PCR扩增、杂交和检测。COBAS
扩增HIV-1 M组的A-H亚型。
? 本实验系统检测的定量范围为50至500,000HIV-1 RNA拷贝 /ml。
? 检测结果以如下形式报告： ? 低于最低定量限的值报告为“<50” HIV-1 RNA拷贝/毫升。 ? 在最低定量限和最高定量限之间的值报告为实际检测值。 ? 高于最高定量限的值报告为“>500,000” HIV-1 RNA拷贝/
毫升。 ? 高于500,000HIV-1 RNA拷贝/毫升的样本位于检测的最高定
量限以上，必须适当稀释以获得确切的量值。在人血浆中稀 释高浓度样本，稀释用血浆需经VERSANT HIV-1 RNA3.0 Assay (bDNA) 检测鉴定不含HIV-1 RNA，按照实验流程重 新检测，得出的结果乘以稀释倍数以确定初始样本的病毒载 量。
bDNA方法(分枝DNA杂交试验) NASBA(核酸序列扩增试验) Cobas Amplicor HIV-1 Monitor(逆转录聚合酶链反应) 荧光定量PCR
? bDNA 是一种夹心式的核算杂交反应过程，用于直接定量检测血浆中HIV-1 RNA 的含量。首先，通过离心将血浆中的HIV-1 富集起来。HIV-1 病毒基因组RNA从 病毒颗粒中释放出来后，首先会被一组合成的寡核苷酸探针又称捕获探针所结合 并连接在微孔板上，然后通过另外一些靶定探针使病毒RNA与预放大探针结合。 捕获探针包括十七个可与基因组特异结合的捕获位，靶定探针包括81个可与基 因组特异结合的靶定区，分别靶定在病毒RNA pol 基因的不同区段。放大探针结 合到预防大探针上，从而形成支链DNA复合体。随后多拷贝的碱性磷酸酶（AP） 标记的探针与该复合体杂交结合。与化学发光底物共同孵育，所产生的光强度与 样品中HIV-1RNA的量成正比，以相对光强度单位（RLUs）表示的光度值被分 析系统记录下来，试剂盒中含有已知浓度的经β-丙内酯（BPL）处理的HIV18E5/LAV病毒液作为标准品，根据标准品的光吸收值绘制标准曲线，样品中 HIV-1 RNA的量可对照标准曲线求得。