饲料中维生素E的快速测定方法
饲料中维生素E的快速测定方法
饲料中维生素E的快速测定方法摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。
关键词维生素E 快速测定维生素E又称生育酚，能维持生殖器官的正常机能，提高母畜生殖能力，促进机体代谢，提高免疫力和抗应激水平，维生素E还有抗氧化作用，可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C 的氧化作用，提高维生素A的作用。
GB／T17812—1999是测定饲料中维生素E含量的传统方法，其原理是用碱液皂化样品，使试样中天然生育酚释放出来，再用乙醚提取未皂化的物质。
前处理需经过皂化、提取、浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。
生育酚在碱性环境下极不稳定，在皂化过程中易分解。
在提取过程中要用到大量的乙醚，对操作人员的健康伤害大。
我们经多次试验，用热的甲醇超声样品，使维生素E溶解到甲醇中，将溶液过膜，上机测定，这种方法操作简便，试剂消耗少，回收率稳定。
1 材料和方法1.1 方法原理样品中加入甲醇并于一定温度水浴超声萃取，使维生素E溶解于甲醇中，经高效液相测定，用外标法计算其含量。
1.2仪器设备高效液相色谱仪（安捷伦1100型），配DAD或VWD检测器；超声波振荡器；电子天平：（精确度分别为0.0001g和0.00001g）。
1.3 试剂1.3.1 甲醇（分析纯）1.3.2 维生素E（dl-α-生育酚）标准溶液1.3.2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃保存。
该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。
1.3.2.2 dl-α-生育酚标准工作液：准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。
配制工作液浓度每毫升含维生素E50µg。
1.4 色谱条件色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20µL。
配合饲料中维生素E含量的测定
VE 具有抗氧化功能、 维持动物正常的繁殖机 能、 增强动物机体的免疫功能和抗应激功能等，对 动物具有重要的营养作用，也是配合饲料中不可缺 少的成分。 但是，由于脂溶性维生素不能经尿排出， 所以摄入过量脂溶性维生素易引起中毒，导致动物 代谢障碍和生长受阻。 因此，准确快速测定配合饲 料 中 VE 含 量 ，对 于 优 化 饲 料 配 方 、提 高 养 殖 效 率 具有十分重要的意义。
2 结果与讨论 2.1 色谱分离
称取维生素 E 乙酸酯标准品 10.0mg 于 150mL 带盖密封玻璃瓶中，按上述方法（1.3.1）皂化，最 后 用 50mL 甲 醇 溶 解 。 此 时 维 生 素 E 乙 酸 酯 浓 度 为
图 1 VE 标准样色谱图
200mg/L，再将上述 200mg/L 标准配制成 50mg/L 的 标准工作溶液。
作者简介：杨曦，工程师，研究方向为农产品质量安全 与检测。
* 通讯作者：王华朗，高级畜牧师，研究方向为动物营养 与饲料研究。
批量检测样本，本方法针对国标方法无法进行批处 理样品进行改进， 改进后的检测方法提高工作效 率，适合对大批量样品进行检测。
1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
安捷伦 1260 Infinity 高效液相色谱仪，台式高 速冷冻离心机（德国 SIGMA），旋转蒸发仪（瑞士步 琪），分析天平（感量 0.0001g，德国赛多利斯），恒温 水浴锅（上海沪南科学仪器联营厂）。
标 准 品 ：VE （dl-а- 生 育 酚 乙 酸 酯 ） 标 准 品 ： （Sigma-Aldrich 公司）含量≥99.0%。
试剂：甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水 为超纯水。 1.2 色谱条件
A 色谱柱 XTerra MS C18，4.6×150mm，5μm B 进样量 20μL，柱温 27℃，流速 1.0mL /min C 检测器：紫外检测器 280nm 1.3 试样制备 1.3.1 皂化 称 取 2g（精 确 至 0.0001g）试 样 于 150mL 带 盖 密封玻璃瓶中，加 50mL 抗坏血酸溶液（5g/L），使试 样完全分散，浸湿，加 10mL 氢氧化钾溶液（500g/L）， 混匀。 充入氮气以隔绝空气，摇匀，置于 60℃水浴上 皂化 4h。 皂化后立即放入冰水中冷却。 1.3.2 提取 向皂化液中加入 50mL 乙醚（不含过氧化物），
饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法-最新国标
饲料中维生素E的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了饲料中维生素E的高效液相色谱测定方法。
本文件中“第一法皂化提取法”适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、复合预混合饲料和维生素预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚）的测定，“第二法直接提取法”适用于维生素预混合饲料、复合预混合饲料中维生素E（dl-α-生育酚乙酸酯）的测定。
本文件“第一法皂化提取法”的定量限为1mg/kg，“第二法直接提取法”的定量限为20mg/kg。
2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。
4第一法皂化提取法注意：使用的器皿不含有氧化性物质；分液漏斗活塞玻璃表面不涂油，处理过程在避光下操作；提取过程在通风柜中操作。
4.1原理试样用碱溶液皂化后，经液液萃取或固相萃取净化后，用高效液相色谱仪分离测定，外标法定量。
4.2试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。
4.2.1水：GB/T6682，一级。
4.2.2无水乙醇：色谱纯。
4.2.3无水乙醇。
4.2.4石油醚（沸程30℃-60℃）。
4.2.5甲醇：色谱纯。
4.2.6乙腈：色谱纯。
4.2.7甲酸。
4.2.8L-抗坏血酸。
4.2.9二丁基羟基甲苯（BHT）。
4.2.10无水硫酸钠。
4.2.11氢氧化钾溶液（500g/L）：称取500g氢氧化钾，加水溶解，冷却后用水定容至1000mL，混匀。
4.2.1270%乙醇溶液：取无水乙醇70mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.1310%甲醇溶液：取甲醇10mL，用水稀释，定容至100mL，混匀。
4.2.140.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水稀释，定容至1000mL，混匀。
饲料中维生素E的测定
维生素 E 具有广泛的生理功能，对于维护畜禽体内正常的生理功能有重要的意义。维 生素 E 能改变动物繁殖能力，增加免疫功能，促进细胞内呼吸，还可以保持体内的不饱和 脂肪酸，巯基化合物和巯基酶等免受氧化破坏，因而 VE 具有抗氧化作用。VE 是饲料行业 中重要的维生素类饲料添加剂。本实验参照 GB/T17812-2008《饲料中维生素 E 的测定》， 采用直接提取法，对 4％蛋鸡产蛋期复合预混料进行测定。
仪器配置
高压泵： 柱温箱： 检测器： 工作站：
C18 柱，250 mm×4.6 mm，5 μm 甲醇 1.0 mL/min 40 ℃ 285nm 20 μL
P-101A 单泵或升级为双泵 LC5510 柱温箱 LC5510 检测器 LC5510 液相色谱工作站
在线脱气机（选配）： DM-101 自动进0µg/mL 标样谱图
组分名称 维生素 E
图 2 饲料样品谱图
保留时间（min） 18.45
实验所需设备
设备名称 超声波水浴 溶剂过滤器
电子天平
C18 色谱柱
规格 —— —— 精度 0.0001g
设备名称 针式过滤器 一次性无针头注射器
规格 0.45μm，有机系
5mL/1mL
250 mm×4.6 mm， 5 μm
参照标准：GB/T17812-2008 样品溶液制备： 称取饲料样品 1g 左右（精确至 0.0001g）于 50mL 棕色容量瓶中，
加入约 40mL 甲醇，在 65℃超声波水浴中超声提取 30min，冷却
至室温，用甲醇定容至刻度，充分摇匀过滤待测。
色谱条件
色谱柱： 流动相： 流速： 柱温： 检测波长： 进样量：
-2-
HPLC法测定饲料中的维生素E
HPLC法测定饲料中的维生素E测定参数维生素E原理HPLC适用产品含维生素E的全价饲料、补充剂和预混料检测限量1mg/kg方法来源Schneider J,Betz R,Chen J.Animal Nutrition Technical Service ,BASF Corporation,Wyandotte,MI48192.实验室联系人姓名：Dr.J.Schneider公司：BASF AG仪器和试剂（及适用来源）（1）带磨口锥形瓶，500ml。
（2）圆底烧瓶，500ml。
（3）回流冷凝设备（带N2气进口）。
（4）分液漏斗，500ml。
（5）回流液设备，0-10ml和0-100ml。
（6）移液管。
（7）容量瓶。
（8）旋转蒸发器。
（9）甲醇（试剂级）。
（10）异丙醇（HPLC级）。
（11）乙醇（紫外光纯级）。
（12）50％KOH溶液（W/V）。
（13）硫化钠溶液：3.6gNa2S溶于10ml水中，并用甘油稀释至100ml。
（14）10％碳酸氢钠溶液（W/V）。
（15）丁基羟基甲苯（BHT）。
（16）石油醚：沸点40-60℃（Merck货号909）。
（17）饱和氯化钠溶液。
（18） 无水硫酸钠。
（19） dl-α-生育酚乙酸酯，USP 级，作校准用。
仪器设备（及适用来源）（1） ABI783型，或ABI980型，荧光检测器。
（2） 柱子：Novapak C 18,长5m ，内径8mm ，RCM-100Waters 。
（3） 洗脱溶剂：100％甲醇。
（4） 流速：1.2ml/min 。
（5） 波长：对紫外，290nm对荧光，激发波长290nm ，发射波长325nm 。
（6） 积分仪：Waters840数据系统。
标准溶液（1） 标准溶液I① 准确称取100mgdl-α-生育酚乙酸酯（USP 级，纯度100％）置于100ml 容量瓶，用乙醇定容。
② 紫外对照标准溶液I ：吸上标准液10ml ，用乙醇稀释至50ml ，用分光光度计在284nm下，以乙醇为对照测消光度。
液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E
分析与检测Oct 2018 CHINA FOOD SAFETY29现行的饲料中维生素A 、维生素D 3、维生素E（以下简称“VA、VD 3、VE”）的检测方法均为液相色谱法，其中VA 的检测方法为GB/T 17817-2010，定量限为1000IU/kg；VD 3检测方法为GB/T 17818-2010，定量限为500IU/kg；VE 的检测方法为GB/T 17812-2008，定量限为1IU/kg。
饲料原料中VA、VD 3、VE 含量在方法的定量限之下时，上述方法无法准确检出它们的含量。
虽然饲料原料中VA、VD 3、VE 的含量很低，但由于饲料原料的添加比例很大，因此饲料中VA、VD 3、VE 的总量十分很可观，故研究适用于饲料中VA、VD 3、VE 低含量的检测方法是一件十分有价值的工作。
1 研究内容1.1 优化前处理方法1.1.1 皂化反应溶液需先离心：皂化反应后的样液转移至离心管中，离心取上清液转移至分液漏斗中，防止样品残渣堵塞分液漏斗。
1.1.2 用石油醚代替乙醚：石油醚的提取效率和乙醚的提取效率基本相同，且因为石油醚的毒性低于乙醚，因此用石油醚代替乙醚。
1.2 考查线性相关性用甲醇溶液配置VA、VD 3、VE 工作液，其系列浓度分别为0.1IU/L、0.5IU/L、1.0IU/L、5.0IU/L、20.0IU/L、100IU/L。
相同条件下，用串联质谱检测上述曲线各点的峰面积，VA 的浓度与峰面积的相关系数为0.9998，VD 3的浓度与峰面积的相关系数为0.9999，VE 的浓度与峰面积的相关系数为0.9995。
1.3 净化小柱的选择根据VA、VD 3、VE 的性质特点，应选取吸附特性为非极性的净化小柱。
经查阅资料，选择安捷伦公司提供的Bond Elut ENN、Bond Elut LMS、Bond Elut ENV、Bond Elut PLEXA4种净化小柱。
笔者分别考察并进行了VA、VD 3、VE 过净化小柱的回收率，其中，Bond Elut PLEXA 净化小柱VA、VD 3过柱回收率达到99%，VE 过柱回收率达到93%。
维生素E测定方法2
MM_FS_CNG_0792饲料添加剂维生素E(原料) 检验规程滴定法分光光度法MM_FS_CNG_0792饲料添加剂维生素E(原料)1.适用范围本方法适于由三四基氢与异植物醇为原料，经化学合成制得的维生素E。
在饲料工业中作为饲料添加剂的原料，也可作为抗氧剂。
2. 分子式、分子量分子式：C31H52O3分子量：472.75(按1983年国际原子量)3.技术要求3.1.外观和性状本品为微绿黄色或黄色的粘稠液体，遇光色渐变深。
本品在无水乙醇、丙酮、乙醚或石油醚中易溶，在水中不溶。
4.4.1.主要试剂无水乙醇；乙醚；硝酸；2,2-联吡啶：0.5%乙醇溶液。
三氯化铁：0.2%乙醇溶液；氢氧化钾：0.5mol／L乙醇溶液(按中国药典1985年版二部附录128页制备)；95%乙醇；硫酸：12%(V／V)乙醇溶液；硫酸铈；二苯胺：1%硫酸溶液；硫酸铈标准液：0.01mol/L。
按中国药内1985年版二部附录134页制备和标定。
4.2.仪器一般实验仪器设备和折光仪、紫外分光光度计。
4.3.鉴别试验4.3.1.称取样品约30mg，加无水乙醇10mL溶解后，加硝酸2mL，摇匀，在75℃加热约15min，溶解显橙红色。
4.3.2.称取样品约10mg ，加0.5mol/L 乙醇制氢氧化钾溶液2mL ，煮沸5min ，放冷，加水4mL 及乙醚10mL ，振摇，静止使分层，取乙醚液2mL 和0.5%2，2-联吡啶乙醇溶液数滴，0.2%三氯化铁乙醇溶液数滴混合，应显血红色。
4.4.维生素E 含量测定4.4.1.测定方法称取样品0.2g(准确至0.0002g)，置具塞棕色锥形瓶中，加无水乙醇25mL 溶解，加12硫酸乙醇溶液25mL ，加热回流3h ，放冷，移置100mL 棕色量瓶中，用少量无水乙醇洗涤容器，洗液并入量瓶中，加无水乙醇稀至刻度，摇匀，准确量取25mL ，置于三角瓶中，加95%乙醇20mL ，水10mL ，1%二苯胺硫酸试液2滴，用0.01mol ／L 硫酸铈标准溶液滴定，滴定速度以每10s25滴为宜，至溶液由亮黄色转变为灰紫色，持续10s 即为终点，并将滴定结果用空白试验校正。
高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
赵小阳;孟兆会
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2001(000)015
【摘要】@@ 以维生素E为原料,加入一定的吸附剂制成的50%维生素E粉的测定,国家标准采用硫酸铈标准溶液滴定法测定,分析时间长,易产生误差.我们采用无水乙醇提取,高效液相色谱法测定维生素E的含量,分离效果好,分析速度快,结果准确,现将方法介绍如下.rn1材料与方法rn1.1仪器美国Waters高效液相色谱仪,510高压泵,Millennium 32操作系统,484紫外可调波长检测器.rn1.2试剂本方法所用试剂除另有规定外,均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水.所用试剂有:无水乙醇,甲醇(色谱纯).
【总页数】1页(P24)
【作者】赵小阳;孟兆会
【作者单位】广州惠华动物保健品有限公司;广州惠华动物保健品有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S816
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1.高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量 [J], 何荣芬
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5.高效液相色谱法测定维生素E粉含量 [J], 商军;华贤辉;王蓓;虞哲高;陈晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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饲料中维生素E的快速测定方法
摘要：用简便快捷的方法测定饲料中的维生素E，试剂消耗少，稳定性强，回收率也较为理想。
关键词维生素E 快速测定
维生素E又称生育酚，能维持生殖器官的正常机能，提高母畜生殖能力，促进机体代谢，提高免疫力和抗应激水平，维生素E还有抗氧化作用，可防止脂肪化合物、维生素A、硒(Se)、两种硫氨基酸和维生素C 的氧化作用，提高维生素A的作用。
GB／T17812—1999是测定饲料中维生素E含量的传统方法，其原理是用碱液皂化样品，使试样中天然生育酚释放出来，再用乙醚提取未皂化的物质。
前处理需经过皂化、提取、浓缩几个步骤，耗时长、过程繁琐、消耗试剂多等局限性。
生育酚在碱性环境下极不稳定，在皂化过程中易分解。
在提取过程中要用到大量的乙醚，对操作人员的健康伤害大。
我们经多次试验，用热的甲醇超声样品，使维生素E溶解到甲醇中，将溶液过膜，上机测定，这种方法操作简便，试剂消耗少，回收率稳定。
1 材料和方法
1.1 方法原理
样品中加入甲醇并于一定温度水浴超声萃取，使维生素E溶解于甲醇中，经高效液相测定，用外标法计算其含量。
1.2仪器设备
高效液相色谱仪（安捷伦1100型），配DAD或VWD检测器；超声波振荡器；电子天平：（精确度分别为0.0001g和
0.00001g）。
1.3 试剂
1.3.1 甲醇（分析纯）
1.3.2 维生素E（dl-α-生育酚）标准溶液
1.3.
2.1 dl-α-生育酚标准储备液：准确称取dl-α-生育酚纯品油剂（USP）100.0mg于100.0mL棕色容量瓶中，用正己烷溶解并稀释至刻度，混匀，4℃
保存。
该储备液浓度每毫升含维生素E1.0mg。
1.3.
2.2 dl-α-生育酚标准工作液：
准确吸取dl-α-生育酚标准储备液（1.3.1.1）1.00mL置于10mL棕色容量瓶中，用氮气吹干，用甲醇稀释至刻度，混匀，再按比例稀释。
配制工作液浓度每毫升含维生素E50µg。
1.4 色谱条件
色谱柱为 Zorbax SB-C18 5μm 4.6×150mm（或相当型号色谱柱）,流动相为95％甲醇(色谱纯)，流速1.0mL/min，柱温为室温，检测波长280nm，进样体积20µL。
1.5 试样的提取
称取适量样品与100mL棕色容量瓶中（维生素预混料0.5g,复合预混料
5－10g），加甲醇80mL，置于50℃水
浴中，超声提取15分钟，其中每5min 取出用手振摇一次。
超声结束后，取出冷却至室温，用甲醇定容至刻度，混匀。
取上层清夜过滤或离心，再经0.45µm膜过滤，供高效液相色谱分析用。
1.6 回收率的测定取适量维生素E标准储备液于100mL棕色容量瓶中,用氮气吹至快干,再称取5g空白样品,使维生素E的含量分别为50µg/g、100µg/g和500µg/g，每个浓度点配制5份样品，求其平均回收率。
按1.5项下的方法处理后进行色谱分析，以外标法计算含量，以测得量与添加量之比来计算回收率。
同时按GB/T17817
－1999测定回收率，比较测定结果。
2 结果
2．1标准曲线
维生素E 的线性回归方程为：y=4.3513x-0.41858,线性范围是：5µg/mL --300µg/mL,相关系数r ＝0.9999(如图1)。
图1.维生素E 标准曲线
2.2回收率测定结果见表1，其高效液相色谱图见图2
回收率测定结果5=n （表1）
添加浓度（µg/mL） 20 50 100 实测浓度（µg/mL） 20.6 49.7 99.8 平均回收率（％） 103 99.4 99.8 变异系数RSD ％ 1.9 1.2 0.8
图2 高效液相色谱图（A 维生素E 标准
工作液，B 空白样品，C 添加样品）
2.3与GB/T17812-1999测定结果的比较
按GB/T17812-1999同时测定添加样品回收率，结果如表3 回收率测定结果5=n （表3）
添加浓度（µg/mL） 20 50 100 实测浓度（µg/mL） 18.4 48.8 98.2 平均回收率（％） 92.0 97.6 98.2
由表2可见，GB/T17812处理样品回收率偏低，由于前处理要经过皂化、提取、浓缩等几个步骤，操作人员稍有不慎就有可能造成样品损失，特别是皂化后样品中天然的生育酚释放出来，而生育酚在碱性环境中不稳定，皂化后必须尽快提取，否则会使回收率偏低。
3.讨论与结论
min
4
5
6 7 8 9 10 11 mAU
0 10 0 0
DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350, 100
(VADE07Z\025-3401.D)
B
min
4 5 6 7 8 9 10 11
mAU
-5 -2.5 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350,100 (VADE07Z\024-3301.D ) A 9.293 min
4
5
6
7
8
9 10 11 mAU 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15
17.5 DAD1 B, Sig=280,16 Ref=350,100,
TT (VADE07Z\035-4301.D)
C
9.297
上述试验表明用这种快速方法测定饲料中维生素E的含量简便快捷便于操作，省时省力，回收率高，是一种较为理想的前处理方法，适合大批量样品检测。