饲料企业维生素检测及产品价值发现-赵小阳
饲料中常用维生素的检测及鉴别
饲料中常用维生素的检测及鉴别何绮霞【摘要】维生素是动物机体维持生命活动、生产必须的营养成分,是饲料的重要组分。
因此,对饲料厂来说,快速鉴别维生素及掌握正确检测方法十分关键。
为此,本刊特邀广东省农科院何绮霞高级药师就《饲料中维生素的检测方法及真假鉴别》为题,综述了脂溶性、水溶性维生素的鉴别、检测方法,本刊将在第6、第7期刊登,敬请关注。
【期刊名称】《广东饲料》【年(卷),期】2012(000)006【总页数】2页(P41-42)【关键词】水溶性维生素;快速鉴别;饲料厂;检测;广东省农科院;生命活动;动物机体;营养成分【作者】何绮霞【作者单位】广东省农科院农产品质量安全与标准研究中心,广州510620【正文语种】中文【中图分类】S816.32维生素是饲料中的重要组成部分，是一组化学结构不同，生理作用和营养功能各异的化学物。
动物对维生素的需要量极微，但其生理、营养作用显著。
所以在饲料中是否加入维生素、加入的量是否准确，对动物的生长、发育和养殖企业获得的经济效益都会受到很大的影响。
《饲料添加剂品种目录》列出的维生素有32种，分为两类：一类是脂溶性维生素，包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K3；另一类是水溶性维生素，包括B族维生素和维生素C等。
维生素的测定方法包括高效液相色谱法、分光光度法、荧光光度法。
而高效液相色谱法是目前使用最多、比较理想的维生素分析方法，它具有分离效果好、灵敏度高、特异性强等特点，特别对于预混合饲料和配合饲料中的维生素，含量低，干扰成分多的情况下，只能用高效液相色谱法进行鉴别及含量分析。
本文主要介绍了维生素预混合饲料或配合饲料中维生素的鉴别及含量分析方法，以提供给广大饲料生产和养殖企业作为参考。
1 脂溶性维生素的鉴别、检测方法1.1 维生素A的鉴别及含量测定方法单体的维生素A肉眼看为淡褐色或灰黄色颗粒。
1.1.1预混合饲料中维生素A的鉴别方法。
取试样2～3g，加氯仿10mL，充分研磨，静置片刻后取少许上清液于点滴板上，加入1滴三氯化锑试液，即呈蓝色。
HPLC法测定饲料中维生素A_维生素D_3和维生素E(精)
HP LC 法测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E摘要:建立了以w (C 2H 5OH =95%乙醇直接提取,高效液相色谱仪在波长280n m 和254n m 处连续测定饲料中维生素A 、维生素D 3和维生素E 的方法。
色谱柱为大连依利特Hypersil ODS C 18(25c m ×416mm ×5μm ,流动相为甲醇水,流速为112mL /m in 。
维生素A 、维生素D 3、维生素E 的质量浓度分别在110mg/L ~2010mg/L 、015mg/L ~15.0mg/L 、215mg/L ~5010mg/L 范围内与峰面积呈良好的线性关系,检测限分别为013×10-6μg 、0104×10-6μg 、510×10-6μg,相对标准偏差分别为116%、217%、214%,平均回收率分别为99%、102%、98%。
关键词:高效液相色谱法;维生素A;维生素D 3;维生素E;饲料中图分类号:O65717+2文献标识码:B 文章编号:10062009(200502003302To D etect V itam i n A,V it am i n D 3and V it am i n E i n Feed w ith HPLC(Changsha Environm ental P rotection Technology Institute,Changsha,Hunan 410004,ChinaAbstract:To detect V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E in feed,which t o directly extract withw (C 2H 5OH =95%glycollic,with HP LC in 280n m and 254n m.Chr o mat ographic colu mn was Hy persil ODSC 18(25c m ×4.6mm ×5μm ,mobile phase was methanol -water,vel ocity of fl ow was 1.2mL /m in .W hen the mass concentrati on of V ita m in A,V ita m in D 3and V ita m in E was 1.0mg/L ~20.0mg/L 、0.5mg/L ~15.0mg/L 、2.5mg/L ~50.0mg/L,there had a well lineal relati onshi p.Detecti on li m it was0.3×10-6μg 、0.04×10-6μg 、5.0×10-6μg.Relative standard deviati on was 1.6%、2.7%、2.4%,recovery rate was 99%、102%、98%.Key words:HP LC;V ita m in A;V ita m in D 3;V ita m in E;Feed收稿日期:20040323;修订日期:20050130作者简介:王安群(1962—,女,江西吉安人,高级工程师,学士,从事环境监测教学工作。
液相色谱法测定饲料中维生素K_3
mAU 80
3.601
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2 结果与讨论
2.1 甲萘醌不同浓度标准溶液与峰面积响应值线 性关系
精密称取甲萘醌标准品 50 mg，置于 100 mL 的 容量瓶中，用甲 醇溶解，并定容至刻度，摇匀，作为 标准贮备液。取一定量的储备液，用甲醇稀释定容， 配 置 成 不 同 浓 度 的 标 准 工 作 溶 液 :0.025、0.05、0.1、 0.5、1.0、5.0、25.0、50.0 μg/mL，按照方法中色谱条件
表 3 氨基酸和维生素预混合饲料中亚硫酸氢烟酰胺 甲萘醌检测结果
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
样品名称
标示量 检验结果 回收率 每吨添加量
（/ g/kg） （/ g/kg） /%
肉（黄）小鸡 1 号小料 75 kg（20g/kg） 0.659 0.662 100.5
肉（黄）大鸡 1 号小料 130 kg（20g/kg） 1.141 1.163 101.9
（V3），使试样溶液浓度为每毫升含甲萘醌 0.1～5 μg。 通过 0.45 μm 有机滤膜过滤，用于高效液相色谱仪 分析。色谱图见图 1。
的甲萘醌相当于 2.186 mg 的亚硫酸 氢 烟 酰 胺 甲 萘 醌；1 mg 的甲萘醌相当于 2.198 mg 的二甲基嘧啶醇 亚硫酸甲萘醌。
饲料中常用维生素的检测及鉴别
饲料中常用维生素的检测及鉴别何绮霞【摘要】【接上期】2水溶性维生素的鉴别2.1维生素B1的鉴别及含量测定方法单体维生素B1外观呈白色结晶或结晶性粉末,稍有臭味,微苦。
2.1.1预混合饲料中维生素B1的鉴别方法（1）取预混料2～5 g,加水20 mL充分搅拌溶解,取滤液2 mL,【期刊名称】《广东饲料》【年(卷),期】2012(000)007【总页数】3页(P32-34)【关键词】维生素B1;预混合饲料;鉴别;检测;水溶性维生素;测定方法;结晶性;预混料【作者】何绮霞【作者单位】广东省农科院农产品质量安全与标准研究中心,广州510620【正文语种】中文【中图分类】S816.322 水溶性维生素的鉴别2.1 维生素B1的鉴别及含量测定方法单体维生素B1外观呈白色结晶或结晶性粉末，稍有臭味，微苦。
2.1.1预混合饲料中维生素B1的鉴别方法（1）取预混料2～5 g，加水20mL充分搅拌溶解，取滤液2mL，加入乙酸铅试液1mL和1%氢氧化钠试液1mL，置水浴加热，可见到溶液由黄变褐，静置片刻后生成黑褐色沉淀。
需指出的是当预混料中维生素B1含量低于0.1g/kg时，不一定会生成黑色沉淀，而是形成棕褐色混浊，此时也应判为阳性反应。
（2）将维生素B1与碱性铁氰化钾反应生成荧光物质硫色素，再用正丁醇提取后置紫外光下显强烈蓝色荧光。
该法专属性高，用来鉴别预混料中的维生素B1一般都有满意结果，不足之处是需用紫外分析仪等专门仪器。
2.1.2饲料中维生素B1的含量测定根据《GB/T 14700-2002饲料中维生素B1的测定》标准，可用荧光分光光度仪和高效液相色谱仪进行维生素B1的含量测定。
其中荧光分光光度法作为仲裁法，适用于饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、复合预混合饲料、维生素预混合饲料中的维生素B1的测定。
萃取液溶液范围为：0.02～0.2μg/mL。
但是有吸附硫胺素或影响硫色素荧光干扰物质存在的情况，不能用该方法。
而高效液相色谱法适用于含量大于20mg/kg的复合预混合饲料、维生素预混合饲料中的维生素B1的测定。
饲料中维生素检测方法概述
素 D3、维生素 E[J].食品安全导刊.2018(28).
[2] 符金华,等.检测饲料中维生素 B1 含量的色谱条件优化[J].中国饲
料.2017(05).
[3] 刘雪芹,等.预混合饲料中维生素 A3 种提取方法的比较研究[J].
食品安全质量检测学报. 2019(11).
[2] 王富连.冬季怎样使猪长得快.畜牧水产 1997（8）：28-29. [3] 王霞.浅谈饲料状态对仔猪生产性能的影响. 畜牧兽医科技信息
判断，因此在对黄瓜，菠 菜等绿
色果蔬样品进行测定时，正确判
定滴定，终点回收率可达 95%，
而菠萝西红柿等黄、红色样品进行终点颜色的判定时会产生
干扰，其回收率便大大减弱。
3结语
维生素在动物体内的所需量极少，但是在其生理功能以
及营养方面有着十分显著的作用，因此维生素的检测有着重
要意义。
参考文献
[1] 于家丰.液相色谱 - 串联质谱法检测饲料原料中维生素 A、维生
牧草饲料
维生素作为饲料中的重要组成部分，是一组化学结构不 同、生理作用和营养功能各异的化学物质。因此，在饲料中是 否加入维生素、维生素量是否达标、对动物的生长发育会产 生很大影响。本文从饲料中常用维生素的检测方法入手，提 出不同维生素的不同检测方式，旨在进一步精确维生素的用 量标准，提高养殖企业的经济效益，促进动物的生长发育。 1 不同维生素检测措施简述
健 2014（8）：70-72.
2020 年第 06 期 181
高效液相色谱法可以检测 VK3，并辨 别 VK3 的真伪，这一方法主要是用于配合饲料、复合预混合饲 料和维生素预混合饲料。用高效液相色谱测定 VK3，VK3 经反
. A算相l。Cl1在8 柱测R得i量到g时h分要t离s尤，其检R强测e调器se在在r维一v定生ed波素.长预下混进合行饲检料、测复，外 合预标混法合计
两种检测饲料中维生素A乙酸酯、维生素D3和维生素E测定方法的比较分析
两种检测饲料中维生素A乙酸酯、维生素D3和维生素E测
定方法的比较分析
司慧民;元雪浈;全晓萍;陈蔷;韩立
【期刊名称】《当代畜禽养殖业》
【年(卷),期】2022()6
【摘要】本试验旨在筛选灵敏度高、准确度高、检测速度快并且可同时检测饲料
中维生素A乙酸酯(VA)、维生素D3(VD3)和维生素E(VE)的检测方法。
试验选取
3种猪浓缩饲料和3种猪预混合饲料分别采用国标方法和快速测定法进行提取测定。
结果表明:利用快速提取法测得3号猪浓缩饲料中VA和VE含量以及3号猪预混
合饲料中VD3和VE含量均显著高于国标方法(P<0.05);整体比较分析结果表明,利用快速测定法测定猪浓缩饲料中维生素A乙酸酯含量显著高于国标方法(P<0.05),
猪预混料使用2种测定方法所得的3种维生素含量差异均不显著(P>0.05)。
综上
所述,快速测定法提取时间短、效率高且操作便捷,更适合饲料中VA、VD3和VE
的多组分一次性提取测定。
【总页数】4页(P31-34)
【作者】司慧民;元雪浈;全晓萍;陈蔷;韩立
【作者单位】河南省兽药饲料监察所
【正文语种】中文
【中图分类】S816.17
【相关文献】
1.肉鸡饲粮中1α-OH D3与维生素D3生物学活性的比较
2.反相高效液相色谱法测定预混合饲料中维生素A乙酸酯的含量
3.维生素D3测定方法的比较
4.液相色谱-串联质谱法检测饲料原料中维生素A、维生素D3、维生素E
5.饲粮添加天然（D-α-生育酚）或合成（DL-α-生育酚乙酸酯）的维生素E对肉仔鸡生长性能、肉品质及氧化状况的比较研究
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2013年维生素产品标准修订解读
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中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
检验方法
f值（转换系数）：预维生素D3转换成维生素D3的校正系数。 预维生素D3：生产维生素D3过程中产生的中间体，与维生素D3互为同分 异构体。 计算公式：f=(A- A*)/(A*pre -Apre) 式中：A：维生素D3标准工作液峰面积； A*：维生素D3标准工作液90℃水浴中回流45min后峰面积； A*pre：维生素D3标准工作液90℃水浴中回流45min后预维生素D3 峰面积； Apre：维生素D3标准工作液中预维生素D3峰面积。
Ar 4.027 ea :3 51 4
中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
检验方法 维生素预混料中维生素E的色谱图：
15.476
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检验方法
维生素预混料中维生素A的色谱图（50万IU/g维生素A微粒 稀释10倍添加到与混料中，顺式VA的峰低于检出限）：
DAD1 B, Sig=326,16 Ref=360,100 (080812\ADE00007.D) mAU 500 400 300 200 100 0 0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 min
Norm. 140 120
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高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
高效液相色谱法测定饲料添加剂维生素E粉
赵小阳;孟兆会
【期刊名称】《中国饲料》
【年(卷),期】2001(000)015
【摘要】@@ 以维生素E为原料,加入一定的吸附剂制成的50%维生素E粉的测定,国家标准采用硫酸铈标准溶液滴定法测定,分析时间长,易产生误差.我们采用无水乙醇提取,高效液相色谱法测定维生素E的含量,分离效果好,分析速度快,结果准确,现将方法介绍如下.rn1材料与方法rn1.1仪器美国Waters高效液相色谱仪,510高压泵,Millennium 32操作系统,484紫外可调波长检测器.rn1.2试剂本方法所用试剂除另有规定外,均为分析纯,水为蒸馏水或相应纯度的水.所用试剂有:无水乙醇,甲醇(色谱纯).
【总页数】1页(P24)
【作者】赵小阳;孟兆会
【作者单位】广州惠华动物保健品有限公司;广州惠华动物保健品有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S816
【相关文献】
1.高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E 的含量 [J], 何荣芬
2.反相高效液相色谱法测定维生素E乳膏中维生素E的含量 [J], 李旭梅;涂厉标;王真
3.高效液相色谱法测定白芷维生素E乳膏中维生素E含量 [J], 何荣芬
4.高效液相色谱法测定维生素E乳中维生素E的含量 [J], 何玉川;张亚茹
5.高效液相色谱法测定维生素E粉含量 [J], 商军;华贤辉;王蓓;虞哲高;陈晓莉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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cis Vit A acetate - 12.866
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三.«饲料和饲料添加剂管理条例»2012年5月1日起实行。 目前饲料和饲料添加剂生产企业及用户最为关注的。 第三章第十四条第三项中规定：饲料和饲料添加剂生产企业必须 具备有必要的产品质量检验机构、人员、设施和质量管理制度。 相关配套法规： «饲料添加剂（混合剂）生产企业许可条件» «饲料生产企业许可条件»中规定： 固、液态维生素预混合饲料生产企业配备高效液相色谱仪（配备 紫外检测器），要求能够检测维生素。
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四.标准化工作：
检测依据：国家标准、行业标准、地方标准、企业标准（企业内部适用）、杂志公开 发表的文章、中心备案方法（研制的方法）。（委托检验的客户如果没有指定方法， 按照现行标准检测,也可指定方法-生产和使用企业达成一致的方法）。 标准化工作的任务（标准化法）：制定标准、组织实施标准和对标准的实施进行监督。 标准的制定（标准化法）：对需要在全国范围内统一的技术要求，应当制定国家标准。 在公布国家标准之后，该项行业标准即行废止，依次类推。（例如：NY/T1246-2006 饲料添加剂 维生素D3（胆钙化醇）油，制定强制性国家标准任务，计划编号： 20110856-Q-469）。 与国际方法接轨（标准化法实施条例）：国家鼓励采用国际标准和国外先进标准，积 极参与制定国际标准。 修订期限（标准化法实施条例）：标准实施后，制定标准的部门应当根据科学技术的 发展和经济建设的需要适时进行复审。标准复审周期一般不超过五年。
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国家标准、行业标准制修订过程：
1.标准的申报：填写申报建议书、标准草案，最好有研究基础和方法储备。 2.市场调研：优势：通过日常委托检验有机会与企业交流沟通，及时掌握市场信息。 3.文献资料:力求检验方法与国际先进方法接轨,参考企业标准。 4.研讨会：主持单位主持相关生产企业技术人员、检测机构研究专家召开预备会议，确定标准 主要内容中产品的类型、技术指标、参数、公式、性能要求、试验方法、检验规则。 5.方法验证：收集样品，进行方法的实验和验证，至少三家有资质检测机构进行实验方法验证， 形成征求意见稿后，必须发出20份征求意见（产品质量标准必须征求行业有影响生产企业 意见），必须收回10份征求意见，组织专家预审，根据预审意见修改，形成送审稿，标委 会组织专家终审，根据终审意见修改送审稿，形成报批稿。 企业积极参与标准的研制，可有效保证自身产品质量，降低市场风险，减少贸易纠纷， 使得国内外生产使用的实际状况相符，从而规范市场秩序保护各方利益。途径：与国家质 检中心有长期研发合作，关注标委会信息（网络）。
1.紫外分光光度法 2.液相色谱(仲裁法)
≥ 50.0% ≥ 51.0%
维生素E
GB/T9454-2008
油剂≥92.0%
≥92.0%
1.内标溶液(正三十二烷)溶解 2.甲醇超声溶解10min.
1.气相色谱(仲裁法) 2.液相色谱
≥92.0%
维生素D3微粒
GB/T9840-2006
≥ 50万IU/g
0.70
AU
14.00
16.00
18.00
20.00
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维生素A乙酸酯样品溶液色谱图
0.70 0.60 0.50
0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 Minutes 12.00
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一.已颁布实施的13项饲料和饲料添加剂维生素A、D3、E、K3的国家标准： GB/T7292-1999 饲料添加剂 维生素A乙酸酯微粒 GB/T23386-2009 饲料添加剂 维生素A棕榈酸酯 GB/T9840-2006 饲料添加剂 维生素D3微粒 NY/T1246-2006 饲料添加剂 维生素D3（胆钙化醇）油 GB/T7293-2006 饲料添加剂 维生素E粉 GB/T9454-2008 饲料添加剂 维生素E GB/T9455-2009 饲料添加剂 维生素AD3微粒 GB/T7294-2009 饲料添加剂 亚硫酸氢钠甲钠醌（维生素K3） GB/T26442-2010 饲料添加剂 亚硫酸氢烟酰胺甲钠醌 GB/T17817-2010 饲料中维生素A的测定 高效液相色谱法 GB/T17818-2010 饲料中维生素D3的测定 高效液相色谱法 GB/T17812-2008 饲料中维生素E的测定 高效液相色谱法 GB/T18872-2002 饲料中维生素K3的测定 高效液相色谱法
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维生素A乙酸酯标准溶液色谱图
0.60 0.50 0.40 0.30 0.20 0.10 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 Minutes 12.00
trans Vit A acetate - 13.920
液相色谱
维生素E粉
GB/T7293-2006
≥ 50.0%
≥ 50.0%
1.1mol/L盐酸超声提取，加乙 醇、内标 2.甲醇超声提取30min
1.气相色谱(仲裁法) 2.液相色谱
≥ 50.0%
维生素K3
GB/T7294-2006
≥96.0% ≥98.0%
≥ 50.0% ≥ 51.0%
水溶解,三氯甲烷和碳酸钠溶液 萃取
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项目
维生素A乙酸 酯微粒
标准号
1224号公告
粉剂≥50万IU/g 油剂≥250万IU/g
产品规格
样品制备
检测方法
技术指标
含量为标示量 的90-120%
GB/T7292-1999
50万IU/g
0.1%氨水酶解，乙醇提取
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五.标准化法实施条例中对制定企业标准的规定： 企业生产的产品没有国家标准、行业标准和地方标准 的，应当制定相应的企业标准，作为组织生产的依据。企 业标准由企业组织制定，对已有国家标准、行业标准或者 地方标准的，鼓励企业制定严于国家标准、行业标准或者 地方标准要求的企业标准，在企业内部适用。
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一.农业部1126号公告«饲料添加剂品种目录（2008）»中： 允许使用的维生素有32种，饲料中常用的、日常委托 检测接触较多的品种：维生素A乙酸酯、β-胡萝卜素、D3、E、K3
（亚硫酸氢钠甲萘醌）、维生素B1、B2、B6、B12、L-抗坏血酸、烟酸、 烟酰胺、泛酸钙、叶酸、D-生物素、氯化胆碱等。
二.目前正在主持、参与制修订的三项产品质量标准： GB/T7292-1999 饲料添加剂 维生素A乙酸酯微粒 已完成。 GB/T9840-2006 饲料添加剂 维生素D3微粒 参与的修订工作：建议补充反相色谱检验方法。所有维生素的检 验方法都是反相色谱，更便于操作。 NY/T1246-2006 饲料添加剂 维生素D3（胆钙化醇）油 筹备阶段，拟补充反相色谱检验方法。
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二.农业部1224号公告«饲料添加剂安全使用规范»（2009年6月）中： 根据条例有关规定，为指导饲料企业和养殖单位科学合理使用饲料添加剂，提高饲 料和养殖产品质量安全水平，保护生态环境，促进饲料产业和养殖业持续健康发展。 涉及1126号公告中部分品种。 含量规格一栏仅公布了产品的主要规格，注：由于测定方法存在精密度和准确度的 问题，部分维生素类饲料添加剂的含量规格是范围值，若测量误差为正，则检测值可 能超过100%，故部分维生素类饲料添加剂含量规格出现超过100%的情况。（解释：以 VA为例，公布两种规格）。 VB1、VB2、VB6、VC、烟酸、D-泛酸钙、叶酸等含量规格以范围表示，现行饲料添 加剂国家标准中，产品规格基本与公告相符。 “配合饲料或全混合日粮中的最高限量”为强制性指标，饲料企业和养殖单位应严 格遵照执行。
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维生素检测技术及研究进展
以GB/T7292-1999 《饲料添加剂 维生素A乙酸酯（微粒）》为例： 修订内容： 1.标准名称改为：《饲料添加剂 维生素A乙酸酯（微粒/油）》。 2.本标准为强制标准。 3.不规定规格，标准适用于现有的规格，生产企业意见倾向用范围表示：占标示量的95%120%(参考我国药典、欧洲药典、美国药典的规定)。 4.补充VA油的质量标准。 5.补充卫生指标。 6.由于产品包被工艺不同，提取时间由原来10min改为30min。 7.补充规定允许差、资料性附录。 8.按照GB/T 1.1—2009《标准工作导则 第1部分：标准的结构和编写》和 GB/T 2001.4-2001《标准工作导则 第4部分：化学分析方法》中给出的规则起草，以增强标 准结构和编写的规范性。
饲料企业维生素检测及产品价值发现
国家饲料质量监督检验中心 （北京） 赵小阳
中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
报告内容
相关政策法规 维生素检测技术及研究进展 新标准对企业的影响-维生素质控案例分析及解决方案 维生素检测风险规避
中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所
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维生素检测技术及研究进展
产品质量标准制修订遵循的原则 1.为强制性国家标准，可分为全文强制和条文强制两种形式。 2.与公告内容相符，必须规定卫生指标，不再执行饲料卫生标准。 3.按照产品标签判定。 4.征求意见稿必须征求有影响企业专家的意见。 5.标准既能保证产品质量，又不难于执行。