配合饲料中维生素E含量的测定

关键词：高效液相色谱；维生素 E；配合饲料
VE 具有抗氧化功能、 维持动物正常的繁殖机 能、 增强动物机体的免疫功能和抗应激功能等，对 动物具有重要的营养作用，也是配合饲料中不可缺 少的成分。 但是，由于脂溶性维生素不能经尿排出， 所以摄入过量脂溶性维生素易引起中毒，导致动物 代谢障碍和生长受阻。 因此，准确快速测定配合饲 料 中 VE 含 量 ，对 于 优 化 饲 料 配 方 、提 高 养 殖 效 率 具有十分重要的意义。
2 结果与讨论 2.1 色谱分离
称取维生素 E 乙酸酯标准品 10.0mg 于 150mL 带盖密封玻璃瓶中，按上述方法（1.3.1）皂化，最 后 用 50mL 甲 醇 溶 解 。 此 时 维 生 素 E 乙 酸 酯 浓 度 为
图 1 VE 标准样色谱图
200mg/L，再将上述 200mg/L 标准配制成 50mg/L 的 标准工作溶液。
作者简介：杨曦，工程师，研究方向为农产品质量安全 与检测。
* 通讯作者：王华朗，高级畜牧师，研究方向为动物营养 与饲料研究。
批量检测样本，本方法针对国标方法无法进行批处 理样品进行改进， 改进后的检测方法提高工作效 率，适合对大批量样品进行检测。
1 材料与方法 1.1 仪器与试剂
安捷伦 1260 Infinity 高效液相色谱仪，台式高 速冷冻离心机（德国 SIGMA），旋转蒸发仪（瑞士步 琪），分析天平（感量 0.0001g，德国赛多利斯），恒温 水浴锅（上海沪南科学仪器联营厂）。
标 准 品 ：VE （dl-а- 生 育 酚 乙 酸 酯 ） 标 准 品 ： （Sigma-Aldrich 公司）含量≥99.0%。
试剂：甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水 为超纯水。 1.2 色谱条件
A 色谱柱 XTerra MS C18，4.6×150mm，5μm B 进样量 20μL，柱温 27℃，流速 1.0mL /min C 检测器：紫外检测器 280nm 1.3 试样制备 1.3.1 皂化 称 取 2g（精 确 至 0.0001g）试 样 于 150mL 带 盖 密封玻璃瓶中，加 50mL 抗坏血酸溶液（5g/L），使试 样完全分散，浸湿，加 10mL 氢氧化钾溶液（500g/L）， 混匀。 充入氮气以隔绝空气，摇匀，置于 60℃水浴上 皂化 4h。 皂化后立即放入冰水中冷却。 1.3.2 提取 向皂化液中加入 50mL 乙醚（不含过氧化物），
表 6 皂化反应时间的选择
皂 化 时 间 （h）
2
3
4
5
6
维生素 E 含量（mg/kg） 148 159 171 172 173
2.5.4 样品称样量的选择 分 别 称 取 不 同 质 量 的 样 品 按 试 样 制 备 1.3 步
骤处理，处理后进高效液相色谱完成检测，结果见 表 7。
当称样量为 1g 和 2g 时提取效率最高，考虑为 了减小称量误差，因此选择称样量为 2g。
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表 2 精密度结果
测定次数 1 2 3 4 5 6 平均值 CV（n=6，%）
含量（mg/kg） 190 189 200 186 207 192 194
4.08
图 2 水产饲料样品 VE 色谱图
2.4 实际样品中维生素 E 的分析 用本文方法对市场上不同种类配合饲料按 1.3
方法所述进行检测。 结果见表 3，南美白对虾、石斑 鱼、草鱼配合饲料、罗非鱼饲料、鸡饲料、猪饲料、肥 鸭饲料等饲料样品的 VE 的检出率分别是 194mg/kg、
国内外有关 VE 检测方法主要有分光光度法[1]、 荧光比色法[2]、气相色谱法[3]和液相色谱法 等 [4-8] 。 分 光光度法的检测灵敏度较低，干扰比较多，荧光比 色法操作比较繁琐， 气相色谱法需要使用衍生剂， 增加检测样本成本。 国标 GB/T 17812-2008《饲料 中维生素 E 的测定 高效液相色谱法》 方法检测饲 料中 VE 也是采用高效液相色谱法，但前处理无法
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TESTING AND ANALYSIS 检测分析
漩涡振荡后，把液体倒入 250mL 分液漏斗中，剩下 固体再用 25mL 乙醚提取两次倒入分液漏斗中，轻 轻振摇分液漏斗 2min，静置分层，弃去水层。 每次 用约 100mL 水洗分液漏斗中的乙醚层，用 pH 试纸 检验直至水层不显碱性（最初水洗轻摇，逐次振摇 强度可增加）。 1.3.3 浓缩
回 收 率/%
平 均 回 收 率/%
38
99.89、102.32
76
99.24、103.99
100.8
190
102.76、96.6
由 表 1 可 知 ， 虾 饲 料 中 添 加 VE 的 回 收 率 为 96.6%～103.99%。
另外称取南美白对虾饲料 2g，共 6 份，采用本 试验方法进行测定，由表 2 可知样品检测结果的变 异系数 CV 为 4.08%。
将乙醚提取液经过无水硫酸钠（约 10g）滤入与 旋转蒸发器配套的 100mL 球形（已加入100mgBHT） 蒸发瓶内，用约 10mL 乙醚冲洗分液漏斗及无水硫 酸钠 2 次，并入蒸发瓶内，并将其接至旋转蒸发器 上，于 55℃水浴中减压蒸馏并回收乙醚，待瓶中蒸 干 乙 醚 ， 残 渣 用 10mL 甲 醇 溶 解 。 取 适 量 溶 液 过 0.45μm 滤膜，滤液用于高效液相色谱分析。
检测分析 TESTING AND ANALYSIS
配合饲料中维生素 Ｅ 含量的测定
杨 曦 王华朗 * 刘成模 黄智成
（广东恒兴饲料实业股份有限公司）
［中 图 分 类 号 ］S816.2
［文献标识码］ A
［文 章 编 号 ］1002-8358 （2015 ）22-42-3
摘 要：建立了一种高效液相色谱检测配合饲料中维生 素 E（VE）含量的方法。 该方法 相 比 较 国 标 容 易 适 合 批 量 检 测样本， 灵敏度也比较高 ， 检 出 限 为 0.6mg/kg， 定 量 限 为 2mg/kg， 回 收 率 在 96.6%~103.99%之 间 ， 相 对 标 准 偏 差 为 4.08%，方 法 准 确 ，达 到 实 验 的 要 求 ，适 用 于 配 合 饲 料 中 维 生 素 E 的检测。
含量 194 208 107
99 54 75 54
2.5 实验条件优化 2.5.1 氢氧化钾溶液体积的选择
分别将 5 份 2.00g 相同样品按上述步骤分别加 入 氢 氧 化 钾 溶 液 （500g/L）5mL、7.5mL、10mL、 12.5mL、15mL 提取，按上 述 检 测 方 法 检 测 ，检 测 结 果见表 4。
表 7 样品称样量的选择
样 品 质 量 （g）
0.5 1 2 5 8 10 12
维生素 E 含量（mg/kg） 172 181 181 180 177 178 157
3 结论 本实验建立了一种用高效液相色谱法检测配
合饲料中 VE 含量的方法。 样品通过皂化后经乙醚 提取，浓缩过滤后，用液相色谱检测。 结果表明，该 方法前处理简单，回收率稳定、灵敏、准确，达到分 析要求，适用于配合饲料中 VE 含量的分析。
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称取已知含量南美白对虾饲料 2g， 共 6 份，分 别 加 入 50μg/mL 维 生 素 E 乙 酸 酯 1 520μL、 3 040μL、7 600μL，按照上述方式检测其含量，进行 回收率测定，平均回收率为 100.8%，结果见表 1。
表 1 虾饲料中 VE 回收率试验结果
添 加 浓 度 /（μg/g）
结果显示， 加入 10mL 氢氧化钾溶液（500g/L） 足够皂化完全维生素 E 乙酸酯。 因此，样品选择加 入氢氧化钾溶液（500g/L）的量为 10mL。
表 4 氢氧化钾溶液体积的选择 Nhomakorabea体 积 数 （mL ）
5 7.5 10 12.5 15