9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则
新修订的《中国药典》对药品微生物检
2015版《中国药典》即将公布，新修订的《中国药典》对药品微生物检验和检定方法发生了重大变化，本次修订是对《中国药典》多年来固有的微生物检查系统进行根本性的调整，着重解决药品微生物相关检查方法及微生物限度标准与欧美等药典的协调统一问题。
宏观变化一：全面与国际接轨以无菌检查法为例从上述无菌检查法的比较中我们不难看出，新药典参考EP7.0、USP35、JPXV 标准，修订中国药典的微生物标准；参考欧美日药典标准修订菌数标准表达方式；以需氧菌总数替代细菌数、耐胆盐的格兰阴性菌替代大肠菌群等等，并增加新的概念：如含菌量较低的供试品细菌总数测定使用最大可能数法、分散均匀并非一定要溶解等等，同时新药典引入的偏差调查概念和内容更具体等等方面说明，微生物检验技术与国际标准要求接轨已成定势。
微观变化二：实验环境的修订2015年版药典中对无菌检查环境洁净度规定：无菌检查应在B 级背景下的A 级单向流洁净区域或D级背景下的隔离器中进行。
限度检查要求在受控洁净环境下的局部不低于B级单向流空气区域进行。
环境的提升，除了对药品检测设备硬件的要求提高，还有验证和维持环境要求的提高。
洁净或无菌室应配备独立的空气机组或空气净化系统，以满足相应的检验要求，包括温度和湿度的控制，压力、照度和噪声等都应符合工作要求。
空气过滤系统应定期维护和更换, 并保存相关记录。
微生物实验室应划分成相应的洁净区域和活菌操作区域，同时应根据实验目的，在时间或空间上有效分隔不相容的实验活动，将交叉污染的风险降低到最低。
活菌操作区应该配备生物安全柜，以避免危害性的生物因子对实验人员和实验环境造成的危害。
实验室环境监测要求提高，增加人员进出表面微生物的监测，以降低人员操作时带来的风险。
对微生物室使用的消毒剂和清洁剂进行验证，从而有效控制微生物，保证无菌环境达到要求。
微生物实验室需要加强人员在环境监测时的操作规范，保证环境监测数据的准确性。
而且实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染。
《中国药典》2015年版技术要点培训
一、实验室控制系统一般要求
一、实验室控制系统一般要求
一、实验室控制系统一般要求
一、实验室控制系统一般要求
二、无菌检查的新理念
无菌 物。
是指某一物体或某一环境中不含有活的微生
无菌操作 是指在无菌环境条件下，在对无菌制品或 无菌器械等进行检验的过程中，能防止微生物污染与 干扰的一种常规操作方法。 无菌技术 是指在微生物试验工作中，控制或防止 各类微生物的污染及其干扰的一系列操作方法和有关 措施，其中包括无菌环境设施、无菌试验器材及无菌 操作。
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
二、无菌检查的新理念
薄膜过滤法
二、无菌检查的新理念
直接接种法
二、无菌检查的新理念
培养及观察
三、药品微生物检查方法验证的一般程序 与环节
二、无菌检查的新理念
应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检 查的要求，（《 9203 药品微生物实验室质量管 理指导原则》 : 环境洁净度 B 级背景下的局部 A 级洁净度的单向流空气区域内或隔离系统中进行）
隔离系统应定期按相关的要求（ 【 15版《 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则 》】 ）进行 验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要 求。日常检验还需对试验环境进行监控。
无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、 生物制 品、医疗器具、 原料、辅料及其他品种是否无菌的一 种方法。 若供试品符合无菌检查法的规定 ,仅表明了 供试品在该检验条件下未发现微生物污染。
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》第四部(1)
2015版《中国药典》关于《通则和指导原则》的内容（以下红色标记的内容更需要关注）序号编码目录10100 制剂通则2 0101 片剂3 0102 注射剂4 0103 胶囊剂5 0104 颗粒剂6 0105 眼用制剂7 0106 鼻用制剂8 0107 栓剂9 0108 丸剂10 0109 软膏剂乳膏剂11 0110 糊剂12 0111 吸入制剂13 0112 喷雾剂14 0113 气雾剂15 0114 凝胶剂16 0115 散剂17 0116 糖浆剂18 0117 搽剂19 0118 涂剂20 0119 涂膜剂21 0120 酊剂22 0121 贴剂23 0122 贴膏剂24 0123 口服溶液剂口服混悬剂口服乳剂25 0124 植入剂26 0125 膜剂27 0126 耳用制剂28 0127 洗剂29 0128 冲洗剂30 0129 灌肠剂31 0181 合剂32 0182 锭剂33 0183 煎膏剂（膏滋）34 0184 胶剂35 0185 酒剂36 0186 膏药37 0187 露剂38 0188 茶剂39 0189 流浸膏剂与浸膏剂400200 其他通则41 0211 药材和饮片取样法42 0212 药材和饮片检定通则43 0213 炮制通则44 0251 药用辅料45 0261 制药用水46 0291 国家药品标准物质通则47030048 0301 一般鉴别试验49 0400 光谱法50 0401 紫外-可见分光光度法51 0402 红外分光光度法52 0405 荧光分光光度法53 0406 原子吸收分光光度法54 0407 火焰光度法55 0411 电感耦合等离子体原子发射光谱法56 0412 电感耦合等离子体质谱法57 0421 拉曼光谱法58 0431 质谱法59 0441 核磁共振波谱法60 0451 X射线衍射法610500 色谱法62 0501 纸色谱法63 0502 薄层色谱法64 0511 柱色谱法65 0512 高效液相色谱法66 0513 离子色谱法67 0514 分子排阻色谱法68 0521 气相色谱法69 0531 超临界流体色谱法70 0532 临界点色谱法71 0541 电泳法72 0542 毛细管电泳法730600 物理常数测定法74 0601 相对密度测定法75 0611 馏程测定法76 0612 熔点测定法77 0613 凝点测定法78 0621 旋光度测定法79 0622 折光率测定法80 0631 pH值测定法81 0632 渗透压摩尔浓度测定法82 0633 黏度测定法83 0661 热分析法84 0681 制药用水电导率测定法85 0682 制药用水中总有机碳测定法860700 其他测定法87 0701 电位滴定法与永停滴定法88 0702 非水溶液滴定法89 0703 氧瓶燃烧法90 0704 氮测定法91 0711 乙醇量测定法92 0712 甲氧基、乙氧基与羟丙氧基测定法93 0713 脂肪与脂肪油测定法94 0721 维生素A测定法95 0722 维生素D测定法96 0731 蛋白质含量测定法970800 限量检查法98 0801 氯化物检查法99 0802 硫酸盐检查法100 0803 硫化物检查法101 0804 硒检查法102 0805 氟检查法103 0806 氰化物检查法104 0807 铁盐检查法105 0808 铵盐检查法106 0821 重金属检查法107 0822 砷盐检查法108 0831 干燥失重测定法109 0832 水分测定法110 0841 炽灼残渣检查法111 0842 易炭化物检查法112 0861 残留溶剂测定法113 0871 甲醇量检查法114 0872 合成多肽中的醋酸测定法115 0873 2-乙基己酸测定法1160900 特性检查法117 0901 溶液颜色检查法118 0902 澄清度检查法119 0903 不溶性微粒检查法120 0904 可见异物检查法121 0921 崩解时限检查法122 0922 融变时限检查法123 0923 片剂脆碎度检查法124 0931 溶出度与释放度测定法125 0941 含量均匀度检查法126 0942 最低装量检查法127 0951 吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法128 0952 黏附力测定法129 0981 结晶性检查法130 0982粒度和粒度分布测定法131 0983 锥入度测定法132 1100 生物检查法133 1101 无菌检查法134 1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法135 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法136 1107 非无菌药品微生物限度标准137 1121 抑菌效力检查法138 1141 异常毒性检查法139 1142 热原检查法140 1143 细菌内毒素检查法141 1144 升压物质检查法142 1145 降压物质检查法143 1146 组胺类物质检查法144 1147 过敏反应检查法145 1148 溶血与凝聚检查法1461200 生物活性测定法147 1201 抗生素微生物检定法148 1202 青霉素酶及其活力测定法149 1205 升压素生物测定法150 1206 细胞色素C活力测定法151 1207 玻璃酸酶测定法152 1208 肝素生物测定法153 1209 绒促性素生物测定法154 1210 缩宫素生物测定法155 1211 胰岛素生物测定法156 1212 精蛋白锌胰岛素注射液延缓作用测定法157 1213 硫酸鱼精蛋白生物测定法158 1214 洋地黄生物测定法159 1215 葡萄糖酸锑钠毒力检查法160 1216 卵泡刺激素生物测定法161 1217 黄体生成素生物测定法162 1218 降钙素生物测定法163 1219 生长激素生物测定法164 1401 放射性药品检定法165 1421 灭菌法166 1431 生物检定统计法1672000 中药其他方法168 2001 显微鉴别法169 2101 膨胀度测定法170 2102 膏药软化点测定法171 2201 浸出物测定法172 2202 鞣质含量测定法173 2203 桉油精含量测定法174 2204 挥发油测定法175 2301 杂质检查法176 2302 灰分测定法177 2303 酸败度测定法178 2321 铅、镉、砷、汞、铜测定法179 2322 汞和砷元素形态及其价态测定法180 2331 二氧化硫残留量测定法181 2341 农药残留量测定法182 2351 黄曲霉毒素测定法183 2400 注射剂有关物质检查法1843000 生物制品相关检查方法1853100 含量测定法186 3101 固体总量测定法187 3102 唾液酸测定法（间苯二酚显色法）188 3103 磷测定法189 3104 硫酸铵测定法190 3105 亚硫酸氢钠测定法191 3106 氢氧化铝（或磷酸铝）测定法192 3107 氯化钠测定法193 3108 枸橼酸离子测定法194 3109 钾离子测定法195 3110 钠离子测定法196 3111 辛酸钠测定法197 3112 乙酰色氨酸测定法198 3113 苯酚测定法199 3114 间甲酚测定法200 3115 硫柳汞测定法201 3116 对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯含量测定法202 3117 O-乙酰基测定法203 3118 己二酰肼含量测定法204 3119 高分子结合物含量测定法205 3120 人血液制品中糖及糖醇测定法206 3121 人血白蛋白多聚体测定法207 3122 人免疫球蛋白类制品IgG单体加二聚体测定法208 3123 人免疫球蛋白中甘氨酸含量测定法209 3124 重组人粒细胞刺激因子蛋白质含量测定法210 3125 组胺人免疫球蛋白中游离磷酸组胺测定法211 3126 IgG含量测定法212 3127 单抗分子大小变异体测定法（CE-SDS）2133200 化学残留物测定法214 3201 乙醇残留量测定法215 3202 聚乙二醇残留量测定法216 3203 聚山梨酯80残留量测定法217 3204 戊二醛残留量测定法218 3205 磷酸三丁酯残留量测定法219 3206 碳二亚胺残留量测定法220 3207游离甲醛测定法221 3208 人血白蛋白铝残留量测定法222 3209 羟胺残留量测定法2233300 微生物检查法224 3301 支原体检查法225 3302 外源病毒因子检查法226 3303 鼠源性病毒检查法227 3304 SV40核酸序列检查法228 3305 猴体神经毒力试验229 3306 血液制品生产用人血浆病毒核酸检测技术要求2303400 生物测定法231 3401 免疫印迹法232 3402 免疫斑点法233 3403 免疫双扩散法234 3404 免疫电泳法235 3405 肽图检查法236 3406 质粒丢失率检查法237 3407 外源性DNA残留量测定法238 3408 抗生素残留量检查法（培养法）239 3409 激肽释放酶原激活剂测定法240 3410 抗补体活性测定法241 3411 牛血清白蛋白残留量测定法242 3412 大肠杆菌菌体蛋白质残留量测定法243 3413 假单胞菌菌体蛋白质残留量测定法244 3414 酵母工程菌菌体蛋白质残留量测定法245 3415 类A血型物质测定法246 3416 鼠IgG残留量测定法247 3417 无细胞百日咳疫苗鉴别试验（酶联免疫法）248 3418 抗毒素、抗血清制品鉴别试验（酶联免疫法）249 3419 A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法250 3420 伤寒Vi多糖分子大小测定法251 3421 b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法252 3422 人凝血酶活性检查法253 3423 活化的凝血因子活性检查法254 3424 肝素含量测定法255 3425 抗A、抗B血凝素测定法256 3426 人红细胞抗体测定法257 3427 人血小板抗体测定法258 3500 生物活性/效价测定法259 3501 重组乙型肝炎疫苗（酵母）体外相对效力检查法260 3502 甲型肝炎灭活疫苗体外相对效力检查法261 3503 人用狂犬病疫苗效价测定法262 3504 吸附破伤风疫苗效价测定法263 3505 吸附白喉疫苗效价测定法264 3506 类毒素絮状单位测定法265 3507 白喉抗毒素效价测定法266 3508 破伤风抗毒素效价测定法267 3509 气性坏疽抗毒素效价测定法268 3510 肉毒抗毒素效价测定法269 3511 抗蛇毒血清效价测定法270 3512 狂犬病免疫球蛋白效价测定法271 3513 人免疫球蛋白中白喉抗体效价测定法272 3514 人免疫球蛋白Fc段生物学活性测定法273 3515 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（E玫瑰花环形成抑制试验）274 3516 抗人T细胞免疫球蛋白效价测定法（淋巴细胞毒试验）275 3517 人凝血因子Ⅱ效价测定法276 3518 人凝血因子Ⅶ效价测定法277 3519 人凝血因子Ⅸ效价测定法278 3520 人凝血因子Ⅹ效价测定法279 3521 人凝血因子Ⅷ效价测定法280 3522 重组人促红素体内生物学活性测定法281 3523 干扰素生物学活性测定法282 3524 重组人白介素-2生物学活性测定法283 3525 重组人粒细胞刺激因子生物学活性测定法284 3526 重组人粒细胞巨噬细胞刺激因子生物学活性测定法285 3527 重组牛碱性成纤维细胞生长因子生物学活性测定法286 3528 重组人表皮生长因子生物学活性测定法287 3529 重组链激酶生物学活性测定法288 3530 鼠神经生长因子生物学活性测定法289 3531 尼妥珠单抗注射液生物学活性测定法290 3532 重组人白介素-11生物学活性测定法291 3533 注射用A型肉毒毒素成品效价测定法（平行线法）2923600 特定生物原材料/动物293 3601 无特定病原体鸡胚质量检测要求294 3602 实验动物微生物学检测要求295 3603 实验动物寄生虫学检测要求296 3604 新生牛血清检测要求297 3605 细菌生化反应培养基2983700299 3701 生物制品国家标准物质目录3008000 试剂与标准物质301 8001 试药302 8002 试液303 8003 试纸304 8004 缓冲液305 8005 指示剂与指示液306 8006 滴定液307 8061 对照品对照药材对照提取物308 8062 对照品标准品3099000 指导原则310 9001 原料药物与制剂稳定性试验指导原则311 9011 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则312 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则313 9013 缓释、控释和迟释制剂指导原则314 9014 微粒制剂指导原则315 9015 药品晶型研究及晶型质量控制指导原则316 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则317 9102 药品杂质分析指导原则318 9103 药物引湿性试验指导原则319 9104 近红外分光光度法指导原则320 9105 中药生物活性测定指导原则321 9106 基于基因芯片的药物评价技术与方法指导原则322 9107 中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则323 9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则324 9202 非无菌产品微生物限度检查指导原则325 9203药品微生物实验室质量管理指导原则326 9204 微生物鉴定指导原则327 9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则328 9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则329 9301注射剂安全性检查法应用指导原则330 9302 中药有害残留物限量制定指导原则331 9303 色素测定法指导原则332 9304 中药中铝、铬、铁、钡元素测定指导原则333 9305 中药中真菌毒素测定指导原则334 9501 正电子类放射性药品质量控制指导原则335 9502 锝［99mTc］放射性药品质量控制指导原则336 9601 药用辅料功能性指标研究指导原则337 9621 药包材通用要求指导原则338 9622 药用玻璃材料和容器指导原则339 9901 国家药品标准物质制备指导原则。
中国药典-2015-四部通则-9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则
本指导原则是用于指导药品微生物检验用的洁净室等受控环境微生物污染情况的监测
和控制。
药品洁净实验室是指用于药品无菌或微生物检验用的洁净实验室、隔离系统及其他受控
环境。药品洁净实验室的洁净级别按空气悬浮粒子大小和数量的不同参考现行“药品生产质
量管理规范”分为A、B、C、D 4个级别。为维持药品洁净实验室操作环境的稳定性、确保
人员操作服表面及5指手套等的微生物监测。
当洁净区有超净工作台、空气调节系统等关键设备发生重大改变时应重新进行监测；当
微生物监测结果或样品测定结果产生偏离，经评估洁净区可能存在被污染的风险时，应对洁
净区进行清洁消毒后重新进行监测。
1. 监测方法
药品洁净实验室悬浮粒子的监测照《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》的现
B级3520293520002900
C级3520002900352000029000
D级352000029000不作规定不作规定
注：①表中各数值均为平均值；②单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可
使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
3.警戒限和纠偏限
药品洁净实验室应根据历史数据，结合不同洁净区域的标准，采用适宜的方法，制定适
本，正常情况下应无微生物污染。
4.数据分析及偏差处理
数据分析应当对日常环境监测的数据进行分析和回顾，通过收集的数据和趋势分析，
总结和评估洁净实验室是否受控，评估警戒限和纠偏限是否适合，评估所采取的纠偏措施是
否合适。
应当正确评估微生物污染，不仅仅关注微生物数量，更应关注微生物污染检出的频率，
往往在一个采样周期内同一环境中多点发现微生物污染，可能预示着风险增加，应仔细评估。
2015中国药典微生物项变化的应对策略
2015版中国药典微生物项变化的应对策略—厂房设施这篇的厂房设施写的重点不在设施改造，更着重于微生物实验室的厂房设施所创造的实验环境如何符合15版药典的管理要求。
在15版药典的指导原则中有两份指导原则有所提及，分别是9203《药品微生物实验室质量管理指导原则》中的“环境”项下及9205《药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则》的内容。
一、微生物实验室的布局实验室布局的基本原则是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止检验过程对环境及人员造成危害。
通常，实验室按功能划分为洁净区、活菌操作区和其他功能区，同时应根据实验目的，在时间和空间上有效分隔各类实验活动，将交叉污染的风险降到最低。
1、洁净区一般微生物实验室的洁净区设置有微生物限度检查洁净室及无菌检查洁净室，两个实验区域的空调系统应独立，微限操作有一定菌数数量级的样品，无菌操作有无菌的样品，本身实验概念上不同，必须设置专属的工作区域。
微生物限度检查洁净室的洁净级别药典要求是不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行，一般大家还是喜欢使用超净台作为实验台，根据10版药典的规定，实验室内微限室是达到C+A的水平，个人建议可以将微限室降级为D级洁净室，但是其空调系统的配制可达到C级净化水平，因为一方面更多的企业选择在无菌检查使用隔离器，也就是无菌检查室会倾向使用控制级别较低的D级洁净背景管理，便于统一管理；另外D级洁净室比C级的风量及相应的换气次数要低，可以降低能耗，节约洁净区运行成本。
在D级洁净室内置上超净台或生物安全柜均可，个人倾向生物安全柜，这也是中检所老师推荐的，理由就是既保护样品又保护实验人员，举个例子，有个公司的超净台是平流式的，正好生产的是促进胃动力的药品，生产车间使用超净台对产品进行操作的人员每天中午的饭量都很大，最后调查因为吸入药品粉末所致，其实这样的药品对于人并不算有太大影响，但是如果配制垂直流的生物安全柜并做成室外排风，那这样是不是更人性化呢，当然检品到实验室这一道其检验量原本就不多，对实验人员一般不会带来什么，但我更相信，在这样更科学化人性化的管理理念下，实验人员也会更认真的处理检品，这不就是企业希望带来的结果吗。
9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则
9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则本指导原则是为药典要求无菌的药品、生物制品、原料、辅料、 及其他品种无菌检查用隔离系统的验证提供指导。
无菌检查用隔离器是为产品无菌检查试验提供无菌环境的一种 设备。
封闭式隔离器不直接与外界环境相连，使用无菌接口或快速转 移通道进行物质传递，一般用于无菌检查；开放式隔离器允许材料通 过舱门进入，舱门内有一定的压力阻止微生物的进入。
物品可通过无 菌传递进入隔离器， 整个传递过程中可保持隔离器内部空间和外部环 境完全隔离。
隔离器内部能够反复进行灭菌， 内壁可用杀孢子剂处理， 以去除所有的生物负载，灭菌完成后，隔离器通过高效空气过滤器 （HEPA）或更高级别的空气过滤器向其内部输送洁净空气来维持内 部的无菌环境。
隔离器的使用从根本上避免了操作人员与实验用物品 的直接接触，操作人员无需穿着专用洁净服，而是通过隔离器上的操 作手套或半身操作服对舱内物品、仪器进行操作。
手套-袖套组件或 半身操作服是隔离器舱体不可分割的一部分， 它们由柔软的材料制成 且与所采用的灭菌剂兼容。
因此，使用隔离器进行无菌检验，可以避 免实验用物品和辅助设备被污染，提高了无菌试验结果的准确性。
一．无菌检查用隔离器的结构 隔离器一般是由不锈钢、玻璃、硬质塑料或软质塑料（如聚氯乙 烯）建成。
隔离器的结构一般包括： 1.空气处理系统 用于无菌检测的隔离器应配备可截留微生物的高效空气过滤系统（或更高级别的过滤系统） 。
静态时，隔离器内部环境的洁净度要 求应达到我国药品生产质量管理规范(GMP)现行版中 A 级空气洁净 度的要求。
当隔离器与外界环境有直接开口时，内部应通过持续足够 的正压来维持隔离器内部的无菌环境。
2. 传递接口及传递门 灭菌后的培养基、 稀释液和实验用品可以通过带传递功能的灭菌 器直接无菌传递到隔离器内。
此外，不同的隔离器也可以通过专门设 计的快速传递门（RTP）连接，以实现将实验物品在两个或多个隔离 器之间进行无菌传递。
《中国药典》2015版微生物新增三个指导原则
一、概述
80xx —试剂和标准物质 90xx —指导原则（二部附录 ⅪⅩ…）
-9201 药品微生物检验替代方法验证指导原则 -9202 非无菌药品微生物限度检查法指导原则 -9203 药品微生物实验室质量管理指导原则 -9204 微生物鉴定指导原则（new） -9205 药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则（new） -9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则（new）
பைடு நூலகம்
汽化过氧化氢发生器
无菌传递舱
隔离器安装位置的选择
无菌检查用隔离器安装环境的洁净度要求 建议 不低 于我国现行GMP 中 D 级空气洁净度要求，安装隔离 器的房间应限制无关人员出入。 应保证隔离器安装 地点周围有足够的空间， 以便于隔离器的移动、物 品的输送和正常维护。
隔离系统验证
1 ．操作验证 2 ．隔离器完整性验证 3 ．灭菌验证 4 ．灭菌循环验证 5. 隔离器内部洁净度验证 6. 仪器仪表的验证
培养基：一般采用胰酪大豆胨琼脂培养基 （TSA） ， 必要时可加入适宜的中和剂 ，当监测结 果有疑似真菌或考虑季节因素影响时， 可增加沙氏 葡萄糖琼脂培养基(SDA)。
培养时间： TSA: SDA：
ChP(2015) 3-5天 5-7天
GB/T16293-2010 不少于2天 不少于5天
3.监测频次及监测项目 参考GMP（2010）及GB50073-2013，见表2 检测频次的调整 如果如果出现连续超过纠偏限和警戒限、 关键 区域内发现有污染微生物存在、 空气净化系统进行 任何重大的维修、 消毒规程改变、设备有重大维修 或增加、洁净室（区）结构或区域分布有重大变动、 引起微生物污染的事故、日常操作记录反映出倾向 性的数据时应考虑修改监测频次。
USP无菌检验-隔离器系统验证指南
无菌检验——隔离器系统验证USP <1208>Sterility Testing—V alidation of Isolator System/General informance这部分是用于无菌检验隔离器系统的简明验证指南（注意：在这个章节中，“已灭菌”指的是物品或者表面的微生物被清除的状态）在19世纪80年代中期，建立一个无菌检验环境的隔离器就已经开始使用。
隔离器可以通过密封的方法或者采用过滤除菌空气保持正压的方法，创造一个无菌的环境。
当隔离器处于密闭状态时，仅仅能够在隔离器内部和快速传递仓传递物品；当隔离器打开时，允许通过一个特殊设计的并经过验证可以避免污染物进入的开口递出物品。
隔离器采用柔软的塑料（例如聚氯乙烯）、硬塑料、玻璃或不锈钢制造。
由于隔离器系统从根本上避免了分析人员与物品的直接接触，因此在无菌检验操作时可以避免物品和辅助设备被污染。
当隔离器内部与环境完全隔离时，隔离器内部的物品是无菌条件下的传递。
操作者穿着半身衣在隔离器内部进行无菌操作，半身衣是连接在隔离器墙体上的柔软的部分，操作者穿着半身衣有足够的范围在隔离器内部进行操作，操作者也可以通过连接在隔离器墙体上的袖子和手套进行操作。
在隔离器中，不要求操作者穿着特殊的无菌衣进行操作，允许操作者穿着标准的实验室服装进行操作。
为确保隔离器内部无菌。
使用杀孢子剂对隔离器内部进行灭菌处理。
隔离器设计和建造空气处理系统用于无菌检验的隔离器需要配备除菌过滤器（HEPA过滤器是被要求的）。
静态时，要求隔离器尘埃粒子符合美国联邦标准209E的100级空气质量要求（看洁净室微生物评价和其他环境控制《1116》）。
动态时，不要求隔离器符合100级空气质量要求，不要求隔离器内部的空气流速或者空气交换频率。
隔离器系统是要求防止泄漏的，然而，它不是通常意义上的防止隔离器与外界环境进行的空气交换。
当与外界环境直接相连的门打开时，隔离器内部的正压保证隔离器内部的无菌环境不被污染。
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9206 无菌检查用隔离系统验证指导原则本指导原则是为药典要求无菌的药品、生物制品、原料、辅料、 及其他品种无菌检查用隔离系统的验证提供指导。
无菌检查用隔离器是为产品无菌检查试验提供无菌环境的一种 设备。
封闭式隔离器不直接与外界环境相连，使用无菌接口或快速转 移通道进行物质传递，一般用于无菌检查；开放式隔离器允许材料通 过舱门进入，舱门内有一定的压力阻止微生物的进入。
物品可通过无 菌传递进入隔离器， 整个传递过程中可保持隔离器内部空间和外部环 境完全隔离。
隔离器内部能够反复进行灭菌， 内壁可用杀孢子剂处理， 以去除所有的生物负载，灭菌完成后，隔离器通过高效空气过滤器 （HEPA）或更高级别的空气过滤器向其内部输送洁净空气来维持内 部的无菌环境。
隔离器的使用从根本上避免了操作人员与实验用物品 的直接接触，操作人员无需穿着专用洁净服，而是通过隔离器上的操 作手套或半身操作服对舱内物品、仪器进行操作。
手套-袖套组件或 半身操作服是隔离器舱体不可分割的一部分， 它们由柔软的材料制成 且与所采用的灭菌剂兼容。
因此，使用隔离器进行无菌检验，可以避 免实验用物品和辅助设备被污染，提高了无菌试验结果的准确性。
一．无菌检查用隔离器的结构 隔离器一般是由不锈钢、玻璃、硬质塑料或软质塑料（如聚氯乙 烯）建成。
隔离器的结构一般包括： 1.空气处理系统 用于无菌检测的隔离器应配备可截留微生物的高效空气过滤系统（或更高级别的过滤系统） 。
静态时，隔离器内部环境的洁净度要 求应达到我国药品生产质量管理规范(GMP)现行版中 A 级空气洁净 度的要求。
当隔离器与外界环境有直接开口时，内部应通过持续足够 的正压来维持隔离器内部的无菌环境。
2. 传递接口及传递门 灭菌后的培养基、 稀释液和实验用品可以通过带传递功能的灭菌 器直接无菌传递到隔离器内。
此外，不同的隔离器也可以通过专门设 计的快速传递门（RTP）连接，以实现将实验物品在两个或多个隔离 器之间进行无菌传递。
RTP 上未经灭菌的表面通过互锁环或法兰互相 叠合，并通过密封圈封闭，从而防止微生物进入隔离器内。
3.灭菌设备 灭菌气体发生器与隔离器之间气体管路的连接，应确保其密封 性。
在接近隔离器的部位，进气与排气管路上应分别安装有阀门，当 气体发生器与隔离器的连接、分离或隔离器进行无菌维持时，进、排 气管路阀门应予以关闭。
灭菌气体或蒸汽应通过高效空气过滤器 （HEPA）进入隔离器内。
灭菌结束后须对灭菌气体进行排空，保证 在进行无菌检测前，隔离器内部的灭菌气体浓度低于一定值，消除灭 菌气体对无菌检测的影响。
4.配套设备与辅助设施 隔离器内部安装无菌检查使用的配套设备与辅助设施， 如无菌检 查过程中使用的蠕动泵、真空泵及连续环境监控设备，其运行不得对 隔离器的内部环境造成影响， 配套设备上的电机等关键部件及排气口设计应置于隔离器的外部，以防运转时产生的扰动气流、排出的废气 对隔离器的环境产生破坏， 并防止其内部受到化学去污剂的腐蚀而产 生安全隐患。
二．隔离器安装位置的选择 无菌检查用隔离器安装环境的洁净度要求应不低于我国现行 GMP 中 D 级空气洁净度要求，安装隔离器的房间应限制无关人员出 入。
应保证隔离器安装地点周围有足够的空间， 以便于隔离器的移动、 物品的输送和正常维护。
为保证操作人员的安全性与舒适性， 安装隔离器的房间内应能控 制温湿度。
对于某些灭菌技术，温湿度的控制是至关重要的。
隔离器 应避免安装在房间通风口直吹的地方， 否则可能导致隔离器舱体部分 区域被冷却，从而造成灭菌过程中灭菌剂蒸汽在隔离器内壁局部冷 凝。
当采用对温度敏感的灭菌方法时，隔离器房间的温度应当是均一 的。
三、隔离系统验证 无菌检查用隔离系统的验证是保证无菌检查所需无菌环境的必要 条件，隔离系统验证在完成安装验证后应定期进行以下验证。
1．操作验证证明所有报警功能均能按照设定的要求正常工作； 证明隔离系统可按设定参数值运行。
2．隔离器完整性验证隔离器在正常运行条件下应能保持良好的 完整性。
通过泄漏测试来验证设备完整性是否达到制造商的要求。
为 避免外来污染，正常操作时隔离器维持在正压下，压差范围为20-50Pa。
应验证隔离器在动态条件下维持正压差的能力。
同时，隔 离器的高效空气过滤器（HEPA）也需定期进行完整性检测。
3．灭菌验证隔离器表面、隔离器内的设备及进入隔离器的 各种物料都应经过处理以降低微生物负载。
用于隔离器、实验物品的 灭菌方法应能达到或超过使生物指示剂下降 6 个对数值的效果。
可使 用某种合适的、高抗性的生物指示剂来验证。
完全灭菌法应采用每单 而阴性对照应该采用每单位孢子数大于 位 106 孢子数的生物指示剂， 使用合适数量的生物指示剂进行试验 等于 106 孢子数的生物指示剂。
可以从统计学上证明灭菌效果是可以再现以及灭菌剂的分布是否合 适。
尤其要注意那些灭菌剂浓度较低的地方。
隔离器内物品和设备满 载时需要用更多的生物指示剂进行试验。
灭菌程序的确定要经过三次 连续的验证且能使生物指示剂下降超过 6 个对数值。
4．灭菌循环验证运行一个灭菌循环，以确认灭菌循环各阶段实 际运行值与其设定值是否相符。
5. 隔离器内部洁净度验证隔离器内部的洁净环境应进行验证， 其悬浮粒子（静态的）和微生物应达到我国现行 GMP 中 A 级空气洁 净度的要求。
在灭菌气体灭菌完成后，通过监测灭菌气体的浓度，保证在无菌 检测前隔离器内的灭菌气体残留量低于可接受值。
7. 仪器仪表的验证需对隔离器配置的仪器仪表，比如 H2O2 传感 器、温湿度传感器、压力传感器等进行定期校验。
隔离器一般还应进行日常验证，如操作验证、隔离器完整性验证等。
当隔离器出现运行异常、舱体环境监控异常或变更运行程序、运 行参数、无菌检查隔离器安装场地变更等应进行再验证。
再验证应按 照文件化的程序及规定的可接受标准实施。
再验证的结果应形成记录 并保存。
四、隔离器的应用 1.包装完整性验证 隔离器常用的灭菌气体在灭菌循环过程中不会穿透螺旋盖试管、 压塞玻璃瓶、西林瓶、安瓿等密封完好的容器，然而，灭菌气体对某 些透析包装物会产生不利影响，可能造成对微生物生长的抑制。
操作 人员应通过验证试验来证实暴露于灭菌气体中的供试品包装容器及 无菌检查过程中所用的器材、稀释剂、培养基，不会由于灭菌气体的 渗透而影响供试品中低水平微生物污染的检出。
当灭菌气体存在渗入 产品容器、实验辅助材料、培养基或稀释液的潜在风险时，操作人员 可采取适当的措施， 如选用能够耐受去污剂渗透的包装材料包装或将 材料放入无菌的密闭容器中， 以尽量减少灭菌剂进入包装或向容器中 渗透，但所采取的措施应避免造成灭菌死角，而再次暴露时污染隔离 器环境的问题。
在某种程度上，可通过降低灭菌剂浓度及缩短灭菌周期，来降低 灭菌剂浸入包装和容器内。
在进行无菌检验之前， 通常使用杀菌剂处理产品包装表面来减少 进入隔离器的物品表面微生物的负荷量， 在使用杀菌剂处理产品包装时， 应证明该过程没有对存在于产品中的低水平污染的微生物造成影 响，不会影响检验结果。
建议用化学和微生物挑战试验来检测包装物 对污染的抵制能力。
经过隔离器全部的灭菌过程后，需进行杀菌剂抑 制细菌和真菌情况的验证（参照无菌检查法（通则 1101） ） 。
2.隔离器内部环境的无菌维持 隔离器内部环境在操作周期内的无菌维持需要经过验证。
隔离器 内的微生物监控， 可通过对灭菌后的第一天和无菌保持期的最后一天 的采样，并对采样进行培养，通过周期性的采样分析，可以实现隔离 器内无菌保持情况的验证。
隔离系统出现故障或者由于偶然因素引起 的微生物污染必须进行检测。
隔离器内部表面可采用平面接触碟、不规则的表面可采用棉签搽 拭进行微生物监控，由于培养基残留会使隔离器产生染菌的风险，因 此，最好在检验完成后进行微生物监测，如果试验中有培养基残留， 应清理干净。
空气取样和沉降菌平皿同时使用，但该方法在检测隔离 器内部非常低水平的污染时不是很灵敏。
检验用具和样品进入隔离器的过程最可能造成微生物的污染，所 有进入隔离器内部物品的无菌验证是非常重要的，另外，垫圈应定期 检查，确保其完整，避免微生物的进入。
手套和半身衣可能是另一个 微生物污染源， 尤其是用于处理无菌检验物品的手套， 应当特别关注； 选择手套时应考虑手套的穿刺抗性、耐磨性及较好的触感，海帕伦材 料具有化学杀孢剂的抗性及抗穿刺性；试验用的手套应保持其完整 性，手套上微小的破损很难检查出来，但使用时，在拉伸情况下，即可发现手套上微小的破损；用户使用检测仪对手套进行检测时，检测 条件要尽可能与手套使用时的条件一致， 微生物检测可补充或替代物 理检测，检测时，将手套浸入 0.1%的蛋白胨水溶液中，然后采用薄 膜过滤法过滤 0.1%的蛋白胨水溶液，取出滤膜进行培养，根据是否 生长微生物判定检测手套的完整性， 本法可以检测出其他方法检测不 出的泄露。
采用隔离器内部进行连续的尘埃粒子检测，可快速检测到过滤器 的泄露，也可使用便携式的尘埃粒子检测器进行周期检测，尘埃粒子 检测取样不能对隔离器内部的无菌环境产生影响。
3.无菌检验结果的解释 隔离器内部空间及表面已经过高水平的灭菌工艺处理， 操作人员 与无菌检查环境没有直接接触，而且系统的完整性经过验证，因 此，在功能运行正常的隔离器内进行无菌检测，出现假阳性的概率很 低，尽管如此，隔离器也仅是个机械设备，操作人员仍需遵循无菌操 作规范。
当出现无菌检查试验结果阳性时，应按照无菌检查法中结果 判断的要求进行分析，并作出该试验结果是否有效的判定。
4.培训与安全 操作人员在使用隔离系统进行无菌检查之前， 应接受特定操作规 程、日常维护及安全等相关知识的培训，并经考核合格后方可上岗， 培训内容及培训考核成绩应记录在每个操作人员的个人培训记录中。
操作人员必须遵守化学去污试剂贮存及安全注意事项的规定， 应在隔 离系统安装地点的显著位置张贴化学去污试剂的材料安全数据表（MSDS） 。
在隔离系统使用前，需要对隔离器及相关设备安全性进 行检查并作好使用记录。
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