尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
饲料中尿素含量的测定——比色法
饲料中尿素含量的测定（非国标）——比色法一、适用范围本方法适用于动物饲料及其原料中尿素含量的测定二、原理由于对-二甲胺基苯甲醛（DMAB，Ehrilich’S试剂）与尿素可形成有颜色的复合物，并可用分光光度计在420nm处进行比色，以求出尿素的含量三、仪器与试剂1、分光光度计420nm，1cm吸收池本方法除特殊注明外，试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
2、DMAB溶液溶解16g DMAB于1000mL甲醇中，再加入100mol/L盐酸，该溶液在1个月内是稳定的。
3、乙酸锌（Zn（Ac）2.2H2O）溶液称取22.0克乙酸锌溶于蒸馏水中，再加入3mL乙酸，然后稀释至100mL 。
4、亚铁氰化钾（K4Fe（CN）6.3H2O）溶液溶解10.6g 亚铁氰化钾于蒸馏水中，再稀释至100mL。
5、磷酸缓冲液（PH6—7.0）先分别溶解3.403g磷酸二氢钾和4.355g磷酸氢二钾100mL蒸馏水中，然后将两溶液合并在一起，再用水稀释至1000mL。
6、木炭Daroa G607、尿素标准溶液：称取5g（准确至1mg）尿素（试剂级）溶解于水，再稀释至1000mL作为储备液（5mg/mL）工作液：0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8和2.0尿素/5mL。
吸收储备液各2 4 6 8 10 12 14 16 18和20mL 分别置于250mL容量瓶中，并用磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度。
8、参比溶液用含1.0mg尿素/5mL的标准溶液作为参比溶液。
如置于24℃以下环境，该参比溶液可稳定一周。
四、标准曲线的制备吸取不同浓度的尿素工作标准溶液5mL ，分别置于20mmX150mm（25mL）的比色管中，各加入5mL DMAB溶液。
另外，制备一空白对照液，即吸取5mL DMAB溶液和5mL磷酸缓冲液于25mL比色管中。
然后，将所有比色管轻轻充分摇动，并置于25℃水浴中放置10min。
然后，用空白对照调节吸光度0点。
脲酶的测定方法
脲酶的测定方法一、脲酶测定(比色法)脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。
1、试剂配制：（1）pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g 氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。
（2）苯酚钠溶液：称取62.5g苯酚溶于少量乙醇中，加2mL甲醇和18.5mL 丙酮，后用乙醇稀释至100mL（A液），保存再冰箱中。
称取27g氢氧化钠溶于100mL水中（B液），保存于冰箱中。
使用前，取A、B两液各20mL混和，并用蒸馏水稀释至100mL备用。
（3）次氯酸钠溶液：用水稀释制剂至活性氯的浓度为0.9％，（1.9g次氯酸钠溶于1L水中）溶液稳定。
（4）10％尿素溶液：10g尿素溶于100mL水中。
（5）N的标准溶液：精确称取0.4717g硫酸铵溶于水稀释至1L，则得1mL 含0.1mgN的标液，再将此液稀释10倍制成氮工作液（0.01mg/mL）。
2、操作步骤称取5ｇ土置于50mL容量瓶中,加1mL甲苯处理,加塞塞紧轻摇15ｍｉｎ;往瓶中加入5mL10%尿素液和10mL的柠檬酸盐缓冲液(ｐＨ6.7),仔细混匀。
在37℃恒温箱中培养24ｈ。
然后用热至38℃的蒸馏水稀释至刻度(甲苯应浮在刻度以上),摇荡,将悬液过滤。
取滤液1mL置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至10mL,然后加入4mL苯酚钠溶液,并立即加入3mL次氯酸钠溶液，加入每一试剂后,立即将混合物摇匀,20ｍｉｎ后,将混合物稀释至刻度,在波长578ｎｍ处测定吸光值。
脲酶活性以样品所得的吸光值减去对照样品吸光值之差,根据标准曲线求出氨态氮量。
标准曲线绘制：分别取0、1、3、5、7、9、11、13mL氮工作液置于50mL容量瓶中，加蒸馏水至20mL，再加4mL苯酚钠溶液和3mL次氯酸钠溶液，随加随摇匀，20min后显色，定容。
尿素(UREA)检测的标准操作程序
尿素（UREA）检测的标准操作程序一、目的规范在罗氏cobas c311生化分析仪上定量检测人血清、血浆中的尿素，确保检测结果的准确性及重复性。
二、范围检验科生化室检验人员。
三、该SOP变动程序本标准操作程序的改动可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准:专业组长，科室主任。
四、授权操作人检验科经过培训并被授权发报告的人员均可操作。
五、实验原理酶动力学法尿素 + H2O 尿酶 2NH+4+ CO22NH+4 + α-酮戊二酸 + NADH + H+ 谷氨酸脱氢酶 L-谷氨酸 + 2NAD+ + H2ONADH浓度降低的速率与样本中的BUN的浓度成正比，在340nm下进行检测。
六、标本1、标本类型：血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。
血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。
2、样本稳定性：标本在2－8 度可稳定2 天，15－25度可稳定8小时，-20 度可稳定6 个月。
只能冻融一次。
七、仪器与试剂1、仪器：罗氏cobas c311生化分析仪2、试剂：罗氏原装配套尿素试剂，试剂无需任何处理，可直接使用3、试剂稳定性：未开封试剂盒按要求保存可稳定至有效期末，已开封试剂盒在仪器上可稳定8周八、校准1、校准物：S1:0.9%NaCl，S2:C.f.a.s(罗氏通用校准品，复溶后使用)。
2、校准方法：两点校准。
3、校准频率：每批试剂必须用新鲜试剂和校准一次。
另外，以下情况需要再次校准：校准过期:批校准稳定28天，盒校准7天。
九、操作程序1.每日开机准备：1.1仪器处于关机状态1.1.1检查供水、排水系统是否正常1.1.2接通仪器左侧电源开关, 以及电脑控制电脑的开关1.1.3登陆：输入用户名mjt及密码123，仪器初始化后进入待机状态1.2仪器处于休眠状态：1.2.1仪器在进入睡眠时指定的时间自动唤醒，或单击[[唤醒]]唤醒仪器；1.2.2系统退出睡眠状态至登录界面，输入用户名及密码，仪器初始化后进入待机状态。
两台不同生化分析系统检测结果的比对
两台不同生化分析系统检测结果的比对摘要目的：探讨同一实验室不同生化分析仪检测结果的一致性。
方法：用长征控制血清水平Ⅰ和病人新鲜血清分别在经过校正的两台生化仪器上检测血糖（GLU）、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)项目。
结果：这3个项目在两台不同生化分析系统间检测结果差异无显著性（P＞0.05）。
结论：东芝TBA-120FR全自动生化分析仪与威图Microlab300半自动生化分析仪经过校正，其检测结果具有较好的一致性和准确性，可满足临床需要。
关键词检测系统比对试验一致性在当今医疗技术和设备飞速发展的时代，许多医院检验科都配备多台生化分析仪，同一项目用不同的检测系统已是很普遍的现象。
我科白天生化项目在东芝TBA-120FR全自动生化分析仪上检测，晚上急诊标本在威图Microlab300半自动生化分析仪上检测，尤其是急诊血糖（GLU）、尿素（UREA）、淀粉酶（AMY）等项目，检测频率较高，为了避免检验结果差距大，给临床诊断带来影响，我们对这两台不同生化分析检测系统进行了血糖（GLU）、尿素（UREA）、淀粉酶（AMY）测定项目的比对试验分析，观察其准确度、精密度，并用相关系数及配对t检验进行简单统计学分析，验证它们之间的一致性。
实验材料仪器：东芝TBA-120FR全自动生化分析仪（以下简称系统1），威图Microlab300半自动生化分析仪（以下简称系统2）。
试剂：系统1：血糖(GLU)、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)为北京首医生物试剂。
系统2：血糖(GLU)、尿素(UREA)、淀粉酶(AMY)为四川迈克生物试剂。
测定方法：系统1：GLU检测方法为氧化酶终点法，UREA检测方法为谷氨酸脱氢酶两点法，AMY检测方法为动力学法。
系统2：GLU检测方法为葡萄糖氧化酶法（GOD-PAP），UREA检测方法为脲酶波氏法，AMY检测方法为碘-淀粉比色法。
校正血清：校正血清及控制血清水平Ⅰ均由上海复星长征生物公司提供。
尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)简介：尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。
尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，铵离子与苯酚反应，生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光度比色法(分光光度计)测定560nm 处吸光度。
该试剂盒可用于检测人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液最好经过处理后再行检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存。
如为尿液样品，最好处理后检测。
2、 配制标准品工作液：4℃保存1周有效。
3、 配制脲酶工作液：取脲酶溶液，按脲酶溶液：脲酶稀释液=1:99的比例混合，即为脲酶工作液。
4℃避光保存1月有效。
4、 Urea 比色操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。
如果样品中的Urea 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。
编号 名称TC1167 100T Storage试剂(A): 尿素标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 脲酶溶液 0.5ml -20℃ 避光 试剂(C): 脲酶稀释液 25ml 4℃ 试剂(D): Urea 显色液 100ml -20℃ 避光 试剂(E): Urea assay buffer 100ml -20℃ 避光 试剂(F): ddH 2O 10mlRT 使用说明书1份加入物空白管 标准管 测定管 ddH 2O/μl10 — — 尿素标准(5mmol/L)/μl — 10 — 待测样品/μl——10脲酶工作液/ml 0.2 0.2 0.2充分混匀，37℃水浴15min。
奶牛尿素氮检测方法
养殖与饲料2017年第9期摘要尿素氮的检测方法很多，本文对其检测过程和检测结果的准确性及稳定性进行综述，并指出使用方便、推广性较强的检测方法。
关键词奶牛；乳尿素氮；蛋白质；检测方法奶牛尿素氮检测方法王玲玲辽宁省畜牧业经济管理站，沈阳110032收稿日期：2017-06-01王玲玲，女，1984年生，畜牧师。
奶牛生产中所用的尿素氮是指乳尿素氮（milk urea nitrogen ，MUN ），是牛群改良计划必备的日常监测指标，奶牛日粮中蛋白质的需要量和利用率、能量平衡、繁殖率以及诊断代谢疾病已成为世界范围内奶牛科学研究的热点[1]。
测定MUN 的方法主要有二乙酰-肟法、脲酶-波氏比色法、红外光谱法。
自20世纪90年代中期欧美已将测定MUN 作为DHI 检测的重要指标之一[2]，但国内外都没有MUN 的标准方法。
本文总结了4种检测方法，为寻找操作更为简单、检测速度快和实用的MUN 检测方法提供参考。
乳尿素氮（Milk Urea Nitrogen ，MUN ）是指尿素在乳中的浓度，单位为mg/dL ，是评定日粮蛋白质利用率的一个重要指标。
目前我国奶牛MUN 值是15.5mg/dL ，美国MUN 标准浓度为10～14mg/dL ，加拿大MUN 标准浓度为8～14mg/dL ，欧洲MUN 标准浓度为15～30mg/dL [3]。
1监测乳尿素氮的意义根据MUN 的测定值来分析蛋白代谢的有效性和牛群瘤胃中氮代谢的效率，确保奶牛能氮平衡和最大效率地利用饲料蛋白质。
测定值过高，说明饲料中的蛋白质利用率不好，导致能氮不平衡，造成日粮氮的浪费，影响奶牛的繁殖；若测定值过低，说明蛋白质补充不足，影响奶牛的生产性能。
根据MUN 的测定值来限制蛋白质供给量，提高氮的利用率，并监测奶牛场氨的排放。
根据MUN 的测定，了解牛群的整体营养状况与繁殖情况，及时调整奶牛饲料配方，实现对牛群的精细化管理。
2尿素氮的检测方法2.1直接法1）红外法。
尿素快速测定实验报告
一、实验目的1. 掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤。
2. 学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。
3. 熟悉实验数据的处理和分析方法。
二、实验原理本实验采用尿素酶法进行尿液中尿素含量的快速测定。
尿素酶能够将尿素分解为氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与水生成氢氧化铵，进而与纳氏试剂中的硫酸铜反应生成黄色的络合物，颜色深浅与尿素含量成正比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 尿液样本- 尿素检测试剂盒（包括试剂A、试剂B、纳氏试剂、pH缓冲液等）- 试管、移液管、滴定管、量筒等2. 实验仪器：- 酶标仪- 移液器- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 样本准备：取适量尿液样本，加入试剂A，混匀后静置5分钟。
2. 滴定：向上述溶液中加入适量的试剂B，混匀后用移液管吸取纳氏试剂，逐滴加入混合溶液中，直至溶液呈现稳定的黄色。
3. 测定：将混合溶液置于酶标仪中，在特定波长下测定吸光度值。
4. 数据处理：根据吸光度值和标准曲线，计算尿液样本中的尿素含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：使用已知浓度的尿素标准溶液，按照上述实验步骤进行测定，绘制标准曲线。
2. 尿素含量测定：根据尿液样本的吸光度值，从标准曲线上查得对应的尿素浓度。
六、实验讨论1. 实验结果与理论值的一致性：本实验测定的尿素含量与理论值基本一致，说明实验方法可靠。
2. 影响实验结果的因素：尿液样本的保存、试剂的浓度、操作步骤等均可能影响实验结果。
3. 改进措施：为提高实验结果的准确性，可以采取以下措施：- 严格控制尿液样本的保存条件，避免细菌污染。
- 精确配制试剂，确保试剂浓度准确。
- 严格按照实验步骤进行操作，避免人为误差。
七、实验结论本实验采用尿素酶法对尿液样本中的尿素含量进行了快速测定，结果表明该方法简便、快速、准确，可用于临床检测和健康评估。
八、实验报告（以下为实验报告的详细内容，可根据实际情况进行修改和补充）1. 实验目的：掌握尿素快速测定方法的基本原理和操作步骤，学习使用尿素检测试剂盒进行尿液中尿素含量的快速测定。
血清尿素测定(精)
样本（微升） 校准液（微升） 蒸馏水（微升） 试剂R1（微升） 试剂R3（微升）
测定 10
5ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟 试剂R4（微升） 1000
校准 10 50 1000
1000
空白
10 50 1000
1000
混匀，置37摄氏度水浴恒温5分钟，600纳米波长，以空白管调零，测定 各管吸光度值。
参考范围及计算
【计算】 尿素（mmol/L）＝A测/A标
×7.14mmol/L 【参考范围】 血清尿素2.68～8.20mmol/L，相当于
尿素氮（BUN）5.3～16.4mmol/L。
临床意义
1.血清尿素浓度增高 ⑴生理性增高：见于高蛋白饮食。 ⑵病理性增高：①肾前性：如失水、水肿、循
环功能不全、心功能不全，休克等引起肾血流 量减少，肾小球滤过率减低而使血中尿素潴留； ②肾性：急性肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能 衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎都可出现血 中尿素含量增高。③肾后性疾患：如前列腺肿 大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道 受压等都可能使尿路阻塞引起血液中尿素含量 增加。 2.血清尿素减少 较少见，尿素减少表示严重 肝病，如肝炎合并广泛性肝坏死。
尿素在尿素酶催化下，水解生成氨和二氧化碳， 氨在α -酮戊二酸和NADH（还原型辅酶Ⅰ）存 在下，经谷氨酸脱氢酶（GLDH）催化生成谷 氨酸。同时NADH被氧化成NAD+。NADH在 波长340nm处有吸收峰，测定此处吸光度的 下降速率，既可反映尿素的含量。（酶速率法）
实验操作
准备：每瓶R1以2.5mlR2复溶
方法局限性
1.尿液尿素也可用此法测定，但因浓度 高（超过28mmol/L），需先用去离子 水稀释。
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尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
简介：
尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥。
尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，铵离子与苯酚反应，生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过分光光度比色法(分光光度计)测定560nm 处吸光度。
该试剂盒可用于检测人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液最好经过处理后再行检测。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
操作步骤(仅供参考)：
1、 准备样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存。
如为尿液样品，最好处理后检测，方法如下。
2、 配制标准品工作液：取尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L)：
ddH 2O=1:19的比例混合，使浓度达到5mmol/L ，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)。
3、 Urea 比色操作：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，
并注意避免产生气泡。
编号 名称
TC1167 100T Storage
试剂(A): 尿素标准(100mmol/L) 1ml 4℃ 避光 试剂(B): 脲酶溶液 0.5ml -20℃ 避光 试剂(D): 酚显色液 100ml -20℃ 避光 试剂(E): Urea assay buffer 100ml -20℃ 避光 试剂(F): ddH 2O 10ml
RT 使用说明书
1份
加入物
空白管 标准管 测定管 ddH 2O/μl
10 — — 尿素标准(5mmol/L)/μl — 10 — 待测样品/μl — — 10 脲酶工作液/ml
0.2
0.2
0.2
充分混匀，37℃水浴15min。
酚显色液/ml 1.0 1.0 1.0
Urea assay buffer/ml 1.0 1.0 1.0
5、Urea检测：充分混匀，水浴，分光光度计检测560nm吸光度，比色杯光径1.0cm，空白管调零，读取各管吸光度，分别为A标准、A测定。
计算：
尿素(mmol/L)=(A测定/A标准)×5mmol/L
参考区间：
成年人血清尿素 2.9－8.2mmol/L
注意事项：
1、最好测定560nm处吸光度，如无560nm，也可检测630nm处吸光度值。
2、如果没有分光光度计，也可以使用酶标仪测定。
3、避免使用铵盐抗凝剂，否则会使结果偏高。
4、高浓度氟化物可抑制尿素酶，引起结果假性偏低。
5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。