淀粉酶的制备及活力测定— 实训结果
淀粉酶活力测定实验报告
淀粉酶活力测定实验报告淀粉酶活力测定实验报告实验三、淀粉酶活性的测定实验报告实验四、淀粉酶活性的测定一、实验目的:1、了解α - 淀粉酶和β - 淀粉酶的不同性质及其淀粉酶活性测定的意义;2、学会比色法测定淀粉酶活性的原理及操作要点。
二、实验原理:淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子，淀粉酶活力最强，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。
根据α-淀粉酶和β-淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;β-淀粉酶不耐热，70? 15min 则被钝化。
测定时，使其中一种酶失活，即可测出另一种酶的活性。
淀粉在淀粉酶的催化作用下可生成麦芽糖，利用麦芽糖的还原性与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，测定其吸光度，从而确定酶液中淀粉酶活力(单位重量样品在一定时间内生成麦芽糖的量)。
三、实验用具:1、实验设备研钵,具塞刻度试管,离心管，分光光度计，酸度计，电热恒温水浴锅，离心机，电磁炉。
2、实验材料与试剂(1)0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液:A液:称取柠檬酸20.01g，定容至1000ml;B液:称取柠檬酸钠29.41g，定容至1000ml;取A液55ml与B液145ml混匀。
(2)1%可溶性淀粉溶液:1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l pH5.6的柠檬酸缓冲液;(3)1%3,5-二硝基水杨酸试剂:称取3,5-二硝基水杨酸1g、NaOH 1.6g、酒石酸钾钠30g，定容至100ml水中，紧盖瓶塞，勿使CO2进入;(4)麦芽糖标准溶液:取麦芽糖0.1g溶于100ml水中;(5)pH 6.8的磷酸缓冲液: 取磷酸二氢钾6.8g,加水500ml使溶解，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1000ml即得。
(6)0.4mol/L的NaOH溶液;(7)1%NaCl溶液。
(8)实验材料:萌发的谷物种子(芽长约1cm)四、操作步骤1、酶液提取:取6.0g浸泡好的原料，去皮后加入10.0mL 1%的NaCl 溶液，磨碎后以2000r/min 离心10min，转出上清液备用。
实验一 α-淀粉酶活力的测定
颜色变化终点要照像，并多媒体型实验结果 单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果 直接写入在实验报告书里。
[实验报告书书写要求]
1. 实验报告书的编写要参考教师提出的写作格式规范。 2. 即：题目、作者（包括同组成员）、单位（班级和组别）、
酶活力单位（g/ml）=(60/T×20×2%×N)÷0.5
60 —酶活定义中反应时间为60min； T —反应时间（min）； 20 —可溶性淀粉的毫升数； 2% —可溶性淀粉浓度； N —酶液稀释倍数； 0.5 —测定时所用的稀酶液量（ml）。
表 1 α-淀粉酶活力测定结果
X
[实验结果处理要求]
酶活力单位gml60t202n05实验结果计算实验结果计算重复数反应时间min酶活力gmlmin要求实验过程中淀粉的颜色变化过程录像或颜色变化终点要照像并多媒体型实验结果单独标注班级和小组名提交或图片型实验结果直接写入在实验报告书里
实验一 α-淀粉酶活力的测定
[实验性质] 验证性实验 [实验学时] 2学时 [实验目的] (1) 掌握淀粉酶糖化淀粉的原理；
[实验步骤]
第一步：待测酶液的配制； 第二步：标准色的配制； 第三步：样品的酶解反应； 第四步：计算。
1. 待测酶液的制备
α-淀粉酶
1.000 g
①
50 mL
2. 标准色的配制
150mL
60℃,30 min
250 mL
③可溶性淀粉 2.0g
酶液
2%淀粉液
A液
②
B液
8.0 mL 1.0 mL
3. 样品测定步骤
中文摘要、中文关键词、英文摘要、英文关键词、前言、材 料与方法、结果与讨论、结论、参考文献等顺序。 2. 报告书的篇幅要求2000字以上。 3. 参考文献必须5篇以上，并至少有一篇英文。 4. 提交时间限为每周一 下午3点。先交到课代表，由课代表汇 总之后按时送到任课老师办公室。 5. 领取的报告书要妥善保管，期末考试时作参考。
淀粉酶的制备及活力测定
（ 4 ） 1 ％ 淀 粉 溶 液 ： 称 取 1 g 淀 粉 溶 于
100mL0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中。
（ 5 ）
0.4M NaOH
实训步骤
1 、称取 1g 萌发 3 天的小麦种子，置于
研钵中。 2. 加入少量的石英砂和 2mL 的蒸馏水， 研磨匀浆。 3. 将匀浆倒入离心管中，用 6mL 蒸馏 水分次将残渣洗入离心管。提取液在 室温下放置提取 15 至 20 分钟。每隔数 分钟搅动一次，使其充分提取。
[3] 何国庆 , 丁立孝 . 食品酶学 . 北京 : 化学工业出版社 2009 [4] 周晓云编著.酶技术.北京:石油工业出版社，1995 [5] 罗贵民.酶工程.北京:化学工业出版社，2003 [6] /question/266186296.htm l
实训原理：
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度 的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀 粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成 的麦芽糖的量表示酶活力。
淀粉酶存在于几乎所有植物中，特别是萌发后的禾谷类种子， 淀粉酶活力最强，其中主要是α- 淀粉酶和β- 淀粉酶。两种 淀粉酶特性不同，α - 淀粉酶不耐酸，在pH3.6 以下迅速钝化。 β-淀粉酶不耐热，在70℃15min钝化。
（ 3 ）如果条件允许，各实验小组可采用不同材料，
参考文献：
[1] Gardner H W.Recent investigations into the lip oxygenase pathway of plants.Biochem Biophysical Ac ta.1991 [2] 莎娜,赵立超,陈永泉.α-淀粉酶对甘薯果脯废糖液澄 清效果的研究
生化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告
实验二：酶活力测定方法的研究一．研究背景及目的酶是高效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋白，几乎所有的生化反应都离不开酶的催化，所以酶在生物体内扮演着极其重要的角色，因此对酶的研究有着非常重要的意义。
酶的活力是酶的重要参数，反映的是酶的催化能力，因此测定酶活力是研究酶的基础。
酶活力由酶活力单位表征，通过计算适宜条件下一定时间内一定量的酶催化生成产物的量得到。
本实验选取萌发的禾谷类种子为材料，通过对其所含两种淀粉酶活力的测定来研究酶活力测定的方法。
二．实验原理萌发的种子中存在两种淀粉酶，分别是α淀粉酶和β淀粉酶，β淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发生钝化[1]。
本实验的设计利用β淀粉酶不耐热的特性，在高温下（70℃）下处理使得β淀粉酶钝化而测定α淀粉酶的酶活性[1]。
酶活性的测定是通过测定一定量的酶在一定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，麦芽糖的浓度利用比色法可以很容易测得。
然后利用同样的原理测得两种淀粉酶的总活性，拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性，再做进一步分析。
实验中为了消除非酶促反应引起的麦芽糖的生成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
三．材料、试剂与仪器材料：萌发的小麦种子试剂：①1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加入80ml蒸馏水，加热熔解，冷却后定容至100ml）；②pH5.6的柠檬缓冲液：A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L）B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容至1L）取A液5.5ml、B液14.5ml 混匀即可；③3，5-二硝基水杨酸溶液（称取3，5-二硝基水杨酸1.00克，溶于20ml 1M 氢氧化钠中，加入50ml蒸馏水，再加入30克酒石酸钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100ml，盖紧瓶盖保存）；④麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馏水中，小心移入100ml 容量瓶中定容）；⑤0.4M NaOH仪器：722光栅分光光度计(编号990695)DK-S24型电热恒温水浴锅(编号L-304056)离心机(TDL-40B) 配平天平药物天平电热锅100ml容量瓶50ml容量瓶移液管试管研钵烧杯洗瓶四．实验方法本实验按照下列表格的中的操作步骤进行：五．数据整理上表中前4行数据为实验的原始数据。
淀粉酶的制备及活力测定
• 3、酶活力的测定：取5支干净的试管，编号，按表 进行操作
反应顺序 样品（重 复3个）
标准空白
样品空白
样品稀释液 （ml）
蒸馏水 依次加入淀粉 溶液（ml） 依次加入DNS 试剂（ml） 加入蒸馏水至 总体积（ml）
1
0 0 60℃预热5min 1.5
1
1
0
1.5
1.5
混合60℃保温30min 1.5 1.5 1.5
二、实验原理
• α －淀粉酶是内切酶，酶的作用点仅限于淀粉链的α －1，4 糖苷键，对α －1，6糖苷键不能作用，但能越过α －1，6糖 苷键，将α －1，4糖苷键随机切断成长短不一的短链糊精， 而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐变红棕色。 • 在酶解的最初阶段，α －淀粉酶对淀粉的水解速度很快，但 当水解到一定程度后，水解虽在继续进行，水解速度却变得 缓慢。该酶的最小作用底物是麦芽三糖以上的低聚糖，对麦 芽三糖的作用很弱，对麦芽糖没有水解能力。 • 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是当今工业酶制剂的主要生 产菌种之一，主要用于生产淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶等。 • 本实验利用高产α －淀粉酶的枯草芽孢杆菌T2生产α －淀粉 酶用于制备淀粉水解糖。
三、材料、试剂与仪器
• 实验材料：萌发的小麦种子（芽长1厘米左右） • 仪器：722光栅分光光度计，恒温水浴锅，离心机，容量 瓶，小台秤，研钵，具塞刻度试管，试管，移液器，烧杯 • 试剂：① 1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加入80ml蒸 馏水，加热熔解，冷却后定容至100ml）； ② pH5.6的柠檬缓冲液： • A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容至1L） • B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容至1L） • 取A液5.5ml、B液14.5ml混匀即为pH5.5柠檬酸缓冲液；
淀粉酶活力的测定心得体会
淀粉酶活力的测定心得体会淀粉酶活力是指单位时间内酶对底物淀粉水解的能力。
测定淀粉酶活力是分析酶的功能和效力的重要方法之一，对生物工程、食品工业等领域具有重要意义。
在进行淀粉酶活力测定实验时，我结合课堂理论知识，认真准备实验材料和仪器，认真操作，仔细观察实验现象，并吸取教训，总结经验，取得了一些心得体会。
首先，测定淀粉酶活力前要准备实验材料和仪器并熟悉其使用方法，保证实验的顺利进行。
在实验时，我选择了新鲜的淀粉样品和淀粉酶溶液，保证了实验结果的准确性和可靠性。
同时，我还准备了一套精确的酶活测定仪器，如比色计、恒温器等，以确保实验过程的可控性和可重复性。
其次，实验操作中的仪器调试和样品准备是关键。
在实验开始前，我做好了比色计初步校准和温度的调整，以确保实验测定的准确性。
同时，我对淀粉样品进行了精确的称量，确保了样品的准确性和可靠性。
在实验过程中，我也注意将操作进行到底，尽量避免出现误差，以获得准确可靠的实验结果。
在实验过程中，我还加强了对实验现象的仔细观察和记录，以确保实验数据的有效性。
酶活测定实验中常常需要观察淀粉的颜色变化，借此判断酶的活力。
因此，我在实验过程中随时观察淀粉的溶液颜色，并根据比色计的读数记录下来。
这样可以避免数据的遗漏和不准确，提高实验结果的可靠性。
不仅仅是在实验操作层面上，我还深入思考了实验原理和结果分析的问题。
在实验前，我详细研究了淀粉酶的作用机制和测定酶活力的原理，以确保对实验结果的准确分析和正确解释。
在结果分析中，我重点关注淀粉酶活力的测定值与理论上预期的值之间的差异，找出可能的问题和解决方案。
这样有助于提高对实验结果的理解和解释，为后续的实验改进提供思路和建议。
同时，在这个实验过程中也出现一些问题和失误，我总结了教训，从中吸取了经验。
例如，在实验操作时由于比色计未及时校准导致最后结果存在一定的误差，这给实验结果的准确性带来了一定的影响。
在下次实验操作中，我会更加注重仪器的调整和校准，确保实验结果的准确性。
实验一α-淀粉酶活力的测定
结果处理与计算
数据处理
根据实验数据，我们计算了酶活力、 反应速率等参数。
图表绘制
我们使用图表展示了实验结果，以便 更直观地分析数据。
结果分析
酶活力比较
通过比较不同浓度酶液的酶活力，我们可以得出酶活力与酶浓度 之间的关系。
反应速率分析
通过分析反应速率，我们可以了解酶促反应的动力学特征。
结论总结
综合以上分析，我们可以得出实验一α-淀粉酶活力测定的结论， 并为其应用提供依据。
用紫外可见分光光度计在540nm波长处测定各管 的吸光度值。
数据记录与处理
01
记录实验数据，计算α-淀粉酶活力。
02
根据实验数据绘制标准曲线和酶 活性曲线。
04
结果分析
数据记录
实验数据
在实验过程中，我们记录了不同浓度 酶液处理后的反应时间、温度、pH值 等数据。
实验误差
在实验过程中，我们尽量减小误差， 如使用精确的测量工具、多次测量取 平均值等。
05
实验总结与讨论
实验总结
01
实验原理
本实验通过测定α-淀粉酶催化淀粉水解生成可溶性糖的速率，从而确定
酶活力的大小。
02 03
实验步骤
准确称取适量淀粉和底物溶液，加入试管中，加入适量酶液，在适宜温 度下恒温水浴一定时间，然后加入碘液和氢氧化钠溶液终止反应，最后 用斐林试剂进行滴定。
实验结果
通过滴定结果计算出α-淀粉酶活力的大小。
DNS溶液
称取3，5-二硝基水杨酸6.3g，溶解于50mL蒸馏水中，加入2mol/L氢氧化钠溶液 16.8mL，再加入20%酒石酸钾钠溶液10mL和2mol/L硫酸溶液20mL，混合均匀后 加热至80℃，不断搅拌，直至溶液呈透明。冷却后用蒸馏水定容至100mL，避光保 存。
生化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告
⽣化实验--淀粉酶活性测定标准实验报告实验⼆：酶活⼒测定⽅法的研究⼀．研究背景及⽬的酶是⾼效催化有机体新陈代谢各步反应的活性蛋⽩，⼏乎所有的⽣化反应都离不开酶的催化，所以酶在⽣物体内扮演着极其重要的⾓⾊，因此对酶的研究有着⾮常重要的意义。
酶的活⼒是酶的重要参数，反映的是酶的催化能⼒，因此测定酶活⼒是研究酶的基础。
酶活⼒由酶活⼒单位表征，通过计算适宜条件下⼀定时间内⼀定量的酶催化⽣成产物的量得到。
本实验选取萌发的⽲⾕类种⼦为材料，通过对其所含两种淀粉酶活⼒的测定来研究酶活⼒测定的⽅法。
⼆．实验原理萌发的种⼦中存在两种淀粉酶，分别是α淀粉酶和β淀粉酶，β淀粉酶不耐热，在⾼温下易钝化，⽽α淀粉酶不耐酸，在pH3.6下则发⽣钝化[1]。
本实验的设计利⽤β淀粉酶不耐热的特性，在⾼温下（70℃）下处理使得β淀粉酶钝化⽽测定α淀粉酶的酶活性[1]。
酶活性的测定是通过测定⼀定量的酶在⼀定时间内催化得到的麦芽糖的量来实现的，麦芽糖的浓度利⽤⽐⾊法可以很容易测得。
然后利⽤同样的原理测得两种淀粉酶的总活性，拟将总活性与α淀粉酶的活性的差值看作β淀粉酶的活性，再做进⼀步分析。
实验中为了消除⾮酶促反应引起的麦芽糖的⽣成带来的误差，每组实验都做了相应的对照实验，在最终计算酶的活性时以测量组的值减去对照组的值加以校正。
三．材料、试剂与仪器材料：萌发的⼩麦种⼦试剂：①1%淀粉溶液（称取1克可溶性淀粉，加⼊80ml蒸馏⽔，加热熔解，冷却后定容⾄100ml）；②pH5.6的柠檬缓冲液：A液（称取柠檬酸20.01克，溶解后定容⾄1L）B液（称取柠檬酸钠29.41克，溶解后定容⾄1L）取A液5.5ml、B液14.5ml 混匀即可；③3，5-⼆硝基⽔杨酸溶液（称取3，5-⼆硝基⽔杨酸1.00克，溶于20ml 1M 氢氧化钠中，加⼊50ml蒸馏⽔，再加⼊30克酒⽯酸钠，待溶解后，⽤蒸馏⽔稀释⾄100ml，盖紧瓶盖保存）；④麦芽糖标准液（称取0.100克麦芽糖，溶于少量蒸馏⽔中，⼩⼼移⼊100ml 容量瓶中定容）；⑤0.4M NaOH仪器：722光栅分光光度计(编号990695)DK-S24型电热恒温⽔浴锅(编号L-304056)离⼼机(TDL-40B) 配平天平药物天平电热锅100ml容量瓶50ml容量瓶移液管试管研钵烧杯洗瓶四．实验⽅法本实验按照下列表格的中的操作步骤进⾏：五．数据整理上表中前4⾏数据为实验的原始数据。