DNS法测定α淀粉酶活力的方法
淀粉酶活力的测定方法
淀粉酶活力的测定方法淀粉酶是一类能够催化淀粉水解的酶，在生物体内和工业生产中都具有重要的作用。
准确测定淀粉酶的活力对于研究酶的性质、生物体的代谢过程以及相关工业应用都具有重要意义。
下面将介绍几种常见的淀粉酶活力测定方法。
一、碘淀粉比色法碘淀粉比色法是一种较为经典且常用的测定方法。
其原理是淀粉经淀粉酶水解后，剩余的淀粉与碘液反应生成蓝色复合物，颜色的深浅与剩余淀粉的量成正比。
通过比色法测定反应后溶液的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
具体操作步骤如下：首先，准备一系列含有不同浓度淀粉溶液的试管，并向其中加入适量的淀粉酶溶液，在一定的温度和 pH 条件下反应一段时间。
然后，迅速向各试管中加入碘液，使反应终止。
最后，使用分光光度计在特定波长下测定各试管溶液的吸光度。
根据事先绘制的标准曲线，将吸光度值转换为剩余淀粉的浓度，从而计算出淀粉酶水解淀粉的量，进而得出淀粉酶的活力。
这种方法的优点是操作相对简单、成本较低，但缺点是灵敏度相对较低，对于低活力的淀粉酶测定可能不够准确。
二、DNS 法（3,5-二硝基水杨酸法）DNS 法是另一种常用的测定淀粉酶活力的方法。
其原理是淀粉在淀粉酶的作用下水解为还原糖，还原糖能与 3,5-二硝基水杨酸在碱性条件下共热，被还原成棕红色的氨基化合物。
在一定范围内，还原糖的生成量与淀粉酶的活力成正比，通过比色测定棕红色物质的吸光度，即可计算出淀粉酶的活力。
操作过程如下：将淀粉溶液与淀粉酶溶液在适宜条件下反应一定时间后，取出适量反应液，加入DNS 试剂，在沸水浴中加热一段时间，使反应充分进行。
冷却后，使用分光光度计测定溶液在特定波长下的吸光度。
与碘淀粉比色法相比，DNS 法的灵敏度较高，能够更准确地测定低活力的淀粉酶，但操作过程相对复杂一些。
三、斐林试剂法斐林试剂法也是基于淀粉水解产生还原糖的原理。
斐林试剂由硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液组成，还原糖能将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，生成砖红色的氧化亚铜沉淀。
淀粉酶活力的测定
收集1管的同学，将0.05 mL稀释到15 mL 收集2管的同学，将0.05 mL稀释到10 mL
1、分别计算0时刻、5 min时刻的A540nm平均值。 2、根据图表中的实验结果，并利用实验 “3,5-二
硝基水杨酸比色法测定糖的含量”中制作的标准 曲线，计算淀粉酶的活力。
需要详细过程。
5 min时刻吸光值
5 min时刻还原糖mg数
0 min时刻吸光值
0 min时刻还原糖mg数
二者相减，计算酶活力。 1 U=1 mg 还原糖/min·mL 酶*稀释倍数
七. 思考题
1、在测定酶活力时应注意哪些反应条件？为什么？ 2、本实验中两次加入NaOH溶液的意义是什么?
八、分析
1.三种酶活力大小顺序是怎样，为什么是这样？ 2.酶液的稀释倍数是否要改变。 3.计算酶液的总活力、回收率。
操作
0号管 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 0时刻 5min时刻 B1 B1’ F1 F1’ B2 B2’ F2 F2’ B3 B3’ F3 F3’
淀粉酶液 (ml)
0.3
0.2
0.5
H2O (ml) 3.5 pH 6.8缓冲液 0.3 ％ NaCl
预热
各 1 ml 各 1 ml 摇匀， 37 ℃ 水浴 2 min
实验七 淀粉酶活力的测定
一、实验目的
掌握测定淀粉酶活力的原理和基本方法
二、实验原理
DNS法测定α-淀粉酶活力的方法
蒸馏水 （mL）2.0 1.6 Nhomakorabea1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
加入完成混匀后沸水浴5min，定容至25mL混匀比色。
预留发酵液酶活力测定 需要稀释倍数
10、100、1000、10000、 50000…… 对照设置1个就可以，10或100倍； 按照DNS方法测定。
酶 活 力 测 定 步 骤 （ 流 程 ）
1ml稀释酶液 40℃水浴保温5min
加入2.0mlDNS 40℃水浴保温10min
加入1.0ml1%淀粉溶液 （预先40℃水浴保温5min）
沸水浴5min 冷却定容至25ml
540nm作比色调 “0”、“100”用
1ml稀释酶液 40℃水浴保温5min
加入1.0ml1%淀粉溶液 （预先40℃水浴保温5min）
调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续 排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4， 1/5……）。
α-淀粉酶酶活力测定的原理
底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反 应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原 糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生 成量（如DNS法），从而计算出酶活力单 位。
40℃水浴保温10min
加入2.0mlDNS 沸水浴5min
冷却定容至25ml
540nm比色测定 OD值
代入回归方程计算出麦芽糖生成量
计算公式
酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ， pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦芽糖的酶 量定义为1个酶活力单位。
α-淀粉酶（酶 U/活 m ）L 麦 力芽糖毫 N 10
DNS法测定α-淀粉酶活力的方法
3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 配制说明
21g 氢氧化钠（先加入溶解）； 182g 酒石酸钾钠（同上）； 6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加 热完全溶于上述溶液中； 5g 重蒸苯酚（冷却后加入）； 5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）； 完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越 长越稳定。 引自： 朱俭，曹凯鸣，周润琦，蔡武城， 袁厚积编著．生物化学实验．上海：上海 科学技术出版社，1981．
比酶活力计算
定义：1mg蛋白质的酶活力单位。 计算公式：
酶活力单位 （U） 比酶活力 （U / mU/mL）和蛋白质含 量（mg/mL）。 可以反映样品中酶的纯度。
分光光度计介绍
原理：在一定条件下，遵循朗伯－比尔 （Lambert-Beer）定律 组成：光源、单色器（棱镜、光栅）、吸 收池、检测器（光电管、光电倍增管、光 电二极管阵列）、显示系统
标准曲线法
取标准品配成一系列已知浓度的标准溶液， 在选定波长处（通常为λ max），用同样厚 度的吸收池分别测定其吸光度，以吸光度（ OD）为纵坐标，系列标准溶液浓度为横坐标 作图，得到一通过坐标原点的直线－标准曲 线（工作曲线）。 理想的标准曲线满足以下条件： 1、至少5个点，一般不超过7个点； 2、2个以上重复值； 3、重复值误差小于5%； 4、点与线的垂直距总和最小； 注意：标准曲线不能任意延长！（有一定测 定范围）
利用DNS法测定α-淀粉酶活力 的方法
目的要求
了解生物学研究中针对糖含量测定的常用 方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理 、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析—— 回归分析，得到回归方程及相关分析结果 。
糖的测定方法
测定α-淀粉酶活力的方法
测定α-淀粉酶活力的方法实验五激活剂、抑制剂、温度及PH对酶活性的影响一、目的要求通过实验加深对酶性质的认识，了解测定α-淀粉酶活力的方法。
二、实验原理酶是生物体内具有催化作用的蛋白质，通常称为生物催化剂。
酶催化的反应称为酶促反应。
生物催化剂催化生化反应时具有：催化效率好、有高度的专一性、反应条件温和、催化活力与辅基，辅酶，金属离子有关等特点。
能提高酶活力的物质，称为激活剂。
激活剂对酶的作用有一定的选择性，其种类多为无机离子和简单的有机化合物。
使酶的活力中心的化学性质发生变化，导致酶的催化作用受抑制或丧失的物质称为酶抑制剂。
氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。
应注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂，而在高浓度时则为该酶的抑制剂。
如氯化钠达到约30%浓度时可抑制唾液淀粉酶的活性。
酶促反应中，反应速度达到最大值时的温度和PH值称为某种酶作用时的最适温度和PH值。
温度对酶反应的影响是双重的：一方面随着温度的增加，反应速度也增加，直至最大反应速度为止；另一方面随着温度的不断升高，而使酶逐步变性从而使反应速度降低。
同样，反应中某一PH范围内酶活力可达最高，在最适PH的两侧活性骤然下降，其变化趋势呈钟形曲线变化。
食品级α-淀粉酶是一种由微生物发酵生产而制备的微生物酶制剂，主要由枯草芽孢杆菌、黑曲霉、米曲霉等微生物产生。
但不同菌株产生的酶在耐热性、酶促反应的最适温度、PH、对淀粉的水解程度，以及产物的性质等均有差异。
α-淀粉酶属水解酶，作为生物催化剂可随机作用于直链淀粉分子内部的α-1,4糖苷键，迅速地将直链淀粉分子切割为短链的糊精或寡糖，使淀粉的粘度迅速下降，淀粉与碘的反应逐渐消失，这种作用称为液化作用，生产上又称α-淀粉酶为液化淀粉酶。
α-淀粉酶不能水解淀粉支链的α-1,6糖苷键，因此最终水解产物是麦芽糖、葡萄糖和α-1,6键的寡糖。
本实验通过淀粉遇碘显蓝色，糊精按其分子量的大小遇碘显紫蓝、紫红、红棕色，较小的糊精（少于6个葡萄糖单位）遇碘不显色的呈色反应，来追踪α-淀粉酶作用于淀粉基质的水解过程，从而了解酶的性质以及动力学参数。
淀粉酶检测方法
淀粉酶检测方法淀粉酶是一种在生物体内分解淀粉的酶类，在工业生产中也有广泛的应用。
淀粉酶检测方法的研究和开发对于生物学和工业生产都具有重要的意义。
本文将介绍10种常用的淀粉酶检测方法，并展开详细描述。
1. 检测淀粉酶酶活力的方法淀粉酶酶活力的检测是在一定的条件下测定淀粉酶对淀粉分子链断裂的程度。
其方法多种多样，如I2-KI法、Nelson-Somogyi法、DNS法、酚硫酸法等。
其中DNS法的操作简单、精密度高、结果准确，被广泛运用于淀粉酶酶活力的测定中。
DNS法的具体流程：取淀粉酶反应液1ml，加入60μl 1% 普鲁士蓝，阴离子化的淀粉酶会将淀粉水解成低聚糖，反应后加入7.5ml DNS液，于100℃水浴烘箱加热10min，将反应液冷却至室温后用1mol/L NaOH调至中性，以1cm光程在720nm波长处测定吸光度。
2. 紫外线比色法紫外线比色法是一种测定淀粉酶酶活力的快速、准确、灵敏的方法。
该法利用酶水解淀粉时所产生的差异色团在化学性质和吸收光谱方面的变化来测定淀粉酶酶活力。
紫外线比色法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，在相应的pH值下孵育一定的时间后，停止反应，加入氢氧化钠，合并各样品，稀释，分别于270nm、309nm处记录吸光值，然后计算各组淀粉酶的缩合作用所产生的光吸收值，即可求出淀粉酶的酶活力。
3. pH滴定法pH滴定法是以酶水解完淀粉后所生成的氢离子释放量作为反应结束的依据。
该方法的特点是操作简单，易于掌握，准确度高。
pH滴定法的具体流程：取一定量的淀粉酶及淀粉，设置相应的pH值，在一定的温度下孵育一定时间，取出样品，加入酚酞pH指示剂，并滴加NaOH溶液，直到溶液从淡红色转为深红色，记录NaOH滴加量，计算其中的氢离子产生量即可求出淀粉酶的酶活力。
4. 薄层酶法薄层酶法是将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后观察酶诱导的淀粉分解反应的变化，以判断淀粉酶的活力。
薄层酶法的具体流程：将淀粉酶和淀粉均匀混合后涂在薄层板上，然后孵育一段时间，用紫碱蓝溶液滴在板上，若淀粉分解为葡萄糖，其降解产物将与紫碱蓝成蓝绿色，而未被淀粉酶降解的淀粉则呈紫色。
DNS法对食用菌发酵液淀粉酶活力的测定
在以 ２ ％可 溶性 淀 粉 为唯 一碳 源 的查 氏（ ｚｐ ｋ ￣ Ｃ ａｅ ） 液体
培 养 基 中 分 别 接 种 香 菇 、 菇 、 菇 、 曲 根 霉 ，７ｃ恒 温 摇 平 姬 酒 ２ Ｃ
发 价 值 的生 产 菌 种 的生 理性 状 ， 中包 括 食 用 菌生 产 菌 种 其 对 环境 的适 应性 ， 归结 为 食用 菌 的代谢 能 力 ， 能够 利 用廉价
原 料迅 速 生 长 并大 量 合成 目 的产物 。 多 工业 发 酵 菌 种 不 许 能 直接 利用淀 粉 ， 物 工厂 必须 对原 材料 进 行预 处理 ， 生 通过 液化、 糖化 生产 微 生物 可 以直接 利 用 的淀 粉 水解 糖 。 果选 如 育 出具 有 淀粉 酶 活 力 的生 产 菌种 ， 可 以 实现 边 糖化 边 发 就
ｍｅ ｔｍ ｎ ｗｈｔ ｈ ｎｙ ｃ ｒｏ ｏ ｒｅ Ｗａ ％ ｓ ｌｂｌ ｔ ｃ ａ ｄ ａ ｌｓ ｎ ｒ ｙ ｒｎ ｅ ｒｍ ．１ ｔ ． ７ Ｕ／ ｏ ｇ Ｌｅ ｔ ｌ ｄ ｄ ｓ， ｄｕ ｉ ｉ ｔｅ ｏ ｌ ａｂ ｎ ｓ ｕｃ ｓ ２ ｈ ｏｕ ｅ ｓａ ｈ， ｎ ｍｙａ ｅ ｅ ｅ ｇ ａ ｇ ｄ ｆｏ １５ ３ ｏ ３４１ ｍＬ ａ ｎ ｎｉ ａ ｅ ｏ ｅ ｒ ｍ ｎｕ Ｐｉｕｏ ｕ ｓｒ ａｕ Ｐｌｕｏ ｕ ｏｎ ｃ ｐｉｅ，Ｏａ ｏｐｕ ｏｗａ ｄａｒ ｆｒｎｃ ｎ ｎ ｌｓｓｍｅｈ ｄｆｒｔｅｅ ｉｌ ｕ ｇｓｒｉ ｅｅ ｔｏ ｅ ｒｔｚ ｏ ｔｅ ｔｓ， ｅ ｒｔｓｃ ｒ ｕ ｏ ａ Ｓ ｓｔ ｔ ｒ ｒ ｅｅ ｅ ｅａ ｄａ ａｙｉ ｔｏ ｄｂ ｅｆ ｎ ｉｔａｎ ｓｌｃｉｎ． ｆ ｏ ｈ Ｋｅ ｙｗｏ ｄ ｅ ｉ ｌ ｕ ｉ ｆｒ ｅ ｔｏ ＤＮＳ； ｙａ ｅ； ｃｉｉｙｄ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｒ ｓ ｄ ｂｅｆｎｇ ；ｅｍ ｎ ｉｎ； ｍ ａ ｌｓ ａ ｔｖｔ ｅｅｍｉ ａｉｎ
淀粉酶活性测定
淀粉酶活性测定淀粉酶是一种非常重要的酶类，是一种负责水解淀粉质的消化酶。
淀粉酶活性测定可以用于评价淀粉酶的水解能力和功能，有助于监测动物体内的淀粉酶活性水平，以及在食品、农业、医学等方面的应用。
在此文中，我们将详细介绍淀粉酶活性测定的方法、原理、重要性等相关知识。
1、Iodine-starch法此方法是基于淀粉直接加热与淀粉酶水解后不同的化学反应。
淀粉水解后的葡萄糖分子，会使加入碘化钾后的淀粉溶液变成淡黄色或透明状态，因而用这种方法来测定淀粉酶活性。
操作步骤：（1）将淀粉溶液分配到不同的试管中，并分别加入一定量的淀粉酶和缓冲液；（2）将试管随之放入水浴器中，在一定的温度下反应一定时间后；（3）将反应好的样品加入适量的碘化钾溶液，混合均匀；（4）观察样品颜色的变化与对照样品进行比较。
淀粉酶活性越强，颜色变化越明显。
2、DNS法（3,5-dinitrosalicylic acid）此法是由3,5-二硝基水杨酸和淀粉水解后形成的糖类反应，也是一种将淀粉水解后产生的葡萄糖利用于测定淀粉酶活性的方法。
（3）在沸水中进行加热封闭处理，使淀粉酶反应后产生的糖分子与DNS反应生成产物，颜色变化呈红色。
淀粉直接加热会发生硫酸化反应，而加入淀粉酶水解后，形成的产物降解了银离子和碘化物的复合物，导致样品中碘的浓度下降，进而改变样品的颜色。
2、DNS法淀粉酶活性水平是衡量动物消化能力的重要指标之一，同时，则涉及到食品、中药、农业等领域相关工作的研究。
用于测定淀粉酶活性，在动物营养研究和饲料生产中具有广泛的应用。
在动物营养领域中，淀粉酶活性测定可以用来评价不同饲料淀粉的消化能力和饲料营养价值，甚至可以评价不同品种和不同饲料来源的淀粉酶活性差异。
在饲料生产方面，淀粉酶活性测定有助于优化饲料制造流程和配方，从而提高生产效率和经济效益。
此外，在工业领域，淀粉酶的活性测定也具有重要的应用价值。
例如，在酿酒过程中，淀粉酶活性的测定可以使发酵操作更加稳定和高效。
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生物学研究中关于糖测定中常用 的方法
菲林试剂滴定——还原糖，常量分析 DNS比色法——还原糖，微量分析 蒽酮比色法——总糖，微量分析
配制系列浓度稀释液的方法
线性稀释——稀释液的浓度梯度是相同的 （0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0……）；
对数稀释（倍数稀释）——系列溶液的浓 度比是一常数，取决于稀释梯度——2倍稀 释（1、1/2、1/4、1/8……）；10倍 稀释（1、1/10、1/100、 1/1000……）；
调和浓度稀释——系列溶液的浓度为连续 排列整数的倒数（1，1/2，1/3，1/4， 1/5……）。
α-淀粉酶酶活力测定的原理
底物（反应物）为淀粉——碘比色法（反 应一定量淀粉为糊精的时间） 产物为麦芽糖、糊精等——麦芽糖为还原 糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生 成量（如DNS法），从而计算出酶活力单 位。
计算公式：根据标准曲线计算。
3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 配制说明
21g 氢氧化钠（先加入溶解）；
182g 酒石酸钾钠（同上）；
6.3g DNS（3，5-二硝基水杨酸），加 热完全溶于上述溶液中；
5g 重蒸苯酚（冷却后加入）；
5g 无水亚硫酸钠（冷却后加入）；
完全溶解后定容至1000ml，贮存时间越 长越稳定。
酶 活 力 测 定 步 骤 （ 流 程 ）
蒸馏水 （mL）
2.0 1.6 1.2 0.8 0.4 0
麦芽糖含量 （mg）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0
DNS试剂 （mL）
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
加入完成混匀后沸水浴5min，定容至25mL混匀比色。
预留发酵液酶活力测定 需要稀释倍数
10、100、1000、10000、 50000…… 对照设置1个就可以，10或100倍； 按照DNS方法测定。
引自： 朱俭，曹凯鸣，周润琦，蔡武城， 袁厚积编著．生物化学实验．上海：上海 科学技术出版社，1981．
标准曲线法
取标准品配成一系列已知浓度的标准溶液， 在选定波长处（通常为λ max），用同样厚 度的吸收池分别测定其吸光度，以吸光度（ OD）为纵坐标，系列标准溶液浓度为横坐标 作图，得到一通过坐标原点的直线－标准曲 线（工作曲线）。 理想的标准曲线满足以下条件： 1、至少5个点，一般不超过7个点； 2、2个以上重复值； 3、重复值误差小于5%； 4、点与线的垂直距总和最小； 注意：标准曲线不能任意延长！（有一定测 定范围）
1%马铃薯淀粉溶液：称取1g马铃薯淀粉 （105℃烘干2hr）溶于100mL 0.2mol/L pH6.0 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中（一般需要 密封121.3 ℃ 灭菌处理20min）。用时注意酶 污染。
标准曲线制作相关试剂加入表
试剂
管号 123456
标准麦芽糖溶液
（mL）
0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0Leabharlann DNS试剂测定还原糖的原理
淀粉酶催化产生的还原糖（麦芽糖等）能使3,5二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝 基水杨酸，其反应如下：
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。 用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色 法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量， 以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的 麦芽糖的量表示酶活力。
利用DNS法测定α-淀粉酶活力 的方法
目的要求
了解生物学研究中针对糖含量测定的常用 方法及相关原理。 掌握一般标准曲线制作的意义及要求。 掌握DNS比色法测定α-淀粉酶活力的原理 、方法及操作步骤。 掌握利用EXCEL分析工具库数据分析—— 回归分析，得到回归方程及相关分析结果 。
糖的测定方法
大致可分为三类： 1.物理法——旋光法、折光法、比重法； 2.物理化学法——点位法、极普法、光度 法、色谱法； 3.化学方法——斐林氏法、高锰酸钾法、 碘量法、铁氰化钾法、DNS比色法、蒽酮 比色法、咔唑比色法
利用Excel中相关统计分析工具，完成回 归方程的计算及分析，并绘制标准曲线图。
相关试剂（第一种）
标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取 1g麦芽糖，用蒸馏水溶解并定容至 1000mL。
0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：称取 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）5.78g，柠檬酸 钠（Na3C6H5O7·2H2O）21.32g ，用 蒸馏水溶解并定容至1000mL。
理想标准曲线的特点
过原点的直线； 斜率为1（45°）； 浓度为待测物质浓 度的一半～二倍； OD值在0.05～0.8之 间（最好控制在0.2 ～0.6）。
mg/ml
麦芽糖标准曲线的制作
取6支干净的具塞刻度25mL比色管，编号， 按下表中加入相关试剂；
混匀后，置沸水浴中煮沸5min。取出后流 水冷却，加蒸馏水定容至25mL。以1号管 作为空白调零点，在540nm波长下比色 测定光密度。以麦芽糖含量（mg）为横坐 标，吸光度（OD）为纵坐标，绘制标准曲 线。——沸水浴时不要加塞！
1%马铃薯淀粉溶液：称取1g马铃薯淀粉 （105℃烘干2hr）溶于100mL 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液中（一 般需要密封121.3 ℃ 灭菌处理20min）。
相关试剂（第二种）
标准麦芽糖溶液（1mg/mL）：精确称取1g麦 芽糖，用蒸馏水溶解并定容至1000mL。
0.2mol/L pH6.0 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液： 称取磷酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O）45.3g， 柠檬酸（C6H8O7·H2O ）7.74g，先在烧杯中 用蒸馏水使之溶解，然后转入容量瓶中定容至 1000mL。
酶活力测定（DNS比色法）
酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为40 ℃ ，pH5.6或6.0），1分钟反应生成1mg麦 芽糖的酶量定义为1个酶活力单位。
注意：去除β-淀粉酶的干扰（ β-淀粉酶不热耐， 在70℃15min钝化 ）——植物材料来源需要注 意。本此实验中忽略不计。
检测的原理：
酶解的产物之一——麦芽糖具有还原性，可以使 试剂中的3，5-二硝基水杨酸还原，形成红色的 物质，在540nm下有吸收峰，并和浓度呈一定 线性关系。