实验五逆境对植物的伤害(电导率法)
实验五逆境对植物组织的伤害
实验五逆境对植物组织的伤害—电导率法检测植物细胞质膜透性和愈创木酚法测定过氧化物酶活性一、实验目的：1.了解研究植物抗逆生理的实验方法，学会使用DDS-11A型电导率仪，掌握绝对电导率和相对电导率的概念；2.熟悉植物组织过氧化物酶活性的测定方法，学会分光光度计的“动力学”测量程序二、实验原理：（P78和P97）三、实验材料：绿豆幼苗四、实验步骤：1.材料处理：10株幼苗为一组分别置于45℃（纯水最好预热至该温度）和室温中（在上课之前请先处理好材料，以课堂小组为单位）。
2.电导率的测定：2h后小心取出幼苗，冷却至室温后测定浸出液和纯水的电导率。
（不必测材料煮沸后的电导率）3.过氧化物酶（POD）活性测定P973.1POD的提取：材料1g，加入KH2PO4冰浴研磨成匀浆，低温4000rpm离心15min,收集上清液，定容至25mL,低温保存3.2POD的测定：先在分光光度计的“动力学”或“时间扫描”程序上设置好参数取比色杯2个，1个将对照液放入参比杯按照程序调零，另一个比色杯拉出加入20μL酶液，再加入1mL KH2PO4 ，最后加入3mL反应混合液，立即测量。
❖723G型分光光度计“动力学”测定❖【3按“按“按“ENT”后，出现：测量出图谱后，按“ESC”返回到界面:按“3”进入活性测量功能，出现如下界面：按“SET”进行具体设置，按“ENT”可得出相应值。
按“4”进入图谱处理功能，出现如下界面：其中按“1”可见原始图谱，按“2”可进行峰谷检测，按“3”通过横纵坐标的缩放可达到图谱缩放功能，方便观察图谱。
按“4”具有具体的实验查询功能。
思考题1.电导率的测定主要有哪些影响因素?2.相对电导率和绝对电导率的概念?3.请说出电导率和电导度的概念区别。
4.温度和CO2会影响电导度的测定结果吗？在操作中应注意什么？5.影响酶提取、纯化和活性测定的因素有哪些？6.测定时酶活性的测定应当定在什么时间范围内？测定植物组织过氧化物酶活性的意义与用途。
植物抗逆性的鉴定
植物抗逆性的鉴定（电导仪法）一、原理植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。
在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。
当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。
膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。
这样，比较不同作物或同一作物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强弱，因此，电导法目前已成为作物抗性栽培、育种上鉴定植物抗逆性强弱的一个精确而实用的方法。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：小麦、女贞叶片；（二）仪器设备：1. 电导仪；2. 天平；3. 温箱；4. 真空干燥器；5. 抽气机；6. 恒温水浴锅；7. 注射器；（三）试剂：NaCl溶液。
三、实验步骤1. 制作标准曲线：如需定量定透性变化，可用纯NaCl配成0、10、20、40、60、80、100μg/ml的标准液，在20～25℃恒温下用电导仪测定，可读出电导度。
2. 选取小麦或其他植物在一定部位上生长叶龄相似的叶子若干，剪下后，先用纱布拭净，称取二份，各重2g。
3. 一份插入小杯中放在40℃恒温箱内萎蔫0.5～1h，另一份插入水杯中放在室温下做对照。
处理后分别用蒸馏水冲洗二次，并用洁净滤纸吸干。
然后剪成长约1cm小段放入小玻杯中（大小以够容电极为度），并用玻棒或干净尼龙网压住，在杯中准确加入蒸馏水20 ml，浸没叶片。
4. 放入真空干燥器，用抽气机抽气7～8min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。
5. 将抽过气的小玻杯取出，放在实验桌上静置20min，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。
6. 测过电导率的之后，再，放入100℃沸水浴中15min，以杀死植物组织，取出放入自来水冷却10min，在20～25℃恒温下测其煮沸电导率。
逆境胁迫对植物生理生化代谢的影响
逆境胁迫对植物生理生化代谢的影响20093391 魏晓明农学0901摘要：对植物产生伤害的环境称为逆境，又称胁迫。
常见的逆境有寒冷、干旱、高温、盐渍等。
逆境会伤害植物，严重时会导致植物死亡。
逆境对植物的伤害主要表现在细胞脱水、膜系统受破坏，酶活性受影响，从而导致细胞代谢紊乱。
有些植物在长期的适应过程中形成了各种各样抵抗或适应逆境的本领，在生理上，以形成胁迫蛋白、增加渗透调节物质（如脯氨酸含量）、提高保护酶活性等方式提高细胞对各种逆境的抵抗能力。
关键词：逆境胁迫,抗逆性，相对电导率，脯氨酸，丙二醛，样品，细胞膜透性，过氧化物酶活性，叶绿素，可溶性糖。
前言：植物细胞膜起调节控制细胞内外物质交换的作用，它的选择透性是其最重要的功能之一。
当植物遭受逆境伤害时，细胞膜受到不同程度的破坏，膜的透性增加，选择透性丧失，细胞内部分电解质外渗。
膜结构破坏的程度与逆境的强度、持续的时间、作物品种的抗性等因素有关。
因此，质膜透性的测定常可作为逆境伤害的一个生理指标，广泛应用在植物抗性生理研究中。
当质膜的选择透性被破坏时细胞内电解质外渗，其中包括盐类、有机酸等，这些物质进入环境介质中，如果环境介质是蒸馏水，那么这些物质的外渗会使蒸馏水的导电性增加，表现在电导率的增加上。
植物受伤害愈严重，外渗的物质越多，介质导电性也就越强，测得的电导率就越高（不同抗性品种就会显示出抗性上的差异）。
在植物胁迫处理过程中，叶绿素含量会下降，可以把叶绿素含量下降看作是胁迫发展中由功能性影响到器质性伤害的一个中间过程。
过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶，他与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系，在植物生长发育过程中，他的活性不断变化，因此测量这种酶，可以反映某一时期植物体内代谢的变化。
植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状，常以糖含量作为重要指标。
植物为了适应逆境条件，如干旱、低温，也会主动积累一些可溶性糖，降低渗透势和冰点，以适应外界环境条件的变化。
植物生理学实验--组织逆境伤害程度测定
吐温20－聚氧乙烯(20)山梨醇酐单月桂酸酯
2、材料处理操作： 正常、冻害各取3个叶片，洗净
各打取叶圆片27个以上, 放到小烧杯中用去离子水冲洗
每支试管9个叶圆片,加15ml蒸馏水
塑料纱网用去离子水漂洗一下， 放入试管(距液面1-2cm)
抽气15min(不盖塞)，取出纱网
植物组织逆境伤害程度的测定
——电导法
（-20ºC,20min冷冻材料 ） 学生进入实验室先洗试管
逆境伤害程度的测定方法：
1 紫外法： 根据渗出物质对紫外的吸收
2 电导法:
一、实验原理：
植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起 着重要的作用。在正常情况下，细胞膜对物质具有选 择透性能力。
逆境：高温、干旱、冻害、冷害、污染、酸雨
③样品测定：
将“选择”旋钮于适合的量程，测定样品。 当测定时显示值熄灭时，说明测量值超出 量程范围，应将选择旋钮置于高一档量程
按照电极上标明的电极常数，调节常数补偿 旋钮，使仪器显示值与电极所标常数一致
每测一个样品， 用去离子水冲洗 电极，滤纸吸干 电极表面水份， 再测下个样品
结果计算:（按课本）伤 害 Nhomakorabea (%)
－
结果记录：记载表老师签字
用品洗刷干净，检查摆放整齐、齐全 报告老师，经检查同意可离去
下一个实验：地点：B124#
植物组织中硝态氮含量的定量测定 (实验12)
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抽气作用？ 纱网作用? 防止抽气时叶圆片被抽出。 防止高CO2气源和口中呼出的CO2进入试 管
放置到塑料烧杯中(不盖塞子)，统一抽气10～15min。 （设置空白1只试管）
11不良环境对植物的伤害 浙江大学植物生理学实验课件
------电导法
实验原理
l 不良环境条件（高温、低温、干旱等）可导致 植物细胞膜受到伤害，使膜的透性增大，细胞 内的盐类和小分子有机物外渗。外渗量可反映 植物细胞膜受到伤害的程度。外渗量可用电导 法检测。
实验步骤
l 清洗用具 确保所有用具（烧杯、剪刀、量筒、 镊子等）洁净干燥。
l 实验材料处理 对照：新鲜植物样；处理：4℃冰冻24hr。
l 步骤 称云南黄素馨枝条（1.0g），清洗后吸 干，剪成0.5cm小段，放入烧杯并用瓶塞压材 料， 加蒸馏水50.0mL，真空抽气5min, 30 ℃恒温30min后 测电导率。 加盖煮沸2min， 并补加蒸馏水到原体积 , 测电导率 。
结果计算
l 相对电导率（%）=煮前电导率/煮后电导率 ×100
l 处理相对电导率/对照相对电导率 反映植物材 料的相对受害程度。
实验植物抗逆性的鉴定
■ 学习电导仪法测定膜相对透性的方法 ■ 理解逆境对植物膜透性的影响
2. 实验原理
植物细胞膜是细胞与外界环境的一道分界面，对维 持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。 在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。 当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐 渍、病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大， 从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液 的电导率增大。 膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物 抗逆性的强弱有关。
电源开关“开”，预热； 打开（测量/校正）拨至“测量”；（补偿/一般）拨至 “一般”；（×1/×10-2）拨至“×1”；量程范围选 “×103”，使待测值介于0.1～0.999之间。
每次往待测液中插入电极时，都要首先用纯水冲洗电极， 并用吸水纸轻轻拭干。
5 数据记录与处理
表1
电导值 A B
叶片不要用蜡质的，可以用梧桐叶、芭蕉叶；
水浴加热隔3分钟摇一次，测量前也要摇匀；
煮沸时单管要分开，否则沸水窜入试管；
电导仪使用前电极放入纯水中浸泡，开关打开后， 不要长时间将电极放在待测液或水中；
每次往待测液中插入电极使，都要首先用纯水冲洗 电极，并轻轻拭干。
伤害率
本次实验测定高温对植物细胞膜的伤害
电导率 K=GQ Q:电极常数（电导仪本身决定） G来自实测电导值 伤害率（％）＝
处理电导率
煮沸电导率
×100％
3 材料、仪器设备及试剂
（一）材料：梧桐叶片； （二）仪器设备： 1. 电导仪；2.打孔器；3. 真空干燥器； 4. 恒温水浴锅；
重复2管号
1B
2B
3B
4B
5B
组织逆境伤害程度测定
电导仪测定初电导值S1 S1。 3 电导仪测定初电导值S1。
沸水浴10min 自来水冷却（ 10min， 4 沸水浴10min，自来水冷却（杀死植物组 ），平衡10min（其间不断摇动） 平衡10min 织），平衡10min（其间不断摇动）后即 可测定终电导。 可测定终电导。
步骤： 三、 步骤：
取材 各3片叶 打取叶圆片 9片/管，15mL蒸馏水/管 15mL蒸馏水/ 蒸馏水 抽气15min 抽气15min 煮沸15min 煮沸15min 测量S2 测量S2 平衡20min 平衡20min 冷却 测量S1 测量S1 平衡10min 平衡10min
结果计算： 相对电导度： L=（S1-空白电导）/（S2-空白电导） L=（S1-空白电导）/ S2伤害度： (Lt-Lck/1(Lt-Lck/1-Lck)*100
注意： 注意：
1 蒸馏水中加吐温，洗仪器时出现泡沫。 吐温作用：表面活性剂，促进细胞间隙水分与 外界交换。 抽气作用：抽出细胞间隙空气， 2 抽气作用：抽出细胞间隙空气，保证水分 充分进入细胞间隙。 充分进入细胞间隙。 纱网作用：防止抽气时叶圆片被抽出。 3 纱网作用：防止抽气时叶圆片被抽出。
ห้องสมุดไป่ตู้
材料： 材料：
大叶黄杨叶片
【方法】 方法】
1.实验分两个处理： 1.实验分两个处理： 实验分两个处理 对照： 对照：正常植物叶片 低温：低温（ 20℃）处理20min的叶片 低温：低温（-20℃）处理20min的叶片 20min 2.冲洗叶片，用滤纸吸干， 叶圆片。 2.冲洗叶片，用滤纸吸干，打取 叶圆片。 冲洗叶片 每个试管9片叶，加入15ml 蒸馏水后放 每个试管9片叶，加入15ml 入塑料沙网（距液面1cm 1cm） 入塑料沙网（距液面1cm）统一抽气 20min。 20min。
46逆境对植物的伤害电导仪法
实验 46 逆境对植物的伤害（电导仪法）一、原理植物细胞膜对维持细胞的微环境和正常的代谢起着重要的作用。
在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性能力。
当植物受到逆境影响时，如高温、低温、干旱、盐渍或病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏，膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。
膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也与植物抗逆性的强弱有关。
这样，比较不同作物或同一作物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强弱，因此，电导法目前已成为作物抗性栽培、育种上鉴定植物抗逆性强弱的一个方法。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。
（二）试剂NaCl 溶液。
（三）仪器设备电导仪，天平，温箱，真空干燥器，抽气机，恒温水浴锅，注射器。
三、实验步骤1. 制作标准曲线如需定量测定透性变化，可用纯 NaCl 配成 0 、 10 、 20 、 40 、 60 、80 、 100 μg/mL 的标准液，在 20 ～ 25 ℃恒温下用电导仪测定，可读出电导率。
以电导率为纵坐标， NaCl 量为横坐标做标准曲线。
2. 选取小麦或其他植物在一定部位上生长叶龄相似的叶子若干，剪下后，先用纱布拭净，称取两份，各重 2 g 。
3. 一份插入小杯中放在 40 ℃恒温箱内萎蔫 0.5 ～ 1 h ，另一份插入水杯中放在室温下做对照。
处理后分别用蒸馏水冲洗两次，并用洁净滤纸吸干。
然后剪成长约 1 cm 小段放入小烧杯中（大小以能够容纳电极为度），并用玻棒或干净尼龙网压住，在杯中准确加入蒸馏水 20 mL ，浸没叶片。
4. 放入真空干燥器，用抽气机抽气 7 ～ 8 min 以抽出细胞间隙中的空气。
重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶下沉。
5. 将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置 20 min ，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在 20 ～25 ℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。
6. 测过电导率之后，再放入 100 ℃沸水浴中 15 min ，以杀死植物组织，取出放入自来水冷却 10 min ，在 20 ～ 25 ℃恒温下测其煮沸电导率。
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六、思考题
植物抗逆性与细胞膜透性有何关系?用电
导仪法定量测定细胞膜透性变化为什么 要用纯NaCl做标准曲线 ?
逆境对植物的伤害-电导仪法
逆境对植物的伤害-电导仪法
二、实验材料、仪器与设备
1 实验材料: 植物叶片 2 实验仪器：电导仪，电子天平， 真空干燥器，抽气机， 恒温水浴锅，打孔器 3 实验试剂：NaCl 溶液
逆境对植物的伤害-电导仪法
二、实验设备-电导仪
逆境对植物的伤害-电导仪法
三、实验步骤
1.取大小一致的功能叶片，蒸馏水洗净，擦干。
实验五
逆境对植物的伤害 -电导仪法
逆境对植物的伤害-电导仪法
一、实验目的、原理
[实验目的]：
１、了解细胞膜透性测定在实际应用中的意义。
２、掌握电导仪使用方法； ３、掌握电导仪法测定植物细胞膜透性的原理 及要点； ４、观察高、低温因子对细胞透性的影响
逆ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ对植物的伤害-电导仪法
一、实验目的、原理
[实验原理]： 在正常情况下，细胞膜对物质具有选择透性 能力。当植物受到逆境影响时，如高温、低温、 干旱、盐渍或病原菌侵染后，细胞膜遭到破坏， 膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致 植物细胞浸提液的电导率增大。 膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，也 与植物抗逆性的强弱有关。这样，比较不同作物 或同一作物不同品种在相同胁迫温度下膜透性的 增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强 弱。
处理电导率-对照电导率 伤害率=──────────────×100% 对照电导率
逆境对植物的伤害-电导仪法
五、注意事项
1.整个过程中，叶片接触的用具必须绝对 洁净（全部器皿要洗净），也不要用手直 接接触叶片，以免污染。 2.各处理和对照的待测液的体积要一样。 3.测定后电极要清洗干净。
逆境对植物的伤害-电导仪法
5.测过电导率之后，再放入100℃沸水浴中
15min，以杀死植物组织，取出放入自来水
冷却10min，在20～25℃恒温下测其煮沸电 导率。
逆境对植物的伤害-电导仪法
实验设备-电导仪的使用
1、开机：连接好设备→开机→预热10min 2、调节温度：按通过“V “确定"键退出。 3、设置电极常数：按"电极常数"设置电极常数（K=
电导电极上的K值）→按 “V
“确定"键退出。
4、测量：用去离子水清洗电极3遍，在未插入溶液 时度数应为“0”，否则按“调零”调节，每次测 定待测样本前、后用去离子水润洗。
5、测量完毕，整理仪器，关闭电源。
逆境对植物的伤害-电导仪法
V
V
”调节至25℃，按
”调节，后按
四、实验结果计算
伤害率可以用下列三种形式表示：
2.避免叶片大脉，打孔器打取20个圆片放入干
净小烧杯，在向其中加入20ml蒸馏水。
3.用抽气机抽气7～8min以抽出细胞间隙中的空
气。重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而
使叶下沉。
逆境对植物的伤害-电导仪法
三、实验步骤
4.将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置 20min，然后用玻璃棒轻轻搅动叶片，在 20～25℃恒温下，用电导仪测定溶液电导率。