AKTA 操作
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
1、使用前,根据自己所要分离蛋白的性质确定所需的分离柱及缓冲液,打开计
算机及仪器,但不要急于打开软件,等计算机与仪器连接再打开软件,此过程大约需要3-5分钟。
2、将纯水先抽滤脱气,使用?0.45μm的滤膜,,然后选择流路连到机器上,先洗泵,然后给机器一个流速和压力。
选择的最高压力须小于柱子所能承受的压力极限。
3、将柱子连接到仪器上,接柱子时,须等进液管中的液体出来,将柱子的一头与进液管通过接头连接,先不要拧的太紧,等液体从柱子的另一头流出,再用接头将其与出液管相连拧紧,再将进液管端拧紧,这样防止柱子中进入气泡,影响分离效果。
4、柱子接上后,换上配好的缓冲液,须抽滤脱气,用缓冲液平衡至仪器的各条基线都平后,再上样。
5、上样时,必须通过滤膜过滤,0.22μm,,具体上样体积视样品浓度而定,采用
不同的上样环上样。
6、仪器使用完毕,切记要用纯水清洗泵和柱子,洗柱直至各条基线都平为止,防止盐和粒子结晶于泵和柱子使机器报废。
若长期不用,再用20%的乙醇清洗系统和
柱子,防止泵和柱子生长微生物,这一步非常重要,。
7、仪器的PH计每隔一段时间,一个月,须校准一次。
紫外流动池也需定期清洗,三个月,。
生物技术中心仪器管理人,李红兵
2006年10月15日。
AKTA操作流程
AKTA 操作流程1 洗泵2 pause 或end 换Buffer 34 降速(节约缓冲液) 上样5 end6 Run789降速卸柱子水洗洗泵 降速0.5 装柱子升速洗柱子缓冲液洗 A Buffer100%AKTA预备与注意事项* AKTA与液相的区别，AKTA不能进气泡Hitrap Q 1ml阴离子柱*柱子的再生方法2M NaCl→水→1M NaOH→水1 检查足够量的A 2L，B Buffer 1L, 2M NaCl 1L（平衡洗脱，要多来几次）、水和20%的乙醇、1M NaOH 50ml2 准备Fraction 的试管、2ml离心管3 透析后离心2000g 10min, 然后过滤好自己的样品(如过夜需继续过滤并准备新的离心管装过滤液)4 白纸、笔（记录收集管号）和记号笔（写离心管），纸巾（换柱子用）5 冰盒2个（1个放样品1个放收集好的离心管含酶液）6 一次性滤器和针若干7 1ml 枪和枪盒（如有时需稀释样品8准备一个废液瓶一个小烧杯（取水洗针等）* 设警报压力卸（装）（别人或自己）的柱子，手动操作一定要* 设警报压力有时设错流速* 设警报压力即便没设错流速，由残存的Buffer可能很稠(如75%的酒精或2M NaOH)，造成超过界限压力* 2ml/min的流速一般的离子柱可以承受，可以实时观察柱子压力* 不运行方法，不会吸样口到LOOP环* 方法成熟以后，可用直接用45%的B buffer当A缓冲液* 电导唯一性，第二次调整时可以用B buffer测一下电导* 从样品环上样，一是不经过泵，二是可以用很小的量如用NaOH洗脱时* 换Buffer洗泵，一般先冲泵可以替换缓冲液，这样一跑柱子就是有效的换过的缓冲液，如不洗泵，可以看电导等参数* NaOH最好不要过检测器。
过LOOP环等要用inject模式冲洗包括注射器，或手动冲洗AKTA方法设定[阴离子柱]储液KPB纯化缓冲液A 1L(一般需配2L) (0.01M=10uM)KPB 由0.1M KPB母液稀释纯化缓冲液B 1L由纯化缓冲液A(10uM) + 0.5M KCl称取1*0.5*74.55=37.28g KCl 定容到1L纯化缓冲液A 抽滤2M NaCl 1L称取2*1*58.44=116.88g NaCl 定容到1L 抽滤1M NaOH 50ml称取0.05*1*40=2g NaCl 定容到50ml 抽滤由纯化缓冲液A(10mM) + 0.2M KCl 500ml1M NH4SO4 50mlSuperdex 200 凝胶柱预备与注意事项**0.22um** 准备0.5M NaOH、water、Ethoh20%、缓冲液、样品90个15ml 离心管*设警报压力delta-column pressure*设柱位置* 流速0.5，用水或缓冲液洗LOOP环* 手动End后，要重设报警压* 增加平衡体积，在第二次进样后，就不用平衡了* 目标分子量越小，出现越晚* 降低流速或是增加洗脱体积，可以提高分辨率* 结束时A1→NaOH,B1→water,Aw→ 20%EthohA1 水洗→A1,B1 20%乙醇A V ANT 参数Pump 泵> Flow: 设定系统泵流速> Gradient: 梯度设定> BufferPrep_pH: 使用缓冲液配制功能时，设定pH值> SampleFlow: 设定样品泵流速> PumpWashExplorer: 系统泵清洗，25ml/min，30ml/管> SystemWash: 使用缓冲液配置功能时，清洗系统泵，30ml/min，共洗75mlFlowpath 流路> BufferValveA1: 缓冲选择阀切换> PumpAInlet: A 泵入口三通阀切换> PumpBInlet: B 泵入口三通阀切换> SampleValve: 样品选择阀切换> InjectionValve: 上样阀切换> ColumnPosition: 层析柱位阀切换> FlowDirection: 层析柱流向切换> OutletValve: 收集出口阀切换> InjectionMark: 插入记号Alarm & Mon 报警、检测> WaveLength: 选择监测波长（1-3个）> AutoZeroUV: 紫外吸收校零> Alarm: 设置压力、紫外、电导、pH等报警限> Watch: 监测参数设置，配合方法编辑中的watch功能Frac 收集：> Peak_Frac_Parameters: 计峰收集参数设定> FracCollect_900: 分布收集每管体积> Frac_Stop_900: 停止分别收集> FeedTube: 换管收集> Peak_Fraction: 按峰收集每管体积> Peak_FracStop: 停止计峰收集> OutletFraction: 出口阀每峰分段收集每段体积等设置Others 其它> Block: 调用程序块（只在方法运行时可用）> Next_breakpoint: 跳到下一程序块（只在方法运行时可用）> BufferPrepRecipe: 选择缓冲液配方> Set_Mark: 插入提示语> End_Timer: 设定结束运行时间> Record on/off: 手动运行时开始或结束数据记录疏水柱缓冲液配制**0.22um** 准备0.01 KPB、0.01KPB+ 1M NH4SO4 、样品90个15ml 离心管**0.01KPB+ 1M NH4SO4 溶液中，NH4SO4太多，容易蛋白质溶液在跑的过程中析出赌柱子，NH4SO4太低则疏水吸附力减弱**与离子柱相反先用0.01KPB+ 1M NH4SO4高盐洗 0.01 KPB高效液相色谱色谱柱的清洗程序反相: 乙腈-水(5:95) 10倍体积(非盐流动相可省略) *不低于20min* 梯度到乙腈-水( 95:5) , 冲10倍体积柱无梯度功能系统中间增加5倍柱体积乙腈-水(50:50)冲洗步骤正相: 乙腈-正己烷(1:99) 10倍柱体积流动相10mM KH2PO4.H3PO4 buffer(pH2.9) + acetonitrile ( 2:1 v/v)烟腈反应终浓度20mM反应总体积500ul10ul 上清+ (440超纯水+ 50ul 200mM的母液)490ul烟腈,反应20min 取100ul与100ul乙腈（分析纯）混合上样尼克酰胺标样。
AKTAprime操作规程 范本
昆山市工业技术研究院小核酸生物技术研究所有限责任公司ÄKTAprime 全自动层析仪操作规程操作步骤：1.开机：先启动电脑，等电脑启动完成后打开AKTAprime主机电源。
2.点击桌面上的Primeview图标进入层析监视界面。
3.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤去离子水中。
4.在AKTAprime主机操作界面按上下键选择Manual Run进入操作菜单界面。
5.选择“Set Pressure Linit”设置系统压力上限，选择“Set Flow Rate”设置流速，选择“Start Run运行。
6.按下操作面板上的“Pause/Cont.”暂停运行。
7.将A/B管道分别放入0.45um/0.22um过滤buffer中。
8.重复操作步骤4—5。
9.按下操作面板上“end”按钮，结束运行。
10.安装层析柱，将层析柱上下管道分别接入AKTA相对应的接口。
11.选择“Set Flow Rate”设置流速，选择“Set Pressure Linit”设置层析柱压力上限，选择“Start Run”运行，开始平衡层析柱。
12.将样品用注射器推入样品环中，选择“Manual Run—Set Inject valvePos--Injection”命令开始进样，等样品全部层析柱后切换“Injection”到“Load”状态。
13.选择“Manual Run—Set Gradient/concentration”命令设置洗脱梯度。
14.洗脱完成后按下控制面板“end”按钮结束层析方法。
15.双击桌面“PrimeView Evaluation”图标，进入Evaluation界面，在Manual run中找到刚才运行的色谱图，选择菜单栏“File—Save As..”命令保存。
16.方法运行完毕后，用0.45um/0.22um过滤后的去离子水冲洗管道。
17.当电导和PH降至中性时换上20%乙醇冲洗管道，直到将所有管道充满乙醇为止。
AKTA操作说明
AKTA操作说明第一章：引言1.1目的本操作说明的目的是提供一个详细的指南，以帮助用户正确操作并有效利用AKTA系统。
1.2适用范围本操作说明适用于所有使用AKTA系统的操作人员。
1.3定义1.3.1 AKTA系统：指一套高效的色谱仪系统，由AKTA Pure、AKTA avant等设备组成，用于生物大分子的分离纯化。
第二章：系统组成2.1 AKTA Pure2.1.1 AKTA Pure系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
2.2 AKTA avant2.2.1 AKTA avant系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
第三章：系统操作3.1准备工作3.1.1确保所有液体介质已接入正确位置。
3.1.2检查设备状态，确保设备正常运转。
3.2打开系统3.2.1 AKTA Pure3.2.1.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.2.2 AKTA avant3.2.2.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.3设置方法3.3.1根据实验需求，使用软件界面上的设置按钮进行参数设置，包括流速、梯度洗脱的梯度段数和比例，柱子的温度等。
3.4样品操作3.4.1准备样品：根据实验需求，准备待分离的生物大分子样品。
3.4.2样品进样3.4.2.1 AKTA Pure：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.4.2.2 AKTA avant：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.5运行实验3.5.1设置柱子：选择合适的柱子，并进行柱子的准备工作，如柱子平衡、填充柱子缓冲液等。
3.5.2开始实验：根据实验要求，点击软件界面上的“开始”按钮，系统将自动进行色谱分离纯化实验。
实验过程中，可以实时观察色谱曲线，控制运行参数。
AKTA使用操作
AKTA使用操作1先打开AKTA开关后再开电脑2打开软件UNICORN，进入到SytemControl3冲洗系统：泵(Pump)—Pumpwahbic—PumpA-选择On单击执行(E某ecute)，立即执行指令，冲洗充满系统，之后会自动结束4设置报警：AlarmQmon—Alarmpreure---highalarm---在参数(Parameter)下面输入新的数值Mpa（根据柱子的信息设置5），单击执行(E某ecute)，立即执行指令5设置流速：泵(Pump)--流量(Flow)—在参数(Parameter)下面输入数值（流速FlowRate），设置一个较小的流速，一般0.5mL/min。
单击执行(E某ecute)，立即执行指令，单击关闭(Cloe)关闭对话框6接注：在冲洗状态运行中接柱子，先打开柱子上端，注满液体，先松松接入接头，去掉柱子下端堵头并接上接头，稍紧，待下接头有液体流出，充满接柱孔后旋紧，然后拧紧柱子上面接头。
7平衡：冲洗平衡柱子一个柱体积到基线稳定，期间可在接口2和6之间接上样品环，注射冲水洗干净，再用buffer冲洗并充满，注射器不拔，等待上样8上样：窗口进入到Flowpath—Injectionvalve—选择load，单击执行(E某ecute)。
取下注射器，用新的注射器吸取适量的样品（根据样品环的容量，注射器中不要带入气泡）从注射口缓慢的注入样品，注射器不可拔掉。
注射完成后，把load改为inject—inert，Alarm&Mon---AutozeroUV--inert，单击执行(E某ecute)开始上样，走4mL左右时，样品应已从样品环完全进入系统，把inject改为load，单击执行(E某ecute)，等待出峰收样，同时摆好收样器的位置，准备接收管。
9收样：出峰时设置Frac---fractionation900---在参数(Parameter)下面输入数值，一般0.5mL—1mL，单击执行(E某ecute)，结束收样时end结束，保存结果10：处理：洗脱样品结束后处理系统，先用水冲洗一个柱体积到基线稳定，暂停，换NaOH冲洗至少一个柱体积到基线稳定，再用水冲洗一个柱体积到基线稳定，测PH为7.0，暂停，换20%乙醇（Ethanol）冲洗至少一个柱体积到基线稳定，11：拆柱：先拆下面，取下后松接上堵头，旋松上面的接头，旋紧下面堵头，取下上面接头，柱子上端注满液体，接上端堵头。
蛋白纯化AKTA操作说明(二)
蛋白纯化AKTA操作说明（二）引言概述：本文档旨在提供关于蛋白纯化AKTA操作的详细说明。
蛋白纯化是生物化学和生物技术中常用的实验技术之一，能够用于从复杂的生物样品中纯化目标蛋白质。
AKTA操作是常用的蛋白纯化系统，本文将介绍该系统的操作步骤和注意事项，帮助用户顺利进行蛋白纯化实验。
正文：一、AKTA操作之仪器准备1. 确保AKTA蛋白纯化系统已经连接好电源，并打开主机电源开关。
2. 检查液氮罐中的液氮是否充足，并确保液位高于所需运行温度。
3. 打开冰盒，准备好所需的离心管、移液器和其他实验器材。
二、AKTA操作之列柱装配1. 按照实验要求选择合适的色谱柱和填料，并正确装配到AKTA系统中。
2. 使用力学手套松开色谱柱底部的螺丝，将填料注入色谱柱中，确保填料均匀。
3. 同时，注意将填料与色谱柱的连接口处用黑色硅胶密封，以免液体泄漏。
三、AKTA操作之流程设置1. 打开AKTA系统的软件界面，并选择“新建方法”。
2. 在方法设置界面中，设定蛋白纯化的各个步骤，如进样、洗脱等流程参数。
3. 根据实验需求，选择合适的梯度洗脱方案，并输入相应的洗脱液体浓度。
四、AKTA操作之样品处理1. 将待纯化的生物样品进行预处理，如离心、过滤等，以去除杂质。
2. 根据纯化需求，可进行某些特定试剂的添加，如酶切剂、亲和标记剂等。
3. 根据方法设置，将样品装入进样器中，并调整进样量和进样流速。
五、AKTA操作之运行实验1. 保存并加载所设置的方法，确保参数设定正确。
2. 启动AKTA系统，开始实验运行，并监控过程中的各项参数指标。
3. 及时记录实验数据，并根据需要进行样品采样、保存等操作。
总结：通过本文所述的蛋白纯化AKTA操作说明，用户可以了解到系统准备、列柱装配、流程设置、样品处理和运行实验等关键步骤。
合理而正确的操作，将帮助用户获得高质量的蛋白纯化结果。
同时，用户还需根据实际操作中的具体情况，进一步优化实验参数，以满足各自的研究需求。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
AKTA使用方法
AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。
（2）洗泵。
点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。
用Q A buffer 冲洗pump A，用Q B buffer冲洗pump B。
（3）洗系统（管道）。
将Conc%B改为100%，点击Start system wash。
（4）改流速，平衡柱子。
将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min），点击Set flow rate。
然后选择柱位。
用Q B buffer平衡Q柱4-5个柱体积，再用Q A buffer平衡Q柱4-5个柱体积。
（5）准备收集盘，设置运行程序。
准备烧杯收集outlet。
（6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。
上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。
电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。
（7）Elution, 运行洗脱程序。
（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（8）及时将outlet取出并保存好。
（9）收集收集管，并将buffer放回。
Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)（1）浓缩。
将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。
（2）洗泵。
用Superdex buffer冲洗pump A。
（3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。
（4）平衡。
用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。
（5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。
（6）上样，运行程序。
（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。
AKTA层析系统
其它要求
TSK-gel XX 5pw 7.5*75
0.5 kPsi /0.6M Pa
1mL/min
TSK-gel XX 5pw 21.5*150
0.5 kPsi /0.6M Pa
6mL/min
TSK-gel G5000PW XL 7.8*300
0.1 kPsi /0.3M Pa
0.5mL/min
TSK-gel G3000SW 0.1 kPsi /0.3M
AKTA层析系统标准操作规程
在使用AKTA前，请先阅读本规程，并了解 所需层析方法的原理。初次使用请在有经验
的人指导下进行。
1. 缓冲液和层析的样品的准备：
1. 溶液需用去离子水、超纯水或注射用水配制，除NaOH和乙 醇外，所有用于层析的缓冲液需经0.45μm孔径的滤膜过滤， 并盛装于用0.45μm孔径滤膜过滤的水至少荡洗4次的容器中。
⑶使用完仪器应在文件管理界面关闭UNICORN程序，系统将提 示是否锁定界面，选否，待UNICORN完全退出后方可关闭仪器电 源。使用完毕后需清理台面，并登记使用事项。
2．AKTA仪器的运行
⑴在打开流速之前，将AB管道插入缓冲液中，遵循A低盐，B高 盐或者A高pH, B低pH的原则，若只用一种缓冲液，请将AB管道都 插入缓冲液中，然后AB泵各走50%。在装上柱子之前应先用高流速 将管道中替换成自己相应缓冲液。
20mL/min
35*40 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
35*60 0.5M Pa 25mL/min
20mL/min
国产柱子，A*B表示内径为A（mm），高为B（cm）
4.
4. 常压介质：
介质
压力上 限
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
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ÄKTA常见问题解决方案
系统（System）
Q：样品与缓冲液怎么脱气和过滤？
A：溶液和样品必须过滤（0.2um或者0.45um的膜过滤）和脱气，可以使用负压抽滤
瓶过滤（如右图），并且在负压条件下保持10min脱气。
脱气的方法还包括：超声15min
以上或者使用注射用水配制缓冲液。
对于小体积样品的过滤，可以使用高速离心的方式，
吸取上清。
Q：系统怎么保存？
A：使用完毕，须用水将系统冲洗干净（关机前，电导检测数值<0.1ms/cm），之后用
20%乙醇清洗系并保存所有的流路。
Q：系统的清洗？
A：按时清洗系统或遇到问题时清洗系统。
用1M NaOH ，小流速清洗系统30min，之后立即用中性的缓冲液（例如PBS）和去离子水将NaOH冲洗干净并且系统pH保持在中性。
系统泵（Pump）
Q：系统中进了气泡，怎么排除？
A：排除气泡的方式有两种：system control→Manual→Pump→PumppurifierA/B，
进行泵洗，高流速将气泡排出（流速和冲洗的时间系统默认）；或者将空注射
器放置在泵头黑色接头处（如右图），拧开泵头，抽出气泡后，拧紧泵头即可。
Q：泵后润洗系统，如果进入气泡怎么处理？润洗液不循环，怎么处理？
A：润洗系统只是起润滑作用，有小气泡不会影响缓冲液的系统或者进入柱子；
如果有大段气泡影响润滑时，则将润洗瓶中有接头处接空注射器，将气泡抽出即可。
如果润洗液不循环，说明单向阀堵塞或损坏，可以使用超声清洗或更换。
紫外监测器(UV Monitor)
Q：如果紫外检测曲线有噪音或者波动，怎么处理？
A：可以使用注射器推甲醇或1M NaOH注入紫外流动池，停留20分钟，用水
冲洗；或者用注射器推10%的表面活性剂（如Decon90，Deconex11，DBS25，
SDS等）注入紫外流动池，停留20分钟，用水冲洗。
Q：怎么查看检测器的使用时间？
A：三波长检测器灯的使用时间：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Run Time（如果>4000h，
需要更换紫外灯）；光栅转动时间：面板菜单-Check-press OK-Check Flip Time （如果>2000h，需要维护）；紫外灯的能量：面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity （如果灯的能量<20%，需要更换内部光纤）
固定波长检测器灯使用寿命：（AKTApurifier UPC/FPLC）：灯的使用时间：面板菜单-Check-press
OK-Check Lamp Run Time，如果达到以下使用时间，需要更换相应灯——汞灯在254 nm的
寿命，室温一般为7000h（冷室2000h)；汞灯在280 nm的寿命，室温一般为3500h；锌灯
的寿命，室温一般为2000h；面板菜单-Check-press OK-Check Lamp Intensity. 如果灯能量
小于以下数值，需要更换相应灯——R <300 mV for 254 nm ；R <150 mV for 280 nm；R
<150 mV for 214 nm。
pH计（pH electrode）
Q：使用前，怎么进行pH校正？
A：使用前校正pH计，将pH计探头放在校正液中（实验室常用的6.86、4.01或者9.18），在system control→System →Calibrate→pH中进行两点校正。
Q：pH的保护液成分是什么？
A：保护液：1:1 pH 4 buffer和 2M KNO3，或pH4.0的饱和KCl溶液）。
Q：怎么清洗pH流通池和电极？
A：清洗流动池：拆下pH电极，用1M NaOH清洗pH和电导流动池30分钟，用水
冲洗。
清洗pH电极（响应慢或校正斜率小于80%时）：
1. 盐沉积：0.1M HCl/ 0.1M NaOH/ 0.1M HCl 交替洗数次，间隔5分钟。
2 . 油脂沉积：1%SDS清洗后水洗。
3. 蛋白沉积：1% 蛋白酶于0.1M HCl 溶液中清洗后水洗。
在线滤器（On-line filter）
Q：在线滤膜的材质？怎么进行清洗？
A：滤膜孔径1um ，滤膜安装时没有正反。
FPLC和100的系统滤膜是多聚物材质, 是一个耗材，清洗后反复使用5~10次左右； 10的系统/micro是金属材质滤膜，可以反复使用。
清洗滤膜的方法：使用1M NaOH浸泡15min，去离子水超声15min，即
可反复使用。
收集器
Q：怎么测量和设定从UV检测池到收集器的延迟体积？（AKTAprime和avant是默认值）
A：延迟体积（delay volume) 测定：从UV检测器到收集器的体积。
使用空注射器将UV
检测池以后的管路排空，设置1mL/min，当看到收集器有连续液滴时，Pause，在logbook
中读取体积，在System Control-setting-special-Frac delay volume设定。