AKTA 简要操作说明
AKTA蛋白纯化系统操作
AKTA蛋白纯化系统操作AKTA蛋白纯化系统是当前蛋白纯化工作经常用到的一组设备，自动化程度很高。
AKTA系统依据不同的配置，可以分为AKTA EXPLORER、 AKTA PILOT、AKTA PURIFIER等多种型号的设备。
以下以AKTA EXPLORER为例简单介绍A KTA蛋白纯化系统的一般操作。
1、认识AKTA。
AKTA explorer 是为方法开拓及研究应用而设计的全自动液相色谱系统。
该色谱系统的分离装置有三个主要组件，在底部平台的左侧整齐堆起（Fig 1）。
它们是：FIG 1、AKTA EXPLORER主机• Pump-900 为双通道高效梯度泵系列。
在AKTAexplorer 100，流速范围0.01-100 ml/min，压力高达10 Mpa（泵名为P-901）。
在AKTA explore10，流速范围0.001-10 ml/min，压力高达25 Mpa（泵名为P-903）。
• Monitor UV-900，同时监控190－700 nm 范围内高达3 个波长的多波长紫外-可见（UV-Vis）监测器。
（针对部分AKTA PURIFIER机型，尚有UPC-900监测器可供选择，光源为汞灯光源，一次可以监控一个波长，安装滤光片后，可以在选择的波长范围内进行切换。
）• Monitor pH/C-900，在线电导和pH 监测的组合监测器。
Fig 2、AKTA EXPLORER硬件模式图AKTA EXPLORER系统的主要组成部件可以用模式图表示（Fig 2）。
组成部件，如混合器、柱及不同的阀安装在右边部分。
打开装阀的门可全部看到。
柱被挂在装阀的门的外侧。
分离装置由UNICORN 软件控制。
软件安装于一独立的电脑主机之中，在电脑与色谱系统之间的通信由数据采集装置CU950进行控制。
2、一般操作2.1 开机按位于底部平台前左侧的ON/OFF 按钮，打开色谱系统，然后打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内的manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一种方式4）洗脱：上样后用缓冲液尽量将穿透峰洗回基线。
AKTA操作说明
AKTA操作说明第一章：引言1.1目的本操作说明的目的是提供一个详细的指南，以帮助用户正确操作并有效利用AKTA系统。
1.2适用范围本操作说明适用于所有使用AKTA系统的操作人员。
1.3定义1.3.1 AKTA系统：指一套高效的色谱仪系统，由AKTA Pure、AKTA avant等设备组成，用于生物大分子的分离纯化。
第二章：系统组成2.1 AKTA Pure2.1.1 AKTA Pure系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
2.2 AKTA avant2.2.1 AKTA avant系统由主机、泵、阀组、控制软件等组成。
第三章：系统操作3.1准备工作3.1.1确保所有液体介质已接入正确位置。
3.1.2检查设备状态，确保设备正常运转。
3.2打开系统3.2.1 AKTA Pure3.2.1.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.2.2 AKTA avant3.2.2.1按下主机上的电源按钮，然后按下软件界面上的“连接”按钮，确保主机和软件连接成功。
3.3设置方法3.3.1根据实验需求，使用软件界面上的设置按钮进行参数设置，包括流速、梯度洗脱的梯度段数和比例，柱子的温度等。
3.4样品操作3.4.1准备样品：根据实验需求，准备待分离的生物大分子样品。
3.4.2样品进样3.4.2.1 AKTA Pure：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.4.2.2 AKTA avant：选择进样器位置，将样品稀释至合适的溶液浓度后，使用软件界面上的“加载样品”功能进行样品进样。
3.5运行实验3.5.1设置柱子：选择合适的柱子，并进行柱子的准备工作，如柱子平衡、填充柱子缓冲液等。
3.5.2开始实验：根据实验要求，点击软件界面上的“开始”按钮，系统将自动进行色谱分离纯化实验。
实验过程中，可以实时观察色谱曲线，控制运行参数。
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程
AKTA蛋白纯化层析系统操作规程一、目的：为了确保蛋白纯化层析系统操作的准确性、稳定性和安全性，保证实验结果的可靠性，制定本操作规程。
二、适用范围：本操作规程适用于实验室内的AKTA蛋白纯化层析系统操作。
三、操作流程：1.准备工作：(1)预热：打开系统电源，预热至设定温度（一般为室温）。
(2)洗涤缓冲液：根据实验要求，制备所需的洗涤缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(3)净化缓冲液：根据实验要求，制备所需的净化缓冲液，确保其浓度和pH值符合要求。
(4)样品：根据实验要求，制备所需的样品。
2.系统配置：(1)连接仪器：将系统中的各个模块连接好，包括色谱柱、注射器、检测器等。
(2)配置方法参数：根据实验要求，在系统内设置合适的流速、梯度洗脱条件等相关参数。
3.样品处理：(1)样品加载：将样品注入到加载注射器中，通过样品加载阀注入到色谱柱中。
(2)洗脱：根据实验要求，设置梯度洗脱条件，将混合物中的目标蛋白纯化。
4.系统清洗：(1)注射器清洗：每次实验结束后，将注射器从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
(2)色谱柱清洗：每次实验结束后，将色谱柱从系统中取出，用纯化缓冲液反复洗涤至无污染为止。
5.系统关闭：(1)关闭电源：关闭系统电源，断开电源线连接。
(2)清洗系统：将系统中的各个模块用水冲洗干净，保持干燥。
(3)整理工作台：将使用过的耗材整理归位，清理工作台。
四、操作注意事项：1.操作前应仔细阅读操作手册，了解仪器的基本原理和操作要点。
2.操作时要穿戴实验室个人防护用品，避免吸入或接触有害物质。
3.在操作过程中，要严格按照实验要求进行，避免操作失误。
4.定期检查系统的运行状态，保证系统正常工作。
5.操作完成后，要及时清洗和整理仪器，保持仪器的干净和完好。
五、风险控制与安全措施：1.使用过程中，注意避免溶液飞溅引起的伤害，避免溶剂和化学品的吸入或接触。
2.避免电源短路或其他电气故障引起的意外事故。
AKTA层析仪使用操作规程(AKTA蛋白纯化系统经典培训资料)
ÄKTApurifier层析仪使用操作规程1、开机打开仪器主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完成（CU950上面3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2、准备工作溶液和样品全部工作溶液和样品必需经过0.45µm滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3、清洗及管道准备首先将A1管道放入缓冲液或平衡液，binding buffer中，将B1管道放入高盐溶液中或elution buffer，在system control窗口点击工具栏内manual，选择 pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗将自动结束。
4、安装层析柱在manual里选择pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
待InjectionValve1号位管道流出水后接入柱子柱头，稍微拧紧后将柱下端堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
5、开始纯化：1）等候柱子平衡好了（观察电导COND，pH数值和改变趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，exectue。
2）用样品环上：将样品吸进注射器，推掉气泡，从injectionValve3号位推入（进样量不得低于样品环体积2倍）推好后不要取下注射器。
在manual里选择flowpath→injectionValve→inject，execute。
3）用泵上样：点击pause，将A1放入样品中，点击countine，待样品上完后，再将A1放入到平衡液中继续清洗柱子。
2),3)选择一个方法4）洗脱：上样后用缓冲液尽可能将穿透峰洗回基线。
(完整word版)蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
蛋白纯化AKTA操作说明
AKTA pure操作说明分子筛层析操作步骤：1. 开机：打开AKTA pure开关，看指示灯，泵同步（泵内有注入液体的声音）。
2. 打开系统：打开电脑：双击Unicorn 7.0打开系统，进入log on 界面，用户名默认为Default，输入密码：default，点ok键，出现提示对话框，继续点确定，进入系统。
注意：进入系统时会弹出三个界面：System Control界面，Evaluation界面和Administration界面。
其中system Control界面为主操作窗口，所有的设置选项都是在该界面下完成：Manual---Execute Manual instructions---......；Evaluation界面为结果数据查看及处理窗口；Administration界面为Unicorn 7.0系统设置界面。
3. 洗泵：把A1泵头从20%乙醇中取出，用去离子水冲洗，放入分子筛缓冲液中，在SystemControl界面下，点击manual---Execute Manual instructions---Pumps---Pump A wash---点开inlet，选择A1---Excuse。
4. 设置系统参数：设柱压：Alams---alam systerm pressure---high alam---设置柱压---Execute；设流速：Pumps---System flow ---设置system flow（1mL/min）---Execute。
注意：流速和柱压设置参照“GE蛋白纯化柱表”，不要超出最高限制。
5. 装柱子(先上后下)：接柱子的上面：拧下连接进样阀和检测器之间的线，等进样阀出口有液体流出时，拧开柱上面线头的螺帽，将它连到进样阀出口；接柱子的下面：去掉柱下端连接的注射器，连上接头，连上一段线，待液体滴出滴出液体滴到检测器上的连接口的洞里，滴满，将接头连到检测器的连接口里。
AKTA层析仪使用操作规程
ÄKTA全自动层析仪操作规程1. 开机打开主机和电脑电源，待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮不闪烁），双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
2. 准备流动相和样品所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤，样品也可高速离心后取上清备用。
当缓冲液中含有有机溶剂（如乙腈、甲醇），需在使用前用低频超声脱气10min。
3. 清洗管道及装柱3.1 首先将A1管道放入平衡液或banding buffering中，将B1管道放入高盐溶液中或elutionbuffering中，在system control窗口点击manual→pump→pump wash basic，选中A1,B1管道为ON， execute。
泵清洗程序会自动运行结束。
3.2 选择manual→pump→flow rate，输入流速1ml/ml，insert；选择manual→Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm（输入填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），insert，execute。
将进样阀的1号位管道接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉，直接拧入紫外流动池或连接管道。
4. 手动运行4.1 平衡柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值正确曲线走稳了）。
此时将紫外调零，选择manual →Alarm&mon→autozero，exectue，就准备上样了。
4.2 上样4.2.1 用样品环上，将样品吸进注射器，推掉气泡，从进样阀的3号位推入（进样量不得低于样品环的体积的2倍），不要取下注射器。
选择manual→flowpath→injectionValve→inject，execute。
4.2.2 用样品泵上样（AKTAexplorer系统），将样品置于Sample Valve 1号位（可以选8个不同的位置），点击manual→pump→Direct Load_960输入进样流速和体积，execute。
AKTA层析系统
压力控制要按照不同的介质、柱型号的使用方法严格严格执行（参 数见附表）。特别需要注意的是，在使用时要设定最高压力警报， 以避免操作不当造成柱子爆裂，甚至仪器损坏。AKTA使用过程中请 检查各部分的运行情况，如有问题及时联系管理员。
⑷同时，在使用时，请确保位于仪器一侧的，50mL管装的20%乙 醇正在循环流动（用于清洗压力泵），并且20%乙醇无浑浊或干涸现 象。若发生断流或液体浑浊，请及时更换并用注射器抽取，让液体 充满管道，避免对压力泵造成损害。
XK 16/100
0.5M Pa
2.5mL/min
2mL/min
通常装分子筛 介质
XK 26/20 0.3M Pa 12mL/min
8mL/min
XK 26/60 0.3M Pa 25mL/min
20mL/min
XK 26/100
0.3M Pa
12mL/min
8mL/min
通常装分子筛 介质
有夹套的进口柱子，XK A/B表示内径为A（mm），高为 B（cm）
⑺运行结束后请及时保存实验结果，并归于各人自己目录下，便 于整理和存档。
三、层析柱和介质的使用：
1.装柱
⑴原先在溶液中的介质通常可以用水或乙醇（20%）装柱，干粉 介质（如G25）需在水中溶胀1h以上，方可装柱。CHTII需在200mM PB溶液中溶胀1h后，用200mM PB装柱。
⑵拆下柱子，清洗柱腔和管道，将位于下方的一端（较短的）接 上AKTA仪器，揭下防水膜，以5~10mL/min流速排出防水膜下的气 泡，盖上防水膜，装上柱腔，继续在柱腔底部注满2cm左右的溶液， 将计算好体积的介质贴壁缓慢倒入柱腔内，要防止气泡的产生。将
4. 配制的缓冲液成分不宜浓度过高，如硫铵不得超过2M（约 50%饱和硫铵）；NaCl不得超过4M；PB不得超过500mM；以 免析出固体损坏层析介质与仪器。
AKTA使用方法
AKTA使用方法AKTA使用方法：阴/阳离子交换柱（1）buffer都要进行超声除气10min（母液需要用0.45μm过滤膜过滤）。
（2）洗泵。
点击Pumps→Start pumpA wash 和Start pump B wash。
用Q A buffer 冲洗pump A，用Q B buffer冲洗pump B。
（3）洗系统（管道）。
将Conc%B改为100%，点击Start system wash。
（4）改流速，平衡柱子。
将System flow的流速改为合适的流速（4mL/min, 2mL/min,0.4mL/min），点击Set flow rate。
然后选择柱位。
用Q B buffer平衡Q柱4-5个柱体积，再用Q A buffer平衡Q柱4-5个柱体积。
（5）准备收集盘，设置运行程序。
准备烧杯收集outlet。
（6）上样，选择A pump上样，当电导上升时waste改为outlet。
上样不要进气泡，上样结束后将A pump放入Buffer A。
电导下降到约1时，outlet改为waste，停止程序。
（7）Elution, 运行洗脱程序。
（设置程序时，一定要勾选using fraction collector）（8）及时将outlet取出并保存好。
（9）收集收集管，并将buffer放回。
Superdex(分子筛、凝胶过滤层析)（1）浓缩。
将蛋白样品溶液用30K的浓缩管在4℃浓缩。
（2）洗泵。
用Superdex buffer冲洗pump A。
（3）用Superdex buffer冲洗整个系统（整个系统体系6-8mL）两个柱体积（约10mL左右）。
（4）平衡。
用Superdex buffer平衡两个柱体积（柱体积23.65mL）。
（5）准备收集盘，用Superdex buffer冲洗Loop环，设置运行程序。
（6）上样，运行程序。
（设置程序时，一定要勾选usingfraction collector）（7）根据分子筛图谱对收集的样品取样进行SDS-PAGE电泳。
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AKTApurifier简要操作说明打开仪器的主电源，打开电脑电源。
待仪器自检完毕（CU950上面的3个指示灯完全点亮并不闪烁）。
双击桌面上UNICORN图标，进入操作界面。
Unicorn Manager文件管理、Method Edit方法编辑、System Control系统控制、Evalution结果处理，4个窗口同时打开，同时关闭。
Unicorn Manager中Manual运行的结果自动保存在Manualruns的文件夹中，文件名从Manualrun1~Manualrun10，第11个结果会覆盖第1个文件（最多保存10个默认的文件名）。
如果手动结果需要长期保存，可以remove到指定文件夹或者rename。
可以利用Manual-other-record-on（off）来选择文件夹，制定文件名保存手动结果。
手动命令(Manual)见《ÄKTA系统手动命令指南》利用脱盐实验熟悉手动操作(System Control→Manual)脱盐试验原理：凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质，按分子大小分离混合分子的技术。
蛋白质是生物大分子，分子量比盐等小分子大许多倍，用凝胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠。
由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控整个层析脱盐的过程。
Sephadex G-25 介质用带3- 氯-1 ，2- 环氧丙烷(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。
适合分子量在5000 以下的生物分子的脱盐及缓冲液置换工作。
在该实验中，蛋白质是大分子，盐离子是小分子，因此蛋白质先出来（280nm有特征吸收），盐离子后出来（电导值显示）o 样品：5mg/mLBSA， NaCl溶液 10mLo binding buffer缓冲液：去离子水o 层析柱：HiTrap Desalting 5 mLo 流速：5mL/min,o 样品体积：200ul/1mL。
操作：1）准备工作溶液和样品所有的工作溶液和样品必须经过µm的滤膜过滤，使用前用低频超声脱气10min。
2）清洗及管道准备首先将A1管道放入binding buffer中，在System Control窗口点击工具栏内的Manual，选择 Pump→Pump wash purifier，选中A1管道为ON， Execute。
泵清洗将自动结束。
3）安装层析柱：在Manual里选择Pump→Flow rate，输入流速5mL/mL，Execute，读取系统空压X Mpa（没有安装层析柱的系统压力），选择Alarm&mon→alarm pressure，设置high alarm,输入X+（填料的耐受压力，可在填料说明书中查到），Execute。
Flow rate，输入流速1mL/mL，Execute，待InjectionValve的1号位管道流出水后接入柱子的柱头，稍微拧紧后将柱下端的堵头卸掉接入管道连上紫外流动池。
改变Flow rate，输入流速5mL/mL，Execute4)开始纯化：o 选择检测波长，Alarm&mon→Wavelength→UV1,UV2,UV3(可以只打开一个波长280nm)等待柱子平衡好了（观察电导COND，pH的数值和变化趋势）就准备上样了。
此时将紫外调零，选择Alarm&mon→autozero，Execute。
o 用样品环上(也可在平衡时将样品推入样品环)：将样品吸进注射器，推掉气泡，从InjectionValve的3号位推入，推好后不要取下注射器。
在Manual里选择Flowpath→InjectionValve→Inject，Execute。
o 设定收集：固定体积收集：（如果有出口阀）Manual→Flowpath→outletvalve→F2，insert，选择Frac→Man_fractionation，输入每管收集体积，insert，exectue。
结束固定体积收集选择Frac→fractionation_stop，exectue。
峰收集：选择Frac→Peak_fracParametersUV_Level,设定峰收集的参数，insert，选择Frac→Peak_Man_fractionation设定峰收集每管收集的体积，insert，Execute。
结束峰收集选择Frac→Peak_frac_stop，Execute。
5）清洗泵及卸下层析柱：将A1入口放入纯水中，启动Pump wash purifier功能冲洗A泵和B泵及整个管路。
设定Flowrate，alarm pressure，清洗柱子和管路，直至cond~cm，UV几乎不变；然后再将A1和B1入口放入20％乙醇中，同样操作将乙醇冲满整个管路保存。
系统给柱子一个慢流速，设置系统保护压力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的时候将堵头拧上，再拆柱子的上端，最后拧上上端的堵头。
整个过程防止气泡进入。
6）关闭电源：从软件控制系统的第一个窗口unicorn manager点击退出，其他窗口不能单独关闭。
然后关闭ÄKTA主机电源，关闭电脑电源。
结果处理Evaluation1）图形或数据拷贝、导出在Unicorn软件Evaluation界面Open结果文件图形拷贝：空白处→右键→copy to clipboard →open word→paste得到结果的图形在Evaluation界面，File→Export→Curves选中206nm →Select→ Export→Excel files→OK2）积分工具和柱效测定在Unicorn软件Evaluation界面打开结果文件夹。
积分：Integrate → Peak integrate→选择待积分曲线，如：UV1_280nm→Peak window(调整积分区域，使其包含主峰)→Reject Peaks (Peaks must be one of 1or 几个 largest)→Baseline(选择Correlated baseline)→Column height：输入实际柱高，如 90cm→OKChromatogram Layout→Peak Table→Plate height(HETP)→Asymmrtey→OK可得到柱效（HETP），对称性（As）Tip：如果峰之间没有达到基线分离，则Baseline→选择Calculate baseline 计算的基线→Baseline settings→ Morphological形态学→Structure width （mL，在多少mL中选取比较平滑的线作为基线，该数值设置大一些）新建柱子具体软件操作如下：①在Unicorn软件Method Editor界面中选择Edit→ Column List②新建一根自己的柱子：New③→New Column中输入柱参数：输入Height，柱子直径diameter；输入其他相关参数：Vt，Vo，Max Pressure，Default Flowrate，Max Flowrate等，然后Save As特定的柱名。
这样在Column List中就有了我们自己编辑好的层析柱。
新建方法：在Unicorn软件Method Editor界面中选择File→New→Wizard→OKMain Selection层析方式选择：Affinity、Anion/Cation Exchange、HIC、Size exclusion→Column：Any（或者预装柱）→Flexible Flow Rate在不同阶段用不同流速→NextWavelength 波长选择UV：280nm →Pump Inlet入口选择→NextEqualibration：Start Concentration %B起始浓度选择→Equalibration Volunme： CV平衡体积→Watch Equlibration和前一个条件是满足任一条件，就跳入下一步。
Sample Injection：Injection Technique: Manual注射器上样→ Empty Loop With：1mL；或者 System Pump Direct Loading系统泵直接上样→Injection Volume 上样体积（必须>10mL），默认样品入口为A2(如果HIC，默认B2) →NextWash Out Unbound Sample清洗未结合蛋白，默认2CV（最后参数表可以修改）→Flowthrough Fractionation穿透峰收集（Frac-900、OFF、Outlet F3出口阀F3收集）→NextElution Fractionation洗脱收集→Frac-900收集器收集、OFF、Outlet出口阀收集→Fixed Volume Fractionation固定体积收集、Peak Fractionation峰收集、Fixed Volume and Peak Fractionation固定体积和峰收集相结合→Fraction Volume固定体积收集每管体积→NextPeak Fractionation设定峰收集→Peak Identification →UV Level峰高度、UV Slope紫外斜率→Minimum Peak Width最小峰宽（排除气泡峰）→Peak Fractionation Volume→NextElution洗脱模式(根据工艺选择一种设定)①Isocratic等度洗脱（凝胶过滤）→Length of Elution 洗脱体积→Finish②Isocratic with Delayed Frationation延迟峰收集的等度洗脱→Length of Elution before Fractionation 从开始采进行峰收集→Length of Elution with Fractionation →Finish③Linear Gradient 线性洗脱→Target Concentration目标变化浓度→Gradient Length梯度长度（一般10~20CV）→Use cond or concB to start and stop Fractionation利用电导或B%开始或者停止收集→Clean after Elution at 100B%(5CV)清洗→Reequilibration after Elution(5CV)再平衡→Finish④Segmented Gradient Advanced高级梯度→ Gradient Segments最多可以设定9个步骤v1.0 可编辑可修改Elution –Segment1(1)-Page1(2) →Step阶段梯度\Gradient线性→Pump Inlet A入口→Concentration B浓度→Length of Step 梯度长度Fraction Volume 固定体积收集→Peak FractionVolume 峰收集设定→设定剩下的梯度后→FinishVariables →Show details检查各个参数，可以修改→Save运行方法System Control→Run→方法→OK→Variables检查一下参数→Evalution Procedures→Method Information/Method Duration总体体积和运行时间→Next→Questions→Directory结果保存文件夹/Name结果名→Start。