免疫分析法ppt汇总.
合集下载
免疫分析教学课件ppt
xx年xx月xx日
免疫分析教学课件ppt
目录
contents
免疫分析概述免疫分析的基本原理免疫分析在医学中的应用免疫分析的新技术与新发展免疫分析的局限性及解决方案研究展望与未来趋势
01
免疫分析概述
免疫分析定义
指利用抗原-抗体特异性反应的生物分析方法
免疫分析分类
根据所用抗体的来源和性质不同分为体内和体外免疫分析
03
免疫分析在医学中的应用
1
感染性疾病的诊断与分型
2
3
感染性疾病是临床常见疾病之一，其诊断与分型对于治疗方案的选择和预后判断至关重要。
免疫分析技术通过检测病原体特异性抗原、抗体或细胞因子等，为感染性疾病的诊断与分型提供重要依据。
例如，免疫荧光、ELISA和化学发光等免疫分析方法可应用于流感病毒、结核分枝杆菌等感染的诊断与分型。
抗原抗体的概念
抗原是指能够刺激机体产生免疫应答的物质，而抗体则是机体在抗原的刺激下产生的免疫应答产物。抗原和抗体结合时会产生一系列的反应，这些反应被称为抗原-抗体反应。
抗原-抗体反应
抗原抗体的特异性
抗原和抗体的结合具有高度的特异性，这是因为抗体只能与相应的抗原结合。抗原抗体的特异性决定了免疫分析的灵敏度和特异性。
抗原抗体的结合力
抗原和抗体结合的力主要是静电引力、范德华力和疏水相互作用等。这些力的相互作用使得抗原和抗体能够紧密结合。
信号放大
免疫分析通常使用信号放大的方法以提高检测的灵敏度。常见的信号放大方法包括酶联免疫分析、化学发光免疫分析和荧光免疫分析等。
检测方法
免疫分析的检测方法包括肉眼观察、仪器测量和放射自显影等。不同的检测方法适用于不同的免疫分析类型和检测范围。
免疫分析教学课件ppt
免疫分析教学课件PPT
xx年xx月xx日
CATALOGUE
目录
免疫分析概述免疫分析的实验技术免疫分析的生物化学基础免疫分析的质量控制免疫分析的未来发展趋势免疫分析实例解析
01
免疫分析概述
免疫分析是一种利用抗原-抗体特异性反应原理，对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测的方法。
免疫分析基于抗原-抗体之间的特异性结合反应，通过检测反应产物来对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测。
在自动化免疫分析仪器的基础上，对整个免疫分析流程进行优化，实现全流程自动化，包括样本处理、加样、孵育、洗涤、检测等环节，减少人为操作误差。
免疫分析的自动化
高灵敏度检测试剂的研发
通过提高检测试剂的灵敏度，能够更早地检测出疾病标志物，提高疾病的早期诊断率。
信号放大技术的运用
采用信号放大技术，如量子点、纳米线等纳米材料的应用，能够将信号放大，提高检测灵敏度和准确性。
常见肿瘤标志物的免疫分析
肿瘤标志物的免疫分析
THANKS
感谢观看
免疫荧光技术的应用
免疫荧光技术被广泛应用于细胞和组织的免疫标记研究。
01
02
03
免疫印迹技术的原理
免疫印迹技术是一种利用特异性抗体识别蛋白质条带，并通过显色反应显示蛋白质存在的方法。
免疫印迹技术的实验步骤
免疫印迹技术通常包括样品处理、电泳分离、转膜、特异性抗体孵育、显色反应等步骤。
免疫印迹技术的应用
抗原结合部位
抗体分子上发挥效应功能的部位，如补体激活、调理吞噬等。
效应功能部位
抗体的结构与功能
04
免疫分析的质量控制
实验计划的制定
制定详细的实验计划，包括实验目的、实验步骤、实验时间、预期结果等，以便于实验的顺利进行。
免疫分析法ppt
酶联免疫分析法——应用2
2、放射免疫分析法(RIA)
• 简介
1959 年美国的 Yalow 和 Berson 首先使用放射性核 素标记胰岛素从而创立了放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA)。
• 定义:把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫
化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种 超微量物质的测定方法。
兴奋剂检测的主要方法有气相色谱、高
效液相色谱、气相色谱－质谱联用、液相 色谱－质谱联用、免疫分析法、流动注射 电化学发光、高效毛细管电泳、毛细管电 泳－离子阱质谱等方法。
二、免疫分析法
免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。
特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。
免疫分析法ppt
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法
（1）酶联免疫分析法 （2）放射64年，国际运动医学会的国际兴奋剂 会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的 运动员使用任何异体物质，或以不正常的 量和不正常的进入机体的途径使用生理物 质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛 成绩的行为。
抽干。
4、结果
γ一记数 仪记数， 并自动计 算尿中MA
浓度 (ng·ml-1)
3、化学发光免疫分析法（CLIA）
1977年Halman将化学反应系统与免疫系统相 结合，创建了化学发光免疫测定法(CLIA )，以检 测抗原或抗体。CLIA是建立放射免疫分析技术 (RIA)基础上的免疫分析技术，既有免疫反应的 特异性，更兼有发光反应的高敏感。
1、酶联免疫分析法(ELISA)
酶联免疫分析法——原理
[课件]免疫分析法PPT
![[课件]免疫分析法PPT](https://img.taocdn.com/s3/m/33001e02af45b307e871978e.png)
免疫分析法
概
前言
要
免疫分析法简介 Section header Section header Section header 免疫分析法 应用与展望
致谢
前言
前言
免疫学是研究免疫系统的结构与功 Ⅱ Ⅲ
能，了解其再免疫应答反应中对机体有
益的防卫功能和有害的病理损伤的机制， 研究有效的免疫措施，实现以防病，治 病为目的的一门现代医学学科。自六十
应用与 展望
Ⅴ
应用与展望
Ⅰ
酶免疫分析技术
Ⅱ
非均相酶免疫分析
均相酶免疫分析
非均相液相酶免疫分析
非均相固相酶免疫分析
Ⅲ
以聚苯乙烯制品作为载体的酶 联免疫吸附实验---ELISA 应用与 展望
Ⅳ
年代竞争分析原理提出，定量免疫获得
巨大的进展。下面简要介绍免疫分析：
Ⅴ
免疫分析法简介
Ⅰ 什么叫免疫分析？ 简介 它是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测 的一种技术手段。
抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发
Ⅲ 生的特异性结合反应。它既可以发生在体内， 也可以发生在体外。在体内发生的抗原抗体 Ⅳ 反应为体液免疫应答的效应作用。体外的抗 原抗体结合反应主要用于抗原或抗体的检测， Ⅴ
Ⅱ
按示踪物及 标记种类分为
分析 检测
Ⅳ
按测定物反应体系 的物理状态分为
Ⅴ
免疫分析检测
Ⅰ 放射免疫分析RIA
放射免疫分析是以放射性核素作示踪剂的标记免疫
Ⅱ
分析方法，具有高度的灵敏性，特异性和精确性，特 别适用于激素，多肽等含量微少物质的超微量分析。
分析 检测
但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必 须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，
概
前言
要
免疫分析法简介 Section header Section header Section header 免疫分析法 应用与展望
致谢
前言
前言
免疫学是研究免疫系统的结构与功 Ⅱ Ⅲ
能，了解其再免疫应答反应中对机体有
益的防卫功能和有害的病理损伤的机制， 研究有效的免疫措施，实现以防病，治 病为目的的一门现代医学学科。自六十
应用与 展望
Ⅴ
应用与展望
Ⅰ
酶免疫分析技术
Ⅱ
非均相酶免疫分析
均相酶免疫分析
非均相液相酶免疫分析
非均相固相酶免疫分析
Ⅲ
以聚苯乙烯制品作为载体的酶 联免疫吸附实验---ELISA 应用与 展望
Ⅳ
年代竞争分析原理提出，定量免疫获得
巨大的进展。下面简要介绍免疫分析：
Ⅴ
免疫分析法简介
Ⅰ 什么叫免疫分析？ 简介 它是基于抗原和抗体的特异性反应进行检测 的一种技术手段。
抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发
Ⅲ 生的特异性结合反应。它既可以发生在体内， 也可以发生在体外。在体内发生的抗原抗体 Ⅳ 反应为体液免疫应答的效应作用。体外的抗 原抗体结合反应主要用于抗原或抗体的检测， Ⅴ
Ⅱ
按示踪物及 标记种类分为
分析 检测
Ⅳ
按测定物反应体系 的物理状态分为
Ⅴ
免疫分析检测
Ⅰ 放射免疫分析RIA
放射免疫分析是以放射性核素作示踪剂的标记免疫
Ⅱ
分析方法，具有高度的灵敏性，特异性和精确性，特 别适用于激素，多肽等含量微少物质的超微量分析。
分析 检测
但由于核素的放射性对人体有一定的危害性，必 须加以防护，核素实验室的建设须经防疫部门的监督，
免疫分析法PPT课件
全抗原： 指同时具有免疫原性和抗原特异性的
物质。 作为全抗原的物质其分子量必须足够
大（分子量>1000），且要求化学结构较 复杂，如蛋白质、多肽等。
半抗原（Hapten）：指只能与特异抗体作用
但不引起机体免疫应答的物质。
人工抗原 ：药物(半抗原) 本身不具免疫原性，
只有当它们与某些大分子的载体物质(如蛋白质 或多肽)共价结合后，才具有免疫原性。这种小 分子半抗原和大分子载体物质结合后所形成的全 抗原。人工抗原直接免疫动物可产生特异抗体。
2. 可逆性
抗原与抗体的特异性结合是由于两者 的分子结构及立体构型相互吻合，它仅发 生在分子的表面，并依靠抗原-抗体分子 间的静电力作用、疏水作用、氢键作用及 范德华引力等而存在。这种结合具有相对 稳定性，但仍为可逆反应。
3. 最适比例性
抗原抗体的结合反 应具有一定的量比关 系。只有当抗原抗体 两者的分子比例合适 时，才能发生最强的 结合反应。
抗体： (antibody ， Ab)
机体是在抗原物质的刺激下形成的一类能与 抗原特异性结合的活性球蛋白，又称免疫球蛋白 (immunoglobin ， Ig) ，由细胞合成并分泌。抗体 是机体对抗原物质产生免疫应答的重要产物，具 有各种免疫功能，主要存在于动物的血清、淋巴 液、组织液及其它外分泌液中。
免疫分析基于抗体与药物结合时所具有的 专一性和可饱和性，利用被测药物同标记药物 之间竞争抗体结合原理，建立药物浓度和响应 值（如RIA中的放射性强度）之间的函数关系， 用于体内药物分析。
抗体（Ab）、标记抗原（标记药物， Ag*）和非标记抗原（非标记药物，Ag） 三种试剂是所有免疫分析必需的基本试 剂，也是任何免疫分析试剂盒应提供的 试剂。
免疫分析技术PPT课件
❖ 1971年，Engvall和Perlman首次报道建立酶联免疫吸附试 验（Enzyme-Linked ImmunosorbentAssays, ELISA）。
❖ 由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优 点，使其得到迅速的发展和广泛应用 。
第19页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖ 基本原理：利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特异性抗原-
第7页，共41页。
第二节 四种常见免疫分析技术
第8页，共41页。
（1）荧光免疫分析技术
❖ 荧光免疫分析技术是标记免疫技术中发展最早的一种，是将
抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合 起来的一种方法。
➢ 1941年，Coons首次采用荧光素进行标记而获得成功。这 种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗 体技术。
❖直接法测定抗体
❖缺点：每检查一种抗体需制备相应的特异抗体。
第21页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖间接法测定抗体
❖优点：灵敏度高，在不同抗体的检测中只需应用一种 酶标抗体。既可检测抗原，也可检测抗体。
第22页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖双抗体夹心测定抗原
第23页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖ 应用：作为免疫净化柱，适用于复杂样本中痕量农 兽药残留的分离分析。
❖ 步骤：加样→洗涤→洗脱 详见下图
第37页，共41页。
免疫亲和色谱柱示意图
第38页，共41页。
第六节 免疫印迹技术
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹 (Western blotting)，是一种借助特异性抗体鉴定抗原的 有效方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基 础上发展起来的一种新的免疫生化技术。
❖ 由于ELISA具有快速、敏感、简便、易于标准化等优 点，使其得到迅速的发展和广泛应用 。
第19页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖ 基本原理：利用酶催化底物反应的生物放大作用,提高特异性抗原-
第7页，共41页。
第二节 四种常见免疫分析技术
第8页，共41页。
（1）荧光免疫分析技术
❖ 荧光免疫分析技术是标记免疫技术中发展最早的一种，是将
抗原抗体反应的特异性与荧光物质检测的敏感性和直观性结合 起来的一种方法。
➢ 1941年，Coons首次采用荧光素进行标记而获得成功。这 种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗 体技术。
❖直接法测定抗体
❖缺点：每检查一种抗体需制备相应的特异抗体。
第21页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖间接法测定抗体
❖优点：灵敏度高，在不同抗体的检测中只需应用一种 酶标抗体。既可检测抗原，也可检测抗体。
第22页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖双抗体夹心测定抗原
第23页，共41页。
（3）酶联免疫分析技术
❖ 应用：作为免疫净化柱，适用于复杂样本中痕量农 兽药残留的分离分析。
❖ 步骤：加样→洗涤→洗脱 详见下图
第37页，共41页。
免疫亲和色谱柱示意图
第38页，共41页。
第六节 免疫印迹技术
免疫印迹(immunoblotting)又称蛋白质印迹 (Western blotting)，是一种借助特异性抗体鉴定抗原的 有效方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基 础上发展起来的一种新的免疫生化技术。
《酶联免疫分析法》课件
酶联免疫分析法具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。
酶联免疫分析法广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
分类：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等 应用：临床诊断、药物研发、食品安全检测、环境监测等领域 优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等 局限性：存在假阳性和假阴性结果，需要标准化操作和严格的质量控制
汇报人：PPT
PPT,a click to unlimited possibilities
汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
酶联免疫分析法（ELISA）是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体。
原理：利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量或定性检测样品中的抗原或 抗体。
优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简便 缺点：成本较高，需要专业人员操作，容易受到环境因素影响
PART THREE
抗原选择：选择合适的抗原，如蛋 白质、多肽等
抗原标记：将抗原与酶或荧光素等 标记物结合
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
抗原纯化：通过离心、层析等方法 纯化抗原
抗原保存：将标记好的抗原保存在 适当的条件下，如低温、避光等
检测水中有机污染物：如农药、多 环芳烃等
检测土壤中的污染物：如重金属、 有机氯农药等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
检测空气中的污染物：如二氧化硫、 氮氧化物等
检测生物体内的污染物：如农药残 留、重金属等
蛋白质定量分析：通过酶联免疫分析法检测蛋白质的浓度 抗体检测：通过酶联免疫分析法检测抗体的存在和浓度 细胞因子检测：通过酶联免疫分析法检测细胞因子的存在和浓度 基因表达分析：通过酶联免疫分析法检测基因的表达水平和调控机制
酶联免疫分析法广泛应用于医学、生物学、环境科学等领域。
分类：直接法、间接法、双抗体夹心法、竞争法等 应用：临床诊断、药物研发、食品安全检测、环境监测等领域 优点：灵敏度高、特异性强、操作简便、成本低等 局限性：存在假阳性和假阴性结果，需要标准化操作和严格的质量控制
汇报人：PPT
PPT,a click to unlimited possibilities
汇报人：PPT
CONTENTS
PART ONE
PART TWO
酶联免疫分析法（ELISA）是一种免疫学检测方法，用于检测样品中的抗原或抗体。
原理：利用抗原-抗体特异性结合的原理，通过酶催化底物产生颜色反应，从而定量或定性检测样品中的抗原或 抗体。
优点：灵敏度高，特异性强，检测速度快，操作简便 缺点：成本较高，需要专业人员操作，容易受到环境因素影响
PART THREE
抗原选择：选择合适的抗原，如蛋 白质、多肽等
抗原标记：将抗原与酶或荧光素等 标记物结合
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
抗原纯化：通过离心、层析等方法 纯化抗原
抗原保存：将标记好的抗原保存在 适当的条件下，如低温、避光等
检测水中有机污染物：如农药、多 环芳烃等
检测土壤中的污染物：如重金属、 有机氯农药等
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
检测空气中的污染物：如二氧化硫、 氮氧化物等
检测生物体内的污染物：如农药残 留、重金属等
蛋白质定量分析：通过酶联免疫分析法检测蛋白质的浓度 抗体检测：通过酶联免疫分析法检测抗体的存在和浓度 细胞因子检测：通过酶联免疫分析法检测细胞因子的存在和浓度 基因表达分析：通过酶联免疫分析法检测基因的表达水平和调控机制
免疫实验结果分析培训ppt课件
谓之假阴性。其原因与组织处理不当，组 织细胞抗原丢失或试剂错误(如漏加、错 加、失效、变质等),操作失误等有关。
免疫实验结果分析
35
对照结果判断：
阳性对照 1 ( －) 2 ( ＋) 3 ( ＋) 4 ( －) 5 ( ＋) 6 ( ＋) 7 ( ＋)
阴性对照 ( －) ( ＋) ( ＋)
( －) ( －) ( －) ( －)
⑶ 吸收试验 是指用事先经过量抗原吸收的
第一抗体上清液取代第一抗体，其他步骤不
变的免疫染色试剂对照。结果应是阴性或阳
性着色明显减弱 (吸收不全时) 。
免疫实验结果分析
15
⑷抑制试验 是指用标记抗体和未标记抗 体 (可以是一抗，也可以是二抗或桥抗
体) 两者的混合物作试剂，其他步骤不 变的免疫组化染色试剂对照，结果其阳 性着色应成比例的减弱 (等量或1：9) 。 此试剂对照多用于直接法。
免疫实验结果分析
第一节 免疫组化结果的判断原则
免疫组化结果的判断原则概括起来有 以下几点：
免疫实验结果分析
2
⒈ 必须同时设对照染色 。没有对照染 色的免疫组化染色结果是不可信的。
⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应 定位在细胞膜上；CK应定位在细胞浆内； PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内；EMA应 定位在细胞膜上，等等。不在抗原所在部
替代对照 检测结果
结果判断
( －) ( ＋)
( －) ( ＋)
抗体失活，操作有误 非特异性染色
( －) ( －) ( ＋)
(＋)(－) ( ＋)
( ＋)
阴性对照内含定位抗原 阳性对照不含定位抗原 非特异染色
( －)
( －)
检测标本不含抗体结合可靠
第二章：免疫分析法ppt课件
55
超抗原的种类： ① 外源性超抗原(细菌性) ：金黄色葡萄球
菌A～E---肠毒素；
② 内源性超抗原(病毒性) ：小鼠乳腺肿瘤
病毒蛋白；(HIV)---人类的病毒性超抗 原等。
56
超抗原可能参与引起机体的生理和病理效 应。超抗原可与食物中毒反应、某些自身 免疫病、AIDS和一些肿瘤发病有关。
57
2．根据抗原刺激B细胞产生抗体是否需要Th细 胞(helper T cell，辅助性T细胞）辅助：
胸腺依赖性抗原(thymus-dependent antigen,TD-Ag)：如多数蛋白质抗原
胸腺非依赖性抗原(thymus-independent antigen, TI- Ag)：如细菌脂多糖，聚 合鞭毛素
淋巴细胞，简称B细胞。人类的B细胞，是在骨髓 中分化的。
47
载体-半抗原概念极其重要，它可解释
为什么低分子量化合物与体内载体蛋白 质分子结合诱发超敏性反应产生的药物 过敏症。
如苯胺类染料、镇静剂司眠脲、退热剂 阿司匹林、氨基比林以及多种抗生素分 解产物等是诱发药物过敏症的原因。
48
（三）抗原的特异性
抗原的特异性，是指某一抗原分子只能诱 导相应淋巴细胞发生免疫应答的专一性， 以及某一抗原分子只能与相应抗体或致敏 淋巴细胞特异性结合的专一性。
49
（四）共同抗原和交叉反应
一个抗原分子上可能只有一种表位，称为单 纯抗原；但是天然情况下很少发现单纯抗原， 多数抗原分子上都存在多种表位。
一般地说，不同的抗原物质具不同的表位， 故各具特异性；
22
3）免疫方式
包括抗原进入的途径、剂量、次数和间隔 时间以及免疫佐剂的使用等因素也可影响 免疫应答。
23
A、免疫原的剂量及进入途径： 剂量： ①剂量不足或过多均不引起免疫应答。 ②重复进入，引起强免疫应答。
超抗原的种类： ① 外源性超抗原(细菌性) ：金黄色葡萄球
菌A～E---肠毒素；
② 内源性超抗原(病毒性) ：小鼠乳腺肿瘤
病毒蛋白；(HIV)---人类的病毒性超抗 原等。
56
超抗原可能参与引起机体的生理和病理效 应。超抗原可与食物中毒反应、某些自身 免疫病、AIDS和一些肿瘤发病有关。
57
2．根据抗原刺激B细胞产生抗体是否需要Th细 胞(helper T cell，辅助性T细胞）辅助：
胸腺依赖性抗原(thymus-dependent antigen,TD-Ag)：如多数蛋白质抗原
胸腺非依赖性抗原(thymus-independent antigen, TI- Ag)：如细菌脂多糖，聚 合鞭毛素
淋巴细胞，简称B细胞。人类的B细胞，是在骨髓 中分化的。
47
载体-半抗原概念极其重要，它可解释
为什么低分子量化合物与体内载体蛋白 质分子结合诱发超敏性反应产生的药物 过敏症。
如苯胺类染料、镇静剂司眠脲、退热剂 阿司匹林、氨基比林以及多种抗生素分 解产物等是诱发药物过敏症的原因。
48
（三）抗原的特异性
抗原的特异性，是指某一抗原分子只能诱 导相应淋巴细胞发生免疫应答的专一性， 以及某一抗原分子只能与相应抗体或致敏 淋巴细胞特异性结合的专一性。
49
（四）共同抗原和交叉反应
一个抗原分子上可能只有一种表位，称为单 纯抗原；但是天然情况下很少发现单纯抗原， 多数抗原分子上都存在多种表位。
一般地说，不同的抗原物质具不同的表位， 故各具特异性；
22
3）免疫方式
包括抗原进入的途径、剂量、次数和间隔 时间以及免疫佐剂的使用等因素也可影响 免疫应答。
23
A、免疫原的剂量及进入途径： 剂量： ①剂量不足或过多均不引起免疫应答。 ②重复进入，引起强免疫应答。
第四章生物免疫分析技术(共33张PPT)
• 测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍 保留其免疫活性，
• 然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（ 标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活 性，
• 当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应
结合后，再加上酶 的相应底物，即起 催化水解或氧化还 原反应而呈颜色。
➢ 颜色反应的深浅与相应的抗体或抗原量成正比 ，因此可借助于颜色反应的深浅来定量抗体或 抗原。
ELISA
ELISA的基本原理和方法
ELISA的种类和变化
ELISA的特点
ELISA的应用实例
4.2.1 基本原理
它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然 后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定 的对象可以是抗体也可以是抗原。
在这种测定方法中有3种必要的试剂： ①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂） ②酶标记的抗原或抗体（标记物） ③酶作用的底物（显色剂）
其优点是灵敏度高、特异性强、精确性好、样品用量 少，而且不需要复杂的提纯步骤。缺点是需要特殊的 仪器设备和一定的防护条件，而且有些同位素标记物 的半衰期较短以及试验废物难以处理，对环境造成放 射性污染。
放射免疫测定法
基本原理
放射免疫测定是建立在待测抗原和标记抗原对有 限量抗体进行竞争性结合的基础上。待测抗原是 指人体内某种微量活性物质（如微生物＆寄生虫 抗原、激素、维生素、酶、药物等），而标记抗 原使将已知的上述物质标记上放射性同位素，具 有示踪作用。
（三）竞争法
此法可用于检测小分子抗原。
步骤：
A 将已知抗体吸附于固相载体表面，温育后清洗；
B 将可能含抗原的待检溶液和酶标记的已知抗原溶液以适当 比例混合，加入已包被的载体孔中，温育后清洗；
C 加入酶作用的底物，产生显色反应。色深表示结合的酶标记抗 原多，而待检溶液中未标记的抗原量少；反之，色浅表示结 合的酶标记抗原少，而待检溶液中抗原量多。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2017/9/16
兴奋剂检测的主要方法有气相色谱、高 效液相色谱、气相色谱－质谱联用、液相 色谱－质谱联用、免疫分析法、流动注射 电化学发光、高效毛细管电泳、毛细管电 泳－离子阱质谱等方法。
2017/9/16
二、免疫分析法
免疫分析法是利用抗原与抗体的特异 性免疫反应来实现对禁用药物的检测的 方法。 特点：快速、高灵敏度、高特异性。 应用：主要被应用于类固醇类兴奋剂 和激素类兴奋剂的检测。兴奋剂 Nhomakorabea检测方法
之免疫分析法
小组成员：鲁梦霞、熊晴、闫晓玉、潘存丽
2017/9/16
兴奋剂的检测方法
之免疫分析法
一、兴奋剂的概念 二、免疫分析法 （1）酶联免疫分析法 （2）放射免疫分析法 （3）化学发光分析法
2017/9/16
一、兴奋剂的概念
1964年，国际运动医学会的国际兴奋剂 会议将兴奋剂的概念定义为: 参加竞赛的 运动员使用任何异体物质，或以不正常的 量和不正常的进入机体的途径使用生理物 质，试图人为地以不正当方式提高其竞赛 成绩的行为。
取尿液于小 离心管中，
放射免疫分析法——特点
• 缺点： 1.检测中有放射性污染，对操作人员有一定的 辐射损害； 2.放射性废物处理上的困难和对环境有一定的 污染；
放射免疫分析法——应用
（尿液中苯丙胺类兴奋剂的检测）
甲基苯丙胺(MA)属于苯丙胺类兴奋剂，作 用于中枢神经系统，具有药物依赖性及毒理 学特性，是我国最为严重的滥用毒品之一。 甲基苯丙胺(MA)及其代谢物自尿排出体外， 可以通过检测尿液中的苯丙胺类兴奋剂及其 代谢物来认定吸毒者。通过建立甲基苯丙胺 放射免疫分析法 ，采用碳化二亚胺法制备甲 基苯丙胺半抗原，免疫兔使其产生相应的抗 体与Na125I标记抗原组成试剂盒，检测人体体 液中的甲基苯丙胺(MA)。
量检测了蛋白同化激素。这个方案结合不同的交
叉反应性与分布多元数据分析技术的多元竞争 ELISA实验。用新型k-最近邻分类法分析了主成分。 这个方案可以同时检测四种浓度范围为0.1 316.2nmol/L不同的类固醇，甚至在交叉反应的前
提下总的检测正确率也可达90.6%。
2017/9/16
酶联免疫分析法——应用1
放射免疫分析法——应用
1、采样 2、样品前处理
3、检测
取50μL样品、 100μL 1:600抗 血清和100μL 125I-MA;37℃孵 育45min，加 分离剂500μL， 放置15min， 以3000r·min1离心15min， 抽干。
4、结果
1天分8个时 间段，上、 下午各采四 次，每组间 隔45min； 收集的尿液 在-20℃保存 待检验
放射免疫分析法——原理
用已知不同浓度 的标准物Ag和一 定量的*Ag及限 量的Ab反应，随 着Ag增加， *Ag 与Ab结合的少， 二者变化如右图 所示。游离的 *Ag为F, *Ag-Ab为 B。
RIA反应示意图
放射免疫分析法——原理
B／(B+F)与Ag的量存在 着函数关系，绘制得标 准曲线。将未知浓度 样品按同样条件操作， 所得结合率(％)与标准 曲线相比，即可得出样 品中待测抗原的浓度。 注：T=B+F
2017/9/16
酶联免疫分析法——应用2
• Eva M 等将牛血清白蛋白多克隆抗体与孕三烯酮3 - 羧甲基羟胺耦合，创建了两种高灵敏度、特异 的检测孕三烯酮的酶联免疫分析法。实验A，半抗 原蛋白涂层条件下的检测限为0.09±0.03ng.L-1。 实验B，在共轭蛋白涂层的条件下，检测限可达到 0.14±0.05 ng.L-1。两个免疫测试都具有高特异 性，与其他合成代谢类固醇没有任何交叉反应。 一般条件下的可运用于未预处理的尿液样本中类 固醇的检测，回收率可达到76~122%。
2、放射免疫分析法(RIA)
2017/9/16
放射免疫分析法——原理
• 建立在标记抗原(*Ag)和非标记抗原(Ag)对限量的特异性抗体 （Ab）的竞争性结合反应。 • *Ag与 Ag 具有等同的与Ab结合能力。 • 竞争结合反应可用下式表示： *Ag + Ab↔*Ag-Ab + Ag ↕ Ag-Ab
2017/9/16
酶联免疫分析法——应用2
2017/9/16
2、放射免疫分析法(RIA)
• 简介
1959 年美国的 Yalow 和 Berson 首先使用放射性核 素标记胰岛素从而创立了放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA)。
• 定义:把放射性核素测定与抗原、抗体间的免疫
化学反应两种方法巧妙地结合起来所形成的一种 超微量物质的测定方法。
标准曲线
放射免疫分析法——特点
• 优点： 1.灵敏度高，其最小检测值可达ng至pg水平; 2.特异性强:由于抗原抗体反应的高度特异性， 该方法具有很强的特异性不需要对样品进行提纯 即可直接测定; 3.重复性好、准确性佳、快速简便，免除了烦 琐的化学提纯步骤； 4. 药盒种类多、标本和试剂用量少，测定方法 易于规范化和自动化等。
产物与显色成正比，因此可通过酶标仪来测定， 从而确定是否存在未知抗原及其含量。
2017/9/16
酶联免疫分析法——原理
2017/9/16
酶联免疫分析法——特点
优点：快速 特异性强 分析容量大 安全可靠 应用：适用在现场筛选和大量样本的快速检测
2017/9/16
酶联免疫分析法——应用1
• Daniel 等用酶联免疫分析法多项检测，定性、定
2017/9/16
二、免疫分析法
分类： （1）酶联免疫分析( enzyme－ linkedimmunosorbent assay，ELISA) （2）化学发光免疫分析 ( chemiluminescence immunoassay，CIA) （3）放射免疫分析( radioimmunoassay， RIA)
2017/9/16
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2017/9/16
1、酶联免疫分析法(ELISA)
2017/9/16
酶联免疫分析法——原理
通过在合适的载体上酶标一定量的抗原与未知抗
原竞争固相抗体结合位点，形成抗体复合物。在
一定底物参与下，复合物上的酶催化底物使其水
解氧化或还原成另一种带色物质，由于酶的降解