组织免疫共沉淀方法(试题学习)
临床医学检验临床免疫技术：沉淀反应测试题(题库版)
临床医学检验临床免疫技术：沉淀反应测试题（题库版）1、单选在琼脂板上打两排孔，左侧孔加入待测抗原，右侧孔加入已知抗体,抗原在阴极，抗体在阳极。
通电后，抗原泳向阳极，抗体流向阴极，观察在两者之间或抗体侧形成沉淀线。
本试（江南博哥）验采用的是OA.免疫电泳B.免疫固定电泳C.蛋白电泳D.火箭电泳E.对流免疫电泳正确答案：E参考解析：对流免疫电泳原理是将双向扩散试验与电泳相结合的定向加速免疫扩散技术。
2、单选不是免疫比浊试验中伪浊度形成的原因（）A.高血脂标本B.标本反复冻融C高效价抗体（＞1：200）D低效价抗体（＜1：20）E.试剂污染正确答案：C3、单选沉淀反应的钩状效应现象指的是OA.抗原过量B.抗体过量C.沉淀物显著D.凝集明显E.抗原和抗体的比例正确答案：A4、单选对流免疫电泳中，抗体向阴极移动原因是OA.抗体带正电B.抗体带负电C.电渗作用D.电泳作用E.抗原带正电正确答案：C参考解析：对流免疫电泳的原理是将双向扩散试验与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术。
通电后，在pH8.4缓冲液中带负电荷的蛋白质抗原流向阳极抗体侧，而抗体借电渗作用流向阴极侧，在两者之间或抗体侧形成沉淀线。
5、单选下列有关沉淀反应第二阶段的说法，错误的是OA.形成可见的免疫复合物B.出现肉眼可见的沉淀线或沉淀环C.可用散射比浊测定反直结果D.几秒钟至几分钟内即完成E.可用透射比浊测定反应结果正确答案：D6、单选环状沉淀试验中要求OA.抗原澄清B.抗体澄清C.抗原和抗体都必须澄清D.对抗原和抗体没有特别要求E.抗原比重大于抗血清正确答案：C参考解析：环状沉淀试验：在一定内径(1.5→.Omm)的玻璃管中先加入抗血清，再沿管壁加入抗原溶液，因抗血清比重大于抗原，故在两者交界处形成清晰界面，此处抗原抗体生成物在一定时间内形成白色环为阳性。
要求：抗原抗体溶液澄清。
适用于微量抗原测定。
考点：环状沉淀试验7、单选下列关于光学检测原理的叙述何者正确OA.荧光检测时，激发光与发射光处于同一直线上B.反射比色检测时，入射光与反射光处于同一直线上C.透射比浊检测时，入射光与透射光处于同一直线上D.散射比浊检测时，入射光与散射光处于同一直线上E.磷光计检测时，入射光与发射光处于同一直线上正确答案：C参考解析：透射比浊法的基本原理是测定一定体积的溶液通过的光线量，当光线通过时，由于溶液中存在的抗原抗体复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光的减少，测定的光通量和抗原抗体复合物的量成反比。
临床免疫学和免疫检验沉淀反应反应练习题
临床免疫学和免疫检验沉淀反应反应练习题一、A11、免疫比浊实验属于A、中和反应B、凝集反应C、沉淀反应D、补体结合反应E、溶血反应2、对流免疫电泳的原理是A、单向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术B、双向免疫扩散与电泳相结合的定向加速的免疫扩散技术C、单向免疫扩散与两相反向的规律改变的电流相结合的免疫扩散技术D、双向免疫扩散与两相反向的规律改变的电流相结合的免疫扩散技术E、抗原抗体反应与电泳相结合的定向免疫扩散技术的统称3、免疫固定电泳的英文缩写是A、ECLB、RIEC、RIAD、IFEE、IEP4、能够定量测定待检标本的免疫学试验是A、间接凝集试验B、协同凝集试验C、单向扩散试验D、双向扩散试验E、对流免疫电泳5、免疫比浊法对抗体的要求不正确的是A、特异性强B、效价高C、亲和力强D、使用H型抗体E、使用R型抗体6、免疫比浊法的基本原则是A、反应体系中保持抗原过量B、反应体系中保持抗体过量C、反应体系中保持抗原抗体为最适比例D、抗体特异性强E、抗体亲和力强7、直接影响絮状沉淀实验的因素是A、抗原分子量B、抗体分子量C、抗原抗体比例D、反应体系的PHE、反应体系的例子强度8、免疫沉淀法目前应用最广、定量比较准确的主要是下列哪种方法A、免疫比浊法B、絮状沉淀试验C、单向扩散试验D、双向扩散试验E、棋盘滴定法9、下列关于免疫浊度测定错误的是A、免疫浊度测定本质上属于液体内沉淀反应B、是将现代光学测量仪器与自动化检测系统相结合应用于沉淀反应，可进行液体中微量抗原、抗体及小分子半抗原定量检测C、当抗原过量时，形成的IC分子小，而且会发生再解离，使浊度反而下降，光散射亦减少，这就是高剂量钩状效应D、当反应液中抗体过量时，IC的形成随着抗原递增而增加，至抗原、抗体最适比例处达最高峰，这就是经典的海德堡曲线理论E、免疫比浊法的基本原理就是在反应体系中保持抗原过量，如形成抗体过量则造成测定的准确性降低10、免疫浊度测定，形成浊度的关键是A、反应温度B、PHC、抗原和抗体的比例D、离子强度E、抗体的亲和力11、单向琼脂扩散法是将相应的（）。
临床医学检验：凝集反应、沉淀反应及免疫电泳技术测试题(题库版)
临床医学检验：凝集反应、沉淀反应及免疫电泳技术测试题（题库版）1、单选Coombs试验的直接法和间接法的主要区别是()A．前者是检测完全抗体的，而后者是检测不完全抗体的B．前者是检测在体内已致敏的红细胞上的不完全（江南博哥）抗体，后者是检测游离在血清中不完全抗体的C．前者主要用于检测IgG型抗体，后者主要用于检测IgE型抗体D．前者主要用于检测IgG型抗体，后者主要用于检测IgM型抗体E．两者判断结果的方法不同正确答案：B2、填空题经典的液相沉淀试验包括_________、_________和免疫浊度试验。
正确答案：絮状沉淀试验；环状沉淀试验3、多选关于双向免疫抗散试验，正确的是()A．抗原或抗体的定性分析B．抗体效价测定C．精确定量抗原或抗体D．抗原或抗体的纯度鉴定E．抗原或抗体相对分子量估计正确答案：A, B, D, E4、问答题在单向扩散试验中，有时会出现结果与真实含量不符，是何原因? 正确答案：在单向扩散试验中，有时会出现结果与真实含量不符，这主要出现在Ig测定中。
如用单克隆抗体或用骨髓瘤纯抗原免疫动物获得的抗血清，都存在结合价单一的现象，若用此作为单向扩散试剂测量正常人的多态性抗原，则抗体相对过剩，使沉淀圈直径变小，测量值降低。
相反，如用多克隆抗体测定单克隆病(M蛋白)，则抗原相对过剩(单一抗原决定簇成分)，致使沉淀圈成不相关的扩大，从而造成某一成分的假阳性增加。
5、单选间接凝集试验和被动凝集试验()A．是同义词B．是完全不同的两种试验C．二者均属凝集试验，但有区别D．前者属玻片凝集反应范畴，后者属试管凝集反应范畴E．是近义词正确答案：A6、填空题母体所产生最常见的免疫性抗体为Rh抗体和ABO抗体，一般为_____________，可通过胎盘，作用于_____________，引起_______________________。
正确答案：7SIgG；胎儿红细胞；新生儿溶血性疾病7、名词解释免疫电泳正确答案：免疫电泳是将区带电泳和双向免疫扩散相结合的免疫化学分析技术。
河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》考试试卷(64)
河南农业大学考研专业课《现代分子生物学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、分析题（5分，每题5分）1. 写出从组织中抽取RNA的关键步骤，并解释如何判断RNA质量。
答案：（1）从组织中提取RNA的步骤如下：①将组织在液氮中磨碎，每50～100mg组织加入1ml TRIzol裂解液溶解样品，充分吹打混匀。
②每1ml TRIzol加入2.0ml氯仿，剧烈震荡15s，室温放置5min。
③4℃，10000g离心15min，此时RNA主要包括集中在水相中。
④将水相转移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，室温放置10min。
⑤4℃，10000g离心10min，此时可在离心管底部观察沉淀到白色沉淀，即为RNA。
⑥用75冷的乙醇洗涤沉淀，4℃，7500g以下，离心5min，弃上清。
⑦超净台中吹干，加入无RNase的水溶解。
（2）检测RNA质量的方法如下：①凝胶成像：取适量RNA溶液加入电泳缓冲液后，跑琼脂糖质谱仪，如果28S和18S条带明亮、清晰，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则认为RNA的质量是好的。
②吸光度检测：使用紫外分光光度计检测RNA样品在260nm、280nm处的吸光度，若两者的比值在1.8～2.0时，可认为RNA纯度良好，蛋白质等其他物质的污染有机物可以接受。
解析：2、判断题（55分，每题5分）1. TDNA插入会导致某些基因表达的缺失，但不会引起植物的致死现象。
（）答案：错误解析：如果TDNA插入到对于植物发育非常重要的基因性状上，就会引起植物的致死弊病。
2. 端粒的序列在同一细胞各条染色体上都是相同的。
（）答案：正确解析：端粒为每个染色体末端特化的部位，着色较深。
由端粒DNA和端粒蛋白组成。
其首要作用主要是防止染色体降解、粘连，抑制细胞凋亡，与细胞寿命长长短有关。
染色体免疫共沉淀(chip)步骤
染色体免疫共沉淀(chip)步骤
染色体免疫共沉淀（ChIP）是一种常用的实验技术，用于研究染色体上特定蛋白质与DNA的相互作用。
以下是染色体免疫共沉淀的基本步骤：
1. 交联：将细胞或组织与形成蛋白质-DNA复合物的交联剂（如甲醛）处理，使蛋白质与DNA之间形成致密的交联。
这一步骤有助于保持蛋白质与DNA的相互作用并固定其在细胞或组织中的位置。
2. 细胞破碎和核裂解：将交联后的细胞或组织进行破碎和核裂解，以释放细胞内的染色质。
这可以通过机械方法（如超声波处理）或化学方法（如利用细胞裂解缓冲液和蛋白酶进行破碎）完成。
3. 免疫共沉淀：在破碎的细胞或组织提取物中，加入特异性抗体，该抗体可以与目标蛋白质结合。
免疫抗体与目标蛋白质形成免疫复合物，并与形成蛋白质-DNA复合物的目标区结合。
4. 洗涤：通过一系列洗涤步骤，去除非特异性和非特定结合的蛋白质和核酸，以减少背景信号的干扰。
5. 解交联：通过加热或酶处理等方法，解除细胞或组织中的蛋白质-DNA交联，并将DNA释放出来。
6. DNA提取：通过加入DNA提取缓冲液和有机溶剂，从溶液中沉淀出DNA，并用适当的方法进行纯化和浓缩。
7. 分析：对提取的DNA进行进一步的分析，可使用PCR、测序等技术，以检测免疫共沉淀的蛋白质与目标DNA的相互作用。
这些步骤旨在允许研究人员从细胞或组织中获得特定蛋白质与DNA的结合信息，并进一步了解基因调控、表观遗传学等相关的生物学过程。
实际操作时，具体的步骤和条件可能会因实验目的和样本类型而有所不同。
因此，在进行染色体免疫共沉淀实验时，建议参考相关文献和实验室经验，以确保实验的准确性和
可重复性。
临床科研实验技能知到章节答案智慧树2023年中南大学
临床科研实验技能知到章节测试答案智慧树2023年最新中南大学第一章测试1.验证假设的最好方法是参考答案:实验2.形态学实验中基本的步骤脱水包埋是指对固定后的（）样品进行脱水包埋形成（）或冰冻组织块。
参考答案:组织，蜡块3.学生进入实验室开展实验的基本要求包括参考答案:全部都是4.实验数据记录、处理和分析的要求是参考答案:全部都是5.以下关于分享的实验心得说法不恰当的是参考答案:只需要通过实验课就可以学会做实验6.实验方法应具有科学性、先进性和可行性，并符合伦理。
参考答案:对7.实验室相关制度中包括每月对新进实验人员进行培训，讲解实验室注意事项和仪器操作使用。
参考答案:对8.未经实验室工作人员同意任何人不得把实验室内的仪器或物品拿出室外使用。
参考答案:对9.学生进入实验室开展实验，需要遵守实验室相关规章制度，如不慎发生事故，应及时向实验指导人员和相关负责人员报告并采取相应措施。
参考答案:对10.实验动物饲养过程中的生物危害不包括存在于动物粪便和尿液中的病原体。
参考答案:错第二章测试1.下列行为不属于科研不端行为的是参考答案:投稿时建议审稿员2.学术不端行为的危害包括参考答案:全部都是3.2014年12月，《科学美国人》(Scientific American) 称期刊《诊断病理学》上的一些论文像是工业规模批量生产出来的，经国家自然科学基金委员会调查，涉假论文被移交给纪检监察审计局处理。
此事件给我们的启示是参考答案:违背科研诚信和学术规范的行为终将受到严惩4.下列属于学术规范类型的是参考答案:全部都是5.黄禹锡因宣布攻克体细胞克隆胚胎干细胞的科学难题而轰动世界，却因被揭发伪造多项研究成果而身陷囹圄。
对于此事件的理解下列不正确的是参考答案:为了出名可以美化和篡改自己的研究成果6.科研活动是我们获得有关人类的新知识的过程。
参考答案:错7.遵纪守法，弘扬科学精神是学术规范的基本准则。
参考答案:对8.涉及以人类为对象的试验只能由具备科研资格的人员操作，如果有学生参加研究，应有相关教师负责安排和监管。
染色质免疫共沉淀技术
染色质免疫共沉淀技术染色质免疫共沉淀技术（ChIP）是一种广泛应用于生物学研究的技术，它可以用来检测蛋白质与染色质之间的相互作用。
该技术能够帮助研究人员确定蛋白质在基因表达中的作用，以及探究细胞的调节机制。
本文将详细介绍染色质免疫共沉淀技术的原理、步骤、优缺点和应用。
一、原理染色质免疫共沉淀技术是基于抗体特异性识别蛋白质的原理。
在该技术中，首先将抗体与磁珠或琼脂糖等载体结合，形成免疫复合物。
接着，将该免疫复合物加入到含有细胞或组织的裂解液中，使其与目标蛋白结合。
随后，使用磁力或离心等手段将免疫复合物与与其结合的蛋白、核酸等分离出来。
最后，利用PCR、微阵列芯片等技术对分离出来的蛋白、核酸等进行检测和分析。
二、步骤染色质免疫共沉淀技术的步骤主要包括：1. 细胞或组织的裂解：将细胞或组织加入到含有蛋白酶抑制剂、核酸酶抑制剂、盐和缓冲液等的裂解液中，使其破裂并释放出蛋白、DNA等。
2. 免疫复合物的制备：将抗体与磁珠或琼脂糖等载体结合，形成免疫复合物。
3. 免疫复合物与目标蛋白的结合：将免疫复合物加入到裂解液中，与目标蛋白结合。
4. 免疫复合物的分离：使用磁力或离心等手段将免疫复合物与与其结合的蛋白、核酸等分离出来。
5. 分析：利用PCR、微阵列芯片等技术对分离出来的蛋白、核酸等进行检测和分析。
三、优缺点染色质免疫共沉淀技术具有以下优点：1. 高特异性：该技术可以通过抗体特异性识别蛋白质，具有高特异性。
2. 高灵敏度：该技术可以检测到极低浓度的蛋白质。
3. 可重复性：该技术具有较高的可重复性，可以用于多次实验。
4. 可广泛应用：该技术可以应用于不同种类的细胞和组织。
然而，染色质免疫共沉淀技术也存在以下缺点：1. 受抗体质量限制：抗体的质量、特异性和亲和力等因素会影响该技术的结果。
2. 受组织分解程度限制：组织分解不彻底会导致目标蛋白无法完全释放，从而影响该技术的结果。
3. 受背景干扰影响：免疫复合物的制备和分离过程中，可能会出现背景干扰，影响结果的准确性。
组织Co-IP
百泰派克生物科技
组织Co-IP
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白互作的经典方法。
在组织Co-IP实验过程中，为了保证足够多的蛋白浓度以维持原本存在的蛋白质互作状态，通常需要准备足够多的动物或者组织样品。
且Co-IP的实验条件很难一次成功，常需要反复摸索，尤其当蛋白丰度较低、相互作用力不强、使用不易提取蛋白的组织等情况时，组织Co-IP实验可能无法继续进行。
因此，用于Co-IP实验需要准备动物组织细胞＞500mg，植物组织＞2g的样品，样品采集后应速冻于-80℃保存并避免反复冻融。
之后利用特异性抗体捕获组织中靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，同时使用能够与抗体结合的基质（如Nanoab-Agarose）对复合物进行沉淀和固定。
相应的，与组织中靶蛋白相互作用的互作蛋白也将被沉淀下来。
最后对基质上的非特异性蛋白进行洗去得到互作蛋白，通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测即可对互作蛋白进行表征。
百泰派克生物科技针对样品蛋白的提取、表达和纯化的优化方案可确保获得高质量的诱饵和猎物蛋白，为客户提供优质的Co-IP蛋白互作分析服务。
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免疫共沉淀操作步骤
免疫共沉淀操作步骤免疫共沉淀（immunoprecipitation）是一种常用的实验技术，用于检测特定蛋白与其他分子的相互作用。
本文将介绍免疫共沉淀的操作步骤，包括前期准备、取样、免疫共沉淀、洗涤、洗脱和分析结果等。
一、前期准备1. 准备所需试剂：PBS缓冲液（含0.1%的Tween-20）、蛋白质抽提缓冲液（含有适当的蛋白酶抑制剂）、抗体（单克隆或多克隆抗体）、控制组织或细胞苗、蛋白质A/G磁珠等。
2.对样品进行处理：收集样品，如细胞或组织，并用蛋白质抽提缓冲液裂解细胞膜或组织。
3. 确定抗原-抗体反应的条件：进行Western blot或其他实验，确定抗体和目标蛋白的最佳工作浓度和最佳条件。
二、取样1.将裂解的细胞或组织样品通过离心等手段去除细胞碎片和残留的细胞核。
2.将上清液收集到新的离心管中，并测定样品的总蛋白浓度，以便后续计算抗体的用量。
3.根据总蛋白浓度将样品分成相等的小样本，并放入不同的离心管中。
三、免疫共沉淀1.将试验管中的抗体与适量的蛋白质A/G磁珠混合，孵育一段时间，使抗体与磁珠形成固定复合物。
2.将磁珠与固定复合物加入到每个含有样品的离心管中，混匀并在冰上孵育一段时间。
3.离心管置于磁珠磁架上，使磁珠在离心管底部附着，将上清液小心地转移至新的离心管中，以减少非特异性结合的背景。
4.用PBS缓冲液洗涤磁珠至少3次，以去除非特异性结合的蛋白质。
5.转移沉淀到新的离心管中，并用PBS缓冲液洗涤磁珠至少3次，以去除残留的非特异性结合蛋白质。
四、洗涤1.将磁珠与背景低的洗涤缓冲液混合，孵育一段时间，混匀后在冰上孵育。
2.将磁珠与洗涤缓冲液加入到每个含有沉淀的离心管中，混匀并在冰上孵育一段时间。
3.离心管置于磁珠磁架上，使磁珠在离心管底部附着，将上清液小心地转移至新的离心管中。
4.用洗涤缓冲液洗涤磁珠至少3次，以去除非特异性结合的蛋白质。
五、洗脱1.将洗涤缓冲液去除，加入适量的脱附缓冲液，孵育一段时间，混匀并在冰上孵育。
免疫共沉淀(CO-IP)实验方法与操作步骤
免疫共沉淀(CO-IP)实验方法与操作步骤CO-IP是用于检测或探究蛋白与蛋白之间相互作用的实验，属于IP实验的扩展，在样品溶液中，捕获和纯化通过天然相互作用及靶标结合的其他大分子蛋白，基于抗原抗体的特异性免疫结合，以饵蛋白为诱饵蛋白，通过饵蛋白抗体捕获，磁珠吸附结合，进而将饵蛋白结合的互作蛋白捕获得到，纯化定量定性分析。
实验操作步骤：1.样本准备组织和细胞是最常见的样本类型。
组织用液氮研磨，研磨时少量多次加入液氮，研磨时用研磨杵按住组织旋转研碎，需戴护目镜或是头盔。
细胞直接消化或刮下离心，预冷1XPBS清洗1-2次，消化是影响细胞膜表面蛋白构象，尤其是层黏连蛋白和粘附蛋白改变，导致细胞贴壁不牢，进而脱落，对细胞内蛋白影响几乎没有，细胞刮下来也行，虽然存在物理机械损伤，但损伤相基本可忽略。
2.细胞裂解使用弱裂解液，不要直接用WB裂解蛋白的裂解液，做免疫共沉淀，要保留细胞内天然构建结合，强裂解液会使蛋白变性，弱性裂解液在于表面活性剂，比如NP-40、Triton X-100。
3. 磁珠清洗及抗体孵育磁珠用之前摇一摇，按照使用量吸取，不要用小枪头，用1ml大枪头，且是无菌无酶，加入适量抗体与buffer，混入磁珠即可。
4. 磁珠-抗体-裂解液孵育此为核心步骤，磁珠与抗体孵育完成后，buffer清洗3次，加裂解液。
清洗是为去除未结合至磁珠表面的游离抗体，防止游离未结合的抗体结合到饵蛋白，降低结合总量。
磁珠-抗体复合物清洗完，加裂解液孵育，注意要颠转孵育，不能静置，磁珠是固体，溶液沉降，颠转孵育，不但能使磁珠不沉降，而且使磁珠-抗体与蛋白结合更充分全面。
放置4℃，颠转过夜。
5.清洗纯化磁珠-抗体-蛋白复合物关键步骤，需清洗6次，清洗少了会导致假阳性，清洗次数过多结合蛋白损失大，清洗时要用两种buffer，一种低盐，一种高盐，尽量去除未结合的蛋白，防止假阳性出现。
6.检测检测分为三种，根据实验目的区分。
一是银染：按照input组、目的组、IgG 组、beads组跑胶银染，查看蛋白差异性；二是WB检测：根据预测结合的靶蛋白，进行WB检测，看有无条带，确认是否结合（要做内参）；三是MS（质谱）检测：质谱检测是根据产物蛋白，进行酶解消化成多肽，再测定多肽，获取序列，比对蛋白数据库，查看潜在结合蛋白有哪些，探讨结合蛋白。
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论坛里发的都是关于细胞的免疫共沉淀的实验方法,这是我做组织时用到的方法,希望能给大家有点帮助
实验方法如下:
第一步：制备组织裂解物
1. 把组织剪切成细小的碎片。
2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。
取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
3. 按照每20毫克组织加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。
(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。
)
4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。
5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。
然后同样离心取上清，用于后续实验。
或
1. 使用洁净的工具用最快的速度切取待测组织。
最好在冰上操作。
以防止蛋白降解
2. 将组织放入圆底离心管中，浸入液氮以达到“snap freeze”. 如果马上裂解则将组织冰浴，否则将组织保存-80°C以备后用。
3. 每5mg组织加入300ul裂解液，使用玻璃匀浆器匀浆，直至充
分裂解。
4. 用300ul裂解液冲洗刀片两次，然后将组织液在4°C缓慢摇动2小时
5. 12000rpm 4°C.离心20分钟。
轻轻的将离心管取出冰浴，将上清吸出到新的预冷的离心管中（保持冰浴），弃沉淀。
裂解液的体积要根据组织量来确定。
蛋白提取物不能太过稀释一方面避免蛋白的损失，另一方面也减少后续电泳的上样量（如果需要的话）。
蛋白的合适浓度为1-5 mg/ml ，最低不能少于0.1 mg/ml。
第二步：预纯化裂解物
使用无关抗体或血清可以将裂解物非特异性结合Ig的蛋白去除，随后加入的agarose beads一方面将裂解物中非特异结合agarose 或sepharose beads的蛋白去除，另一方面也将加入的无关抗体和血清蛋白去除。
经过处理的裂解物所得试验结果背景更低、信噪比更好。
但如果最后是使用WB来检测的话，预纯化就不是特别的必要了。
主要步骤：
1. 每1ml裂解物加入50ul和IP抗体来源及亚型相同的无关抗体（例如后续免疫沉淀时用的是小鼠IgG，则在本步骤中可以加入normal mouse IgG）或者正常血清（常用兔血清），冰浴1小时
2. 加100 μl Preotein A/G agarose beads，4°C缓慢摇动10-30分钟
3. 14,000 x g 4°C离心10分钟
4. 取上清，弃沉淀。