(完整版)104.水中总大肠菌群复习试题(多管发酵法)
多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告
学院：环境科学与工程学院班级：11级环境科学（2）班姓名：李宝携学号：3111007398实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群一、实验目的（1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。
（2）学习检测水中大肠菌群的方法。
二、实验原理大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。
大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。
我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。
多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。
当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。
三、实验材料1、水样中心湖湖水2、试剂三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液3、仪器及其他用品试管、发酵管、烧杯、量筒、移液枪、高压灭菌锅四、操作过程1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。
取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后，1支加入9ml自来水。
2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。
3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。
取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。
4、将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。
5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。
6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。
五、实验结果实验现象：有些试管的颜色变成黄色，并且有些试管中的发酵管的底部存在气泡，说明存在产酸产气的大肠杆菌。
生活饮用水 总大肠菌群 多管发酵法方法证实
生活饮用水微生物指标总大肠菌群1.项目概述本实验依据GB-T5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法总大肠菌群多管发酵法。
总大肠菌群指一群在37℃培养24 h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
本标准规定了用多管发酵法测定生活饮用水及其水源水中的总大肠菌群。
本法适用于生活饮用水及其水源水中总大肠菌群的测定。
2.培养基与试剂2.1 乳糖蛋白胨培养液2.1.1 成分A蛋白胨10 gB牛肉膏3gC乳糖5gD氯化钠5gE溴甲酚紫乙醇溶液(16 g/L) 1mLF 蒸馏水1000 mL2.1.2 制法将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2～7.4，再加入1 mL16 g/L的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，68. 95 kPa (115℃．10 lb)高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
2.2 二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液按上述乳糖蛋白胨培养液(2.1.1)，除蒸馏水外，其他成分量加倍。
2.3 伊红美蓝培养基2.3.1 成分A蛋白胨10 gB乳糖10 gC磷酸氢二钾2gD琼脂20 g～30 gE 蒸馏水1000 mLF伊红水溶液(20 g/L) 20 mLG美蓝水溶液(5 g/L) 13 mL2.3.2 制法将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正pH为7.2，加入乳糖，混匀后分装，以68.95 kPa(115℃，10 lb)高压灭菌20 min。
临用时加热融化琼脂，冷至50℃～55℃，加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。
2.4 革兰氏染色液2.4.1 结晶紫染色液A成分：a结晶紫 1 gb乙醇（95%，体积分数）20 mLc草酸铵水溶液(10 g／L) 80 mLB制法：将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。
注：结晶紫不可用龙胆紫代替，前者是纯品，后者不是单一成分，易出现假阳性。
结晶紫溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
2.4.2 革兰氏碘液A成分：a碘1gb碘化钾 2 gc蒸馏水300 mLB制法：将碘和碘化钾先进行混台，加入蒸馏水少许，充分振摇，待完全溶解后，再加蒸馏水。
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6.
A、100 B、90 C、80 D、60 答案：C 解析：
7.由坐标纵轴北端起顺时针方向量到所测直线的水平角，该角的名称及其取值范 围分别为()。 A、象限角、0°～90° B、磁方位角、0°～360° C、真方位角、0°～360° D、坐标方位角、0°～360° 答案：D 8.下列属于不稳定的水位流量关系曲线处理方法的是()。 A、断流水位法
30.遗传信息的表达过程中，翻译是 mRNA 上的信息到()的过程。 A、蛋白质 B、mRNA C、DNA D、tRNA
12
答案：A 解析：转录指遗传信息从 DNA 到 mRNA 的过程。翻译则是 mRNA 上遗传信息到蛋白 质的过程。 31.坡度、边壁材料相同的渠道，当过水断面积相等时，明渠均匀流过水断面的 平均流速中最大的渠道是()。 A、半圆形渠道 B、正方形渠道 C、宽深比为三的矩形渠道 D、等边三角形渠道 答案：A 解析：
8
20. A、变水头出流，沉速先慢后快 B、恒定水头出流，沉速先慢后快 C、变水头出流，沉速不变 D、恒定水头出流，沉速不变 答案：D 解析：箱形船体重量不变则满足浮力定律，内外液面差不变，为孔口恒定淹没出 流，流速不变。 21.两台水泵运动相似的条件是指()。 A、两水泵叶轮对应点尺寸成比例，对应角相等 B、两水泵叶轮对应点尺寸相等，对应角相等 C、两水泵叶轮对应点上水流同名速度方向一致，大小相等 D、两水泵叶轮对应点上水流同名速度方向一致，大小互成比例 答案：D 22.某水文站控制面积 680k ㎡，多年平均径流模数为 20L/(s²k ㎡)，则换算成 年径流深约为()。 A、315.4mm B、630.7mm C、102.3mm D、560.3mm
1
C、目标像没有落在十字丝平面上 D、十字丝横丝不水平 答案：C 解析：在进行水准测量时，由于人眼辨别微小差距的能力有限，往往当望远镜的 像平面与十字丝平面还没有严密重合时就进行测量，由此给观测照准带来的误差 称为视差。 4.下列物质中，不属于细菌内含物的是()。 A、异染颗粒 B、淀粉粒 C、葡萄糖 D、聚β-羟基丁酸 答案：C 解析：内含物是细菌新陈代谢的产物，或是贮备的营养物质，常见的内含物颗粒 主要有异染颗粒、聚β-羟基丁酸、淀粉粒、硫粒等。 5.发酵型酵母将碳水化合物，最终分解为酒精和()。 A、二氧化碳 B、甲烷 C、硫化氢 D、氨 答案：A 解析：发酵型酵母主要进行酒精发酵反应，分解最终产物为酒精和二氧化碳。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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2）平皿分离（证实试验）
水中除大肠菌群外, 还有其它细菌可能引发 糖类发酵, 所以需要深入证实。
将初发酵管中已发酵菌液接种于伊红美兰 培养基, 37 ºC培养24 h, 依据菌落特征（带关键、 有金属光泽深紫色菌落）, 挑取可能为大肠菌 群菌落制片, 经革兰氏染色, 深入证实是否为大 肠菌群。
划线接种于伊红美蓝琼脂平板上, 再于37 ℃培养 18～24 h, 将符合以下特征菌落进行染色镜检。
深紫黑色, 有金属光泽； 紫黑色, 不带或略带金属光泽； 淡紫红色, 中心颜色较深。
多管发酵法测定水中大肠菌群
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（3）复发酵试验 将镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌菌株重复初
步发酵试验。并依据初发酵管试验阳性管查表, 即得大肠菌群数。
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二、试验原理
发酵法: 又称多管发酵法或三步发酵法
1) 初发酵（推测试验）:
将不一样稀释度水样，分别接种于 含有乳糖等糖类培养液中（3倍或1倍乳 糖液），经37 ºC培养24 h，观察产酸产 气情况，培养基内加有溴甲酚紫作为 PH指示剂，细菌产酸后，培养基即由 原来紫色变为黄色，以初步判断是否有 大肠管发酵法测定水中大肠菌群
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多管发酵法测定水中大肠菌群
一、试验目标 二、试验原理 三、试验材料 四、试验步骤 五、试验汇报
多管发酵法测定水中大肠菌群
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一、试验目标
1、学习测定水中大肠菌群数量多管发酵法。 2.了解大肠菌群数量在饮水中主要性。
多管发酵法测定水中大肠菌群
多管发酵法测定水中大肠菌群
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10ml×100 1ml×100 1ml×10-1 1ml×10-2
3×
微生物实验基础知识考核试卷含答案
微生物实验基础知识考核试卷一、填空题（28分）1．总大肠菌群多管发酵法测定的复发酵试验，是每一管接种完同一发酵管的最典型菌落l～3个后，将发酵管置于℃恒温箱中，培养 h，有产酸产气者，则证实有大肠菌群存在。
①答案：37 242．总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为、和。
答案：初发酵试验平板分离复发酵试验3．总大肠菌群测定的滤膜灭菌是将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水后置于沸水浴中煮沸灭菌：次，每次 min，前两次煮沸后需更换水洗涤2～3次，以除去残留溶剂；也可用1 2 l℃蒸汽灭菌1 0min。
②答案：3 1 54. 细菌总数的菌落数在100以内按报告，大于100时采用两位有效数字，用表示，在报告菌落数为无法计数时，应注明水样的稀释度。
答案：实有数 10的指数6．用于细菌学检测的吸管上端要用填塞，并注意，使其快速、准确流出所用体积。
答案：普通棉花松紧适度7．测定水中细菌学指标的采样瓶口用牛皮纸等防潮纸包扎后，置于干燥箱中，于℃干热灭菌2 h，或用高压蒸汽灭菌器℃灭菌15 min；不能用加热方法灭菌的塑料瓶，应浸泡在O．5％过氧乙酸lO min或环氧乙烷气体进行低温灭菌；聚丙烯耐热塑料瓶，可用℃高压蒸汽灭菌器灭菌1 5 mina答案：1 60～1 70 12 1 12 18．测定自来水样中的细菌学指标时，采水前将水龙头开至最大，放水 min，然后关闭水龙头，用酒精灯火焰灼烧约 Inin消毒水龙头或用75％酒精溶液消毒水龙头，再打开水龙头、开足放水l min，以充分去除水管中的滞留杂质。
答案：3～5 3。
9．测定水样中细菌学指标时，从取样到检验不宜超过 h，否则应使用1 0℃以下冷藏设备保存样品，但不得超过。
答案：2 610．分层检测地表水中的细菌学指标时，应自而（方向）进行采样，以免不同层次的搅扰；与理化监测项目同时采样时，应先采集细菌学检验样品。
答案：上下11．配制好的用于细菌学检测的培养基，不宜保存过久，以少量勤配为宜。
大肠菌群第二法计算题
大肠菌群第二法计算题大肠菌群第二法，又称大肠杆菌群指数法，是一种评价水质卫生状况的重要方法。
它通过检测水样中大肠菌群的数量，来判断水质是否受到粪便污染，从而为水资源的合理利用和卫生管理提供科学依据。
一、大肠菌群第二法计算公式及意义大肠菌群第二法的计算公式为：大肠菌群指数（MI）=（A+B+C+D）/1000其中，A、B、C、D分别代表不同稀释度下的大肠菌群数量。
MI值越高，说明水体受到粪便污染的程度越严重。
我国《生活饮用水卫生标准》规定，MI值不应大于10。
需要注意的是，MI值并非绝对标准，还需结合其他水质指标综合评价水质状况。
二、计算实例与步骤详解以下是一个计算实例：某水样经稀释后，四个浓度下的大肠菌群数量分别为10、20、30、40。
则MI值的计算过程如下：MI = (10+20+30+40)/1000 = 10根据计算结果，该水样的MI值为10，处于正常范围内。
三、应用场景及注意事项大肠菌群第二法适用于水源水、饮用水、瓶装水等水样的检测。
在实际应用中，还需结合水样的其他污染指标，如细菌总数、总大肠菌群等，综合评价水质状况。
注意事项：1.水样采集要具有代表性，尽量避开污染源附近。
2.样品运输和保存过程中，应严格遵循相关标准和方法，防止样品污染或损失。
3.实验操作过程中，要确保实验器材和人员的卫生，避免实验误差。
4.计算MI值时，应注意单位的转换，确保计算结果的准确性。
总之，大肠菌群第二法作为一种评价水质卫生状况的方法，具有较强的实用性和可操作性。
通过对MI值的计算和分析，可以初步判断水体的污染程度，为水资源管理和保护提供依据。
水中总大肠菌群的测定法(多管发酵法)
1适用范围本标准适用于天然水和生活水中总大肠菌群的测定。
2方法概要总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37C 生长时能使乳糖发酵，在 24h 内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
总大肠菌群数系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
本标准参照GB 5750-85制订。
3试剂和材料 3.1乳糖蛋白胨培养液：外购商品培养基或按下列方法自行配制。
3.1.1 组分蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g乳糖 氯化钠1.6 %溴甲酚紫乙醇溶液蒸馏水3.1.2 配制将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于 节pH为7.2〜7.4，再加入1ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置于高 压蒸汽灭菌器中，以 115C 灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液: 按上述乳糖蛋白胨培养液（ 3.1 ）各组分的称量增加三倍配制。
3.3 品红亚硫酸钠培养基（供多吕发酵法用） :外购商品培养基或按卜列万法自行配制。
3.3.1组分蛋白胨 10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾3.5g琼脂10〜30g蒸馏水1000ml无水亚硫酸钠5g 左右 5.0g 5.0g 1.0ml 1000ml1000ml 蒸馏水中加热溶解，用 1mol/L 的NaOH 或HCI 调332 贮备培养基的配制先将琼脂加至900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，用1mol/L的NaOH或HCI调节pH为7.2〜7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置于高压蒸汽灭菌器中，以115C灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
3.3.3平皿培养基的配制将上法制备的贮备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中。
再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10分钟以灭菌。
微生物综合实验报告——利用多管发酵法检测水中大肠杆菌群数量
微生物综合实验报告实验题目：水质微生物学分析——利用多管发酵法检测水中大肠杆菌群数量组员姓名：xxx作者单位：南京工业大学生物与制药工程学院专业班级：生物工程类1001班指导老师：xxx摘要：实验采用自来水作为样品，对样品进行接种，分离，纯化，培养得到具有不同特征的肠杆菌。
通过对肠杆菌的数量和形态特征的分析，确定自来水是否被污染和污染程度。
关键词：水源；肠杆菌；数量；污染前言：水是制药和食品行业使用最为广泛的原料，也是赖以生存和发展的物质基础。
水与药品、食品中的其他原料一样，必须符合既定的质量标准，如果水被污染就会影响多批次产品。
另外，对微生物实验室来说，水是各种培养基、缓冲液、检测剂的主要组成部分。
近年来，由于国际上一些地区和国家频繁发生恶性事件，饮用水安全和卫生问题引起了全球的关注，饮水安全已经成为全球性的重大战略性问题。
世界卫生组织调查表明：在发展中国家，各类疾病有8%是因为饮用了不安全、不卫生的水而传播的，每年大约有2000万人死于饮用不卫生的水。
必须严格控制水的微生物学质量，以保证医药食品产品、培养基、试剂等的质量的可靠性以及人类饮用水的安全。
我国饮用水水质微生物学指标：国际上目前主要的水质标准是世界卫生组织（WHO）制定颁发的《饮用水水质准则》制药用水微生物监测是为了监控控制性微生物从而将水中微生物含量维持在一定水平。
没有必要将水中存在的所有微生物都监测出来，只针对对产品对人具有潜在危害的致病性的微生物进行监控。
流行病学研究确认，水携带的病原菌的存在与肠道来源的细菌相关，肠道病原微生物进入水体，随水流传播可引起肠道病爆发流行，所以必须对水中病原微生物严格监控。
但要从水体中直接检出病原微生物比较困难，它们在水中的数量很少且培养条件苛刻，分离和鉴别都比较难，即使样品检测结果是阴性也不能保证没有病原微生物的存在。
因此，常用指示微生物作为水体中病原微生物的监测指标。
大肠菌群细菌在人的肠道和粪便中数量很多，受到粪便污染的水容易被检出，且检测方法比较简易。
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水中总大肠菌群的测定复习试题
（多管发酵法）
一、填空题
1.总大肠菌群主要包括有、、肠杆菌属、等菌属的细菌。
答：埃希氏菌属；柠檬酸杆菌属；克雷伯氏菌属。
2.总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可适用于，操作，需要时间。
答：各种水样；较繁；较长。
3.配制乳糖蛋白胨培养液时，将、、、氯化钠加热溶解于1000ml蒸馏水中，调节pH值为，再加入溶液1ml，充分混匀，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，于高压蒸汽灭菌器中，在答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；7.2～7.4；115；20；暗处。
4.平板分离：经初发酵试验培养 h后，发酵试管颜色变黄为，小玻璃倒管内有为产气。
答：24；产酸；气泡。
5.配制伊红美蓝贮备培养基：先将加至900ml蒸馏水中，加热融化，然后加入及，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整pH值为。
趁热用脱脂棉或多层纱布过滤，再加入，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器中，在℃灭菌 min，贮存于备用。
答：琼脂；磷酸氢二钾；蛋白胨；7.2～7.4；115；20；冷暗处。
二、选择题
1.下列物质中不是配制品红亚硫酸钠培养基所需要的。
A、蛋白胨；
B、琼脂；
C、溴甲酚紫乙醇溶液；
D、磷酸二氢钾
答：C
2.测定水源水中总大肠菌群时，将水样作稀释。
A、1：10；
B、1：100；
C、1：1000；
D、1：10000
答：A
三、判断题
1.大肠菌群在水中能自行繁殖。
（）
2. 滤膜法主要适用于杂质较多的水样，操作较繁。
（）
答：1.√ 2. ×
四、问答题
1. 请解释总大肠菌群？
答：总大肠菌群是指那些能在37℃48h内发酵乳糖酸产气的、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。
2.多管发酵法测定总大肠菌群的原理是什么？
答：多管发酵法是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群。
3.在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？
答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml。
4.在进行水质生物实验时，灭菌的意义是什么？
答：使水中一切活的生物体（包括无性繁殖的和芽孢繁殖的形态）及病毒失活或消除。
5.总大肠菌群测定步骤与粪大肠菌群测定有什么异同之处？
答：相同之处：初发酵时，水样都稀释成三个浓度，接种乳糖蛋白胨培养基，在37℃培养24h，对产酸产气者定为初发酵阳性。
不同之处：对粪大肠菌群检测做复发酵时，接种的培养基，培养的温度与大肠菌群检测不同，培养的时间相同。