水中粪大肠菌群快速检测方法_固定底物酶底物法与多管发酵法的比较_高瑞坤
酶底物法与多管发酵法测定水中粪大肠菌群的对比分析
地震等自然灾害过后水体会被大量微生物所污染,特别是被粪便污染。
如水体中含有肠道病原菌株,人饮用后会暴发严重疾病。
粪大肠菌群是一类能使乳糖发酵、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,是水体受人畜粪便污染的最直接指标。
对于粪大肠菌群检测的方法主要为滤膜法和多管发酵法,但试验过程较为繁琐,因此亟需一种快速简便的检测方法。
酶底物法也可用来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌,操作方便,检测时间短,无需确认试验。
但该方法尚未正式列入国家标准,因此,该文通过与多管发酵法相比较,对酶底物法进行验证分析。
1材料与方法1.1试验材料仪器及试剂:乳糖蛋白胨;EC 肉汤;灭菌锅;科立得TM (Colilert R )试剂(美国爱德士生物科技股份有限公司);酒精灯;100mL 无菌取样瓶(里面装有1.5%硫代硫酸钠去除水样中的余氯);3mm 接种环;无菌培养定量盘(97孔);封口机(带97孔定量盘橡胶托垫);97孔阳性标准比色盘;培养箱。
1.2试验方法1.2.1多管发酵法。
参考《生活饮用水标准检验方法(GB/T5750.12-2006)》和《水和废水监测分析方法(第四版)》,将水样分别接种到发酵管中,发酵管中盛有乳糖蛋白胨,在(37±0.5)℃条件下培养(24±2)h ,如果试管产酸或产气,说明试验呈阳性(初发酵试验),将呈阳性结果的发酵管轻微振荡,用灭菌棒或3mm 接种环将培养物转接至EC 培养液中,在(44.5±0.5)℃水浴下培养(24±2)h ,如果发酵管产气即可确认呈阳性(复发酵试验)。
1.2.2酶底物法。
将科立得TM (Colilert R )试剂加入100mL 装有水样的取样瓶中,待试剂完全溶解后,倒入无菌培养定量盘(97孔)中,对其进行封装,然后置于(44.5±1)℃恒温培养箱中培养24h 。
取出后与97孔阳性标准比色盘进行比较,如果为阳性反应,则黄色孔颜色较标准比色盘深,如果有疑虑,可将可疑阳性的试管继续培养4h ,然后观察,之后出现的颜色反应无效。
水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较
水中粪大肠菌群测定方法-纸片快速法与多管发酵法的比较黄晓容【摘要】2015年10月国家环境保护部发布了行业标准《水质总大肠菌群和粪大肠菌群的测定纸片快速法》（HJ755-2015）（以下简称纸片快速法）。
之前环境监测部门一直在使用国家环境保护部于2007年3月发布的行业标准《水质粪大肠菌群的测定多管发酵法和滤膜法（试行）》（HJ/T347-2007）（以下简称多管发酵法）。
纸片快速法操作简单快速,在标准中对采样瓶的处理、样品的保存、水样的稀释接种等做出了详细的规定,而多管发酵法中没有相应规定。
本文对两个标准的异同点进行比较,提出了将这两种方法的优点应用于实际环境监测工作中。
【期刊名称】《生物技术世界》【年(卷),期】2016(000)004【总页数】2页(P33-33,35)【关键词】粪大肠菌群;多管发酵法;纸片快速法【作者】黄晓容【作者单位】重庆市黔江区环境监测中心站，重庆409000【正文语种】中文【中图分类】X8我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过Ⅴ类水质标准数万倍［2］。
我国粪便微生物指标的评价还处于起步阶段，水质评价多以常规理化指标为主，对微生物指标的评价有待进一步加强。
目前水中粪大肠杆菌群检测方法主要有传统的滤膜法及多管发酵法，并且已经列入环保行业标准方法（HJ/T347-2007），此两种传统方法被国内环境监测部门广泛采用，但上述方法操作时间需2-5天，步骤较为繁琐，需验证试验。
多管发酵法每100毫升水样中最低检出限为2个粪大肠菌群［1］。
冯青英等人对传统的多管发酵法进行了优化，将水样接种至乳糖蛋白胨培养液后，在44.5℃±0.5℃培养箱中培养24h后直接读取结果［3］。
多管发酵法不受浊度的影响，可以对浊度较大的污水水样进行监测。
纸片法培养时间对阳性管率有明显影响，适用于测定受粪便污染程度较轻的水体［4］。
多管发酵法和纸片快速法均为行业标准，对粪大肠菌群的检测做出了详细的规定，现就两个标准中的异同做以下探讨。
生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较
生活饮用水大肠菌群快速纸片法和多管发酵法检测结果比较王琳
【期刊名称】《临床合理用药杂志》
【年(卷),期】2015(8)8
【摘要】大肠菌群测定是检测生活饮用水情况的重要指标,具有广泛的卫生学意义。
目前,我国环保部门检测大中大肠菌群常用传统的多管发酵法,但该方法准备工作量大,操作复杂,周期长,无法满足大指样品快速检测的需求。
1956年,Forg等提出的快速纸片在餐具消毒等的定性检测中得到了广泛应用,并被列入我国卫生部《生活饮
用水检验规范（2001）》及国家环保总局《水和废水监测分析方法（第4版）》
中的C类方法。
【总页数】1页(P166-166)
【作者】王琳
【作者单位】江西省上饶市疾病预防控制中心
【正文语种】中文
【中图分类】R15
【相关文献】
1.固定底物酶底物法与多管发酵法和快速纸片法测定水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的比较
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法检测方法比较
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酶底物法和多管发酵法检测水中的总大肠菌群的比较研究
中国卫生产业有资料表明:酶底物法试剂盒弥补了多管发酵法的不足,是现代微生物快速检测的发展方向,超过90%以上的美国国家实验室都使用此方法[1]。
目前,国内越来越多的实验室采用酶底物法用于水质大肠菌群的检测,但总体规模还不大,还未被绝大多数检测机构所采用;特别是基层实验室因条件受限,采用酶底物法的比例更少。
作者所处的属于基层实验室,我们借助较为简易的基层条件,分别使用酶底物法和多管发酵法对饮用水中的总大肠菌群进行检测,分析发现两种方法的检测结果有高度的一致性。
现总结报告如下。
1材料与方法1.1样品大英县农村饮用水22份。
1.2试剂酶底物法由株洲鸿润检测技术有限公司提供的总大肠菌群-大肠埃希氏菌测定试剂盒,十管法,批号为20150416。
多管发酵法的乳糖培养基由杭州滨和微生物试剂有限公司提供,批号为20150822,EC 肉汤由北京奥博星生物技术有限责任公司提供,批号为20141222,伊红美蓝琼脂由北京奥博星生物技术有限责任公司提供,批号为20141222。
1.3原理酶底物法是利用大肠菌群可产生β-半乳糖苷酶,该酶能分解试剂盒中底物邻-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG),而生成黄色的邻-硝基酚,使培养基呈现颜色变化,颜色会从无色变成黄色,指示有大肠菌群的存在;而大肠埃希氏菌可产生β-葡萄糖醛酸酶,而β-葡萄糖醛酸酶能对试剂中的4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)成份进行代谢,使其产生荧光,可在紫外灯下进行鉴别。
多管发酵法是根据大肠菌群能发酵乳糖,产酸产气及具备革兰氏染色阴性,无芽孢呈杆状等有关特性的菌群组。
1.4方法每份水样分成两份接种以下两种方法,根据污染程度进行稀释。
1.4.1酶底物法采用十管法,直接将水样100mL 加入含有“科立德”酶底物试剂的无菌瓶中,盖上瓶盖,颠倒混匀,使酶底物试剂充分溶解,加样:使用10mL 无菌刻度吸管吸取上述处理好的水样10mL 加入到试剂盒的方格中,共十格,盖上盖子(36±1)℃,培养24h 后进行判读,如果结果可疑,可延长培养时间到28h 进行结果判读,查MPN 检索表报告水样中的MPN 值。
三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较
I节能环保LOW CARBON WORLD2021/6三种监测地表水中粪大肠菌群标准方法的比较唐微微，罗娅敏，陈瀚,赵志友(四川省成都生态环境监测中心站，四川成都610066)【摘要】多管发酵法、纸片法和酶底物法是目前测定地表水中粪大肠菌群的常用标准方法，通过三种方法对粪大肠菌群标准物质和实际地表水样进行分析检测，结果表明：多管发酵法、纸片法和酶底物法用于粪大肠菌群的检测结果具有一致性；通过三种方法优缺点的对比，多管法成本低适用于常规检测，纸片法高效方便更适用于大批量快速检测，酶底物法操作简单，不受场地限制可直接现场检测,更适用于应急现场监测遥【关键词】多管发酵法；纸片法；酶底物法；粪大肠菌群;地表水【中图分类号】X132【文献标识码】A【文章编号】2095-2066(2021)06-0034-020前言粪大肠菌群又称耐热大肠菌群，是在44.5益能生长并发酵乳酸产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽抱杆菌⑴。
环境地表水中的粪大肠菌群主要来自粪便的污染，因此通过测定水中粪大肠菌群的含量，可间接得出水体受粪便污染的情况囚,是当前国内外环境监测部门主要监测项目之一，是评价水体污染程度和环境卫生的重要指标，在《地表水环境质量(GB3838—2002)》中，规定I、域、芋、郁及吁类水粪大肠菌群的含量依次臆200、200〜2000、2000〜10000、10000~20000及20000~40000个/L,我国地表水体粪大肠菌群含量普遍较高，部分水域含量甚至超过吁类水质标准。
多管发酵法叫纸片法⑷和酶底物法间是目前国内测定地表水中粪大肠菌群常用的标准方法。
多管发酵法早在1985年就列入《生活饮用水标准检验方法(GB5750-85)》，并于2018年发布修订版，是粪大肠菌群测定的经典方法,它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法向，美国公共卫生协会(APHA)出版的《水和废水标准检验方法(20版)》中方法9221E也采用的是多管发酵法；纸片法在西方发达国家运用较少，主要在一些发展中国家使用，环保部在2015年发布了纸片法的标准方法，它作为《水和废水监测分析方法(第四版)》中的推荐方法(C类方法)叫酶底物法是一种新型酶技术检测方法，已在美、日、韩和欧洲许多国家使用孔2003年从美国引入我国，环保部在2018年发布了酶底物法的标准方法。
水中粪大肠菌群测定方法的比较研究分析——酶底物法与多管发酵法
酶底物法（ Ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ） 是 利 用
大肠 菌 群能 分解 培 养 液 ， 使 之呈 黄 色 ， 以及 大 肠 埃
希 氏菌使 培 养液 在 波长 ３ ６ ６ ｎ ｌ ｎ紫外 光 下 产生 荧 光
Ｗａ ｎ ｇ Ｙａ ｎ，Ｌ ｏ ｎ ｇ Ｊ ｉ ａ ｈ ｏ ｎ ｇ ，Ｘｕ Ｘ ｉ ｏ ｎ ｇ ｆ ｅ ｉ ，Ｌ ｉ Ｊ ｉ ｎ ｇ
（ Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ Ｅ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ ａ ｌ Ｍｏ ｎ ｉ ｔ ｏ ｒ ｉ ｎ ｇ Ｃ ｅ ｎ ｔ ｒ ｅ ，Ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｓ ｈ ａ ４ １ ０ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
第３ ８卷第 ７期 ２ ０ １ ３年 ７月
环 境 科 学 与 管理
ＥＮＶＩ Ｒ０Ｎ 佃 ＮＴＡＬ Ｓ ＣＩ ＥＮＣＥ ＡＮＤ Ｍ ＡＮＡＧＥＭ ＥＮＴ
Ｖ０ １ ． ３ ８ ＮＯ ． ７
Ｊ ｕ ｌ ｙ ２ ０１ ３
文 章编 号 ： １ ６ ７ ４— ６ １ ３ ９ （ ２ Ｏ １ ３ ） Ｏ ７— ０ １ ２ ６— ０ ３
结果ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ稳 定 ， 满 足环 境 监 测技 术 要 求 ， 可 用 以评 价 水 质 微 生 物 污 染 程 度 。
关键 词 ： 酶底物法 ； 多管 发 酵 法 ； 粪 大肠 菌 群 中 图分 类 号 ： Ｘ ８ ３ ０ ． ２ 文 献标 识 码 ： Ｂ
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｆ ｅ ｃ ａ ｌ Ｃｏ ｌ ｉ ｆ ｏ ｒ ｍ ｉ ｎ Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｂ ｙ Ｅｎ ｚ ｙ ｍｅ Ｓ ｕ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ａ ｎ ｄ Ｍｕ ｌ ｔ ｉ ｐ ｌ ｅ— — ｔ ｕ ｂ ｅ Ｆ ｅ ｒ ｍｅ ｎ ｔ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ Ｔｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ
水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比
水环境粪大肠菌群监测2种分析方法的对比粪大肠菌群是监测水体是否被粪便污染的指示菌,是监测地表水尤其是饮用地表水的重要指标之一。
它是总大肠菌群的一部分,其基本性状和总大肠菌群相似。
在实验时,将培养温度提高到44.5C,我们把可以在此条件下生长并发酵产酸产气的,称粪大肠菌群。
经典的粪大肠菌群的监测方法是采用多管发酵法,但这种方法具有前期准备时间长、任务繁重;培养过程中操作繁琐的缺点,并且事后还要清洗大量的试管,浪费人力、物力、财力。
为此很多厂家研发了大肠菌群的快检纸片。
采用纸片法,大大缩短了实验的时间,并且根本不需要再清理大量的试管,减轻了劳动强度,也节约了宝贵的水资源。
那么,多管发酵法和纸片法的数据究竟有没有相关性?作者采用某厂生产的大肠菌群的快检纸片通过对比实验旨在探讨这个问题。
一、分析方法1、多管发酵法(1)培养基单倍和三倍乳糖蛋白胨培养液(培养液的成分与制备略,下同)EC培养液(2)步骤①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的接种量,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五管。
如果接种的体积为10ml,则接种于含有三倍浓度5ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内,如果接种量为1ml或者小于1ml,则接种于含有单倍浓度10ml的乳糖蛋白胨培养液的试管内。
②初发酵：将接种了水样的试管,在370.5C下培养242h,产酸和产气的发酵管表明实验阳性。
如产气不明显,可轻拍试管,有小气泡升起的为阳性。
③复发酵试验轻微振荡初发酵阳性的发酵管,用3mm接种环将培养物转接到EC培养液中。
在440.5C水浴中培养242h,培养后立即观察。
发酵管产酸产气表明确信试验阳性。
④计算和报告结果根据不同接种量的发酵管所出现的阳性结果的数目,从MPN表中查相应的MPN 指数,计算出每升水中粪大肠菌群的MPN值。
2、纸片法采用某厂生产的大肠菌群快检纸片①水样接种量：将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样的稀释倍数,每个样品至少用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有五个纸片。
比较快速检测水中粪大肠菌群的方法
f论与综述清洗世界Cleaning World第36卷第12期2020年12月文章编号：1671-8909 ( 2020) 12-0121-003比较快速检测水中粪大肠菌群的方法刘招椿(宁德市环境监测站东侨分站，福建宁德 352 1000)摘要：目的：粪大肠菌群集中产生在温血动物和人的粪便当中，其数量的多少在一定程度上直接代表着水体受粪便污染的具体程度，是目前国际上所通行的对受粪便污染水质监测的重要指示菌，其也是对城市污水特别是 生活污水进行综合评价的关键指标之一。
现阶段，我国环境监测部门主要采用多管发酵法和膜过滤法作为标准的 检测方法，但是这两种方法在检测过程中所花费的时间往往都比较长，一般需要两三天的时间，并且实验步驟十 分繁琐，对于环境的要求非常高。
为此，简便快速的检测方法至关重要。
关键词：水中粪大肠菌群；快速检测；固定底物酶底物法；多管发酵法中图分类号：X 321 文献标识码：A〇引言分析水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底 物法与多管发酵法的比较，进而为实际检测工作提供更 多更好的检测方法。
方法：在检测水中粪大肠菌时分别利用固定底物酶 底物法与多管发酵法进行检测，在此基础上对两种方法 的检测结果进行比较。
结果：对大肠菌群进行科学检测 时，利用酶底物法与多管发酵法所检测出来的结果，在 一定程度上具备非常强的相关性，在浓度范围相对较低 的状态下样品浓度所具备的相关性比高浓度范围更好， 二者差异有统计学意义。
结论：利用酶底物法的检测结 果在一定程度上会比多管发酵法的检测结果低，这极有 可能与酶底物法检测的大肠埃希氏菌、多管发酵法检测 的粪大肠菌群所造成的，当置信度控制在95%的条件 下是允许存在差异的，并且与环境各方面的监测要求十 分相符，基于检测水中粪大肠方法成本价格、准确度、 灵敏度、简易性及定量范围的考虑，建议选用97孔定 量盘法与酶底物法检测水中粪大肠菌群。
1实验部分1.1仪器设备和试剂材料(1) 仪器设备。
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收稿日期:2008-07-08作者简介:高瑞坤(1963-),男,福建泉州人,工程师.参考文献:[4]Gitelson A,Mayo M,Yacobi Y Z,et al.The use of hi ghspectral radiometer data for detection of low chlorophyll concentrations in Lake Kinneret[J].J.Plank ton Res.1994,16:993-10021[5]Hoge F,Swift R.Ocean color spectral variability studiesusing solar induced chlorophyll fluorescence[J].Applied Optics.1987,26:18-21[6]Iluz D,Yacobi Y Z,Gitelson A.Adaptation of analgori thm for chlorophyll-a es timation by optical data in the oligotrophic Gulf of Eilat[J].Int.J.Remote Sensing.2003,24(5):1157-11631[7]Schalles J F,Gitelson A,Yacobi Y Z,Kroenke A E.Chlorophyll esti mation using whole seasonal,remotely sensed high spectral-resolutiondata for an eutrophic lake [J].J.Phycol.1998,34:383-391[8]Yacobi Y Z,Gi telson A,M ayo M.Remote sensing ofchlorophyll in Lake Kinneret using high spectral resolution radiometer and Landsat TM:Spectral features of reflectance and algorithm development[J].J.Plankton Res.1995,17:2155-21731水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底物法与多管发酵法的比较高瑞坤1,汤琳2,付强3(1.厦门市环境监测中心站,福建厦门361004; 2.上海环境监测中心,上海200030;31中国环境监测总站,北京100012)摘要:目的在于比较固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的检测,使用科立得T M (Colilert R o)试剂和传统方法检测地表水、水源水及污水水样,比较固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)检测结果的一致性。
结果表明,固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)检测结果具有一致性,固定底物酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。
关键词:粪大肠菌群(耐热大肠菌群);固定底物酶底物法科立得TM(Colilert R o);多管发酵法;快速检测中图分类号:X832文献标识码:A文章编号:1002-6002(2008)04-0039-03Com parison between rapid detection m ethod of Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water Fecal bacteria(Thermotoleerant coliform bacteria)detectionGAO Ru-i kun1,et al(1.Xiamen Environ mental Monitoring Centre,Xiamen361004,China)Abstract:In order to compare bet ween rapid detection method of Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique and mul tiple-tube fermentation technique in water Fecal bacteria(Thermotoleerant coliform bacteria)detection,use科立得TM(ColilertÒ) and traditional method to test real water samples are included in this experiment.Results demonstrate that Defined Substrate Technology (DST)enzyme substrate technique shows equivalence with multiple-tube fermentation technique.It is suggested that Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique can be used as a standard method for water microbiological safety evaluation.Key words:Fecal bacteria(Thermotoleeran t coliform bacteria);Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique科立得TM(Colilert R o);Mul tiple-tube fermentation technique;Rapid detection目前水中粪大肠杆菌群(耐热大肠菌群)检测方法主要有传统的滤膜法及多管发酵法,并且已经列入环保行业标准方法(HJ P T347-2007),此两种传统方法被国内环境检测部门广泛采用,但上述方法操作时间需2~5天,步骤较为繁琐,需验证试验,不能对水的卫生学状况做出快速评价,制约了其应用。
且多管发酵法每毫升水样中最低检出限为2个粪大肠菌群,而固定底物酶底物法却能抑制200万个异样细菌,精确检测到1个粪大肠菌群。
因此,采用快速简便且精确的检测方法第24卷第4期2008年8月中国环境监测Environmental Monitoring i n ChinaVol.24No.4Aug.2008十分必要。
固定底物酶底物法可以较好地弥补传统方法的不足。
固定底物酶底物法(Defined Substrate Technology,DST,以下简称DST-酶底物法)采用大肠菌群细菌能产生B-半乳糖苷酶(B-D-galactosidase)分解ONPG(Ortho-nitrophenyl-B-D -galactopyranoside)使培养液呈黄色,以及大肠埃希氏菌产生B-葡萄糖醛酸酶(B-glucuronidase)分解MUG(4-methyl-umbelliferyl-B-D-glucuronide)使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光的原理,来判断水样中是否含有大肠菌群、粪大肠菌群(耐热大肠菌群)及大肠埃希氏菌[1]。
DST-酶底物法可以采用成品的培养基及试剂,操作方便;无需确认试验;DST-酶底物法检测时间较短,18~24h即可同时判断水样中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的MPN值。
在美国,欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠杆菌,粪大肠菌群(耐热大肠菌群)及大肠埃希氏的检测,并通过美国EPA,5水与废水标准检测方法6以及我国5生活饮用水标准检验方法6认证[2]。
由于DST-酶底物法用于水样定量检测时采用最可能数(MPN,most probable number)的技术和方法,所以,本项试验中比较DST-酶底物法与多管发酵法用于水样的检测。
1材料与方法材料与试剂:本试验中酶底物法采用固定底物技术(DST,defined substrate technology),其MMO -MUG培养基[3]、试验材料和仪器由爱德士公司提供。
其它所用培养基与试剂按5地表水环境质量标准方法6GB3838-2002准备和配置。
试验方法:固定底物酶底物法采用97孔定量盘,此方法是一种基于MPN的方法。
检测所需水样为100ml。
用100ml的无菌取样瓶量取100ml 水样,加入科立得TM(Colilert R o)试剂,混摇均匀使之完全溶解,将水样全部倒入97孔无菌定量盘内,以手抚平定量盘背面以赶除孔穴内气泡,然后用封口机封口[4]。
放入4415e?012e培养箱中培养24小时后进行结果判读,如果结果为可疑阴性,可延长培养时间到28小时,超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果[4]。
将培养24小时之后的定量盘取出观察,如果孔穴内的水样变成黄色则表示该孔穴中含有粪大肠菌群(耐热大肠菌群)。
计算有黄色反应的孔穴数,对照MPN 表查出其代表的粪大肠菌群(耐热大肠菌群)最可能数。
多管发酵法检测大肠菌群和粪大肠菌群方法参见5水质粪大肠菌群的测定多管法和滤膜法(试行)HJ P T347-20076。
数据统计。
数据整理统计方法使用Excel和SPSS1010软件。
2试验结果采取地表水、污水水样进行检测,为保证试验结果的精确和方便统计,水样要求一定的阳性检出率。
在本项实验中采用103份地表水及污水水样进行粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的检测,结果如图1和图2。
图1厦门环境监测站对53份样品进行两种方法的比较图2上海环境监测站对50份样品进行两种方法的比较对两种方法检测的粪大肠菌群(耐热大肠菌群)结果进行配对t检验,为了使两组数据呈正态分布,现对数据进行对数处理后进行t检验[5-7],结果见表2、表2。
表1配对变量统计描述平均值分析样本量标准偏差标准误差多管发酵法219933103110797011085固定底物酶底物法3106131030190700109115表2进行配对变量间的相关性分析方法分析样本量相关性P值40中国环境监测第24卷第4期2008年8月表2反映出两组数据的相关性。
Correlation 代表r值。
r=1说明两组数据完全相同[6]。
由图1、图2可看出,r=01902,说明相关性很好。
P =01000,说明两组数据的相关性趋于一致[6]。