粪大肠菌群数测定原始记录
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大肠菌群检验原始记录-平板计数法-2016版-5样
3.培养
将以上VRBA平板倒置于36.0±1.°C,培养18h~24h（//时〜/_/时）并
分别计数可疑和典型菌落。
4.平板菌落数选择
选取菌落数在15~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
5.证实试验（接种BG1.B）
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BG1.B肉汤管内，36°C±1°C培养24h~48h,（//时〜/_/时）观察产气
大肠菌群检验原始记录（平板计数法）
检验单位
检验员
检验日期
至
环境条件
温度℃,相对湿度%
检验依据
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法
样品名称
产品批号
仪器设备及耗材：
电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器
培养基及试剂：
结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：m1.配制日期：
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品4
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品
5
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CFU∕m1.□CFU∕g□
2.接种VRBA
选择适宜的2~3个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取Im1.于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1m1.生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及时将15~20m1.融化并恒温至46℃的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加3~4m1.VRBA覆盖平板表层。同时再以只加VRBA的平皿，作为VRBA的空白对照。将平板翻转，培养。
将以上VRBA平板倒置于36.0±1.°C,培养18h~24h（//时〜/_/时）并
分别计数可疑和典型菌落。
4.平板菌落数选择
选取菌落数在15~150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。
5.证实试验（接种BG1.B）
从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BG1.B肉汤管内，36°C±1°C培养24h~48h,（//时〜/_/时）观察产气
大肠菌群检验原始记录（平板计数法）
检验单位
检验员
检验日期
至
环境条件
温度℃,相对湿度%
检验依据
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法
样品名称
产品批号
仪器设备及耗材：
电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器
培养基及试剂：
结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：m1.配制日期：
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品4
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CF∪∕m1.□CFU∕g□
VRBA疑似大肠菌群菌落数
接种BG1.B管数
BG1.B阳性管数
样品
5
稀释度
第一稀释度
第二稀释度
第三稀释度
结果
CFU∕m1.□CFU∕g□
2.接种VRBA
选择适宜的2~3个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取Im1.于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1m1.生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及时将15~20m1.融化并恒温至46℃的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加3~4m1.VRBA覆盖平板表层。同时再以只加VRBA的平皿，作为VRBA的空白对照。将平板翻转，培养。
大肠菌群测定原始记录
大肠菌群测定原始记录
时间：检验地点：本厂化验室
检测样品名称：来源：
生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。
1.取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，
取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。
2.LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，
取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试Байду номын сангаас中，
5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：
24h产气管数：
48h产气管数：
6．BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。
倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。
放入灭菌锅灭菌15min.
以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：
压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。
培养起始时间：
48h产气管数：
7.检索MPN表结论：
备注：
3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；
从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;
4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，
取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，
时间：检验地点：本厂化验室
检测样品名称：来源：
生理盐水的配制：8.5g氯化钠加1000ml蒸馏水溶解待用。
1.取225ml生理盐水于标签为1:10的300ml锥形瓶中，
取9ml生理盐水于标签为1:100的50ml锥形瓶中。
2.LST溶液的配制：取LST7.1g加水100ml（双料），溶解至透明，
取1:100的稀释样1ml于标有0.01g的3只试Байду номын сангаас中，
5．培养：放入36℃的培养箱中培养48h。时间起始：
24h产气管数：
48h产气管数：
6．BGLB溶液复发酵试验：配制BGLB溶液，称取BGLB4g溶液100ml水中，均分倒入对应产气标号的标有标示并放有聚气管的试管中，放入灭菌锅灭菌15min。用接种针粘一环产气管液于标有对应的以灭菌的BGLB溶液的试管中，于36℃的培养箱中培养48h。
倒入10ml于3只标有1g的并放有聚气管的试管中;剩余溶液加一倍水配成单料倒入标有0.01g，0.001ml的6只试管中，每只10ml,并放有聚气管(试管要求180×18mm)。
放入灭菌锅灭菌15min.
以上1；2；同时一起灭菌，灭菌起始时间(喷气开始计时)：
压力表指针回零后打开放气阀，开盖取出，冷至常温。
培养起始时间：
48h产气管数：
7.检索MPN表结论：
备注：
3.样品稀释：于225ml灭菌的生理盐水中加入样品25g，混匀，配成1:10的稀释样；
从1:10的稀释样中取1ml到入标有1:100的9ml灭菌的生理盐水中混匀，配成1:100稀释样;
4.初发酵试验：取1:10的稀释样10ml于标有1g的3只试管中，
取1:10的稀释样1ml于标有0.1g的3只试管中，
大肠菌群原始记录
检验员：审核员：
样品编号
LST肉汤初发酵试验培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，接种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，培养观察。
样
品
编
号
BGLB肉汤复发酵试验
培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
结果报告
MPN/mL
备注：+：阳性-：阴性
绥芬河出入境检验检疫局综合技术中心密山实验室
ZJ-03-107大肠菌群检验原始记录
样品名称：样品号：
检验日期：验讫日期：标准物质Biblioteka 号检验依据设备编号
大肠菌群计数
第一法大肠菌群MPN计数法：取检样25g(ml)+225ml，用均质器均质1min，制成1:10的样品匀液。按10倍递增稀释，选取6个适宜的稀释倍数，接种LST肉汤管，每个稀释度接种三管，培养观察。
样品编号
LST肉汤初发酵试验培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，接种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，培养观察。
样
品
编
号
BGLB肉汤复发酵试验
培养温度℃，培养开始时间年月日点分，培养结束时间年月日点分。
结果报告
MPN/mL
备注：+：阳性-：阴性
绥芬河出入境检验检疫局综合技术中心密山实验室
ZJ-03-107大肠菌群检验原始记录
样品名称：样品号：
检验日期：验讫日期：标准物质Biblioteka 号检验依据设备编号
大肠菌群计数
第一法大肠菌群MPN计数法：取检样25g(ml)+225ml，用均质器均质1min，制成1:10的样品匀液。按10倍递增稀释，选取6个适宜的稀释倍数，接种LST肉汤管，每个稀释度接种三管，培养观察。
大肠菌群计数平板法检验原始记录
食品中大肠菌群平板计数检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰 箱□冰 箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员： 审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；
样品名称
样品编号
检验项目
大肠菌群平板计数法
检验日期
检验地点
□BSL-2实验室
□洁实验净室
检验依据
判定依据
检验仪器
□生化培养箱□均质器□菌落计数仪
□生物安全柜□超净台□电子天平
□恒温振荡器□冰 箱□冰 箱
检验试剂
VRBA琼脂、BGLB肉汤、磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水等。
h
稀释度
空白
2
25g(mL)样品+225mL稀释液均质（或原液直接检验）；
平板A1
平板A2
3
10倍系列稀释；
结果
平板B1
4
选2-3个适宜稀释度样品匀液；每梯度接种VRBA平板2个；
平板B2
结果
5
36±1℃，18-24h培养，计数典型和可疑菌落；
平板C1
平板C2
6
挑10个可疑菌落接种于BGLB肉汤管36±1℃，24-48h；
结果
平板D1
7
若BGLB肉汤管产气则阳性；
平板D2
结果
8
按比例记录结果，报告。
平板E1
平板E2
温度（℃）
相对湿度（％RH）
结果
证实实验比例
结果
报告
检验员： 审Βιβλιοθήκη 员：样品制备□固体和半固体样品：无菌称取25g，置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水的无菌灭菌袋内，进行均质处理。
□液体样品：吸取25mL于样品于225mL磷酸盐缓冲液或无菌生理盐水中，混匀。
检验程序
大肠菌群计数[ CFU/g (mL ) ]
1
实验采集抽样方案来自GB4789.1；
20-6.大肠菌群检验原始记录
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
3
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
4
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长大肠菌群检验原始记录来自检验项目大肠菌群
样品状态
□完好□异常
检验
方法
GB 4789.3—2016（第二法）
仪器
设备
样品
处理
□固体样品：无菌操作称取25g加入到225mL无菌生理盐水均质袋中，拍打1～2min
□液体样品：无菌吸管吸取25mL加入到225mL灭菌生理盐水中，充分混匀
样品
序号
培养过程
稀释倍数
结果计算
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
5
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
琼脂
对照
0 CFU/皿
盐水
对照
0 CFU/mL
检验人：
复核人：
检验日期：
报告CFU/g
100
10-1
10-2
10-3
1
(1)吸取1mL样液于VRBA平板36.0℃培养24h后，是否有沉淀环的紫红色菌落生长
（2）从合适稀释度上挑取典型和可疑菌落数（个）
（3）BGLB肉汤证实试验阳性管数
2
滤膜法测定原始记录
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：检测地点：环境温度与湿度：
分析方法：仪器设备（管理编号）：
培养条件：
样品编号Байду номын сангаас
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
C1-滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000-将过滤体积的单位由ml转换为L
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录表（续表）
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：
样品编号
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：检测地点：环境温度与湿度：
分析方法：仪器设备（管理编号）：
培养条件：
样品编号Байду номын сангаас
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
C1-滤膜上生长的粪大肠菌群菌落总数，个；
1000-将过滤体积的单位由ml转换为L
f--样品接种量，ml
若平行样结果都在20~60CFU/L范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。
（）ml
平均值
（）ml
平均值
（）ml
平均值
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
滤膜1
滤膜2
分析/日期：校核/日期：复核/日期：
滤膜法测定原始记录表（续表）
第页共页
项目编号：分析项目：样品性质：收样日期：分析日期：
样品编号
不同接种量MFC培养后菌落个数
粪大肠菌群数C（CFU/L）
备注：
选择结果在20~60CFU/L范围内，进行计算
计算公式:
C=
式中C--样品中粪大肠菌群数，CFU/L；
大肠菌群测定原始记录
培养
要求：初发酵试验：36℃±1℃；24h±2h或48h±2h。复发酵试验：36℃±1℃；48h±2h。
初发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时；复发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时。
稀释度
管号
接种量
（ml）
初次发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
复发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
大肠菌群最有可能数（MPN/100g）
LST肉汤
BGLB肉汤
大肠菌群测定原始记录
编号：
样品名称
规格型号
生产批次
抽样数量
检验标准
GB4789.3-2010
生产日期
检验日期
样品
处理
无菌操作取检样25g，加225ml无菌生理盐水，均质处理得1:10稀释液，再用灭菌生理盐水按梯度稀释，得1:100、1:1000稀释液，选择三个连续的适宜稀释度接种发酵管，双料发酵管接种稀释液10ml，单料发酵管接种稀释液1ml。
备注：
检验员：年月日校核员：年月日
1:10
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:100
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:1000
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
要求：初发酵试验：36℃±1℃；24h±2h或48h±2h。复发酵试验：36℃±1℃；48h±2h。
初发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时；复发酵：＿月＿日＿时至＿月＿日＿时。
稀释度
管号
接种量
（ml）
初次发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
复发酵
导管有
无气泡
阴
阳
性
大肠菌群最有可能数（MPN/100g）
LST肉汤
BGLB肉汤
大肠菌群测定原始记录
编号：
样品名称
规格型号
生产批次
抽样数量
检验标准
GB4789.3-2010
生产日期
检验日期
样品
处理
无菌操作取检样25g，加225ml无菌生理盐水，均质处理得1:10稀释液，再用灭菌生理盐水按梯度稀释，得1:100、1:1000稀释液，选择三个连续的适宜稀释度接种发酵管，双料发酵管接种稀释液10ml，单料发酵管接种稀释液1ml。
备注：
检验员：年月日校核员：年月日
1:10
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:100
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
1:1000
1
1
24h( ) 48h( )
2
1
24h( ) 48h( )
3
1
24h( ) 48h( )
大肠菌群检验原始记录
四、根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告大肠菌群的最可能数。
初发酵（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，）支）
产气管数（支）
复发酵(煌绿乳糖胆盐
肉汤，
37℃，,48h)
产气管数（支）
10-1
10-2
10-3
检验结果
（MPN/100g）
检验人：复核人：
大肠菌群检验检验原始记录
样品名称
明胶
样品编号
样品状态
生产日期
检验依据
GB4789.3-2010
检验日期
大肠菌群检验过程：
1、称取样品25g样品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
2、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。
初发酵（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤，）支）
产气管数（支）
复发酵(煌绿乳糖胆盐
肉汤，
37℃，,48h)
产气管数（支）
10-1
10-2
10-3
检验结果
（MPN/100g）
检验人：复核人：
大肠菌群检验检验原始记录
样品名称
明胶
样品编号
样品状态
生产日期
检验依据
GB4789.3-2010
检验日期
大肠菌群检验过程：
1、称取样品25g样品放入盛有225ml灭菌的生理盐水中，制成1：10的样品匀液，用1ml无菌吸管吸取1：10的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：100的样品均液，用1ml无菌吸管吸取1：100的样品匀液1ml，沿管壁缓缓注入盛有9ml生理盐水的无菌试管中，制成1：1000的样品均液。
2、初发酵试验：大肠菌群每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内产气情况。如未产气，培养至48h±2h，如产气着进行复发酵试验。
三、复发酵试验：（大肠菌群的测定）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。