逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit )操作步骤

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逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit ) 说明书

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04 379 012 001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit y Version 6.0
1. What this Product Does, continued
Vial/ Cap
Label
Store the kit at ؊15 to ؊25°C N Store Control RNA (vial 7 in
Cat. No 04 379 012 001) at —70°C or below.
y Version 6.0
Content version: September 2010
9 (7 for b,c) colorless
Water, PCR-grade
Content
a) Cat. No. 04 379 012 001 b) Cat. No. 04 896 866 001 c) Cat. No. 04 897 030 001
a) 1 vial, 1 ml b) 2 vials, each 1ml c) 3 vials, each 1 ml
L In Cat. No. 04 896 866 001 and Cat. No. 04 897 030 001 the control reagents (vial 7 and 8) are not included. Therefore, in these kits vial 7 is Water, PCR Grade.
Random Hexamer Primer
a) 1 vial, 100 ␮l (600 ␮M) b) 1 vial, 200 ␮l (600 ␮M) c) 2 vials, each 200 ␮l (600 ␮M)

PROMEGA逆转录试剂盒说明书

Reverse Transcription System
INSTRUCTIONS FOR USE OF PRODUCT A3500.
1. Description..........................................................................................................1 2. Product Components and Storage Conditions ............................................2 3. Reverse Transcription Protocol.......................................................................2
Printed in USA. Revised 3/09 Part# TB099 Page 1
2.
Product Components and Storage Conditions
Size 100 reactions Cat. # A3500
Product Reverse Transcription System
3.A. Reverse Transcri magnesium concentration may be optimized for any given sequence to achieve better yields. **Final concentration of reaction components: 5mM MgCl2; 1X Reverse Transcription Buffer (10mM Tris-HCl [pH 9.0 at 25°C]; 50mM KCl; 0.1% Triton® X-100); 1mM each dNTP; 1u/μl Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor; 15u/μg AMV Reverse Transcriptase (High Conc.); 0.5μg Oligo(dT)15 Primer or Random Primers per microgram RNA; 50ng/μl 1.2kb Kanamycin Positive Control RNA, poly(A)+ mRNA or total RNA.

通用反转录试剂盒(M-MLV)

通用反转录试剂盒(M-MLV)货号：RP1105规格：50T/100T保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。

产品内容：试剂盒组成50次100次M-MLV(200U/μL)50μL50μL×25×M-MLV Buffer200μL400μLOligo(dT)(10uM)100μL200μL16RNasin(40U/μL)25μL50μLdNTPs(10mM)50μL100μLO1mL1mL×2RNase-free ddH2说明书1份1份产品简介：本试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应。

它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物用于后续的PCR扩增和分子克隆实验。

操作步骤：一、反转录反应1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：1-5μg总RNA或50-500ng mRNA或2pmole基因特异性引物2μL Oligo(dT)16O至14.5μL补RNase-free ddH22、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：4μL5×M-MLV Buffer1μL dNTPs0.5μL RNasin1μL M-MLV3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。

4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。

5、若用于后续PCR扩增,用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50μL，取2-5μL作为PCR反应模板。

注意事项：1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。

有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。

2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。

3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。

东洋纺反转录试剂盒

11-05
高效率逆转录试剂盒 First Strand cDNA Synthesis Kit
ReverTra Ace -α-
(Code No. FSK-100,FSK-101)
使用说明书
科研用
TOYOBO CO., LTD. Life Science Department OSAKA JAPAN
目录
※ 除Positive Control RNA外，所有组分请均保存在-20℃条件下；Positive Control RNA请保存于-80℃条件下。
※ Positive Control RNA 由于运输过程中不能一直保证 -80℃条件，在运输过程中可能降解。建议用户选择人、鼠来源的 Total RNA 作为 Control RNA。
G3PDH mRNA
Primer F 559
intron
Size(bases)
1634
1237
1110 Primer R
90 129 90 92 k-193 104
图 2. Control Primer F，R 的 location
[Positive Control RNA]
本试剂盒作为 Positive Control 用 RNA ，添附有 Human G3PDH (Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase)遗传基因的 in vitro 转录产物。（在 3’末端添加了 22mer 的 Poly（A）tail）（请参照图 3）。
※ 组分中的 5×RT Buffer 在溶解时，可能会出现白色沉淀现象，但不影响其品质。此时，请使用振荡器等仪器使其混合均匀，等完全溶解后再使用。
[各引物的序列]

takara反转录试剂盒说明书

Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。

为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。

但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。

在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。

而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。

PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。

Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。

同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。

使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。

东盛生物 RT-PCR Kit（逆转录试剂盒）说明书

0.6 μl RNasin , M-MLV ；按下列条件进行反转录反应 42℃ 温浴 60 min（随即引物 37℃ 温浴 60 min）； 5 终止反应 70℃ 温浴 5 min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃ 保存。 6 用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50 μl ，取 2-5 μl 进行 PCR 扩增反应。
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mபைடு நூலகம் DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件各组分均-20℃保存，避免反复冻融。
●
在逆转录反应中经常加入 RNase 抑制剂以增加 cDNA 合成的长度和产量。RNase 抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲
液和还原剂（如 DTT）存在的条件下加入，因为 cDNA 合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解 RNA 的 RNase。蛋白 RNase 抑制剂仅防止 RNase A，B，C 对 RNA 的降解，并不能防止皮肤上的 RNase，因此尽管使用了这些抑制剂，也要小心不要从手指上引入 RNase。
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------广州东盛生物科技有限公司电话：020-87791356 传真：020-87791381 网址：

使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA

适用范围
RT延伸。
注意事项
1. 下列操作步骤适用于模板量为50 ng-2 μg的总RNA，如果总RNA量大于2 μg，请按比例扩大反应体系。
2. 在冰上进行操作，防止RNA发生降解。 3. 不需分开变性和退火两个步骤。但是对于二级结构很复杂的RNA模板，推荐使用变性步
KR116-0μl 25 μl 50 μl 1 ml
KR116-02 (100 rxn)
200 μl 200 μl 100 μl 200 μl 2×1 ml
KR116-03 (1000 rxn) 10×200 μl 10×200 μl 10×100 μl 10×200 μl 10×2×1 ml
操作步骤
使用快速反转录试剂盒合成第一链cDNA
50 ng-2 μg总RNA可建立20 μl反应体系。
1. 将模板RNA在冰上解冻；5×gDNA Buffer、FQ-RT Primer Mix、10×King RT Buffer、 RNase-Free ddH2O在室温（15-25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体。
以下操作步骤请在冰上进行。为了保证反应液配制的准确性，进行各项反应时，应先配制成Mix，然后再分装到每个反应管中。
2. 按照表1的基因组DNA的去除体系配制混合液，彻底混匀。简短离心，并置于42℃，孵育 3 min。然后置于冰上放置。
表1 gDNA去除反应体系
组成成分
使用量
5×gDNA Buffer
产品特点
反转录效率高：反转录效率可达95%以上；操作简单快速：反应体系配制简单，21 min完成cDNA第一链的合成；通读复杂模板：能够作用于GC含量高，二级结构复杂的RNA模板；样品普适性高：对不同物种来源及杂质较多的RNA模板的适用性高；后续兼容性好：后续配合荧光定量检测产品，灵敏度高、稳定性好。

罗氏第一链cDNA合成试剂盒Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 中文说明书

反应次数目录号反应次数04 379 012 00150次，包括10次对照反应04 896 866 001100次04 897 030 001200次试剂盒包装与含量小瓶/瓶盖标签适用于a) 04 379 012 001 b) 04 896 866 001 c) 04 897 030 0011红色TranscriptorReverseTranscriptase（逆转录酶）a) 1瓶，25 μl (20 U/μl)b) 1瓶，50 μl (20 U/μl)c) 2瓶，各50 μl (20 U/ μl)储存缓冲液：200 mM 磷酸钾，2 mM 二硫苏糖醇，0.2% Triton X-100(v/v)，50% 甘油(v/v)，pH 约为7.2∙2无色Transcriptor RTReaction Buffer(5×)（逆转录缓冲液）a) 1瓶，1 mlb) 1瓶，1 mlc) 2瓶，各1 ml5×浓度：250 mM Tris/HCl，150 mM KCl，40 mM MgCl2，pH约为8.5(25°C)∙3无色ProtectorRNase Inhibitor（RNase抑制剂）a) 1瓶，50 μl(40 U/μl)b) 1瓶，100 μl(40 U/μl)c) 2瓶，各100 μl(40 U/μl)储存缓冲液：20 mM Hepes-KOH，50 mM KCl，8 mM 二硫苏糖醇，50 % 甘油(v/v)，pH 约为7.6 (4°C)∙4黄色/ 紫色Deoxynuc-leo-tideMix（dNTP）a) 1瓶，100 μl(黄色瓶盖)b) 1瓶，200 μl(紫色瓶盖)c) 2瓶，各200 μl(紫色瓶盖)dATP, dCTP, dGTP, dTTP各10 mM∙5蓝色Anchored-oligo(dT)18Primer（锚定oligo(dT)18引物）a) 1瓶，100 μl(50 μM)b) 1瓶，200 μl(50 μM)c) 2瓶，各200 μl(50 μM)6Random Hexamera) 1瓶，100 μl(600 μM)蓝色Primer（随机引物）b) 1瓶，200 μl(600 μM)c) 2瓶，各200 μl(600 μM)7绿色Control RNA（对照RNA）a) 1瓶，20 μl(50 ng/μl)包含提取于永生细胞系(K562)的总RNA 片段稳定溶液∙8绿色Control Primer Mix PBGD（对照基因引物）a) 1瓶，40 μl5 μM 人类PBGD特异性正向与反向引物∙9(b和c为瓶7)无色Water, PCR-gradea) 1瓶，1 mlb) 2瓶，各1 mlc) 3瓶，各1 ml注意：货号为04 896 866 001和04 897030 001的产品不含有control试剂(瓶7和瓶8)，因此瓶7即为Water, PCR-grade。

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Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit 逆转录步骤
1，使用前解冻结冰的试剂
2，将试剂短暂离心
3，冰上操作：（操作RNA实验需要戴手套）
将模板与引物在PCR管上混合
试剂体积最终浓度
细胞总RNA 或 1 ug 总RNA 或10ng
多聚尾(A)+m RNA 多聚尾(A)+ mRNA
任选其中一个引物:
Anchored-oligo(dT)18 Primer, 1 ul 2.5 uM
50 pmol/ul (vial 5)
或Random Hexamer Primer, 2ul 60uM
600 pmol/ul (vial 6)
或 Sequence-Specific Primer 可变0.5-2.5 uM
1%DEPC水, (vials 7 or 9) 可变使总体积为 13 ul
总体积13ul
注：以上为初次实验的推荐浓度。

总RNA的适用浓度为10ug到5ng，
以及mRNA的适用浓度为1到100ng,当RNA模板浓度较低时添加10ug/ml 的MS2 RNA* 来稳定模板RNA。

4，（可选）65度水浴上述混合物10分钟，使模板引物混合物变性（确
保失活RNA二级结构），水浴后立即冰浴至少一分钟
5，往上述混合物继续加入以下试剂（冰上操作）
试剂体积最终浓度.
Transcriptor Reverse Transcriptase 4 ul 1×(8 mM MgCl2) Reaction Buffer, 5× conc. (vial 2)
Protector RNase Inhibitor, 0.5 ul
40 U/ul (vial 3)
20 U Deoxynucleotide Mix, 2 ul 每个1 mM 10 mM each (vial 4)
Transcriptor Reverse 0.5 ul 10U Transcriptase, 20 U/ul (vial 1)
最终体积20 ul
注：小心混合上述试剂，不要振荡，短暂离心使试剂沉在管底6，将PCR管放在PCR仪上孵育，孵育条件如下：
使用的引物目标mRNA长度孵育温度与时间Anchored-oligo(dT)18 不大于4kb 55度30分钟
大于4kb 50度60分钟
primer, 50 pmol/ul 或
Sequence–specific primer
Random hexamer primers, 不大于4kb 25度10分钟，然后55度
30分钟
600pmol/ul 大于4kB 25度10分钟，然后50度
60分钟
6,85℃水浴5分钟灭活逆转录酶
8、－20℃保存，或立即进行PCR。

注：Random hexamer primer: 主要用于细胞总RNA的逆转录
A anchored-oligo(dT)18 primers ：主要用于多聚尾(A)+m RNA的逆转录。