通用反转录试剂盒(M-MLV)使用说明
M-MLV逆转录酶 说明书
单体的分子量约为73kD，具有RNase H活性，无RNase的污染，可用于5kb以下第一链cDNA的合成。
产品来源：重组E.coli菌株,含有从莫洛尼氏鼠中克隆的莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MLV，Moloney
Murine Leukemia Virus）逆转录酶基因。
活性定义： 以poly(rA)为模板、oligo (dT) 为引物，在37°C条件下，10分钟内催化掺入1nmol的dTTP
3. 离心数秒使反应液聚集于PCR管底部。
4. 继续向上述反应液中加入以下试剂：
5×RT Buffer
4ul *注：也可以使用相对便宜的化学类试剂RNasafe（TIANGEN）
0.1 M DTT RNasin(40U/ul)*
2ul 代替RNasin，效果相同；由于RNasafe只在高温下起作用，需 1ul 在第一步中70℃保温之前加入，本体系中加入1ul即可。
产品纯度：200U的本酶和1ug的16S，23S rRNA在37℃下反应1小时，RNA的电泳条带不发生变化。 反应缓冲液：[5×RT Buffer] 250 mM Tris-HCl（PH 8.3），15 mM MgCl2，375 mM KCl. 反应条件：
z cDNA第一链的合成（反转录反应）：
1. 在无RNAase污染的PCR管中加入以下试剂，全量12ul：
Beijing Protein Institute (BPI) B-8 Airport Industrial Zone, Beijing, China, 101300
Tel: 86-10-80493132, Fax: 86-10-80485460
Oligo (dT)12-18(1ug/ul) 或随机引物（50-250ng）
逆转录试剂盒( transcriptor first strand cdna synthesis kit ) 说明书
3
04 379 012 001
Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit y Version 6.0
1. What this Product Does, continued
Vial/ Cap
Label
Store the kit at ؊15 to ؊25°C N Store Control RNA (vial 7 in
Cat. No 04 379 012 001) at —70°C or below.
y Version 6.0
Content version: September 2010
9 (7 for b,c) colorless
Water, PCR-grade
Content
a) Cat. No. 04 379 012 001 b) Cat. No. 04 896 866 001 c) Cat. No. 04 897 030 001
a) 1 vial, 1 ml b) 2 vials, each 1ml c) 3 vials, each 1 ml
L In Cat. No. 04 896 866 001 and Cat. No. 04 897 030 001 the control reagents (vial 7 and 8) are not included. Therefore, in these kits vial 7 is Water, PCR Grade.
Random Hexamer Primer
a) 1 vial, 100 l (600 M) b) 1 vial, 200 l (600 M) c) 2 vials, each 200 l (600 M)
1一步法荧光定量反转录PCR试剂盒
注意事项：
●当同时需要进行数次Real Time One Step qRT-PCR反应时，应先配制各种试剂的混合液（M aster M ix；其中 包括RNase-free ddH2O、Buffer、各种酶等），然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确， 减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验样品之间产生的误差。 ●使用Enzyme M ix和TRUEscript RTase时，分取之前要小心地瞬间离心收集到反应管底部；由于酶保存液中含 有高浓度的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。 ●2×qRT-PCR M ix内含Sybr Green I，保存或配制One Step qRT-PCR反应液时应避免强光照射。 ●为保证反应成功建议使用高质量的RNA模板。 ●不同的片段，所需最佳RNA模板用量不同，过多的RNA会抑制反应，建议根据反应调整模板用量。 ●只能使用特异性引物，不能使用 Oligo(dT) 和 Random Primer 进行反应。
TUREscript One Step qRT-PCR Kit
包 装 量：
目录编号 154101 154102
包装单位 25次 50次
使用说明书
组成
2×qRT-PCR M ix(Contains Sybr Green) Enzyme M ix (Contains HotM aster DNA Polymerase and RNasin) TRUEscript RTase
反应体系（50 μl）：
注意：2×qRT-PCR Buffer 低温时可能有结晶析出，应手心加热或者涡旋振荡恢复融解后使用。短期使用可放 4℃ 冰箱。
Agilent Real-time qPCR 检测 操作手册说明书
Real-time qPCR 检测操作手册1/ 6一、实验概述Real-time Quantitative PCR Detecting System ，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，也叫实时定量基因扩增荧光检测系统，简称qPCR 。
是一种在PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR 进程，最后通过特定数学原理对未知模板进行定量分析的方法，实现了PCR 从定性到定量的飞跃。
二、实验流程三、实验材料： 1.主要试剂试剂名称 试剂来源 Cat.No. Trizol 上海普飞 3101-100 M-MLV promega M1705 dNTPs promega U1240 oligo dT 上海生工 B0205 Bulge-LoopTM miRNA广州锐博 详见实验报告 qPCR Primer Set Rnase Inhibitor promega N2115 Primer(R&F) 上海生工 详见实验报告 SYBR Master MixtureTAKARADRR041B2/ 6样本收集Trizol 法抽取RNARNA 反转录获取cDNAReal-time qPCR2.主要器材器材名称来源Cat.NoNanodrop 分光光度计Thermo 2000/2000C稳压电泳仪上海天能EPS-600超细匀浆机FLUKO公司F6/10Real time PCR 仪器Agilent公司MX3000p反转录耗材Axygen四、实验步骤：1.总RNA 抽提（1）收取样品，Trizol 裂解。
细胞样品：收集细胞（6 孔板 80%细胞密度），2000 rpm 离心5min，去上清，细胞沉淀中加入1mL Trizol，充分混匀后室温静置 5 min，然后转移至新的 1.5 mL EP 管中；组织样品：将待研磨的组织样品从液氮或者-80℃冰箱中取出，无菌刀片于干冰上将组织样品切割成约 3 mm×3 mm×3 mm 大小，置于装有 1 mL Trizol 裂解液的 1.5mL EP 管中。
takara反转录试剂盒说明书
takara反转录试剂盒说明书Takara反转录试剂盒是一种用于研究RNA分子的试剂盒。
该试剂盒可以用于DNA的反转录，将RNA转录成DNA，并进行后续的PCR扩增。
反转录试剂盒在生命科学领域中起着非常重要的作用，因此在使用过程中需仔细阅读说明书并按照说明书进行操作。
一、试剂盒组成Takara反转录试剂盒主要包含以下拉玛：1.反转录酶：外源的M-MLV反转录酶，具有高度的反转录活性和优异的扩增效率等优良特性。
2.反转录缓冲液：针对反转录酶的酶切优化反转录缓冲液。
3.引物：随机9mers引物，适用于多种RNA逆转录的应用。
4.对照RNA：In Vitro转录的任意序列的RNA，用于反转录和后续PCR扩增反应的质控。
二、试剂盒使用方法1. RNA提取：在使用Takara反转录试剂盒之前，需要从样品中提取RNA。
2. 反转录反应：将RNA测序专用随机引物、针对反转录酶的反转录缓冲液、反转录酶和RNA样品混合，进行逆转录反应。
3. PCR扩增：反转录完成后，可以利用PCR扩增技术对转录所得DNA进行扩增，完成DNA序列的检测和分析。
三、试剂盒注意事项1. 避免多次冻融。
为保证试剂的稳定性，反转录试剂盒必须储存于-20℃及以下的冰箱中，避免多次冻融。
2. 操作时需佩戴手套。
操作时需佩戴手套，尽量避免手汗或皮脂的污染，影响试剂盒的效率和准确性。
3. 注意反转录缓冲液的稀释量。
反转录缓冲液的稀释量会影响反转录效果，因此需要按照说明书进行操作，精准稀释。
4. 注意反转录酶的用量。
不同反转录酶的最优用量不同，需要根据实验需要按照说明书或文献进行调整。
5. 确认对照RNA引物的扩增效果。
在进行PCR扩增前，需要先进行对照RNA引物的扩增，以确认反转录反应的正确性，避免因为反应偏差而引起的实验结果的偏差。
4. 根据实验需要进行调整。
反转录试剂盒虽然具有大量的优良特性，但是实验环境和实验条件的不同，会对反转录试剂盒的效果产生较大的影响，因此需要根据实验需要进行调整。
takara反转录试剂盒说明书
Code No. RR047A 研究用PrimeScript™RT reagent Kitwith gDNA Eraser(Perfect Real Time)说明书目录内容页码●制品说明1●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8●制品说明为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。
为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。
但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。
在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。
而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。
PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。
Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。
同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。
使用本制品合成的cDNA适用于SYBR® Green分析法和TaqMan®探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR Premix Ex Taq™ II（Tli RNaseH Plus）（Code No. RR820Q/A/B）、Probe qPCR Mix（Code No. RR391S/A/B）组合使用。
东盛生物 RT-PCR Kit（逆转录试剂盒） 说明书
0.6 μl RNasin , M-MLV ； 按下列条件进行反转录反应 42℃ 温浴 60 min（随即引物 37℃ 温浴 60 min） ； 5 终止反应 70℃ 温浴 5 min 终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃ 保存。 6 用 RNase-free ddH2O 将反应体系稀释到 50 μl ，取 2-5 μl 进行 PCR 扩增反应。
20 次逆转录反应，R1012 可进行 100 次逆转
录反应（20 μl 标准 PCR 反应体系，每次使用 M-MLV 1 μl）。
M-MLV 储存液 20 mM Tris-HCl (pH 7.5) 200 mM NaCl 0.1 mM EDTA 1 mபைடு நூலகம் DTT 0.01% NP-40 50% glycerol 5xfirst-strand buffer 成分 250 mM Tris-HCl (pH 8.3 at 25 ℃) 375 mM KCl 15 mM MgCl2 50 mM DTT 保存条件 各组分均-20℃保存，避免反复冻融。
●
在逆转录反应中经常加入 RNase 抑制剂以增加 cDNA 合成的长度和产量。RNase 抑制剂要在第一链合成反应中，在缓冲
液和还原剂（如 DTT）存在的条件下加入，因为 cDNA 合成前的过程会使抑制剂变性，从而释放结合的可以降解 RNA 的 RNase。蛋白 RNase 抑制剂仅防止 RNase A，B，C 对 RNA 的降解，并不能防止皮肤上的 RNase，因此尽管使用了这些抑 制剂，也要小心不要从手指上引入 RNase。
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------广州东盛生物科技有限公司 电话：020-87791356 传真：020-87791381 网址：
天根 一步法逆转录PCR试剂盒说明书
通用型一步法RT-PCR试剂盒说明书前言本试剂盒适用于对各种动、植物、病毒RNA进行PCR 检测。
用户可根据被分析基因，配合一对引物，或同时采用Taqman 荧光探针，先将提取的RNA反转录(reverse transcription).成cDNA，再经过聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)技术对特异性片段进行扩增，进行电泳或实时荧光分析。
一步法RT-PCR可使RT及PCR过程在单管中完成，比分开进行RT及PCR更方便。
由于不需要在RT完成后打开反应管，尽可能地避免了样品间的相互污染。
规格20人份适用仪器适用于各种普通PCR仪器和实时荧光PCR仪器。
试剂盒组成试剂准备根据下表配制反应液：振荡混匀后，按每管 40 μl(可根据需要调整)分装，备用。
PCR扩增将均一化后的RNA提取样本10 μl加入各反应管，混匀、离心后，置普通PCR仪器或实时荧光PCR仪器上进行扩增及实时检测。
结果判断扩增产物可直接进行电泳检测；实时荧光检测可根据相应仪器的配套软件进行结果分析。
保存及有效期-20℃保存，有效期为6个月。
注意事项1. 开始检测前请仔细阅读本说明书全文。
2. 整个检测过程中，反应体系的配制、样本处理及加样、PCR扩增（荧光检测）应分区进行以避免污染。
3. 操作人员应戴口罩，经常更换一次性手套，以避免RNA酶的污染；实验中所用器具均应经过除RNA酶处理。
4. 试剂盒组成中的试剂使用前应充分融化并混匀。
5. 进行实时荧光分析时，应使用透光性能较好的一次性薄壁离心管；.荧光探针应避光保存，加入缓冲液中后，应尽快进行扩增。
6. 注意适当处理检测中遗留的样品、扩增产物及可能被污染的试剂。
生产企业：上海蓝创生物科技发展有限公司。
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通用反转录试剂盒(M-MLV)使用说明
货号：RP1105
规格：50T/100T
保存：-20℃保存，避免反复冻融，复检期为1年。
产品内容：
试剂盒组成50次100次
M-MLV(200U/μL)50μL50μL×2
5×M-MLV Buffer200μL400μL
(10uM)100μL200μL
Oligo(dT)
16
RNasin(40U/μL)25μL50μL
dNTPs(10mM)50μL100μL
O1mL1mL×2
RNase-free ddH
2
说明书1份1份
产品简介：
通用反转录试剂盒适用于各种RNA制品的反转录反应。
它采用M-MLV进行反转录反应，能够获得较长的反转录产物用于后续的PCR扩增和分子克隆实验。
通用反转录试剂盒中配置的酶为进口的酶。
RT酶采用进口的M-MLV，所以cDNA更长，基因的信息保留得更完整！反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。
通用反转录试剂盒可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
操作步骤：
一、反转录反应
1、在冰浴的无RNase的离心管中加入如下反应成分：
1-5μg总RNA或50-500ng mRNA
2μL Oligo(dT)
或2pmole基因特异性引物
16
O至14.5μL
补RNase-free ddH
2
2、70℃保温5min后迅速在冰上冷却2min，简短离心收集反应液后加入以下各组分：
4μL5×M-MLV Buffer
1μL dNTPs
0.5μL RNasin
1μL M-MLV
3、42℃温浴60min，如果是用随机引物，请先将离心管置25℃温浴10min，再42℃温浴60min。
4、95℃加热5min终止反应，置冰上进行后续实验或-20℃保存。
5、若用于后续PCR扩增,用RNase-free ddH2O将反应体系稀释到50μL，取2-5μL作为PCR 反应模板。
注意事项：
1、用于cDNA合成反应的相关试剂和耗材尽可能用DEPC进行处理，并在高压灭菌后使用。
有些试剂不能高压灭菌时，首先用经过灭菌的器具、水等配制溶液后，再将溶液进行过滤除菌处理。
2、试剂盒的各组分应在-20℃保存，避免反复冻融，有效期12个月。
3、RNA样品要避免反复多次冻融，应使RNA在冰浴中处于融化状态。
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