关于2020年度山东省科学技术奖初评答辩的预备通知(2020)
省科学技术奖励办法及实施细则

(五)报奖时限及要求:
已通过初评要求撤回的项目需间隔一年以上才能再 次推荐
连续两年参加评审未予授奖的,如再次推荐须隔一年进行
同一项目已经获得国家科技奖的,不再推荐省科学 技术奖
凡存在知识产权以及项目完成单位、完成人员等方面争议 的,在争议未解决前不得推荐省科学技术奖 法律、法规规定必须取得有关许可证,且直接关系到人身 和社会安全、公共利益的项目,如动植物新品种、食品、 药品、基因工程技术和产品等,在未获得主管行政部门批 准之前,不得推荐省科学技术奖
(3)技术开发项目:
是指企事业单位积极开展多种形式的科技合作,充分利 用社会科技资源,针对行业或企业技术需求,开展技术开 发、科技成果转化与产业化等科技创新活动,促进行业或 企业科技进步,完成具有显著市场价值的产品、技术、工 艺、材料、设计和生物品种及其应用推广。重点鼓励:企 业技术创新项目。
(6) 软科学项目:
是指在有关战略、政策、规划、评价、预测、科技立法 及有关管理科学与政策科学研究中,做出创造性贡献并经 实践证明取得显著的综合社会经济效益的软科学研究成果。 (为管理与决策服务)
一等奖:项目研究在理论上有重大创新,方法上有较大突 破,达到国内领先水平,其研究成果对决策管理已产生的 作用很大,被社会承认并产生显著的社会或经济效益的;
2020年度山东省科学技术奖申报项目公示【模板】

2020年度山东省科学技术奖申报项目公示一、基本情况1 项目名称:Dirac费米子体系纳米结构的电子性质研究2 申报奖种:山东省自然科学奖3 申报等级:二等奖二、提名单位意见陈丽教授及其合作者以第一性原理研究Dirac费米子体系纳米结构的电子性质。
研究不同的二维Dirac材料(六角结构的石墨烯等)的相互作用、应变效应、电子结构和输运性质。
澄清了这些二维Dirac材料的各种相互作用对其体系电子结构和纳米结构边缘电子态的影响规律。
发展了能用于高灵敏的电子器件的材料体系,达到了国内外先进水平,取得了重要的研究成果。
与本项目相关的论文发表在国际重要期刊《Carbon》、《Nano Lett.》、《Phys.Rev.B》、《Appl.Phys.Lett.》和《ChemPhysChem》等。
相关研究工作受到国内外同行专家的广泛关注,并对所做工作给予了高度评价。
论文单篇SCI引用次数高达94次,其中SCI他引次数高达73次。
8篇论文影响因子共计39.258,SCI引用总次数293次,其中SCI他引次数共计229次。
对照山东省科学技术奖授奖条件,推荐该项目申报山东省自然科学二等奖。
我单位认真审阅了该项目推荐书及其附件材料,确认全部材料真实有效,相关栏目均符合山东省科学技术奖励委员会办公室的填写要求。
按照要求,我单位和项目合作单位都已对该项目的拟推荐情况进行了公示,公示期间无异议。
三、项目简介Dirac费米子体系如石墨烯和二维拓扑绝缘体的物理性质引起了广泛的关注。
应变效应、吸附效应和电场效应等引起电子结构变化机理的澄清,将为Dirac费米子体系纳米结构在电子器件等领域中的应用提供科学基础和指导。
由XX大学和XX 大学合作,针对上述问题开展了Dirac费米子体系纳米结构的电子性质研究。
1.二维Dirac材料薄膜拓扑性质的研究利用密度泛函理论计算,针对其薄膜外延生长在衬底上引起的晶格失配和界面电荷转移的影响,用应变和垂直的电场系统模拟衬底作用,研究原子吸附和电场对Bi、Sn和As膜的拓扑性质的调制。
山东省人民政府关于2012年度山东省科学技术奖励的决定

山东省人民政府关于2012年度山东省科学技术奖励的决定文章属性•【制定机关】山东省人民政府•【公布日期】2012.11.21•【字号】鲁政发[2012]44号•【施行日期】2012.11.21•【效力等级】地方规范性文件•【时效性】现行有效•【主题分类】科技奖励正文山东省人民政府关于2012年度山东省科学技术奖励的决定(鲁政发〔2012〕44号)各市人民政府,各县(市、区)人民政府,省政府各部门、各直属机构,各大企业,各高等院校:为贯彻落实党的十八大精神和全国科技创新大会精神,鼓励科学技术创新,大力实施创新驱动发展战略,根据《山东省科学技术奖励办法》,经山东省科学技术奖励委员会严格评审,省政府决定:授予程林教授、赵振东研究员2人2012年度山东省科学技术最高奖;授予“植物生殖器官的发育与激素调节”1项成果山东省自然科学奖一等奖;授予“新型激光束和激光器件及其波前检测和成像的理论与实验研究”等7项成果山东省自然科学奖二等奖;授予“中国边缘海沉积矿物学的研究”等6项成果山东省自然科学奖三等奖;授予“海洋生物蛋白资源制备系列功能寡肽和功能蛋白技术与应用”等2项成果山东省技术发明奖一等奖;授予“稀土永磁与电磁混合励磁发电系统稳压控制技术及应用”等7项成果山东省技术发明奖二等奖;授予“开放空间高含硫天然气管线泄漏激光在线监测系统”等4项成果山东省技术发明奖三等奖;授予“大型快速高效数控全自动冲压生产线”等38项成果山东省科学技术进步奖一等奖;授予“苹果采后增值关键技术及产业化”等169项成果山东省科学技术进步奖二等奖;授予“家庭媒体中心的研究与产业化”等265项成果山东省科学技术进步奖三等奖;授予法国费尔南德·彭斯博士、美国邢明照教授2名外国专家山东省国际科学技术合作奖。
希望获奖单位和个人再接再厉,勇攀高峰,再创新业绩。
全省科学技术工作者要向获奖科技人员学习,认真学习贯彻落实党的十八大精神,科学务实,积极作为,潜心钻研,勇于创新,不断提高自主创新能力,大力推进创新型省份建设,为加快建设经济文化强省,谱写山东人民美好生活新篇章作出新的更大贡献。
2020年度国家科学技术进步奖提名书(Word版)

2020年度国家科学技术奖励提名工作手册国家科学技术奖励工作办公室2019年11月编制说明为深入贯彻国务院办公厅印发的《关于深化科技奖励制度改革的方案》(国办函〔2017〕55号)精神,做好2020年度国家科学技术奖励提名工作,我办编制了《2020年度国家科学技术奖励提名工作手册》。
主要内容包括:国家科学技术奖励年度工作日程、国家科学技术奖各奖种提名书及填写要求以及有关政策规定等。
本手册内容以国家科学技术奖励工作办公室网站()发布的版本为准。
国家科学技术奖励工作办公室2019年11月目录国家科学技术奖励年度工作日程 (1)国家最高科学技术奖提名书.................... 错误!未定义书签。
国家自然科学奖提名书........................ 错误!未定义书签。
国家技术发明奖提名书........................ 错误!未定义书签。
国家科学技术进步奖提名书 (2)关于国家科学技术进步奖科普项目提名评审补充说明错误!未定义书签。
国家科学技术进步奖(创新团队)提名书........ 错误!未定义书签。
关于国家科学技术进步奖(创新团队)提名工作的补充说明错误!未定义书签。
中华人民共和国国际科学技术合作奖提名书(候选人)错误!未定义书签。
中华人民共和国国际科学技术合作奖提名书(候选组织)错误!未定义书签。
国家科学技术奖提名公示内容.................. 错误!未定义书签。
国家科学技术奖提名材料形式审查不合格内容.... 错误!未定义书签。
关于台湾居民作为国家科学技术奖候选人的补充说明 (145)关于外国人作为国家自然科学奖、国家技术发明奖、国家科学技术进步奖候选人的补充说明 (146)国家科学技术奖励年度工作日程(2020年)国家科学技术进步奖提名书( 年度)一、项目基本情况专业评审组:序号:(适用于提名机构和部门)(适用于提名专家)三、项目简介(限1页)四、主要科技创新1. 主要科技创新(限5页)2. 科技局限性(限1页)四、主要科技创新(保密要点)(仅限涉密项目填写,限1页)五、客观评价(限2页。
2020年度山东省科学技术奖励项目公示结果报告

2020年度山东省科学技术奖励项目公示结果报告
山东省教育厅:
根据山东省科学技术奖励委员会办公室《关于2020年度山东省科学技术奖提名工作的通知》的要求,对我单位拟申报山东省自然科学奖一等奖的项目《鸟类若干器官结构的演化研究》的项目名称、提名单位意见、项目简介、客观评价、代表性论文专著目录、主要完成人情况、完成人合作关系说明等内容进行了公示,公示期为2019年12月5日至12 月11 日。
公示时间大于五个工作日。
经所在成果完成单位公示后,对以上公示内容等方面无异议。
(单位公章)
2019.12.5。
2020年度山东省科学技术奖励受理项目公示

236 轮 胎 工 业2020年第40卷表4 开发配方轮胎和生产配方轮胎胎面胶物理性能对比项 目开发配方+优化硫化工艺开发配方+原硫化工艺生产配方密度/(Mg·m-3) 1.114 1.116 1.145邵尔A型硬度/度646261 100%定伸应力/MPa 3.6 3.2 2.8 300%定伸应力/MPa18.416.814.7拉伸强度/MPa30.227.024.5拉断伸长率/%46845052260 ℃下的损耗因子0.154 30.188 20.176 7强度均进一步提高,且60 ℃下损耗因子明显减小,各项性能达到预期目标值,与竞品轮胎水平相当。
5 结论(1)对竞品18.00R25港口专用工程机械子午线轮胎进行胎面胶物理性能和化学组分剖析,并通过分析数据确定开发配方的目标值。
(2)采用参照竞品轮胎开发的胎面胶配方,并对轮胎的硫化工艺进行优化,可使18.00R25港口专用工程机械子午线轮胎胎面胶的物理性能达到预期目标值,与竞品轮胎水平相当。
参考文献:[1]陈勇前,何庆,杨林,等.甲基乙烯基硅橡胶/溶聚丁苯橡胶并用胶在轮胎胎面胶中的应用研究[J].橡胶工业,2019,66(3):199-202.[2]高利,刘娟.地下矿专用工程机械子午线轮胎胎面基部胶配方开发[J].轮胎工业,2019,39(3):161-162.[3]武栴丞,李文东,杨茂林,等.巨型工程机械子午线轮胎的变温硫化工艺研究[J].橡胶工业,2019,66(2):142-145.收稿日期:2019-10-29Development of Tread Compound of 18.00R25 Off-The-RoadRadial Tire for PortLIU Juan,GAO Li,XU Xin’an(Triangle Tire Co.,Ltd,Weihai 264200,China)Abstract:The tread compound of 18.00R25 off-the-road radial tire for port applications was developed by analyzing composition and testing physical properties targeting the performance of a well-known foreign brand tire,and the curing process of the tire was optimized.The test results showed that the properties of the new tread compound and optimized curing process of the tread compound of 18.00R25 off-the-road radial tire for port applications reached the designed values and were equivalent to the level of the competitive tire.Key words:off-the-road radial tire;tread compound;port application;component analysis;physical property;curing process;loss factor2020年度山东省科学技术奖励受理项目公示2020年2月20日,山东省科学技术奖励委员会办公室公示《2020年度山东省科学技术奖励受理项目公示名单》。
2020年潍坊市科学技术奖提名书

潍坊市科学技术最高奖提名书(2020年度)一、候选人基本情况三、工作简历四、候选人的主要科学技术成就和贡献五、候选人论文(论著)发表情况六、候选人论文(论著)被引用情况- 8 -八、候选人曾获科技奖励情况九、候选人工作单位意见十、主要附件目录1.公开发表的代表性论文、论著2.他人引用的代表性引文、论著3.知识产权证明4.重要获奖证书5.其他证明十一、主要附件请按下列顺序提供有关附件:1.公开发表的代表性论文、论著2.他人引用的代表性引文、论著3.知识产权证明4.重要获奖证书5.其他证明潍坊市自然科学奖提名书(2020年度)一、项目基本情况学科评审组:序号:编号:二、提名单位意见二、专家提名意见三、项目简介四、重要科学发现五、第三方评价六、代表性论文、论著目录承诺:上述论文论著用于报奖的情况,已征得未列入项目主要完成人的作者的同意。
第一完成人签名:- 19 -七、代表性论文、论著被他人引用的情况- 20 -八、完成人情况表九、主要附件目录按下列顺序排列附件:1. 代表性论文、论著2. 他人引用代表性引文、论著3. 检索报告结论4. 其他证明十、主要附件请按下列顺序提供附件:1. 代表性论文、论著2. 他人引用代表性引文、论著3. 检索报告结论4. 其他证明潍坊市科学技术进步奖提名书(2020年度)一、项目基本情况专业评审组:序号:奖励类别:编号:三、项目简介四、主要科技创新五、第三方评价六、推广应用情况、经济效益和社会效益七、本项目曾获科技奖励情况八、完成人情况表九、完成单位情况表十、支撑技术创新点的主要知识产权证明目录承诺:上述知识产权用于报奖的情况,已征得未列入项目主要完成人的权利人(发明专利指发明人)的同意。
第一完成人签名:- 35 -十一、支撑技术创新点的主要论文、论著目录承诺:上述论文论著用于报奖的情况,已征得未列入项目主要完成人的作者的同意。
第一完成人签名:- 36 -十二、主要附件目录按下列顺序排列附件:1.知识产权证明2.论文、论著目录3.评价证明及国家法律法规要求审批的批准文件4.主要应用证明5.其他证明十三、主要附件请按下列顺序提供附件:1.知识产权证明2.论文、论著证明3.评价证明及国家法律法规要求审批的批准文件4.应用证明(按提供格式填写,主要提供重要的、有代表性应用单位的证明)5.其他证明潍坊市国际科学技术合作奖提名书(2020年度)一、基本情况序号:编号:二、提名单位意见二、专家提名意见三、专家简历或组织简介(中、英文)四、主要贡献(中、英文)五、合作单位意见六、主要附件目录按下列顺序排列附件:1.技术评价证明。
创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用

㊀山东农业科学㊀2024ꎬ56(1):147~155ShandongAgriculturalSciences㊀DOI:10.14083/j.issn.1001-4942.2024.01.020收稿日期:2023-04-07基金项目:国家重点研发计划 食品安全关键技术研发 重点专项(2017YFC1601400)ꎻ山东省重点研发计划项目(2022TZXD0022)ꎻ泰山学者工程专项经费资助(tsqn201909168)ꎻ山东省自然科学基金青年基金项目(ZR2020QC226)ꎻ济南市 新高校20条 项目(202228062)ꎻ山东省农业科学院国际科技合作专项(CXGC2022F09)作者简介:袁玮(1997 )ꎬ女ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向为食品微生物检测技术研究ꎮE-mail:794393617@qq.com通信作者:陈相艳(1973 )ꎬ女ꎬ研究员ꎬ研究方向为食源性病原微生物检测及标准物质研究ꎮE-mail:315478845@qq.com创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用袁玮1ꎬ2ꎬ陈蕾蕾1ꎬ2ꎬ杨金玉1ꎬ周庆新1ꎬ2ꎬ裘纪莹1ꎬ赵双枝1ꎬ付恩君1ꎬ赵国琰2ꎬ陈相艳1(1.山东省农业科学院农产品加工与营养研究所/山东省农产品精深加工技术重点实验室/农业农村部新食品资源加工重点实验室ꎬ山东济南㊀250100ꎻ2.山东师范大学生命科学学院ꎬ山东济南㊀250014)㊀㊀摘要:针对我国缺乏适用于创伤弧菌检测的质粒标准样品的现状ꎬ本研究开展了创伤弧菌鉴定即用型定性质粒标准样品的研制和应用工作ꎮ首先构建了创伤弧菌毒力基因vvhA的重组质粒ꎬ经测序验证后制备成质粒标准样品冻干粉ꎬ然后对其进行PCR定性检测及紫外分光光度计法定量分析ꎮ均匀性检验结果表明ꎬ样品间无显著差异ꎬ均匀性良好ꎬ符合预期目标ꎻ短期稳定性检验结果表明ꎬ样品能在4ħ㊁37ħ条件下稳定保存14天ꎻ长期稳定性检验结果表明ꎬ样品能在-20ħ条件下稳定保存至少12个月ꎮ研究结果表明ꎬ创伤弧菌质粒定性标准样品的均匀性和稳定性均符合国家定性标准样品的要求ꎬ为创伤弧菌的快速㊁高通量的定性鉴定分析提供了可靠的参考物质ꎮ将标准样品应用于鱼类㊁贝类等10份海鲜类食品样品的检测中ꎬ经传统培养法验证ꎬ检测结果准确无误ꎮ本研究所研制的创伤弧菌质粒定性标准样品具有较好的商业应用潜力ꎬ为其在食品检测领域的推广应用奠定了重要基础ꎮ关键词:创伤弧菌ꎻ质粒定性标准样品ꎻ水产品ꎻ检测中图分类号:S852.61㊀㊀文献标识号:A㊀㊀文章编号:1001-4942(2024)01-0147-09DevelopmentofCertifiedPlasmidReferenceMaterialforHemolysinGenevvhAofVibriovulnificusandIt sApplicationinAquaticProductsDetectionYuanWei1ꎬ2ꎬChenLeilei1ꎬ2ꎬYangJinyu1ꎬZhouQingxin1ꎬ2ꎬQiuJiying1ꎬZhaoShuangzhi1ꎬFuEnjun1ꎬZhaoGuoyan2ꎬChenXiangyan1(1.InstituteofFood&NutritionScienceandTechnologyꎬShandongAcademyofAgriculturalSciences/KeyLaboratoryofAgro ̄productsProcessingTechnologyofShandongProvince/KeyLaboratoryofNovelFoodResourcesProcessingꎬMinistryofAgricultureandRuralAffairsꎬJinan250100ꎬChinaꎻ2.CollegeofLifeSciencesꎬShandongNormalUniversityꎬJinan250014ꎬChina)Abstract㊀DuetolackofplasmidstandardsamplesuitablefordetectionofVibriovulnificusinChinaꎬaready ̄to ̄usecertifiedplasmidreferencematerialwasdevelopedherein.TherecombinantplasmidsofvvhAgeneofV.vulnificuswasconstructedfirstlyandthentheirfreeze ̄driedplasmidpowderswerepreparedaftersequen ̄cingverificationandbeingdetectedbyPCRandUVspectrophotometry.Theuniformitytestshowednosignifi ̄cantdifferencebetweensamplesꎬandtheuniformitywasasexpected.Thestabilitytestshowedthatthepre ̄paredplasmidsamplescouldbestablypreservedfor14daysat4ħor37ħꎬandforatleast12monthsat-20ħ.TheoverallresultsindicatedthattheuniformityandstabilityofthevvhAgenerecombinantplasmidqualitativestandardsamplescouldmeettherequirementsofnationalqualitativestandardsamplesꎬwhichpro ̄videdreliablereferencematerialforrapidandhigh ̄throughputqualitativeidentificationofV.vulnificus.Thesampleswereusedaspositivecontrolinthedetectionof10seafoodsamplessuchasfishandshellfish.andtheresultswereconfirmedtobeaccuratebytraditionalculturemethod.AboveallꎬthequalitativestandardsamplesofvvhAgenerecombinantplasmiddevelopedinthisstudyhadgreatpotentialincommercialapplicationꎬlayinganimportantfoundationforitsapplicationinfooddetection.Keywords㊀VibriovulnificusꎻCertifiedplasmidreferencematerialꎻAquaticproductsꎻDetection㊀㊀创伤弧菌(Vibriovulnificus)是一种革兰氏阴性菌ꎬ主要特性为嗜盐㊁喜温ꎬ自然分布于世界各地沿海和河口水域[1-2]ꎬ是一种人畜共患病原菌ꎬ容易感染鱼㊁虾㊁牡蛎㊁蛤㊁螃蟹等海产品ꎬ人类通过生食或食用未完全煮熟的海产品㊁破损皮肤直接接触被其污染的海水或海产品而患病[3]ꎮ创伤弧菌与霍乱弧菌㊁副溶血弧菌并称为人类三大致病弧菌[4]ꎬ弧菌感染病例具有明显的季节性ꎬ大多数发生在夏季和初秋气温较高的时期[5]ꎮ随着全球气候变暖㊁海洋温度升高等自然条件的变化ꎬ创伤弧菌的感染率也逐年增加ꎮ在全世界范围内创伤弧菌感染的死亡率高达60%ꎬ在美国约为33%ꎬ使其成为严重的公共卫生和食品安全问题[6-7]ꎮ创伤弧菌感染的主要症状包括肠胃炎㊁原发创伤性感染㊁败血症和坏死性筋膜炎等ꎬ免疫力低下或患有糖尿病㊁肝脏疾病等慢性基础病的患者属于易感人群[8]ꎮ创伤弧菌伤口感染通常以肿胀㊁红斑和剧烈疼痛为特征ꎬ潜伏期短ꎬ发病迅速ꎬ病变经常演变为可坏死的囊泡或充满液体的大泡ꎬ最终引起多脏器衰竭[9]ꎮ创伤弧菌菌体产生的创伤弧菌外毒素通过特定的毒力机制引发疾病ꎮ创伤弧菌毒力因子主要包括溶细胞素㊁铁载体㊁金属蛋白酶㊁荚膜多糖等[10]ꎬ由vvhA基因编码的创伤弧菌溶细胞素是唯一分泌到细胞外的外毒素ꎬ具有创伤弧菌种属特异性ꎬ可作为鉴定创伤弧菌的指标[11]ꎮ当前ꎬ对创伤弧菌进行定量检测主要通过平板计数㊁MPN法等传统培养法ꎬ这些方法需要进行过夜培养㊁选择性平板分离㊁生化鉴定㊁血清学检测等繁琐的试验步骤ꎬ不仅耗时费力ꎬ同时样本中杂菌的过量繁殖也会对鉴别结果产生影响ꎮ另外ꎬ由于水产品中的创伤弧菌通常处于 活的且不可培养 的状态[12-13]ꎬ传统的培养方法很难对该部分创伤弧菌进行有效鉴定ꎬ严重降低了检测结果的准确度ꎮ作为最危险的食源性细菌之一ꎬ创伤弧菌造成了95%的海鲜相关死亡ꎬ已成为一个主要的食品安全问题[14]ꎮ随着食品供应链的全球化ꎬ创伤弧菌的定期监测变得更加重要ꎮ为了满足当下快速㊁高通量检测的需求ꎬ分子生物学方法在食品微生物的检测中得到了越来越广泛的应用ꎬ但相关的参考物质相对匮乏ꎮ食源性微生物检测即用型标准样品的研制ꎬ有助于解决目前国内食品微生物检测中存在的参考物质不足的难题ꎬ使具有自主知识产权的标准样品在相关领域得到更好的推广和应用ꎬ从而摆脱对国外标准样品的依赖ꎮ因此ꎬ建立创伤弧菌鉴定检测即用型质粒定性标准样品用于其快速㊁高通量鉴定ꎬ对提高水产品的质量安全㊁保证人类健康具有重要意义ꎮ1㊀材料与方法1.1㊀试验材料1.1.1㊀菌株来源㊀创伤弧菌(CICC21615)来源于中国工业微生物保藏中心ꎮ1.1.2㊀主要试剂㊀琼脂糖购自上海贝晶生物技术有限公司ꎻPNCC增菌液基础培养基㊁PNCC添加剂㊁mCPC琼脂基础培养基㊁多粘菌素E㊁多粘菌素B购自北京陆桥技术股份有限公司ꎻ核酸染料GelStain㊁Trans15000marker㊁Trans2000mark ̄er㊁质粒大提试剂盒购自北京全式金生物技术股份有限公司ꎻ50ˑTAE缓冲溶液购自生工生物工程(上海)股份有限公司ꎻ2ˑTaqPCRMix㊁琼脂糖841山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第56卷㊀凝胶DNA回收试剂盒㊁pLB零背景快速克隆试剂盒购自天根生化科技(北京)有限公司ꎮ1.1.3㊀仪器和设备㊀ZHWY-200H恒温培养振荡器购自上海智城分析仪器制造有限公司ꎻSW-CJ-2D双人净化工作台购自苏州净化设备有限公司ꎻC1000TouchPCR仪㊁NanoDropTM2000超微量分光光度计购自赛默飞世尔科技公司ꎻJY600C水平电泳仪㊁JY04S-3C凝胶成像系统购于北京君意东方电泳设备有限公司ꎮ1.2㊀试验方法1.2.1㊀重组质粒的获取与验证㊀创伤弧菌vvhA基因片段由生工生物工程(上海)股份有限公司合成ꎬ获得重组质粒PUC-SP-vvhAꎬ并保存于大肠埃希氏菌Top10菌株中ꎮ依据GB4789.44 2020«食品安全国家标准食品微生物学检验创伤弧菌检验»[15]中创伤弧菌PCR检测的引物序列ꎬ由生工生物工程(上海)股份有限公司合成引物(表1)ꎮ以重组质粒为模板ꎬ利用创伤弧菌鉴定引物ꎬ对目的基因进行PCR扩增ꎬ扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析ꎬ使用琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒对PCR产物进行胶回收ꎬ使用pLB零背景快速克隆试剂盒将PCR纯化产物连接至pLB-simpleVector上ꎬ并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞ꎬ置于37ħ培养箱培养12hꎮ从平板上挑取单菌落ꎬ经PCR反应鉴定为阳性的克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序鉴定ꎬ测序结果与预期一致的ꎬ即为验证正确的重组质粒ꎮ将携带正确重组质粒的大肠埃希氏菌于-80ħ超低温冰箱中甘油管保存ꎮ㊀㊀表1㊀创伤弧菌vvhA基因的引物序列引物名称引物序列(5ᶄң3ᶄ)片段大小/bpvvhA-FCCGCGGTACAGGTTGGCGCAvvhA-RCGCCACCCACTTTCGGGCC5191.2.2㊀重组质粒的提取㊀将携带重组质粒的大肠埃希氏菌甘油管解冻ꎬ接入4mLLB液体培养基中ꎬ放入200r/min的振荡摇床中37ħ培养12hꎬ取2mL种子液转接于200mL的LB液体培养基中扩大培养ꎬ获取大量携带重组质粒大肠埃希氏菌的培养液ꎬ利用细菌质粒大提试剂盒提取质粒ꎮ琼脂糖凝胶电泳分析质粒完整性ꎬPCR验证目的基因ꎬ紫外分光光度计检测质粒的浓度和纯度ꎮ1.2.3㊀重组质粒的含量检测㊀取重组质粒样品1μLꎬ于NanoDropTM2000超微量分光光度计中检测浓度ꎬ每管检测两次ꎮ1.2.4㊀重组质粒的分装㊀将大提的质粒样品混合至1管中ꎬ采用紫外分光光度计测定浓度ꎬ然后用无菌去离子水稀释至20ng/μLꎬ每管100μL分装至螺口冻存管中ꎬ贴上标签ꎮ1.2.5㊀重组质粒的冷冻干燥㊀由于质粒样品较为稳定ꎬ分装后可直接冻干ꎮ在-25ħ㊁真空度为50Pa条件下冻干20hꎮ1.2.6㊀质粒定性标准样品的均匀性分析㊀按照随机抽号系统抽取的号码ꎬ抽取质粒定性标准样品12管ꎬ用100μL无菌水溶解质粒冻干粉ꎮ取0.5μL溶解的质粒样品作为PCR模板ꎬ按照1.2.1方法进行基因定性检测ꎻ取质粒样品2μLꎬ按照1.2.1方法琼脂糖凝胶电泳分析质粒样品的完整性ꎻ取质粒样品1μLꎬ采用紫外分光光度计法进行复溶质粒样品的定量试验ꎬ检测样品的浓度ꎬ每管测两次ꎬ核酸含量=核酸浓度ˑ水化体积ꎬ核酸含量结果统计分析采用方差分析法ꎮ1.2.7㊀质粒定性标准样品的稳定性分析㊀稳定性检验方法同均匀性检验ꎬ核酸含量结果统计分析采用单因素方差分析法ꎮ短期稳定性检验:采取两种短期稳定性试验ꎮ第一种模拟冰袋运输:在4ħ条件下的短期储存稳定性试验ꎬ随机取样21管置于4ħ保温箱ꎬ分别在第1㊁3㊁5㊁7㊁9㊁11㊁14天每天检测3管ꎬ每管2个重复ꎻ第二种模拟高温运输:在37ħ条件下稳定性试验ꎬ随机取样21管置于37ħ保温箱ꎬ分别在第1㊁3㊁5㊁7㊁9㊁11㊁14天时每天检测3管ꎬ每管2个重复ꎮ长期稳定性检验:质粒样品经冷冻干燥后ꎬ需要在-20ħ条件下长期冷冻保存ꎮ为了测定质粒样品长期保存时间及其稳定性ꎬ每次检测时ꎬ从冷冻样品中随机取出3管样品ꎬ每管重复2次ꎮ抽样时间点遵循先密后疏的原则ꎬ分别在第1㊁2㊁4㊁6㊁8㊁10㊁12个月共7个时间点抽样检测ꎮ1.2.8㊀创伤弧菌质粒定性标准样品在食品检测中的应用㊀食品样本的前处理:将购买的食品样本按照GB4789.44 2020要求处理ꎬ在无菌条件941㊀第1期㊀㊀㊀㊀袁玮ꎬ等:创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用下ꎬ称取鲫鱼㊁偏口鱼㊁银鲳鱼㊁鲤鱼㊁鲅鱼㊁黄花鱼6种鱼类样品的表面组织㊁肠和腮各25gꎬ花蛤㊁海蛎子和生蚝3种贝类样品内容物各25gꎬ明虾的头足部组织25gꎬ分别放入含225mLPNCC增菌液的无菌均质袋ꎬ用拍打式无菌均质器拍打2min制成样品匀液ꎻ将均质袋放入培养箱37ħ培养18h获得增菌液ꎬ取距液面1cm深处菌液1mL放入离心管中ꎬ9000r/min离心3minꎬ去上清ꎻ用1mLPBS磷酸盐缓冲液悬浮清洗后9000r/min离心3minꎬ去上清ꎬ重复2次ꎻ加入1mL无菌去离子水ꎬ煮沸10minꎬ12000r/min离心5minꎬ吸取上清液ꎮPCR分析:将上清液用作PCR反应的DNA模板ꎻ随机抽取1管创伤弧菌重组质粒定性标准样品ꎬ加入100μL无菌去离子水溶解ꎬ作为阳性对照ꎻ将大肠埃希氏菌CICC10003基因组DNA冻干粉用300μL无菌水溶解(终浓度为20ng/μL)后作为阴性对照ꎻ无菌去离子水为空白对照ꎬ按照1.2.1的方法进行PCR分析ꎮ创伤弧菌的分离验证:取检测为阳性的食品样本的增菌液ꎬ用接种环将其划线接种于CC平板和mCPC平板ꎬ37ħ培养18hꎬ验证菌落形态是否符合创伤弧菌菌落形态特征ꎬ即圆形㊁扁平ꎬ光照下透明但中心不透明的黄色或橘黄色菌落ꎬ直径1~2mmꎮ创伤弧菌的生化鉴定:按照GB4789.442020进行创伤弧菌的培养和生化特性鉴定ꎮ1.3㊀数据统计与分析使用SPSS26.0软件的ANOVA法进行单因素方差分析ꎬ统计各处理组之间的差异性ꎬ数据用平均值ʃ标准误 表示ꎬP<0.05表示差异显著ꎮ2㊀结果与分析2.1㊀创伤弧菌重组质粒的验证以创伤弧菌重组质粒为模板ꎬ对其进行目的基因PCR扩增验证ꎬ以大肠埃希氏菌CICC10003为阴性对照ꎬ无菌去离子水为空白对照ꎮ琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增结果(图1A)显示ꎬ创伤弧菌重组质粒vvhA基因为阳性ꎬ条带清晰ꎬ片段大小为519bpꎬ符合目的条带大小ꎬ说明成功构建了创伤弧菌溶血素基因vvhA重组质粒ꎬ质粒图谱如图1B所示ꎮM:Trans2000markerꎻ1:vvhA质粒ꎻ2:阴性对照ꎻ3:空白对照ꎮ图1㊀创伤弧菌重组质粒PCR扩增(A)及PUC-SP-vvhA重组质粒图谱(B)2.2㊀创伤弧菌重组质粒的浓度及纯度分析取重组质粒1μLꎬ利用NanoDropTM2000测定其浓度和纯度ꎬ结果如表2所示ꎬA260/280㊁A260/230均超过1.8ꎬ说明所提取的质粒纯度高ꎬ无蛋白质和有机物污染ꎻ对其携带的基因进行PCR扩增ꎬ琼脂糖凝胶电泳分析结果(图2A)显示ꎬ目的基因vvhA条带单一且片段大小符合预期ꎬ质粒完整性分析(图2B)显示质粒条带完整ꎬ说明所制备的质粒符合预期ꎮ㊀㊀表2㊀创伤弧菌重组质粒的浓度与纯度样品管号浓度/(ng/μL)A260/A280A260/A230VA1167.01.862.21VA2189.51.882.29VA3173.61.882.26VA482.11.892.53051山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第56卷㊀M:Trans15000markerꎻ1~8:vvhA质粒样品ꎮ图2㊀创伤弧菌重组质粒vvhA的PCR扩增(A)及质粒完整性(B)分析㊀㊀将4管大提的创伤弧菌重组质粒样品混合至1管中ꎬ采用紫外分光光度计测定浓度ꎬ然后用无菌去离子水稀释至20ng/μLꎬ取100μL分装至2mL螺口冻存管中ꎬ所有质粒溶液分装450管后ꎬ置于真空冷冻干燥机中按照冷冻程序真空冷冻干燥ꎬ获得白色粉末状的冻干质粒样品ꎬ设计创伤弧菌重组质粒定性标准样品标签纸ꎬ打印并贴在管外(图3)ꎮ质粒定性标准样品置于-20ħ冰箱冻存ꎮ2.3㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的均匀性分析从450管质粒标准样品中随机抽取12管进行PCR定性试验ꎬ结果如图4A所示ꎬ各管PCR扩增目的基因均为阳性ꎬ条带单一且清晰ꎬ图4B显示质粒完整无降解ꎮ使用NanoDropTM2000超微量分光光度计进行质粒标准样品的浓度㊁纯度分析ꎬ对所测数据进行单因素方差分析ꎬ结果如表3所示ꎬ在95%的置信概率下ꎬF值小于F临界值ꎬ各管间质粒含量无显著性差异ꎬ表明质粒定性标准样品均匀性良好ꎮ图3㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品M:DNAmarkerꎻ1~12:vvhA质粒标准样品ꎮ图4㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品PCR扩增(A)及均匀性(B)分析㊀㊀表3㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品均匀性试验方差分析平方和SS自由度均方MSF值F临界值置信概率P值组间0.021110.022.7002.720.950.051组内0.008120.012.4㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的稳定性分析温度是运输过程中影响质粒定性标准样品质量的主要因素ꎬ因此设计不同温度模拟质粒样品运输条件ꎬ以质粒标准样品目的基因阳性检出㊁质粒完整性及核酸含量变化确定其短期稳定性(运输稳定性)ꎮ创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品分别在4ħ和37ħ条件下保存14dꎬ琼脂糖凝胶电泳分析结果(图5㊁图6)显示第1天和第14天目的基因均为阳性ꎬ电泳条带单一ꎬ符合预期条带大小ꎬ质粒无降解ꎻ质粒含量统计学分析结果如图7所示ꎬ各时间点间无显著性差异ꎬ表明质粒含量无明显变化ꎬ说明质粒定性标准样品在上述条件下是稳定的ꎮ因此创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品可与冰袋(4ħ)一起运输ꎬ也可在温度较高(37ħ)且无降温装置条件下运输ꎮ151㊀第1期㊀㊀㊀㊀袁玮ꎬ等:创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用M:DNAmarkerꎻ1~6:vvhA质粒标准样品ꎻ7:阴性对照ꎻ8:空白对照ꎬ下同ꎮ图5㊀4ħ条件下保存1天创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品PCR扩增(A㊁B)及完整性(C㊁D)分析图6㊀37ħ条件下保存14天创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品PCR扩增(A㊁B)及完整性(C㊁D)分析图7㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准㊀㊀样品短期稳定性定量分析为了分析创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的长期稳定性ꎬ在第1㊁2㊁4㊁6㊁8㊁10㊁12个月随机抽取3管样品进行定性和定量分析ꎮ创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品在-20ħ条件下保存12个月ꎬ琼脂糖凝胶电泳分析结果显示第1个月和第12个月目的基因均为阳性ꎬ电泳条带单一ꎬ符合预期条带大小(图8A㊁B)ꎬ质粒无降解(图8C㊁D)ꎮ质粒含量统计学分析结果如图9所示ꎬ各时251山东农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀第56卷㊀间点间无显著性差异ꎬ表明质粒定性标准样品在-20ħ条件下稳定ꎬ说明创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品能在-20ħ条件下稳定保存至少12个月ꎮ图8-20ħ条件下保存1㊁12个月创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品PCR扩增(A㊁B)及完整性(C㊁D)分析图9-20ħ条件下创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒㊀㊀定性标准样品长期稳定性定量分析2.5㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品在水产品检测中的应用为了验证创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品在水产品检测中的应用效果ꎬ将其作为阳性对照ꎬ参照GB4789.44 2020的方法ꎬ利用PCR对10种水产品中的创伤弧菌基因vvhA进行检测ꎬ每种样品取样7次ꎬ每个样品7个重复ꎮ结果如表4所示ꎬ在10种水产品样本中检测出1例vvhA基因阳性ꎮ将阳性样本的增菌液划线至创伤弧菌鉴定平板CC平板和mCPC平板中ꎬ每种平板重复划线3次ꎬ37ħ培养18hꎬ平板菌落为黄色㊁圆形且扁平(图10)ꎮ挑取菌落按照GB4789.44 2020要求进行生化鉴定(图11㊁表5)ꎬ验证此阳性样本感染创伤弧菌ꎮ㊀㊀表4㊀海鲜样品中创伤弧菌溶血素基因vvhA检出结果海鲜类型检测份数检出阳性次数鱼类60贝类31虾类10总计101㊀㊀表5㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA阳性样本生化鉴定结果项目结果赖氨酸紫色氨基酸对照黄色无盐胰胨水微弱生长6%氯化钠胰胨水生长旺盛8%氯化钠胰胨水不生长10%氯化钠胰胨水不生长V-P半固体穿刺周围扩散增长351㊀第1期㊀㊀㊀㊀袁玮ꎬ等:创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用图10㊀CC平板和mCPC平板创伤弧菌菌落特征图11㊀创伤弧菌溶血素基因vvhA阳性样本菌体的生化鉴定结果3㊀讨论与结论本研究构建了创伤弧菌溶血素基因vvhA的重组质粒PUC-SP-vvhAꎬ经测序验证后ꎬ将质粒样品真空冷冻干燥制成创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品冻干粉ꎮ对其进行均匀性和稳定性分析ꎬ检测结果均为阳性且符合目的基因片段的大小ꎬ质粒样品无降解ꎻ均匀性分析定量检测结果表明ꎬ质粒定性标准样品无管间差异ꎬ均匀性良好ꎻ稳定性分析定量检测结果表明ꎬ质粒定性标准样品在低温(4ħ)或高温(37ħ)下可稳定保存14天ꎻ在-20ħ下长期存储12个月ꎬ亦未观测到不稳定性ꎮ将所研制的创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品应用于10种海鲜产品的检测ꎬ检出1份阳性样本ꎬ经传统培养法和生化鉴定验证ꎬ证实阳性样本确为创伤弧菌污染ꎬ表明质粒定性标准样品能够满足水产品中创伤弧菌溶血素基因vvhA的快速㊁精确检测ꎮ该研究填补了我国创伤弧菌鉴定即用型质粒定性标准样品的空白ꎬ为创伤弧菌质粒定性标准样品在食品检测领域的应用研究打下了良好的基础ꎮ参㊀考㊀文㊀献:[1]㊀YunNRꎬKimDM.Vibriovulnificusinfection:apersistentthreattopublichealth[J].KoreanJournalofInternalMedi ̄cineꎬ2018ꎬ33(6):1070-1078.[2]㊀Hernánde 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̄choleravibrios:themicrobialbarometerofclimatechange[J].TrendsinMicrobiologyꎬ2017ꎬ25(1):76-84.[10]LiGꎬWangMY.TheroleofVibriovulnificusvirulencefactorsandregulatorsinitsinfection ̄inducedsepsis[J].FoliaMicro ̄biologicaꎬ2020ꎬ65(2):265-274.[11]GavinHEꎬBeubierNTꎬSatchellKJ.Theeffectordomainre ̄gionoftheVibriovulnificusMARTXtoxinconfersbiphasicepi ̄thelialbarrierdisruptionandisessentialforsystemicspreadfromtheintestine[J].PLoSPathogensꎬ2017ꎬ13(1):e1006119.[12]RaoNVꎬShashidharRꎬBandekarJR.Inductionꎬresuscita ̄tionandquantitativereal ̄timepolymerasechainreactionanaly ̄sesofviablebutnonculturableVibriovulnificusinartificialseawater[J].WorldJournalofMicrobiologyandBiotechnologyꎬ2014ꎬ30(8):2205-2212.[13]包秋华ꎬ刘倩宇.基于WebofScience细菌活的非可培养状态研究文献的可视化分析[J].食品科学ꎬ2023ꎬ44(5):248-256.[14]ZhangXꎬGuoBꎬYangLHꎬetal.CRISPR/Cas12acombinedwithrecombinasepolymeraseamplificationforrapidandsensi ̄tivedetectionofVibriovulnificusinonetube[J].ActaBio ̄chimicaetBiophysicaSinicaꎬ2023ꎬ55(2):322. [15]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准:食品微生物学检验创伤弧菌检验:GB4789.442020[S].北京:中国标准出版社ꎬ2020.551㊀第1期㊀㊀㊀㊀袁玮ꎬ等:创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用。
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关于2020年度山东省科学技术奖初评答辩的预备通知(2020)
各有关提名单位(专家):
2020年度山东省科学技术最高奖、自然科学奖、技术发明奖、科学技术进步奖、国际科学技术合作奖会议初评工作拟于2020年6月下旬至7月上旬在济南进行,具体时间地点另行通知。
现将有关事项通知如下:
一、答辩范围
通过网络评审进入2020年度山东省科学技术奖初评答辩的项目;已受理但不参加网络评审的省科学技术最高奖、国际科学技术合作奖候选人,科学技术进步奖(军民融合和公共安全类、科普类)候选项目。
请各提名单位(专家)使用提名账号和密码登录山东省科学技术奖申报系统(可从省科技厅网站登录,或直接访问略登录)在“指标管理及项目提名”的“项目状态查看”功能中,查询进入初评答辩的具体项目(候选人)名单,并尽快通知相关完成单位做好答辩准备。
二、答辩方式
初评答辩采用视频答辩或电话候答辩两种方式,实行差额答辩。
视频答辩:省科学技术最高奖、国际科学技术合作奖候选人,自然科学奖、技术发明奖、科学技术进步奖(含军民融合和公共安全类、科普类项目)一等奖、二等奖候选项目在济南参加视频答辩。
电话候答辩:自然科学奖、技术发明奖、省科学技术进步奖(含军民融合和公共安全类、科普类项目)三等奖候选项目在所在地参加电话答辩。
三、答辩人员
提名单位(专家)是省科技奖会议初评答辩的责任主体,负责组织项目完成人员参加会议初评答辩。
答辩人员应包括提名单位(专家)一人和项目前三完成人,答辩总人数不得超过4名。
(一)提名单位(专家)应有1人,或书面委托1名项目前三完成人所在单位(最高奖候选人所在单位、国际科技合作奖候选人合作单位)熟悉项目(候选人)情况的相关人员参加答辩。
2020年度已受理公示项目完成人及最高奖候选人不能作为受托人员参加答辩。
(二)项目完成人员:自然科学奖、技术发明奖和科学技术进步奖前三完成人均应参加答辩,第一完成人无故不参加答辩的,将对项目扣分。
最高奖候选人所在单位派人参加答辩,国际科技合作奖候选人合作单位派人参加答辩,候选人本人不参加答辩。
四、答辩流程及要求
(一)首先由工作人员在评审会场播放多媒体介绍材料。
播放结束后,评委与答辩人进行问答。
电话候答辩的项目,按通知要求等候评审会场的电话呼入,具体问答时间根据评委提问情况而定。
(二)答辩人初次回答评审专家提问前,第一完成人须自报姓名。
关于专业科学技术内容和应用(引用)情况等方面的问题,必须由第一完成人为主进行回答;涉及提名书“客观评价”内容的问题,由提名单位代表或提名专家回答。
(三)省科学技术最高奖候选人答辩时间不超过40分钟,其中多媒体介绍材料不超过20分钟,专家提问和答辩人回答时间不超过20分钟;自然科学奖、技术发明奖、科学技术进步奖和国际科技合作奖,每个候选人答辩时间不超过20分钟,其中多媒体介绍材料不超过10分钟,专家提问和答辩人回答时间不超过10分钟。
五、其他事项
(一)科学技术进步奖主要表彰奖励为经济建设、社会进步做出突出贡献的科技成果。
建议进入初评答辩的省技术发明奖、科学技术进步奖(技术开发类)一等奖候选项目,提交专项审计报告,统计范围为申请项目整体应用推广开始截止至2019年底,应包含申请项目已整体应用推广的产品名单、形成的收入、毛利额、上缴税金,分年度统计;出具申请项目专项审计报告的第三方专业机构为依法注册成立的会计师事务所,由申请单位自行选定。
专项审计报告在答辩会议现场向评审专家展示查阅。
(二)请各提名单位(专家)通知参加初评答辩项目的单位或人员做好答辩准备,按照要求制作、报送答辩材料(多媒体介绍材料内容要求详见附件)。
各提名单位(专家)负责将参加初评答辩项目(候选人)的答辩材料收齐、核查并保证顺利播放后,统一拷贝至U盘(文件夹命名方式:评审组+提名号+项目名称,军民融合和公共安全类项目答辩材料刻录至光盘)。
(三)不能按时上报视频材料或无故不参加答辩,视为自动放弃参加初评答辩,将取消项目前三位完成人申报2021年度山东省科学技术奖的资格。
六、报送时间
各提名单位(专家)统一将答辩材料以及技术发明奖、科学技术进步奖(技术开发类)一等奖候选项目的专项审计报告,于2020年6月10日下午16时前送至山东省科学技术奖励委员会办公室,并现场播放查看多媒体介绍材料,确保正常播放。
七、联系方式
电话(略)
地址:济南市历下区舜华路607号科技大厦1212房间
附件:
初评答辩多媒体介绍材料内容要求
附件下载:
初评答辩多媒体介绍材料内容要求.docx
山东省科学技术奖励委员会办公室
2020年5月9日
(非正式文本,仅供参考。
若下载后打开异常,可用记事本打开)。