蒸发光检测器校准方法作业指导书分析
蒸发光散射检测原理与操作要点
蒸发光散射检测器(ELSD)3300 原理与操作一.操作原理蒸发光散射检测器的独特检测原理包括以下三个步骤:首先将柱洗脱液雾化形成气溶胶,然后在加热的漂移管中将溶剂蒸发,最后余下的不挥发性溶质颗粒在光散射检测池中得到检测。
雾化(Nebulization)：雾化(Nebulization) 经HPLC 分离的柱洗脱液进入雾化器, 在此与稳定的雾化气体(一般为氮气)混合形成气溶胶。
气溶胶由均匀分布的液滴组成,液滴大小取决于分析中采用的气体流量.气体流量越低形成的液滴越大,液滴越大则散射的光越多,从而提高了分析灵敏度,但是越大的液滴在漂移管中越难蒸发。
每种方法均存在产生最佳信号噪音比率的最优化气体流量。
流动相流速越低要求适当雾化的气体流量也越低。
用内径为2.1mm 的微径柱代替内径为4.6mm 标准型分析柱,能大大降低流动相流速,因而提高分析的灵敏度。
蒸发(Evaporation)：蒸发(Evaporation) 气溶胶中挥发性成分在加热的不锈钢漂移管中蒸发.为特定应用设置适当的漂移管温度,取决于流动相组成和流速,以及样品的挥发性.高有机含量流动相比高含水量流动相要求蒸发的漂移管温度低。
流动相流速越低比流动相流速越高要求蒸发的漂移管温度越低。
半挥发性样品要求采用较低的漂移管温度,以获得最佳灵敏度.最佳温度需要通过观察各温度时的信号噪音比率来确定。
在ELSD 3300 漂移管中,距离雾化器3 英寸处有一个PTFE 涂层的不锈钢撞击器.气溶胶与撞击器相遇,大的液滴从废液管排出。
余下的液滴从撞击器周围通过并经过漂移管进入到光散射检测池被检测。
除去大的液滴就允许在低温模式下操作ELSD3300,适用于分析半挥发性样品。
流动相和雾化气体中的非挥发性杂质会导致噪音。
采用高品质的气体,溶剂和挥发性缓冲液(经过过滤的) ,会很大程度上降低基线噪音.若流动相没有完全挥发会导致基线噪音上升。
仔细选择设置检测器的参数保证流动相完全挥发。
蒸发光检测器原理及技术应用
Impactor ‘Off’ Column:
Mobile Phase: Flowrate:
Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min
有机溶剂在较低温度蒸发，在撞击器“关”的情况下， 也会完全蒸发，B型ELSD 任何条件下均分流，造成样品 损失，降低检测灵敏度
独特的检测方法
检测三部曲 ➢雾化 ➢溶剂的蒸发 ➢检测
第一部：雾化
色谱柱流出物通过喷雾器针孔 与氮气混合形成均匀的雾状液滴
第二部：溶剂的蒸发
液滴通过加热的漂移管 溶剂蒸发 只有样品颗粒保留
第三部：检测
样品颗粒通过流动池 激光“撞击”颗粒被散射 光电二极管检测散射光 检测角度为90℃，避免虚假 信号(>90℃折射/衍射光；<90℃反射光)
Alltima™NH2, 5µm 1.5mL/min
Mobile Phase: A: Acetonitrile
B: Water
Gradient:
Time: 0 10
%B: 20 40
Detector:
ELSD
紫外-可见光检测器的缺点
UV的局限性
1. 羟基苯甲酸甲酯 2. 羟基苯甲酸乙酯 3. 羟基苯甲酸丙酯 4. 羟基苯甲酸丁酯
Column:
Mobile Phase: Flowrate:
Alltech Econosphere®, C18, 5µm, 150 x 4.6 mm Methanol:Water (90:10) 0.8mL/min
4.75 6.37
9.25 10.81 10.66 11.01
pKb
监测仪器校验作业指导书
监测仪器校验作业指导书一、实验目的1.学习与掌握常用测量仪器的使用方法；2. 掌握测量仪器校验步骤与方法。
二、实验器材1.示波器；2.数字万用表；3.频率计；4.电源；5.多用表。
三、实验步骤1.示波器的校验（1）检查示波器的各个控件和开关，确保其处于正常状态。
（2）打开示波器的电源，并使其加温10-20分钟。
（3）调节示波器的中心干扰控制器，将其调节到最小。
（4）将示波器的纵向通路调至X-Y方式。
（5）将示波器的水平扫描频率调至50Hz。
（6）将示波器的校准信号源输出端与示波器相应的输入端相连。
（7）通过校准信号源输出相应的幅度和频率信号，调节示波器各控件和开关，使示波器读出的结果能够与校准信号源的输出结果相符合。
2.数字万用表的校验（1）在正常情况下，连接表笔应采取四线法。
（2）将测试电阻箱和万用表进行连接，按照测试步骤进行测量，记录前后测试结果。
（3）重复测试，将测试结果进行比对，确保测试结果的准确性。
3.频率计的校验（1）将频率计的输入端与频率转换器的输出端相连。
（2）将频率转换器的输入端与信号源相连。
（3）根据要求调节信号源的频率，记录频率值。
（4）将频率计的读数与信号源设置的频率进行比对，确保测量的准确性。
4.电源的校验（1）将电源的正极和负极线性连接。
（2）调节输出电压和输出电流，记录读数。
（3）将记录的读数与电源设置的输出值进行比对，确保测量的准确性。
5.多用表的校验（1）将多用表的输入端与信号源的输出端相连。
（2）根据要求调节信号源的幅度和频率，记录测试值。
（3）使用示波器和数字万用表对同一个信号源进行测试，将测试结果比对，确保多用表的测试结果准确性。
四、实验结果分析通过本次实验，掌握了常用测量仪器的使用方法及校验方法，实验结果比对分析，可以确定测量仪器的读数准确性，并对检测结果的合格性提供了保障。
五、注意事项1. 在进行仪器校验前，要检查仪器的各个开关和控件处于正常位置；2. 总是使用正确的连接方式；3. 测量时注意安全，避免扰动和干扰；4. 记录测量值时要确保其准确性和完整性。
ELSD蒸发光检测器原理以及参数设置
控制方式只能选其一，选定之后其他方式不可用。
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仪器面板控制
当期方法 仪器实际值
状态栏 菜单栏
键盘
模式：Stand/Run 检测器输出值
自动调零
两种操作模式
STANDBY
• 电源开启 • LED灯关闭 • 加热器关闭 • 气体流速在最低值(1.2 SLM)
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附录Ⅰ 与ELSD相关的模块配置信息
安装控制软件及驱动
1.点击 Drivers
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附录Ⅰ 与ELSD相关的模块配置信息
3. 安装过程中，在弹出的设置窗口 依次点击Next、Install及Finish。
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附录Ⅰ 与ELSD相关的模块配置信息
在仪器配置窗口添加 Agilent 38X-ELSD(G4260A/G4261A)
•独 立 控 温 ， 控 温 范 围 是 25–90 ℃
。
流
氮动氮 气相气
ELSD的蒸发管
•通过蒸发管的加热去溶剂 •独立控温 • 有一路额外的气体帮助蒸发 • 蒸发管体积较小 • 快速的热平衡
•G4260型的控制温度为25120℃ •G4261型的控温范围是10-80 ℃
ELSD的检测器
•蓝色LED光源(480nm)，提供了稳定的 输出。 •检测器直接安装在光学组件上，消除 了杂散光的干扰，增加了灵敏度。 •减小了检测区域的空间，降低了谱带 展宽。 •增益可调节，使得检测范围更宽。 •数据信号的平滑增加了信噪比。
挥发性组分很难得到良好的响应。 流动相中不能含有不挥发成分(如不挥发性缓冲盐)
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第二节 ELSD操作
蒸发光散射检测器使用注意事项
蒸发光散射检测器使用注意事项蒸发光散射检测器是一种常用的实验室仪器，用于表征材料的表面形貌和薄膜的质量。
在使用蒸发光散射检测器时，需要注意以下几点。
一、仪器安装和校准1. 在使用蒸发光散射检测器前，需要将其正确安装在实验室的光学台上。
确保仪器的稳定性和水平度。
2. 在使用前，需要对仪器进行校准。
校准过程包括零点校准和灵敏度校准，确保仪器的准确性和可靠性。
二、样品制备1. 样品制备是蒸发光散射检测的关键步骤。
在制备样品时，应注意样品表面的光洁度和平整度。
避免表面存在杂质、颗粒或划痕。
2. 样品的尺寸和形状也需要符合仪器的要求。
通常情况下，样品的尺寸应小于仪器的探测范围。
三、实验操作1. 在进行蒸发光散射检测时，应保持实验环境的稳定。
避免有风、震动或其他干扰因素影响实验结果。
2. 在进行实验前，需要将仪器预热至稳定的工作温度。
同时，还需根据实验需求选择合适的检测波长。
3. 在实验过程中，需注意控制蒸发速率和压力。
过高的蒸发速率或压力会导致样品表面出现不均匀的薄膜。
4. 实验结束后，应及时清洁仪器，避免样品残留对下次实验的影响。
四、数据分析与结果解释1. 在进行数据分析时，需注意对实验数据进行适当的处理和修正。
通常情况下，需要进行背景减除和散射强度的归一化处理。
2. 在结果解释时，应结合样品的特性和实验条件进行综合分析。
避免仅凭散射强度大小得出片面的结论。
总结：在使用蒸发光散射检测器时，需要注意仪器的安装和校准，样品的制备，实验操作的准确性以及数据分析和结果解释的科学性。
只有在严格遵守这些注意事项的情况下，才能获得准确可靠的实验结果。
同时，还应不断学习和探索新的技术和方法，提高实验技能和数据分析能力，为科研工作提供有力支持。
监测仪器校验作业指导书
为控制有关的在用设备、计量器具是否符合监测分析工作要求，特对下列设备进行定期校验。
一、电导仪（一）电导池的电极常由两个面积相等且平行的金属片组成，期间有一定的距离（L）。
电导池常数（∮）为电极间的距离与其面积（A）的比值，即∮=L/A，其单位为厘米-1。
由于仪器制作和使用要求等原因，电导池常数并非均为1.0，且在使用过程中电导池常数也会有变化。
因此，应经常测定电导池常数。
对必须准确测量电导率的样品，则应在测定过程中随时测定。
通常使用已知溶液法或比较法测定。
1.已知溶液法此法是用测量已知电导率的溶液电导值（或电阻值）求得。
由于各种浓度的氯化钾溶液在25℃时的电导率的准确值为已知值，所以常用氯化钾标准溶液校正电导池常数。
现举例说明在1~2间的电导池常数测定法。
（1）配制氯化钾标准溶液准确称取745.6毫克氯化钾，溶于新煮沸冷却的二次蒸馏水（电导率应小于1微西/厘米）中，于25℃的温度下稀释至1升，其浓度为0.01摩尔/升，在此温度下的电导率为1413微西/厘米。
（2）测定氯化钾标准溶液的电导值将上述氯化钾标准溶液分别倾入4个烧杯，放置于25℃恒温水浴内，使温度平衡至25℃。
用3个烧杯中的标准溶液仔细地冲洗电导率，第4个烧杯中测定标准溶液的电阻值R KCL（欧姆）或电导值L KCL（微西）。
（3）计算电导池常数∮=R KCL*0.001413或∮=1413/L KCL2、比较法此法是用常数待测的电导池与常数已知的电导池同时测定同一溶液的电导值，用下式计算待测电导池的池常数∮2：∮2=L1∮1/L2式中∮1—已知电导池的池常数；L1—用已知电导池测得的电导值；L3—用待测电导池测得的电导值；使用比较法时，两个电导池的构造及常数应相似，所用溶液的电导率应具有一定的稳定性，且其电导值应在电导池的适宜测定范围内。
（二）电导值刻度的校正将不同浓度的氯化钾标准溶液与25℃温度下，用电导仪测定其电导率，并按电导池常数计算相应的电导值，即为应在电导仪上显示的电导值，与表1中标准溶液电导率对比，即可校正仪器各量程的刻度。
型蒸发光散射检测器安全操作及保养规程
型蒸发光散射检测器安全操作及保养规程1. 引言型蒸发光散射检测器是一种常用于粒子测量的仪器，主要用于测量物料中的颗粒大小和浓度。
为了保证仪器的准确性和安全性，在操作和保养检测器时需要按照一定的规程进行。
2. 操作规程为了确保型蒸发光散射检测器的正常运行和操作人员的安全，以下是操作规程的详细步骤：2.1 准备工作在进行操作之前，需要做好以下准备工作：•确保操作人员已经接受过相关的培训，并熟悉仪器的使用说明书和安全操作规程。
•清理工作区域，确保周围没有杂物或干扰物。
•检查仪器是否正常工作，如有故障或异常情况需要及时报修。
•戴上适当的个人防护装备，包括手套、护目镜等。
2.2 检测样品准备在进行检测之前，需要准备好样品，并按照以下步骤进行操作：•根据实验要求，选择合适的样品，并将其装入待测容器中。
•确保样品容器干净，没有残留杂质或沉淀。
•按照仪器的使用说明书填充样品，避免超过仪器的量程范围。
•将样品容器放置在仪器的检测位置上，并确保良好的接触。
2.3 仪器操作接下来，按照以下步骤进行仪器的操作：•打开仪器的电源，并按照仪器的操作界面进行设置。
•根据实验要求设置仪器的参数，包括测量时间、激光功率等。
•点击开始测量按钮，观察仪器的运行状态，并记录实验数据。
2.4 完成操作完成实验后，需要进行以下步骤来完成操作：•停止仪器的测量，关闭电源，并断开与电源的连接。
•将样品容器从仪器中取出，并将其清洗干净。
•清理工作区域，确保仪器周围没有残留的样品或污染物。
•关闭仪器的操作界面，离开工作区域。
3. 保养规程为了保证型蒸发光散射检测器的长期稳定运行，以下是保养规程的详细步骤：3.1 定期清洁定期清洁仪器可以有效延长其使用寿命并保持准确性，以下是清洁的步骤：•使用干净的软布擦拭仪器的外壳，避免使用含有酸性或腐蚀性成分的清洁剂。
•清理仪器的检测窗口，可以使用适当的溶液或清洁剂。
•清理仪器的传感器，遵循仪器使用说明书中的清洁建议。
蒸发光验证方案
蒸发光散射检测器ZAM4000验证方案验证方案组织与实施本蒸发光散射检测器ZAM4000验证工作由动力设备室负责组织，生产技术部、动力设备室、质量管理部及QC检验室有关人员组成验证小组参与实施。
验证小组成员方案制订方案审核方案批准目录1.引言-------------------------------------------------32.安装确认---------------------------------------------33. 运行确认---------------------------------------------44. 性能确认--------------------------------------- ---45. 验证周期---------------------------------------------41.1概述1.1.1产地：德国schambeck GmbH 型号：SFD ZAM4000出厂日期：2011年11月安装位置：QC检验室1.1.2 ZAM4000 主要参数：1.1.3 用途：蒸发光散射检测器ZAM4000ELSD 是HPLC 通用型检测器，它可以用来分析那些没有紫外吸收，与溶剂难分离，或必须使用梯度洗脱而无法使用示差检测器的样品。
1.1.4 ZAM4000优势:1.1.4.1螺旋管技术，有效的增加了蒸发管的长度.蒸发管越长，所需要蒸发温度就越低，流动相被蒸发得也就越完全,基线噪音也就越低，所以ZAM4000 得到了更好的基线，更高的灵敏度，更低的检出限。
1.1.4.2 ZAM4000光电检测系统为卤素灯＋光电倍增管能将很微弱的电流放大，提高检测灵敏度。
1.1.4.3 ZAM4000无需分流进样，可同时检测含有半挥发性，热不稳定和稳定组分的样品，保证各组份的灵敏度和检测极限。
1.1.4.4 低温型的蒸发光散射,基线更为稳定，灵敏度更高。
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编号：JL13-理化-作业-121
蒸发光检测器校准方法
作业指导书
编写：年月日
审核：年月日
批准：年月日
理化实验室
蒸发光检测器校准方法作业指导书
1 使用范围
本规范主要适用于新制造、使用中或修理后的蒸发光检测器的校准。
2 引用文献
《液相色谱仪ELSD 蒸发光散射检测器简介与校准方法研究》广东省计量院JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》
蒸发光检测器使用说明书
3 术语和计量单位
蒸发光散射检测器是上世纪90年代开始应用的一种新型通用性的HPLC质量检测器：其主要特点在对于没有紫外吸收的化合物，比如皂甙、内酯、糖类等化合物，在ELSD上会有响应,而且稳定性好,灵敏度高,可进行梯度洗脱分析。
在我国中药、食品等检测领域有着广乏的应用。
4 概述
通常，蒸发光检测器的结构是由雾化器蒸发、漂移管和光散射池三部分组成。
其工作原理如图所示，雾化器与分析柱出口直接相连，柱洗脱液进入雾化器针管在针的末端，脱洗液和充入的气体（通常为氮气）混合形成均匀的微小液滴，可通过调节气体和流动相的流速来调节雾化器产生的液滴的大小。
漂移管的作用在于使气溶胶中的易挥发组分挥发，流动相中的不挥发成分经过漂移管进入光散射池。
在光散射池中，光源照射雾状颗粒产生散射光，经光电倍增管收集，根据散射光强正比于溶质粒子数目和粒子大小，样品组分含量得到检测。
本校准方法主要依据《液相色谱仪ELSD 蒸发光散射检测器简介与校准方法研究》和JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》，对蒸发光检测器的校准进行了规范。
5 计量性能要求
5.1外观
5.1.1 蒸发光检测器应有下列标志：仪器名称、型号、制造日期和仪器编号、制造厂名、国产离心机还应有制造计量器具许可证标志及编号。
5.1.2 仪器外观不应有影响仪器正常工作的机械损伤。
5.1.3 仪器的各紧固件和电缆接插件均应紧固，插接良好；各运动件运行平稳自
如；各功能键应完好，工作正常。
5.1.4 仪器的指示刻度和数字清晰，数字显示完整；
5.2 仪器技术性能
5.2.1 输液系统：输液管路接口紧密牢固，在规定的压力范围内无泄漏。
5.2.2流量设定值误差S S和流量稳定性误差S R应符合表1 的要求
5.2.3 梯度误差GC：不超过±3 %。
5.2.4柱温箱温度设定值误差ΔT C：不超过±2℃。
5.2.5温度稳定性T C：不超过1℃。
5.2.6 噪声：优于1mv；漂移：应优于0.5%/30min。
5.2.7 检出限：(100ng-100pg) 范围内（葡萄糖）
5.2.8 定性重复性：优于1%；定量重复性：优于3%。
表1 流量设定误差S S和流量稳定性误差S R的要求
6 计量器具控制
6.1校准的环境条件
6.1.1环境温度：（15～35）℃
6.1.2相对湿度：≤80％，或按仪器说明书规定。
6.1.3电源：电压AC（220±10）V，频率（50±1）Hz。
6.1.4仪器周围应无强烈振动、无强烈交流电干扰，无强气流及酸、碱等腐蚀性气体。
6.1.5仪器及电源应有良好接地。
6.2所需标准器及标准物质
6.2.1 色谱检定测量仪
6.2.2葡萄糖标准物质
6.2.3 秒表
6.3 校准条件
采用C 18柱，流动相为90%的水和10%的甲醇，采用等度洗脱方式，雾化载气为高纯氮气等。
7 校准项目和校准方法
7.1输液系统的检校
7.1.1泵耐压的检校
将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为 1mL/min ，按说明书启动仪器，压力平稳后保持10min ，用滤纸检查各管路接口处应无湿迹。
卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min 无泄漏。
7.1.2泵流量设定值误差S S 、流量稳定性误差S R 的检校
参照下表的要求设定流量，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集下表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按下式计算S S 和S R 。
100%/F F -F S S S M S ⨯=）（
100%F /F -F S M min max R ⨯=）（
式中：F M --t /W -W F t 12M ⋅=
ρ）（，流量实测值，mL/min ； W 2--容量瓶+流动相的质量，g ；
W 1--容量瓶的质量，g ；
ρt --试验温度下流动相的密度，g/cm 3；
t--收集流动相的时间，min ； M F --同一组测量的算术平均值，mL/min ；
F S --流量设定值，mL/min ；
F max --同一组测量中流量最大值，mL/min ；
F min --同一组测量中流量最小值，mL.min 。
7.2梯度误差的检校
由梯度控制装置设置阶梯式的梯度洗脱程序，A 溶剂为纯水，B 溶剂为含0.1%丙酮的水溶液，B 经由5个阶梯从0变到100%，如图1所示。
将输液泵和
检测器连接（不接色谱柱），开机以后以A 溶剂冲洗系统，基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线。
求出A 、B 溶剂不同比例时的输出信号值（或记录仪读数），重复测量2次，计算平均值。
从B 溶剂的含量及对应的输出信号值（或记录仪读数），按下式计算梯度误差G ci ，取G ci 最大者作为仪器梯度误差。
100%L )/L -L (m m i ⨯=ci G
式中：G ci --第i 段梯度误差 ( % ) ；
i L --第i 段输出信号值（或记录仪读数）平均值；
m L --各段输出信号（或记录仪读数）平均值的平均值。
图1 剃度误差检校示意图
梯度误差G C ：不超过±3 % 。
7.3 柱箱温度设定值误差ΔT S 和控温稳定性T C 的检校
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃（也可根据用户使用温度设定）进行检校。
按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min 记录一次读数，共计7次，求出平均值。
平均值与设定值之差为ΔT S ，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性T C 。
7.4基线噪声和基线漂移的检校
仪器开机后，在室温下设定泵的流速为1%，按仪器规定的要求调节好载气（氮气）流速和漂移管温度，设定合适增益等，待仪器稳定后，采用不进样方式运行30min ，测量仪器的噪声和漂移。
7.5 检出限
配制25ug/L 的葡萄糖水溶液，每次进样量20μL ，测量3次取平均值；检出限的公式可依据 JJG705-2002《液相色谱仪检定规程》中规定的最小检测浓度
公式：C L=2H N C/H(C L为最小检测浓度，H N为噪声高，C为样品浓度，H为样品峰高)。
7.6 重复性
在仪器稳定后，选用浓度为5mg/l葡萄糖水溶液作为校准物质，进样量为20μL，采用同样的条件重复测量6次，计算6次的保留时间和峰面积的相对标准偏差，得到仪器定性与定量重复性数据。
8 校准结果
8.1经校准符合仪器技术性能要求的蒸发光检测器，出具测试报告，测试报告应给出泵流量设定值误差S S、流量稳定性误差S R、柱箱温度设定值误差ΔT S和控温稳定性T C
、噪声、漂移、检出限、定性重复性、定量重复性。
9 校准周期
校准周期一般不超过两年，再次期间内，仪器经修理或对测量结果有怀疑时应及时进行校准。