真核细胞转染试剂(Hifectin
威格拉斯生物技术(北京)有限公司 高效真核转染试剂 - ( VigoFect
表：建议的起始转染条件。
培养容器
96孔板 24孔板 6孔板 35mm平皿 60mm平皿
转染前一天接 种细胞数 万 1-1.5 5-10 20-40 20-40 40-60
转染时培 养液体积
ml 0.1 0.5 2 2 4
DNA用量与稀释 VigoFect 用量与
后体积
稀释后体积
µg
µl
µl
µl
0.25
操作方法：
准备培养细胞： 1) 转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。至转染时细胞密度以
40~60%为宜（80~90%亦可）。 2) 转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培
养。 配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液） 3) 取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室
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威格拉斯生物技术（北京）有限公司
注意事项：
1) 少量使用Vigofect时，可取精确量的VigoFect用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精 确取样量。该稀释液可在4℃保存1月左右。
2) 细胞的生长状态是转染效率的一个主要决定因素。在实验条件许可的情况下，使 用高质量的培养液、优质血清等，可能会明显提高转染效率。
培养。 细胞后续处理： 7) 24~48小时后，观察或收取细胞。 8) 稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相
应抗生素（如G418）筛选。
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
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降低细胞毒性的方法：
通常本转染试剂对细胞的毒性很低。如个别种类细胞对本转染试剂特别敏感，可通过 以下方法降低细胞的毒性反应。 1) 确保质粒DNA无杂质污染。 2) 检查表达蛋白对细胞是否有毒性。 3) 增加转染时培养液体积，或略减低转染工作液的用量。 4) 转染后3~6小时去除含转染液的培养液，更换为新鲜的完全培养液。 5) 转染时细胞密度不能过低。
各种转染试剂的中文转染方法
各种转染试剂的中文转染方法FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。
将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。
将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。
使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。
1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。
2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。
3. 加入1-2 ug的DNA溶液（0.02－2.0 ug/ul），轻弹管壁混合。
4. 室温孵育20分钟。
5. 将6孔板中的旧营养液吸出，加入约1 ml不含血清和双抗的营养液洗涤一次，再加入2 ml不含血清和双抗的营养液。
6. 将转染复合物加入细胞，混匀使之均匀分布。
7. 3-8小时后，加入血清或换成含血清的营养液。
Lipofectamine 2000(Invitrogen)转染试剂转染步骤（6孔板）：1. 转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90-95％。
细胞铺板在2 ml含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中。
2. 对于每孔细胞，使用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释4.0 ugDNA，轻轻混匀。
3. 使用前将Lipofectamine 2000转染试剂轻轻混匀，用250 ul无血清培养基（如OPTI-MEM I培养基）稀释10 ul Lipofectamine 2000转染试剂，轻轻混匀。
Lipofectamine 2000稀释后，在5分钟内同稀释的DNA混合（<30分钟）。
NOTE：若使用DMEM培养基，则需在5分钟内同稀释的DNA混合。
4. 混合稀释的DNA（第二步）和稀释的Lipofectamine 2000（第三步）。
室温放置20分钟。
5. （optional）将6孔板中的旧营养液吸出，用无血清培养基清洗两次。
Hieff TransTM脂质体核酸转染试剂说明书
Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂说明书产品描述Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。
其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。
转染后不需要除去核酸-Hieff Trans TM复合物或更换新鲜培养基，也可在4～6小时后除去。
Hieff Trans TM以无菌的液体形式提供。
通常情况下对于 24 孔板转染，每次用1.5μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做660次转染；对于6孔板，每次用6μl左右，则1ml Hieff Trans TM约可做160 次转染；运输与保存方法冰袋（wet ice）运输。
产品4ºC保存，一年有效。
不可冷冻！注意事项1）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂要求细胞铺板密度较高，以90%-95%为佳，这有助于减少阳离子脂质体细胞毒性造成的影响；如果你研究的基因要求比较长的表达时间，比如细胞周期相关基因，或者细胞表面蛋白，最好选择细胞铺板密度要求较低的转染试剂，不适合用脂质体核酸转染试剂。
2）Hieff Trans TM脂质体核酸转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前后不需要换培养基。
但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。
另外，要检测所用的无血清培养基与脂质体核酸转染试剂的相容性，已知CD293, SFMII, VP-SFM 就不相容。
3）转染的时候培养基中不能添加抗生素。
4）使用高纯度的DNA或RNA有助于获得较高的转染效率，质粒中的内毒素是转染的大敌。
5）阳离子脂质体应该在4度保存，要注意避免多次反复长时间开盖，因为可能会导致脂质体氧化而影响转染效率。
6）初次使用应优化DNA浓度和阳离子脂质体试剂量以得到最大的转染效率。
转染试剂的转染过程及特点
转染是将核酸导入真核细胞中的过程。
相关实验方案和技术包括转染试剂（脂质体转染、阳离子聚合物转染等）、以及化学法（DEAE-葡聚糖法、磷酸钙法等）或物理方法（如电穿孔、基因枪粒子轰击法、显微注射等）。
其中，转染试剂已然成为实验室细胞转染主流方法。
转染试剂是新一代的阳离子聚合物基因转染试剂，已被广泛应用于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
具有高效转染、细胞毒性很低，不被血清清除、操作简便易行，高重复性等特点。
特点
● 转染效率高
对原代培养细胞HUV-EC有较高的转染效率，而大多数阳离子脂质体对此细胞的转染效率很低。
● 细胞毒性低
在正确的转染方法及条件下，常用的细胞存活率高于90%。
● 试剂不被血清清除，转染操作简单
新型转染试剂不被血清清除，转染时可直接将转染试剂/DNA复合物直接加到细胞培养基中，无需更换培养基质和清洗细胞，整个操作过程可在半小时内完成。
图1.与传统转染实验程序比较
● 适应于体外细胞转染和动物体内转染、众多原代细胞和转化细胞株转染、瞬时转染和稳定转染、贴壁细胞和悬浮细胞转染等。
●新型转染试剂成功转染的部分细胞株：。
TransLipidHLTran...
TransLipid®HL Transfection Reagent目录号：FT111保存：2-8℃保存一年(避免冷冻)。
产品说明TransLipid® HL Transfection Reagent是一种新型的阳离子脂质体转染试剂，适用于将核酸(DNA和RNA)转染入真核细胞，在保证高转染效率的同时具有极低的细胞毒性。
本产品适用细胞类型广，转染时血清和抗生素的存在不影响转染效率，并且转染后无需更换培养基。
适用范围：贴壁细胞和悬浮细胞(哺乳动物细胞系)的转染。
特点·转染效率高·细胞毒性极低(细胞存活率>90%)·操作简便，转染后无需更换培养基质粒DNA的转染:以24孔板为例，步骤如下细胞接种：每孔接种0.5-2×105个细胞，使转染时细胞达到70-90%汇合度细胞培养12-24小时质粒稀释：将0.8 μg质粒稀释于50 μl Opti-MEM培养基TransLipid® HL稀释：将2 μl TransLipid® HL稀释于50 μlOpti-MEM培养基室温静置5分钟将质粒和TransLipid® HL轻柔混合室温静置20分钟将质粒-TransLipid® HL混合物加入细胞，于37℃ CO2培养箱培养转染4-6小时后更换培养基(可选)，继续培养18-72小时本产品仅供研究，不用于临床诊断。
siRNA 的转染以24孔板为例，转染时细胞汇合度为30-50%，转染所需的siRNA 和TransLipid ® HL 的量分别为20 pmol 和1 μl ，步骤同DNA 转染。
质粒DNA 和siRNA 转染的优化为达到高转染效率和低细胞毒性的最佳结合，可以对DNA 或siRNA 和 TransLipid ® HL 的比例及转染初始细胞密度进行优化，DNA 转染可以在1: 2-1: 5的范围内优化比例，siRNA 转染可以试用10-50 pmol siRNA 和0.5-1.5 μl TransLipid ® HL 的用量。
Lipofectamine 2000转染说明
LipofectamineTM 2000之吉白夕凡创作CAT. NO. 11668019 Size: 1.5 ml4℃储存（不要冻存）说明：LipofectaminTM 2000是核酸（DNA或RNA）转染真核细胞的一个专用的试剂盒，其有如下优点：●对各种细胞及细胞板（如96孔板）都有高的转染效率，在 的细胞系数据库中有各种细胞转染成功的实例。
●在含有或是不含有血清的培养基中，DNALipofectaminTM 2000复合物能够直接加给细胞。
●在转染之后不需要除去复合物以及添加或是更换培养液，但在培养46小时后需要除去复合物。
关于转染的一些重要建议：1.不要用即将要介绍的转染程序进行RNAi的转染实验。
在/rnai上有转染步调，登陆后点击说明。
2.对于大多数细胞系，转染复合物中DNA(μg)与LipofectamineTM 2000(μl)的比例在1：2到1：3之间，最好达到最优化的比例。
注意：在混合之前，我们建议用OptiMEM I 低血清培养基（Cat: NO.31985062）（reducedserum medium）稀释LipofectamineTM 2000和DNA.3.为了实现高的转染效率、高的目的基因表达水平以及低水平细胞毒效应，受体细胞最好达到高的浓度：在转染时，细胞的培养液的混浊度建议为90%95%并最优化混浊度。
此外，在实验过程中包管相同的接种条件。
4.为防止细胞死亡，在培养基中不要加抗生素。
5.由于一些无血清复合物（如CD239、SFM II、VPSFM）会抑制阳离子脂质体介导的转染，因此有需要检测一下无血清培养基和LipofectamineTM 2000的相容性。
转染步调（用于DNA）：依照如下步调在24孔板中转染哺乳动物细胞。
对于其它种类细胞板请参照转染量度尺度。
步调中均依照一个细胞孔的量给出质量和体积。
1.贴壁细胞：转染的前一天，在500μl无抗生素培养基中接种0.52×105个细胞，以包管在转染时候细胞的混浊度达到90%95%。
高效真核转染试剂
高效真核转染试剂( VigoFect )产品说明：本试剂采用一类阳离子非脂性物质为主的配方，可以与DNA形成稳定的复合物，透过细胞膜进入细胞内，并保护DNA免受核酸酶的降解。
该试剂对细胞毒性很小，可在含血清与抗生素的完全培养液中充分发挥作用。
对多数培养细胞种类都有较高的转染效率（不同种类细胞的转染效率可有明显差异）。
此类试剂是目前非病毒介导方法中效率最高的转染试剂。
产品内容与储存方法：名称数量保存条件mlVigoFect 0.44℃可进行200次转染（6孔板或35 mm平皿）。
常温运输，4℃保存。
有效期6个月。
所需其它试剂：使用者需准备150 mM NaCl （超纯水配制，高压或过滤灭菌）或注射用生理盐水作为VigoFect及DNA的稀释液，和要转染的DNA溶液（高纯度，浓度0.1~2 μg/μl）。
操作方法：准备培养细胞：1)转染前24小时，接种适量细胞（接种数量可参考附表）。
至转染时细胞密度以40~60%为宜（80~90%亦可）。
2)转染前1小时，更换新鲜的完全培养液（体积可参考附表），置37℃，5% CO2 培养。
配制转染工作液：（6孔板或35 mm平皿，2 ml培养液）3)取5~8 μg DNA（起始用量5 μg），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置。
4)取VigoFect 1~4μl（起始用量2 μl），加入稀释液中至总体积为100 μl，轻轻混匀，室温放置5分钟。
5)将稀释的VigoFect逐滴加入稀释的DNA溶液中，轻轻混匀，所得的转染工作液在室温放置15分钟。
6)将转染工作液轻轻混匀，逐滴加入2 ml培养液中，轻轻混匀培养液，置37℃，5% CO2培养。
细胞后续处理：7)24~48小时后，观察或收取细胞。
8)稳定转染时，于转染后24~48小时消化细胞分至3~5个培养皿中，加适当浓度的相应抗生素（如G418）筛选。
注意事项：1) 少量使用Vigofect 时，可取精确量的VigoFect 用无菌超纯水稀释一定倍数，以便精确取样量。
真核转染
分子生物学常用实验方法－步骤汇总实验室分子生物学实验方法汇总PCR (2)RT-PCR (4)琼脂糖核酸电泳 (6)胶回收纯化DNA (6)大肠杆菌质粒DNA 的提取（碱裂解法） (7)乙醇沉淀DNA (8)酶切 (8)连接 (8)感受态细胞的制备 (9)转化 (10)重组子的筛选和鉴定 (10)真核细胞的转染 (11)转染细胞的稳定筛选 (11)重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量 (12)肿瘤细胞体外传代培养及保种 (13)肿瘤动物模型的建立 (14)小鼠尾静脉注射方法 (14)肿瘤蛋白疫苗预防性动物实验 (14)人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养 (14)实验动物免疫方案 (15)血清制备 (16)ELISA (16)血清学筛选克隆新抗原/新基因 (17)ELISPOT (20)藻酸盐包裹实验 (21)重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 (21)（细菌内同源重组AdEasy System） (21)组织病理技术 (26)免疫组化染色 (27)流式细胞仪常用的几种检测方法 (29)Western Blot(免疫印迹法) (34)PVDF 膜上蛋白的可逆染色 (37)人肿瘤抗原的识别与鉴定 (39)－免疫沉淀实验流程 (39)蛋白质组实验流程 (41)SDS-PAGE 胶染色 (44)数据库搜索(Databases search) (45)主要的公共数据库及网址 (46)蛋白质的序列分析流程 (48)聚丙烯酰胺凝胶的配制 (49)双向电泳常用溶液配方 (51)分子生物学常用溶液配制 (53)生物秀论坛网上搜集，更多精彩内容请访问h2ttp:///bbs/index.php总RNA的提取（Trizol法提取）在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。
若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。
在制备RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase 的作用。
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技术咨询电话：400-607-9999 Hifectin I 真核细胞转染试剂（Hifectin I transfection reagent）
货号：M080006
描述：Hifectin I真核细胞转染试剂由阳离子脂质体和辅助脂质以特定比例融合制备而成的单层脂质体悬液，可与DNA或RNA形成稳定的转染复合物进入细胞，并将核酸释放入细胞内。
Hifectin I独特的制备方法增加了脂质体对真核细胞转染的高效性、广谱性、低毒性和可靠性，并使试剂在4°C储存至少稳定12个月。
Hifectin I可高效转染多种细胞，属于可被生物降解的脂质体因而细胞毒性明显降低，转染效率与Invitrogen 的LipofectAMINE相当，但其价格仅相当同类试剂的1/3。
转染时只需将Hifectin I稀释与DNA溶液混合并室温放置15分钟即可转染细胞。
1 ml Hifectin I 可转染100-500µg DNA或50-100只35mm培养皿或250-1000孔24孔板细胞。
颜色：清亮或略呈白色胶体溶液。
储存：4°C储存12个月。
切勿冻存。
适用：将DNA、RNA、寡聚核苷酸转入真核细胞。
适用于大多数传代或原代细胞。
转染步骤：以生长于24孔板的一个孔内的贴壁细胞为例，使用其它规格培养皿参见表一。
细胞准备：转染前一天传0.5-2 x 105细胞于24孔板内，加1 ml正常培养基培养。
在光镜下观察细胞，当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的85-95%时，为Hifectin I转染的最佳时机。
这通常需要18-24小时，但依细胞类型和接种量而变。
注意：传代时接种过多的细胞，100%长满的细胞的转化效率明显降低
制备转染复合物：对特定细胞类型来说，应该优化加入DNA (µg)和Hifectin I (µl)比率和绝对量，参见后面附表。
推荐DNA和Hifectin I的初始比例为1:4。
DNA (µg) ：Hifectin I (µl) ＝1:2～1:8
转染实际上是人为造成细胞对外源物质的高摄取状态，因此过量摄入DNA和转染试剂将导致细胞毒性而降低转染效率。
与细胞接触的转染混合物中Hifectin I 的最大浓度不应超过30 µl/ml，DNA浓度应小于5µg/ml。
参考表一制备转染复合物，参照表二进行优化。
下面的步骤以生长于24孔板的单孔贴壁细胞为例。
悬浮细胞转染参见表一后面的说明。
1. 取1 µg DNA稀释到25 µl 无血清无抗生素培养基，混匀。
2. 取2-8 µl Hifectin I 加入到25 µl 无血清抗生素培养基，轻轻混匀。
3. 吸取稀释的DNA溶液加入到稀释的Hifectin I溶液中，上下吹吸混匀，勿振荡。
室温孵育15分钟。
如果按照相反的顺序将稀释的Hifectin I溶液与DNA混合，将生成相反类型的DNA转染复合物，有可能会导致转染效率下降。
4. 在此期间用无血清培养基洗涤细胞1-2次，按照表一Step 5加入适宜体积的无血清无抗生素培养基。
5. 加入步骤3获得的转染复合物于培养瓶皿内，轻轻混合与细胞充分接触，开始转染细胞。
6. 二氧化碳孵箱37C孵育细胞4小时。
7. 吸除转染混合物，加入含血清的正常培养基；或直接将含血清培养基加到孔内，继续培养24小时以上。
观察细胞，进行下一步实验。
或1:10稀释传代，进行G418筛选。
技术咨询电话：400-607-9999
一DNA和转染试剂稀释表
悬浮细胞转染与上述步骤类似：(1) 离心收取细胞，用不含血清培养基洗涤2次；将1 x 106细胞混悬于1ml无血清培养基，加入6孔板内。
(2) 按照表一制备转染复合物。
将转染复合物加到悬浮细胞的培养基中，轻轻混匀。
(3) 二氧化碳孵箱培养4小时。
(4) 吸除转染混合物，换常规培养基，继续培养24小时以上。
观察细胞或进行下一步实验如G418筛选。
转染优化程序：
对特定类型的细胞，欲获得最大转染效率和最低细胞毒性，应该对加入DNA和Hifectin I的绝对量和比率、浓度等分别进行优化，步骤参见表二。
表二是生长于24孔板的单孔细胞为例进行优化操作的。
由于可以理解的心理因素，实验人员在转染时常常趋于加入过量的DNA和转染试剂和使用更小的转染复合物体积。
从表二可以计算，如果每孔加入1 µg DNA和8 µl Hifectin I，在200 µl转染混合物中，DNA的浓度将为5µg/ml，Hifectin I浓度达到40µl/ml，二者的浓度很容易产生细胞毒性；另外转染混合物体积很少时不利于操作也不利于细胞生长，不利于获得最佳转染效率。
作为参考，通常最后的转染混合物中DNA浓度应小于5µg/ml，Hifectin I浓度应<30～40 µl/ml。
表二给出DNA和转染试剂的量、比率、浓度等指标仅作为参考。
表二转染优化操作程序
1. 优化DNA:Hifectin I 比率，固定加入0.5 µg DNA
DNA : Hifectin I ratio 1:1 1:2 1:3 1:4 1:5 1:6
DNA µg in 25 µl 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Hifectin I µl in 25 µl 0.5 1 1.5 2 2.5 3
Add media µl 150 150 150 150 150 150
Final volume µl 200 200 200 200 200 200
Final DNA concentration µg/ml 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5
Final Hifectin I concentration µl/ml 2.5 5 7.5 10 12.5 15
2. 优化DNA和Hifectin I 绝对剂量，固定DNA:Hifectin I 比率为1:3或1:4
DNA : Hifectin I ratio 1:3 1:3 1:3 1:3 1:3
DNA µg in 25 µl 0.2 0.4 0.8 1.2 1.6
Hifectin I µl in 25 µl 0.6 1.2 2.4 3.6 4.8
Add media µl 150 150 150 150 150
技术咨询电话：400-607-9999
Final volume µl 200 200 200 200 200
Final DNA concentration µg/ml 1 2 4 6 8
Final Hifectin I concentration µl/ml 3 6 12 18 24
3. 优化DNA和Hifectin I 浓度，固定DNA和Hifectin I 绝对量和比率为1:3或1:4
DNA : Hifectin I ratio 1:3 1:3 1:3 1:3 1:3
DNA µg in 25 µl 1 1 1 1 1
Hifectin I µl in 25 µl 3 3 3 3 3
Add media µl 100 150 200 250 300
Final volume µl 150 200 250 300 350
Final DNA concentration µg/ml 6.7 5 4 3.3 2.85
Final Hifectin I concentration µl/ml 20 15 12 10 8.5
说明：
使用高纯水和不含内毒素的质粒DNA、溶液、器皿。
常规方法制备的质粒DNA含有大量内毒素，可明显降低降低转染效率。
使用内毒素清除剂(Endotoxin Removal Reagent)清除内毒素。
技术咨询电话：400-607-9999。