实验7_种子生活力的快速测定
实验步骤
BTB法
1. 煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，冷却倒胶至培 养皿（1/3皿）；
2. 取30粒完好的小麦种子，种胚向下插入胶(不软 不硬)；
3. 将培养皿置于35 ℃下培养 1hr，对光观察，如 种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是 死种子。
TTC/红墨水染色法
1. 2. 3. 4. 5. 将种子用温水（30℃）浸泡2-6h，使种子充分吸胀； 随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，取其一半 TTC备用，另一半红墨水法备用； 将TTC备用的一半种子浸于5 ml TTC 中，于恒温箱（3035℃）中保温30min； 将红墨水法的另一半种子用5 ml红墨水浸5 min（室温）； 染色结束后要立即进行鉴定，因放久会褪色。倒出TTC / 红墨水，再用清水冲洗种子1-2次，观察种胚被染色的情况。
（一）材料：小麦种子 （二）仪器设备：1. 小烧杯；2. 刀片；3. 镊子；4. 温箱 （三）试剂： 1. 0.12％-0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后， 呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应现用现配）。 2. 0.02％-0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G） 3. BTB溶胶
思考题
TTC法和红墨水法测定种子生活力的理论依据 有何不同?
生活力：指种子能够萌发的潜在能力或种胚 具有的生命力。
实验目的
1. 了解种子生活力快速测定的方法
2. 理解TTC/BTB/染料法测定种子生活力的原理
实验原理
TTC法
1. 2. 凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化-还原反 应，而无生活力的种胚则无此反应。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶 （NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯甲腙 （TTF），胚便染成红色。 如种胚死亡便不被染色；如种胚生活力下降，呼吸作用明显 减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，染色较浅；故可根据种胚 染色的部位或深浅来鉴定种子的生活力。
3.
TTC还原反应如下：
氯化三苯基四氮唑
三苯甲腙
活种子
死种子
BTB溴麝香草酚蓝法
1. 活细胞呼吸释放CO2， CO2溶于水成H2CO3解 离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映 酸度的改变； 2. BTB变色范围为pH6.0-7.6，酸性呈黄色，碱 性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 3. 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。
数据记录与处理
不同方法测定种子生活力统计表 方法 TTC 红墨水 有生活力 无生活力 供试粒数 种子粒数 种子粒数 30 30 有生活力种子 占供试粒数的%
BTB
30
注意事项
沿种胚中央准确切开，同粒TTC/红墨水法各一半 TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色 瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。 染色结束后立即进行鉴定，因放久会褪色。 显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中 溶胶倒至培养皿1/3处； 取完好小麦种子，将种胚向下插入BTB琼脂胶。
染料染色法
1. 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选 择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内， 胚部不染色。
2. 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了 选择吸收能力，染料可自由进入细胞内使胚部染色。 所以可根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命 力。
活种子
死种子
材料、设备及试剂
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
种子生活力的快速测定
4 方法步骤
4.1 浸种。将待测种子在 30～35 ℃温水中浸泡 ( 大麦、小 麦、籼谷 6 ～8h , 玉米 5h左右 , 梗谷 2h), 以增强种胚的呼 吸强度 , 使显色迅速。 4.2 显色。取吸胀的种子 50 粒 , 用刀片沿种胚中央纵切为两
半 , 其中一半放入培养皿中加适量红墨水溶液，处理10min
胚部不染色。而死的种胚细胞原生质膜丧生了选择用 的能力， 于是染料便能进入死细胞而使胚着色。故可
根据种胚是否染色来判断种子的生活力。
3 仪器设备、材料和试剂
• 3.1 仪器 培养皿2套；镊子1把；单面刀片1片；垫板(切
种子用)1块；烧杯1个；棕色试剂瓶；解剖针1把；搪瓷
盘1个；PH试纸。 • 3.2 试剂 • 取市售红墨水稀释 20 倍（1份红墨水加 19 份自来 水 ） 作为染色剂。 • 3.3 材料：玉米
。倒去红墨水溶液, 用水冲洗多次 , 至冲洗液无色为止 。观 察结果 。
5 实验结果
染色种子数 红墨水处理 未染色种子数 生活力
6 生理学实验
（多媒体课件）
田国政
湖北民族学院生物科学与技术学院
湖北省生物实验教学示范中心
实验2-2 种子生活力的快速测定
实验类型：基础验证型 实验学时：2学时
1 实验目的
熟悉红墨水法测定种子活力的原理和
方法及其计算。
2 实验原理
凡生活细胞的原生质膜具有选择性吸收物质能力 ,
某些染料如红墨水中的酸性大红 G 不能进入细胞内 ,
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定种子生活力快速测定实验人员：候勇 2012年度国培班果蔬花卉专业试验目的：种子生活力是指种子的发芽潜力，即发芽力，是判断种子质量的重要指标；要了解种子生活力的大小，最可靠的方法是测定种子的发芽率。
种子的发芽率是指在适宜条件下种子发芽的百分数，它是鉴定种子质量的主要依据，在确定播种量以及种子生理研究中具有重要意义。
本实验的目的就是快速测定种子生活力的方法。
实验仪器及材料：1、仪器：电热恒温培养箱、培养皿、烧杯、镊子、单面刀2、试剂：3%TTC溶液、0.1%BTB溶液、1%BTB琼脂凝胶、红墨水5%3、材料：玉米、小麦吸胀种子方法一：红墨水染色法实验原理：红墨水染色法是根据活种子细胞的原生质膜具有选择性吸收物质的透性，而死种子的胚细胞原生质膜则丧失此性质，于是染料进入死细胞而染色。
操作步骤：1、浸种：取不同种子一部分用沸水煮5-10min，作为死种子；一部分用凉水浸泡一昼夜，吸涨备用。
2、染色：取已吸涨种子100粒，玉米种子可在中间阔面将胚纵切为两半将其中一半放入培养皿中，用5%红墨水染色。
3、结果观察：经过5-8min，倒出红墨水，多次用清水清洗后观察胚的颜色，凡是胚部不着色的为生活良好的种子，有略带红色的说明生活力较弱，都染红的说明无生活力。
结果：活种子%=胚不着色的种子数/供试种子*100 50%=5/10*100方法二：BTB变色法实验原理：活种子进行呼吸作用呼吸空气中的O2，放出CO2。
CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离为H+和HCO3-，使得种子周围环境的酸度增加。
BTB法通过测定酸度的变化来判断种子活性。
BTB 变色范围为PH6.0—7.6,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为PH7.1）。
色泽差异显著，易于观察。
操作步骤：1%BTB染色将吸胀的小麦种子分别整齐地埋于1%BTB琼脂凝胶两个培养皿中，胚向下，间距约1cm。
培养皿置于30C培养箱中培养0.5h，在光亮处下观察，种子附近呈现深黄色晕圈的是活种子，用沸水中杀死的种子分别进行对照。
实验七种子生活力的快速测定(精)
种子冲洗l~2次，观察种胚被 染色的情况。凡种胚全部或 大部分被染成红色的即为具 有生活力的种子，种胚不被 染色的为死种子。如果种胚
（30℃~35℃）中保温
中非关键性部位（如子叶的
0.5~1h。另取100粒吸涨种 一部分）被染色，而胚根或
子，于沸水中煮5min后，
胚芽的尖端不染色，都属于
再加入0.5%TTC溶液染色。 不能正常发芽的种子。根据
2
实验原理
有生活力的种子能够进行呼吸代谢，在呼吸代谢途 径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的2，3， 5 - 三苯基氯化四唑（2，3，5 - triphenyl tetrazolium chloride 简称为TTC）还原为红色、不溶 性的甲月替，而且种子的生活力越强，代谢活动越
旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没 有呼吸作用，因而不会将TTC还原为红色。种胚生 活力衰退或部分丧失生活力，则染色较浅或局部被
染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的 深浅程度来判定种子的生活力。
2019/5/4
3
实验材料和器材
• 实验材料
水稻种子
• 器材：恒温箱、小白瓷碗、
镊子、刀片、小烧杯
• 试剂： 0.5% TTC溶液：
称取0.5 g TTC放入小烧杯 中，先加少许乙醇溶解后， 再用蒸馏水稀释定容至100 mL。TTC溶液最好随用随 配，不宜久藏。溶液应遮光
实验七：种子生活力的快速测定
（一）实验目的及意义 （二）实验原理 （三）实验步骤 （四）实验报告
2019/5/4
1
实验目的和意义
种子生活力（seed viability测定种子
生活力常采用萌发实验，即在适宜的条件下，
种子生活力快速测定
种子生活力快速测定一、实验原理通过本实验，掌握种子生活力快速测定的原理和方法。
二、实验原理（1）活细胞染色：脱氢辅酶（NADH或NAFPH)存在于活的细胞内，当TTC渗透进入细胞内作为受体被脱氢辅酶上的氢还原，便由无色的TTC变为红色的三苯基甲（TTE)。
当细胞死亡后，NADH会迅速被降解，不会发生相应的颜色反应，故TTC染色法可显示细胞是否存活。
（2）死细胞染色：有生命力的细胞膜是一个半透性膜，因此对内渗透的物质有选择性；而无生命力的细胞，其细胞膜已经消失，因此有的有色物质（如品红）不能进入活的细胞内，但可以进入已经死亡的细胞，从而使细胞内出现该有色成分特有的颜色，故可以据此鉴别细胞是否死亡。
三、实验材料、药品和器具1、实验材料：花生、黄豆2、实验药品和器具：品红、TTC、培养皿、吸水纸、镊子、解剖针、刀片等四、试验方法1、分别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入TTC培养1h左右，观察胚染色的情况。
胚被染色的为有活力种子，未被染色的为无活力的种子。
2、别取10颗红豆和黄豆的种子，沿种子的培从中切成两半，将带胚的部分放入培养皿中，加入品红培养10-20min，倒掉品红溶液，冲洗数次，观察胚染色的情况。
胚被染色的为无活力种子，未被染色的为有活力的种子。
五、实验结果品种测定方法测定种子总数有生活力种子粒数无生活力种子粒数种子生活率花生TTC 30 28 2 93% 品红30 28 2 93%黄豆TTC 30 30 0 100% 品红30 29 1 97% 实验结果可以得出选用TTC染色和品红染色得出的结果存在差异，用TTC染色得出的结果高于品红染色法。
结果分析：可能的原因是在清洗品红时没有清洗干净，品红粘在胚上，影响实验的观察，导致结果差异。
六、注意事项1、选取种子的时候，要尽量选取未发芽的种子，避免影响测定。
2、添加染色液时，要是然也尽量没过种胚，使种胚和染液充分接触。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
快速测定玉米种子生活力三法
进一步研究玉米种子生活力的影 响因素和作用机制，为农业生产
提供更加科学、准确的依据。
探索更加快速、简便的测定方法 ，提高方法的可操作性和实用性
。
结合现代生物技术，研究玉米种 子生活力与其他性状的关系，为 选种育种提供新的思路和方法。
THANK YOU
盐水漂浮法
该方法操作简便，但结果 受环境温度和种子质量影 响较大，准确性相对较低 。
剥胚染色法
该方法能够较为准确地测 定玉米种子的生活力，但 操作较为繁琐，需要较高 的实验技能。
适用范围比较
碘化钾染色法
适用于所有类型的玉米种子， 特别是对于已经经过处理的玉 米种子，该方法也能够得到较
为准确的结果。
染色法是根据种子胚部是否被染色来判断种子是否具有生 活力。具有生活力的种子胚部在染色液中会被染色，而没 有生活力的种子则不会被染色。
染色法通常使用的染色液为红色染料，如品红、甲基品红 等，因为这些染料能够与活细胞中的蛋白质结合，使其染 色。
染色法操作步骤
1. 将玉米种子放入染色液中浸泡3060分钟，使种子充分染色。
4. 加水浸泡
将称好的样品加入一定量的蒸馏水中 ，浸泡一定时间，一般以24小时为 宜。
5. 测定电导率
将浸泡后的样品用镊子取出，用滤纸 吸干表面水分，放入电导仪中测定其 电导率。
6. 数据记录
记录每个样品的电导率和对应的测量 值。
7. 数据处理
根据测定的电导率值，利用标准曲线 或公式计算出玉米种子的生活力。
电导率测定法是一种快速、简便、可靠的玉米种子生活力快速测定方法。
电导率测定法操作步骤
01
02
03
1. 仪器准备
准备好电导仪、烧杯、称 量纸、镊子等仪器和试剂 。
种子活性测定实验报告
种子活性测定实验报告1. 引言种子活性是指种子在适宜的环境下发芽并形成新的植株的能力。
测定种子活性有助于评估种子的品质和提高农作物的产量。
本实验旨在通过测定种子的发芽率和活力指数来评估不同处理下的种子活性。
2. 材料与方法2.1 材料- 待测种子样本：A品种、B品种、C品种- 无菌培养基- 无菌培养皿- 实验室摄像机和计算机- 光照设备- 定量滴管和移液管2.2 方法1. 种子表面消毒：将待测种子分别放入无菌培养皿中，用70%酒精浸泡5分钟，然后用无菌水冲洗3次，以达到表面消毒的目的。
2. 播种：在每个无菌培养皿上均匀撒上100颗已消毒过的种子，使其分散排列。
3. 添加培养基：在每个培养皿中加入适量的无菌培养基，使其浸没种子。
4. 培养条件：将培养皿放置在恒温恒湿的培养箱中，保持温度在25左右，相对湿度为80%。
5. 光照条件：在培养皿上方设置适当的光照设备，以提供足够的光照，模拟自然环境。
6. 数据记录：每天记录各品种种子的发芽情况，包括发芽数、芽长等指标。
7. 活力指数计算：将发芽率和芽长指标综合计算得到种子活力指数。
3. 结果与讨论经过实验观察和数据统计，我们得到了以下结果：品种处理1 处理2 处理3 平均发芽率平均芽长- -A 90% 80% 95% 88.3% 3.6cmB 75% 90% 85% 83.3% 4.2cmC 85% 70% 80% 78.3% 3.8cm通过计算我们得到了各品种的种子活力指数：- A品种：88.3% * 3.6cm = 317.88- B品种：83.3% * 4.2cm = 349.86- C品种：78.3% * 3.8cm = 297.54根据结果我们可以看出，B品种的种子活力指数最高，最适合作为优良的种子来源。
活力指数越高，说明种子具有更好的发芽能力和生长潜力。
而对于不同处理方式的比较，我们可以看出处理2对种子的发芽率和芽长有较为显著的提高。
这可能是由于处理2提供了适宜的环境条件，如更加合理的温度和光照，促进了种子的发芽和生长。
种子生活力的测定
种子生活力的测定一、氯化三苯基四氮唑（TTC）法【原理】凡有生活力的种子胚部在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，而无生活力的种胚则无此反应。
当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯基甲（TTF），胚便染成红色。
当种胚生活力下降时，呼吸作用明显减弱，脱氢酶的活性亦大大下降，胚的颜色变化不明显，故可由染色的程度推知种子的生活力强弱。
TTC还原反应如下：TTC（无色） TTF（红色）【仪器与用具】培养皿2套；镊子１把；单面刀片１片；垫板（切种子用）１块；烧杯１个；棕色试剂瓶；解剖针１把；搪瓷盘１个；pH试纸。
【试剂】TTC溶液的配制：取1g TTC溶于１L蒸馏水或冷开水中，配制成0.1％的TTC溶液。
药液pＨ应在6.5～7.5，以pH试纸试之（如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水）。
【方法】1.将玉米、小麦等作物的新种子、陈种子或死种子，用温水（30℃）浸泡2～6h，使种子充分吸胀。
2.随机取种子2份，每份50粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。
3.把切好的种子分别放在培养皿中，加TTC溶液，以浸没种子为度。
4.放入30～35℃的恒温箱内保温30min.也可在20℃左右的室温下放置40～60min.5.保温后，倾出药液，用自来水冲洗2～3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力，把判断结果记入表32-1内。
表32-1 染色法测定种子生活力记载表【注意事项】1.TTC溶液最好现配现用，如需贮藏则应贮于棕色瓶中，放在阴凉黑暗处，如溶液变红则不可再用。
2.染色温度一般以25～35℃为宜。
3.判断有生活力的种子应具备：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色；子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处；胚根尖虽有小部分坏死，但其它部位完好。
4.判断无生活力的种子应具备：胚全部或大部分不染色；胚根不染色部分不限于根尖；子叶不染色或丧失机能的组织超过1/2；胚染成很淡的紫红色或淡灰红色；子叶与胚中轴的连接处或在胚根上有坏死的部分；胚根受伤以及发育不良的未成熟的种子。
实验三十九种子生活力的快速测定
实验三十九种子生活力的快速测定种子发芽率是鉴定种子品质的重要标志，在确定播种量以及种子生理研究方面具有重要的作用，常需加以测定。
但一般测定发芽率的方法所需时间长，尤其是对处在深休眠状态的种子，根本无法应用，所以有必要根据活种子的生理特性建立起一套快速鉴定种子生活力的方法，以克服常规方法的缺点。
本实验介绍剥胚法，染色法和荧光法三类方法，可根据具体情况选用。
Ⅰ、剥胚法一、目的掌握用剥胚法测定种子生活力的原理和方法。
二．原理此法适于测定休眠状态的种子的生活力。
种子深休眠的原因很多，有些是因为果皮或种皮的束缚（如不透水、不透气）造成的；也有的在果皮、种皮、胚乳中存在着萌发抑制剂，这类障碍可以用除去果皮、种皮、胚乳或切去一部分子叶的办法克服。
当阻碍萌发的物理或化学因素被排除以后，胚就很快萌发。
三、材料与设备1. 材料：苹果、柑桔的成熟种子或玉米乳熟期籽粒。
2. 设备：培养皿；滤纸；刀片；镊子。
3. 试剂：0.1﹪升汞。
四、实验步骤1. 种子处理取刚从成熟果实中剥出的新鲜柑桔种子300粒，已晒干的柑桔种子100粒，乳熟期新鲜玉米种子200粒，经晒干的乳熟期玉米种子或贮存三年以上的玉米陈种子各100粒，用0.1％升汞消毒后再用水充分洗净，进行以下处理：1.1柑桔新鲜种子，不加处理，作为对照；1.2 柑桔新鲜种子，用镊子小心剥去种皮，留下完整的胚；1.3柑桔新鲜种子，用刀片把种子横切为二，留下带胚根的一半，注意切除部分应不少于种子全长的一半。
1.4晒干的柑桔种子*，处理同1.2；*柑桔种子经晒干后即失去发芽能力。
1.5新鲜乳熟期玉米粒，不加处理作为对照（新鲜乳熟玉米种子粒因胚乳中存在着萌发抑制剂，不能萌发）。
1.6新鲜乳熟期玉米子粒，用镊子小心地将胚剥出。
1.7 晒干的乳熟期玉米子粒，不加处理。
1.8 贮存三年以上的玉米陈子粒，不加处理。
2. 观察测定以上处理完毕，随即将种子或胚整齐地摆在铺有适当大小滤纸的培养皿里，用蒸馏水湿润滤纸，加盖后置30℃左右的温箱中培养，并注意随时补充水分（但不可加水过多，否则易因缺氧而霉烂），从第二天起每天统计发芽种子数，记入下表，连续观察二星期。