真菌学实验报告
真菌学实验报告
实验名称：真菌形态观察与鉴定实验日期：2023年X月X日实验地点：实验室实验目的：1. 学习和掌握真菌的基本形态结构。
2. 通过显微镜观察真菌的微观结构，了解其细胞壁、细胞核、菌丝等特征。
3. 学会根据真菌的形态特征进行初步鉴定。
实验原理：真菌是一类真核生物，其细胞结构相对复杂，具有独特的细胞壁、细胞核和菌丝等特征。
通过显微镜观察真菌的形态结构，可以初步判断其种类，为真菌的鉴定提供依据。
实验材料：1. 真菌样品：曲霉、青霉、酵母菌等。
2. 显微镜：光学显微镜、油镜。
3. 染色剂：乳酸酚棉蓝染色剂、革兰氏染色剂。
4. 其他试剂：蒸馏水、酒精、甘油等。
实验步骤：1. 取少量真菌样品，置于载玻片上，滴加乳酸酚棉蓝染色剂，盖上盖玻片，轻压使样品展开。
2. 将载玻片置于显微镜下，先用低倍镜观察真菌的宏观形态，如菌丝的粗细、颜色等。
3. 转换至高倍镜，观察真菌的微观结构，如细胞壁、细胞核、菌丝等。
4. 取少量真菌样品，滴加革兰氏染色剂，进行革兰氏染色，观察真菌的革兰氏染色特性。
5. 根据真菌的形态特征，进行初步鉴定。
实验结果：1. 曲霉：- 宏观形态：菌丝粗细不均，有的菌丝较粗，有的较细。
- 微观结构：细胞壁较厚，细胞核明显，菌丝分支较多。
- 革兰氏染色：革兰氏阳性。
2. 青霉：- 宏观形态：菌丝较细，颜色较深。
- 微观结构：细胞壁较薄，细胞核不明显，菌丝分支较少。
- 革兰氏染色：革兰氏阳性。
3. 酵母菌：- 宏观形态：菌丝较细，呈球形或椭圆形。
- 微观结构：细胞壁较薄，细胞核明显，菌丝分支较少。
- 革兰氏染色：革兰氏阴性。
实验讨论：1. 通过本次实验，我们掌握了真菌的基本形态结构，了解了细胞壁、细胞核、菌丝等特征。
2. 在观察真菌的微观结构时，应使用高倍镜，以获得更清晰的图像。
3. 真菌的革兰氏染色特性有助于判断其属于革兰氏阳性还是革兰氏阴性。
4. 在鉴定真菌时，需结合真菌的宏观形态、微观结构和革兰氏染色特性进行综合判断。
真菌的观察实验报告
真菌的观察实验报告真菌的观察实验报告一、引言真菌是一类特殊的生物，它们既不属于植物界，也不属于动物界，而是独立成为一个界。
真菌在自然界中广泛分布，包括了许多不同的种类，如霉菌、酵母菌和蘑菇等。
本实验旨在观察真菌的生长过程以及其对环境的适应能力。
二、实验材料与方法1. 实验材料：- 真菌培养基：包括蔗糖、琼脂和酵母粉等成分。
- 真菌菌种：选择了一种常见的霉菌菌种。
- 培养皿、移液管、显微镜等实验器材。
2. 实验方法：- 准备培养基：按照一定比例混合蔗糖、琼脂和酵母粉，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后倒入培养皿中。
- 接种真菌：用移液管将真菌菌种均匀地滴在培养基上，然后将培养皿盖好。
- 观察生长过程：将培养皿放置在适宜的温度和湿度条件下，每隔一段时间观察真菌的生长情况，并记录相关数据。
- 显微镜观察：在适当的时间点，取出培养皿中的真菌样本，放在显微镜下观察其细胞结构和特征。
三、实验结果与分析开始实验后，我们观察到真菌在培养基上迅速生长，并形成了一片均匀的菌丝网络。
随着时间的推移，菌丝网络逐渐扩展，形成了更大的菌落。
在观察的过程中，我们还注意到一些有趣的现象。
首先，我们发现真菌的生长速度与温度和湿度密切相关。
在较高的温度下，真菌的生长速度明显加快，而在较低的温度下则相对缓慢。
这表明真菌对温度的适应能力较强。
另外，适宜的湿度也对真菌的生长起到重要的影响。
过高或过低的湿度都会抑制真菌的生长，而适宜的湿度则促进了其菌丝的扩展。
其次，通过显微镜观察，我们可以清晰地看到真菌的细胞结构。
真菌的细胞由菌丝组成，菌丝是一种细长的细胞结构，具有分枝和交叉的特点。
菌丝的末端通常会形成孢子或孢子团，这是真菌繁殖的一种方式。
通过观察不同时间点的样本，我们发现孢子的数量逐渐增加，这说明真菌在适宜的环境下能够迅速繁殖。
最后，我们还观察到真菌对光线的敏感性。
在实验过程中，我们将一部分培养皿放置在光照充足的环境下，而另一部分则放置在黑暗中。
真菌形态观察实验报告
真菌形态观察实验报告真菌形态观察实验报告引言：真菌是一类生物体，常见于自然界中的各种环境中，包括土壤、水体、空气等。
真菌的形态多样，有的呈现菌丝状，有的形成孢子团，还有的形成菌盖和菌柄。
为了更好地了解真菌的形态特征，我们进行了一系列的实验观察。
实验一：真菌的菌丝观察我们从周围的环境中采集了一些土壤样品，并在实验室中进行了菌丝观察。
首先，我们将土壤样品放入培养皿中，加入适当的培养基，然后在恒温箱中进行培养。
经过几天的培养，我们观察到了菌丝的形成。
菌丝呈现出细长的线状结构，有的呈现分枝状，有的呈现网状。
通过显微镜观察，我们还发现菌丝表面覆盖着一层透明的物质，这是真菌分泌的黏液，有助于菌丝的生长和营养吸收。
实验二：真菌的孢子观察为了观察真菌的孢子形态，我们选择了一种常见的黑曲霉进行实验。
我们将黑曲霉菌丝划过培养基，经过一段时间的培养，我们观察到了大量的黑色孢子形成。
这些孢子呈现出圆形或卵形，表面光滑，颜色深黑。
通过显微镜观察，我们发现孢子内部含有丰富的营养物质，这些孢子可以在适宜的环境下发芽，形成新的菌丝。
实验三：真菌的菌盖和菌柄观察为了观察真菌的菌盖和菌柄结构，我们选择了一种常见的蘑菇进行实验。
我们将蘑菇培养在适宜的环境中，经过一段时间的生长，我们观察到了蘑菇的形成。
蘑菇的菌盖呈现出圆形或伞状，表面光滑，颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄，菌柄呈现出圆柱形，表面光滑。
通过显微镜观察，我们发现菌柄内部有空心结构，这有助于蘑菇的支撑和养分输送。
结论：通过以上的实验观察，我们对真菌的形态特征有了更深入的了解。
真菌的菌丝呈现出细长的线状结构，有的呈现分枝状，有的呈现网状。
真菌的孢子呈现出圆形或卵形，表面光滑，颜色深黑。
真菌的菌盖呈现出圆形或伞状，表面光滑，颜色多样。
菌盖下面有许多垂直向下延伸的菌柄，菌柄呈现出圆柱形，表面光滑。
这些形态特征不仅有助于真菌的生长和繁殖，也为我们研究真菌的分类和进化提供了重要的参考。
真菌学实验报告-范本模板
真菌学实验报告一。
实验目的：1.1了解真菌形态的基本特征。
1.2掌握丝状真菌制片方法。
1.3掌握内生真菌的分离方法1.4掌握真菌的鉴定方法。
二.前言：真菌广泛分布于地球表面，从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。
真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中.当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业,真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。
真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的分析。
因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具,真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。
植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性,植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎,根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用.研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。
三.材料与方法：3。
1.1材料：在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。
3。
1.2。
药品与试剂：葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O,马铃薯、琼脂。
孟加拉红,青霉素，链霉素,甲基蓝，蛋白胨,酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。
消毒剂：75%的乙醇，0.1％升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10％）,30%双氧水.双蒸水、琼脂糖，Tris饱和酚、巯基乙醇(β- Mercaptoethanol)，石英砂，Tris饱和酚,氯仿，异戊醇，无水乙醇，硼酸,冰醋酸，氯化钠，盐酸，氢氧化钠，EDTA,CTAB。
真菌学实验报告
真菌学实验报告本次实验是关于真菌学的研究，主要分为两部分：菌落培养及显微镜观察。
一、菌落培养a) 实验材料：1. 大豆胨蛋白琼脂（SDA）培养基2. 火炬显微镜3. 细菌交错匀胶器4. 无菌玻璃针5. 无菌移液枪6. 真菌菌丝体1. 将SDA培养基加热至可倒，倒入培养皿中并等待冷却至室温。
2. 取真菌菌丝体，用细菌交错匀胶器在SDA培养基上均匀涂抹，然后在培养皿上留出一些空间。
3. 覆盖培养皿盖子，放在恒温箱中，调节温度和湿度。
4. 观察菌落的生长情况，并记录生长时间、颜色、菌落形状等信息。
在恒温箱中生长了4天后，观察到了2种真菌的菌落生长，分别为白色和灰色的菌落。
白色菌落的形状为不规则圆形，灰色菌落的形状为圆形。
两种菌落的直径分别为1.5cm和1cm。
两种菌落都呈现出平滑的表面，整体呈微凸的形状。
二、显微镜观察1. 十滴定盘（盛菌液60ul）2. 火炬显微镜3. 双孔双目显微镜4. 干式消毒柜5. 细菌交叉匀胶器6. 玻璃盖片7. 甲醇8. 静电纸1. 用细菌交错匀胶器将真菌菌丝体均匀涂抹到玻璃盖片上。
2. 用甲醇固定菌落，将甲醇迅速滴到菌落上，使之固定。
3. 将盖片拿起，晾干后放入干式消毒柜进行消毒处理。
4. 在静电纸上滴上一滴解剖液，然后将玻璃盖片反面朝下放置在解剖液上。
5. 用双孔双目显微镜观察菌落的内部结构，并记录所见情况。
观察到两种真菌的菌落内部都有类似于小丝状结构的菌丝体，在这些菌丝体上可以看到类似于芽孢的结构。
这些芽孢形成在菌丝体上，会逐渐壮大，并最终破裂释放。
观察到的菌丝体大多数是透明或淡黄色，芽孢结构呈现出黑色或深紫色。
结论：通过菌落培养和显微镜观察，我们成功地分离出了2种真菌，并观察到了它们的生长和内部结构。
这种实验有助于我们更深入地了解真菌的生态特征和繁殖方式，为研究真菌的发展和应用提供了基础。
人体真菌治疗实验报告(3篇)
第1篇一、实验背景人体真菌感染是一种常见的皮肤性疾病，主要由真菌感染引起，包括体癣、股癣、手足癣等。
真菌感染会给患者带来不适，严重时甚至影响日常生活。
因此，寻找有效的治疗方法对于真菌感染的治疗至关重要。
本实验旨在探究不同抗真菌药物对人体真菌感染的治疗效果。
二、实验目的1. 了解不同抗真菌药物对人体真菌感染的治疗效果。
2. 分析不同抗真菌药物的优缺点。
3. 为临床治疗人体真菌感染提供参考。
三、实验材料与方法1. 实验材料：- 实验对象：20名患有不同类型真菌感染的患者。
- 抗真菌药物：咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等。
- 实验仪器：显微镜、培养皿、酒精灯、无菌棉签等。
2. 实验方法：1. 收集患者皮肤样本，包括真菌感染的部位。
2. 对患者进行分组，每组5人，分别给予咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物进行治疗。
3. 观察并记录患者治疗过程中的症状变化，如瘙痒、脱皮、臭味等。
4. 定期对患者进行治疗后的皮肤样本进行显微镜检查，观察真菌生长情况。
5. 治疗结束后，评估不同抗真菌药物的治疗效果。
四、实验结果1. 治疗过程中，患者症状逐渐改善，瘙痒、脱皮、臭味等症状明显减轻。
2. 显微镜检查结果显示，在咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物的治疗下，真菌生长得到有效抑制。
3. 治疗结束后，咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物的治疗效果分别为：85%、90%、75%、80%。
五、实验讨论1. 咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物对人体真菌感染具有良好的治疗效果，可有效抑制真菌生长，缓解患者症状。
2. 咪康唑和特比萘芬的治疗效果较好，可能与药物的抗真菌活性较强有关。
3. 克霉唑和酮康唑的治疗效果相对较差，可能与药物的抗真菌活性较弱有关。
4. 在治疗过程中，患者应保持皮肤干燥清洁，避免刺激性食物的摄入，有利于病情恢复。
六、实验结论本实验结果表明，咪康唑、特比萘芬、克霉唑、酮康唑等抗真菌药物对人体真菌感染具有良好的治疗效果。
真菌实验报告
一、实验目的1. 观察和描述真菌的形态特征。
2. 学习真菌的培养和分离方法。
3. 了解真菌在自然界中的作用及其与人类生活的关系。
二、实验材料与试剂1. 实验材料：土壤、水果（如苹果、香蕉）、面包等富含真菌的食物。
2. 试剂：无菌水、无菌棉签、无菌培养皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳酸酚棉蓝染色液等。
三、实验方法1. 真菌的采集与分离（1）采集土壤样品，用无菌水将土壤样品稀释至一定浓度。
（2）用无菌棉签蘸取稀释后的土壤样品，均匀涂抹在牛肉膏蛋白胨培养基上。
（3）将培养皿倒置，放入恒温箱中培养。
（4）观察菌落生长情况，挑取典型菌落进行纯化。
2. 真菌的形态观察（1）将纯化后的真菌菌落接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，培养至适宜时期。
（2）用无菌水轻轻洗去菌落表面的培养基，制成临时玻片。
（3）用乳酸酚棉蓝染色液染色，镜检观察真菌的形态。
3. 真菌的培养与繁殖（1）将分离得到的真菌接种于牛肉膏蛋白胨培养基上，培养至菌落丰满。
（2）用无菌水稀释菌液，制成一定浓度的孢子悬液。
（3）将孢子悬液接种于新的牛肉膏蛋白胨培养基上，观察菌落生长情况。
四、实验结果1. 真菌的形态特征观察到的真菌菌落呈现出不同的形态，如绒毛状、蜘蛛网状、絮状等，有的菌落呈现出红色、褐色、绿色等不同的颜色。
2. 真菌的培养与繁殖在牛肉膏蛋白胨培养基上，真菌菌落生长迅速，繁殖能力强。
通过稀释孢子悬液，可以观察到真菌的繁殖过程。
五、讨论与分析1. 真菌在自然界中广泛分布，与人类生活密切相关。
本次实验观察到的真菌菌落形态各异，体现了真菌的多样性。
2. 通过培养真菌，可以了解真菌的生长条件和繁殖方式。
真菌的繁殖能力强，可以通过孢子进行繁殖，这也是真菌在自然界中广泛分布的原因之一。
3. 真菌在食品、医药、生物工程等领域具有广泛的应用价值。
例如，真菌可以用于生产抗生素、酶等生物制品。
六、实验总结本次实验成功观察到了真菌的形态特征，并学习了真菌的培养和分离方法。
通过实验，我们对真菌有了更深入的了解，认识到真菌在自然界和人类生活中的重要作用。
观察真菌的实验报告
观察真菌的实验报告背景介绍真菌是一类生物界中独立的生物群体，它们形态各异，包括了霉菌、酵母菌、黑曲霉等。
真菌广泛存在于自然界中的各个环境中，包括土壤、水体、空气中等。
真菌在自然界中扮演着重要的角色，不仅能分解有机物，还能产生一些有用的化合物。
本实验旨在观察不同条件下真菌的生长情况，探究真菌对环境的适应性和生长特点。
实验材料和方法材料：1. 真菌菌种：选取了两种常见的真菌菌种进行观察2. 培养基：使用琼脂作为基础培养基3. 培养皿：用于培养真菌的容器4. 实验器材：显微镜、移液器、培养皿铺平器等方法：1. 准备培养基：将琼脂块加入适量的水中，搅拌均匀，加热至融化。
将融化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后封闭培养皿。
2. 接种真菌：将刚刚凝固的琼脂培养基用移液器从培养皿中取出，滴在另一片培养基上，使得两个培养基合二为一，形成接种区域。
3. 形成接种块：用培养皿铺平器将接种区域周围的琼脂均匀压平，形成接种块。
4. 不同条件下培养：将制作好的培养皿放置在不同条件下，包括温度、湿度和光照等方面的差异。
5. 观察记录：每隔一段时间利用显微镜观察真菌的生长情况，并记录观察结果。
实验结果我们在实验中观察到了真菌的生长情况，并记录了观察结果。
以下是我们的观察结果：1. 温度对真菌生长的影响：我们将两个培养皿分别置于不同的温度条件下观察真菌的生长情况。
结果显示，较高温度（30C）下的真菌生长较为迅速，而较低温度（20C）下的真菌生长较缓慢。
2. 湿度对真菌生长的影响：我们将两个培养皿分别置于不同的湿度条件下观察真菌的生长情况。
结果显示，较高湿度下的真菌生长茂盛，生长速度明显快于较低湿度条件下的真菌。
3. 光照对真菌生长的影响：我们将两个培养皿分别置于不同光照条件下观察真菌的生长情况。
结果显示，光照条件对真菌生长并没有明显的影响，两个培养皿中的真菌生长情况相似。
结论通过以上观察结果，我们得出了以下结论：1. 温度对真菌生长有一定影响，较高温度下真菌的生长速度更快。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
真菌学实验报告一.实验目的：1.1了解真菌形态的基本特征。
1.2掌握丝状真菌制片方法。
1.3掌握内生真菌的分离方法1.4掌握真菌的鉴定方法。
二.前言：真菌广泛分布于地球表面,从高山、湖泊到田野、森林，从海洋、高空到赤道、两极，到处都有真菌。
真菌虽然不在空气中生长繁殖，但它的孢子却成群的漂浮在天空，只要稍微注意你会发现人类原来生活在真菌的汪洋大海中。
当今世界，生物技术已迈入世界经济的支柱产业，真菌学在生物技术的大潮中得到了长足的发展。
真菌是原始的真核生物，具有广泛的多样性，真菌生长我繁殖迅速，在很短的时间内就可以得到比动物和植物多得多的后代，能够直接、快速地进行遗传性状分离的分析。
因此，真菌可以作为研究基础生物学过程中的一个重要工具，真菌基因的多样性以及真菌分子生物学的发展，为生物技术产业提供了一个广阔的天地。
植物的生长环境直接影响内生真菌的生物多样性，植物物种的年代越久远，其生物内生真菌的多样性越丰富：抗病原性能越强的植物，其所含的内生真菌具有抗菌活性的可能行就越大；其所含的内生真菌有可能产生与植物相同或相似的抗菌无知或产生抗菌活性物质可能参与了药用植物的抗菌过程，本实验通过植物病原真菌和G+、G-细菌的抑制实验发现茎，根，花，种子或果实内生真菌的代谢产物具有不同程度的抑菌能力，并且对G+、G-有普片遍的抑菌作用。
研究和开发内生真菌的寻找新的抗菌活性物质具有广泛的应用前景。
三.材料与方法：3.1.1材料：在校园内采集银杏、喜树、桂花树样品包括叶、茎、根、花、种子或果实。
3.1.2.药品与试剂：葡萄糖、蛋白胨、KH2P04·3H2O、MgSO4·7H2O，马铃薯、琼脂。
孟加拉红，青霉素，链霉素，甲基蓝，蛋白胨，酵母膏，蔗糖，磷酸盐，葡萄糖，琼脂条，无菌水等。
消毒剂：75%的乙醇，0.1%升汞（HgCl2），次氯酸钠溶液（含活性氯10%），30%双氧水。
双蒸水、琼脂糖，Tris饱和酚、巯基乙醇(β- Mercaptoethanol)，石英砂，Tris饱和酚，氯仿，异戊醇，无水乙醇，硼酸，冰醋酸，氯化钠，盐酸，氢氧化钠，EDTA，CTAB。
3.1.3.培养基：3.1.3.1马铃薯、葡萄糖琼脂培养基马铃薯汁 1000ml，葡萄糖20g，琼脂20g（注：取去皮马铃薯200克，切成小块，加水1000毫升煮沸30分钟，滤去马铃薯块，将滤液补足至1000毫升，加葡萄糖20克，琼脂15克，溶化后分装，15磅灭菌30分钟3.1.3.2察氏琼脂培养基蔗糖30g，NaNO33g，MgSO4.7H2O 0.5g，KCl 0.5g，FeSO4.7H2O 0.01g，K2HPO4 1g，琼脂13g，蒸馏水1000ml，自然pH3.1.3.3沙氏培养基蛋白胨 1g，葡萄糖或麦芽糖 4 g，琼脂 1.5克，水 100 ml。
制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH 即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压115℃20分钟。
趁热斜好，凝固备用。
3.1.3.4马丁氏培养基葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1%孟加拉红3.3mL，琼脂20g，水 1000mL，pH值自然。
抗生素用法与用量：培养基灭菌之后分装前按链霉素40U/mL，青霉素30U/mL用量加入，冷却到45℃左右未凝固时加入抗生素，混匀倒平板。
四.方法：4.1.1采样方法：在校园内找到银杏、喜树、桂花树并用刀采集叶、茎、根、皮、种子。
4.1.2样品前处理：分别取根、茎、叶、果实，用洗涤剂在自来水下洗净。
老树皮用75%酒精进行表面消毒后，用镊子取出，于酒精灯上烧灼15秒至表面焦糊，切成1×1cm2大小置于PDA固体培养基上。
对于根、茎、叶、果实按下列程序进行表面消毒：75%的酒精漂（浸）洗2-3min→无菌水冲洗4-6次→0.1%升汞不同的消毒时间（见表2-2，共设置7个梯度）→无菌水冲洗4-6次→用灭菌滤纸吸干多余水分→无菌刀片将材料切成小块将根、茎的表皮、韧皮部、木质部大致分开，并切成0.5×0.5cm2大小。
将果实的外种皮去掉，消毒之后将内种皮去掉。
灭菌时，沥干的植物材料转放到烧杯中，记好时间，倒入消毒溶液，不时用玻璃棒轻轻搅动，以促进材料各部分与消毒溶液充分接触，驱除气泡，使消毒彻底。
在快到时间之前1-2分钟，开始把消毒液倾入一备好的大烧杯内，要注意勿使材料倒出，倾净后立即倒入无菌水，轻搅漂洗。
灭菌时间是从倒入消毒液开始，至倒入无菌水时为止。
灭菌液要充分浸没材料。
宁可多用些灭菌液，切勿勉强在一个体积偏小的容器中使用很多材料灭菌。
4.1.3 内生菌的分离方法：将上述组织块置于分离培养基上（每一平皿培养5块组织块）于27℃恒温培养，同时将上述消毒过程中最后一次冲洗组织块后的无菌水滴在培养基上平行培养，用以检测消毒是否彻底。
观察菌丝生长情况及污染情况。
4.1.4纯化方法：培养3-4天后及时采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌丝或菌落移种到新鲜PDA培养基上。
纯化3-4次以保证所得菌落为纯培养。
4.2形态鉴定方法：4.2.1培养方法：4.2.1.1培养基：查氏培养基、沙氏培养基和PDA培养基。
4.2.1.2将4℃保存菌种活化2次；4.2.1.3将活化菌种分别点种PDA、沙氏、察氏平板，每重复4.2.1.425℃恒温培养箱培养7天；4.2.1.5然后进行菌落特征描述，取一个平行进行制片（胶带子粘片法），观察个体形态；4.2.1.6另两个平行继续培养至14天，取出；4.2.1.7重复步骤4，作为最终描述结果；4.2.1.8根据真菌分类鉴定手册和相关资料分析确该菌的归属。
4.2.2制片方法：胶带粘贴法：选用在显微镜油镜下观察细致不粗糙且粘性好的胶带。
取一小段胶带从菌落表面的中心向边缘粘，75%乙醇固定，乳酸石炭酸棉蓝染色液染色，将粘有菌丝的一面向上，盖上盖玻片，于显微镜下观察产孢结构等特征。
4.2.3鉴定标准：观察的要点：4.2.4菌落宏观形态：大小：以菌落的直径（mm）表示。
颜色：包括菌落表面和背面的颜色，及色素是否渗入培养基。
菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。
菌落的质地：毡状、毯状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状、有无成束状或绳状的气生菌丝。
菌落的高度：扁平、凸起或隆起，及菌落中心部分状况等。
菌落边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。
渗出物：菌落表面有无液滴及液滴的颜色等。
4.2.5个体形态：菌丝的特征：表面性状（粗糙或光滑），宽度等分生孢子梗：分支情况--简单或复杂，轮生或单生等；长短；基部粗糙或光滑等。
产孢结构的形态特征：形状，大小，着生状况（位置，单生、互生或成轮生体）分生孢子的形态：形状，大小，表面状况，聚集方式（直链、斜链或聚集成头）4.3分子生物学鉴定：4.3.1培养方法：培养基成分与不加琼脂的PDA固体培养基成分相同。
将液体培养基以100mL每瓶分装至250mL三角瓶中，用8层纱布封口。
121℃，蒸汽灭菌20min。
将菌丝致密的真菌接种到液体培养基中，于恒温振荡培养箱中27℃、120rpm培养5-7天。
用两层灭菌纱布过滤菌丝球，用无菌蒸馏水冲洗菌丝球5次，避免培养基中的糖类和蛋白对DNA提取的影响。
40℃下烘干菌丝，但是不要过于干燥，然后进行DNA的提取。
4.3.2基因组DNA的提取DNA提取采用CTAB法。
CTAB（cetyltriethylammonium bromide，十六烷基三乙基溴化铵）是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度时，从溶液中沉淀，通过离心可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
CTAB法的好处是能很好地去掉糖类杂质，提取前期可得到高含量的DNA。
4.3.2.1用CTAB法提取材料DNA的具体步骤如下：将CTAB buffer在65℃水浴锅中预热，研钵用液氮预冷；4.3.2.2 取0.1g左右菌丝体，在液氮中迅速研磨成粉末后，迅速加入5mL预热的提取液及10μLβ-巯基乙醇，混合均匀后把混合液转入1.5mL离心管中700μL/管；4.3.2.3 于65℃水浴保温0.5-1h，时间不能超过1.5h。
保温期间要轻轻振摇几次；4.3.2.4 冷却至室温后，加入等体积(700μL)的饱和酚：氯仿：异戊醇(25：24：1)，充分混匀后静置10min。
4.3.2.5离心(12000rpm，10min，室温)，去沉淀，将上清液转入干净离心管中。
4.3.2.6 根据杂质的去除情况重复步骤4、5数次，直至无杂质；4.3.2.7加入等体积氯仿：异戊醇(24：1)抽提一次以去除饱和酚，离心(12000rpm，10min，室温)；4.3.2.8将上清液逐滴加入两倍体积的-20℃预冷无水乙醇，以沉淀出DNA。
室温放置10-20min，可以过夜；4.3.2.9 挑取或离心去上清液(10000 rpm，5min)的方法取出DNA；用75%乙醇洗涤两次；<10> 37℃保温箱中干燥后溶于适量的TE缓冲液中4℃备用。
4.4 所用引物ITS5：GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGITS4：TCCTCCGCTTATTGATATGC4.4.1PCR反应条件：4.4.1.1体系：PCR反应体系为50μL体系，包括：10×PCR buffer：1/10MgCl2 ： 1.5mM，dNTPs（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）：各200μM，Primer1 0.2μM，Primer2 0.2μM，Taq酶： 1~2.5U，DNA模板：约100ng。
4.4.2条件：扩增条件预变性 95℃ 5min变性 95℃ 1min复性 51℃ 1min 30~35个循环延伸 72℃ 1min延伸补齐 72℃ 10min4.4.3测序方法：送测序公司。
4.4.4序例分析：五．结果及分析：结果：试验分离到两种真菌5.1八爪金盘分离到菌种查氏正反照5.1.1菌落宏观形态：大小：菌落的直径3.2（mm）。
颜色：包括菌落表面棕黑色背面灰色，色素渗入培养基。
菌落表面的纹饰：如皱纹、整个菌落致密。
菌落的质地：毡状菌落的高度：凸起或隆起。
菌落边缘：锯齿状。
渗出物：菌落表面无液滴。
5.1.2个体形态：菌丝的特征：表面粗糙。
分生孢子梗：分支复杂，轮生。
5.1.3 分子生物学鉴定通过PCR扩增和序列分析，送公司检测得到的序列为：TGAAGTTAAAAAGCGTAACAAGGTCTCCGTAGGTGAACCTGCGGAGGGATCATTACAAGTGACCCC GGTCTAACCACCGGGATGTTCATAACCCTTTGTTGTCCGACTCTGTTGCCTCCGGGGCGACCCTGC CTTCGGGCGGGGGCTCCGGGTGGACACTTCAAACTCTTGCGTAACTTTGCAGTCTGAGTAAACTTA ATTAATAAATTAAAACTTTTAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAA TGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCC CTGGTATTCCGGGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCACCACTCAAGCCTCGCTTGGTATTGGG CATCGCGGTCCGCCGCGTGCCTCAAATCGACCGGCTGGGTCTTCTGTCCCCTAAGCGTTGTGGAAA CTATTCGCTAAAGGGTGTTCGGGAGGCTACGCCGTAAAACAACCCCATTTCTAAGGTTGACCTCGG ATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAAAATCGGAGGAA通过blast序列分析得到的结果为：Distribution of 100 Blast Hits on the Query SequenceSequences producing significant alignments：5.2桂花树茎分离到PDA正反照镜检：5.2.1菌落形态：大小：菌落的直径22mm。