9-4 分离模式介绍
固相萃取——精选推荐
固相萃取一．主要参考文献：分析化学2000年9月第9期第28卷1172-1180，固相萃取，张海霞、朱彭龄分析仪器1998年第1期，固相萃取技术的发展与应用，楼蔓藤、商振华。
二．摘要：对固相萃取技术的原理、方法、特点及应用作了较全面的介绍。
重点介绍了固相萃取的萃取原理，举例说明了正相、反相、离子交换等分离模式在医药、食品、临床、环保等领域中的应用。
三．正文1．固相萃取基本概念固相萃取(Solid Phase Extraction SPE)就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。
与液－液萃取相比，固相萃取有很多优点：固相萃取不需要大量互不相溶的溶剂，处理过程中不会产生乳化现象，它采用高效﹑高选择性的吸附剂（固定相），能显著减少溶剂的用量，简化样品于处理过程，同时所需费用也有所减少。
一般说来固相萃取所需时间为液－液萃取的1/2，费用为液－液萃取的1/5。
其缺点是：目标化合物的回收率和精密度要低于液－液萃取。
2．固相萃取原理固相萃取实质上是一种液相色谱分离，其主要分离模式与液相色谱相同，可分为正相（吸附剂极性大于洗脱液极性），反相（吸附剂极性小于洗脱液极性），离子交换和吸附。
固相萃取所用的吸附剂也与液相色谱常用的固定相相同，只是在粒度上有所区别。
正相固相萃取所用的吸附剂都是极性的，用来萃取（保留）极性物质。
在正相萃取时目标化合物如何保留在吸附剂上，取决于目标化合物的极性官能团与吸附剂表面的极性官能团之间相互作用，其中包括了氢键，π—π键相互作用，偶极－偶极相互作用和偶极－诱导偶极相互作用以及其他的极性－极性作用。
正相固相萃取可以从非极性溶剂样品中吸附极性化合物。
反相固相萃取所用的吸附剂通常是非极性的或极性较弱的，所萃取的目标化合物通常是中等极性到非极性化合物。
目标化合物与吸附剂间的作用是疏水性相互作用，主要是非极性－非极性相互作用，是范德华力或色散力。
三大遗传规律—分离定律、自由组合定律、连锁交换定律
（YYRR）
（yyrr）
（YyRr） F1自交，存活15个植株，产生556个种子
YyRr
9 : 3 :3 : 1
三、采用“测交试验”确认“自由组合定律”
为了验证不同对的遗传因子可以自由组合的假设？孟德尔再一次采用了测交实验，即让
杂种子一代（YyRr）与双隐性亲本（yyrr）杂交。理论上子代遗传因子的组成应为：YyRr, Yyrr, yyRr, yyrr；黄色圆粒、黄色皱粒、绿色圆粒、绿色皱粒之比为1:1:1:1。
第一节 孟德尔的分离定律 （law of segregation)
一、实验材料的选择
豌豆是一种严格自花授粉的植物，即在开花前已完成授粉。不同的 性 状 （ character） 和 同 一 性 状 的 不 同 表 现 类 型 即 相 对 性 状 （ relative character）能稳定遗传给后代。
孟德尔所完成的七对性状的杂交试验，完全符合上述的假设，即F1代为杂合子（Aa）均只表现出显 性性状，F1代自交，F2代的遗传因子组成应为1AA比2Aa比1aa，其显性性状和隐性性状之比应为3:1， 试验结果完全相符（如下图）。
P AA aa 纯合子
P
高茎
矮茎
A a 配子
F1
Aa
杂合子
F1自交 Aa Aa 杂合子
黄色 黄色 绿色 绿色 圆粒 皱粒 圆粒 皱粒
31 27 26 26
24 22 25 26 1 ：1 ：1 ：1
孟德尔自由组合定律（law of independent assortment）
当具有两对（或更多对）相对性状的亲本进行杂交，控制不同性状的遗传因子 的分离和组合是互不干扰的。 在形成配子时，决定同一性状的成对的遗传因子必须 分离，一个配子只能带有成对遗传因子的一个；决定不同性状的遗传因子可以自由 组合，即可以同时进入一个配子；通过配子随机结合形成带有成对遗传因子、具不 同组合类型的合子，从而决定生物体的性状。 （设n代表杂交亲本可区分的成对性状的数目，则2n是杂种F2纯合子的组合数，3n是杂种F2不同遗传因子组
酶工程4-4离心分离
图4-1 3 种梯度形式示意图 (a) 线性梯度; (b) 凸形梯度; (c) 凹形梯度。
配制时, 将稀溶液置于贮液室 B, 浓溶液置于混合室A , 两室 的液面必须在同一水平。 操作时, 首先开动搅拌器, 然后 同时打开阀门a 和b, 流出的梯 度液经过导管小心地收集在离 心管中。 也可以将浓溶液置于B, 稀溶液置于A 室, 但此时梯度 液的导液管必须直插到离心管 的管底, 让后来流入的浓度较 高的混合液将先流入的浓度较 低的混合液顶浮起来, 形成由 管口到管底逐步升高的密度梯 度。
•高速离心（超速），常以相对离心力（RCF）表
示，如：65000g。 两者可换算或查测算图。
计 算 近 似 的 列 线 图
RCF
2. 沉降系数:（sedimentation constant）
指单位离心力下颗粒的沉降速度
（sedimentation velocity）,用S表示。
由于许多生物大分子的S值很小，所以定 义10
图4-2 梯度混合器示意图 A-混合室; B- 贮液室; C-电磁搅拌器; ○-阀门。
离心操作
离心前：将样品小心地铺放在预先制备好的密度梯度溶液
的表面；
离心：不同大小不同形状、具有一定沉降系数差异的颗粒
在密度梯度溶液中形成若干条界面清楚的不连续区带；
收集：通过虹吸、穿刺或切割离心管的方法将不同区带中
特点
介质的密度梯度范围包括所有待分离物质的密度。 适于分离沉降系数相近，但密度不同的物质。
注意事项
采用铯盐作为离心介质时, 它们对铝合金的转子有很强的 腐蚀作用, 要防止铯盐溶液溅到转子上, 使用后要将转子仔细清 洗和干燥, 有条件的最好采用钛合金转子。
等密度梯度离心示意图 （a）离心前； （b）离心后
第4章 分离变量(傅里叶级数)法(补充1)
第四章 分离变量法 §4.1 分离变法介绍1．“顾名思义，分离变量法只能求出分离变量形式的解，如果一个定解问题不是分离变量形的，用分离变量法不可能求得这个解。
”试对上述说法加以评论。
解：分离变量法解方程可得到本征解，本征值说是分离变量形式的，但定解问题的一般是本征解的某个叠加，即由本征解组成的级数，这种解已不是分离变量形式的了，事实上，一个解即使不是分离变量形式的也可展为级数，所以由分离变量法得到的解，一般并不一定是分离变量形式的。
2．演奏琵琶是把弦的某一点向旁拨开一个小距离，然后放手任其自由振动。
设弦长为l ，被拨开的点在弦长的00(1n n 为正整数）处，拨开距离为h ，试求解弦的振动。
[注意：在解答中，不存在0n 谐音以及0n 整倍数次谐音。
因此，在不同位置拨弦（0n 不同），发出的声音的音色也就不同。
]图4-1解：定解问题为：⎪⎪⎪⎪⎪⎪⎩⎪⎪⎪⎪⎪⎪⎨⎧≤≤=⎪⎪⎪⎩⎪⎪⎪⎨⎧⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛≤≤--⎪⎪⎭⎫ ⎝⎛≤≤===<<=-====)4(),0(,0)3(,),(,0,|)2(,0)1( ),0(,000000002l x u l x n l x l n l l h n l x x l h n u u u l x u a u t t t l x z zx tt 第一步，分离变量：设)()(),(t T x X t x u =以此代入泛定方程和边界条件：0)()()()(2=''-''x X t T a t T x X ， （5）0)()()()0(==t T l X t T X ， （6）由（5）式得到)()()()(2x X x X t T a t T ''=''， （7）只有上式两端均等于同一常数时才有可能成立，把这个常数记为λ-，代入（7）式成为：λ-=''='')()()()(2x X x X t T a t T ， 即,0)()(2=+''t T a t T λ （8）,0)()(=+''x X x X λ （9）在（6）中，若取)(t T =0，得出0)()(==t T x X u ，显然无意义，只能取0)()0(==l X X第二步，求解本征值问题： 由方程（9）来求解)(x X ，这要分0,0=<λλ和0=λ三种情况。
华为采购模式介绍
2015/4/20
视野 意志 品格
1、采购组织职责：组织框架
2015/4/20
视野 意志 品格
2、采购关键流程：三个阶段
商的货款。管理采购运作策略、建立跨部门的合作，评审供应商和采购绩效，管理进出口的要求及供应 商的合约，及维护采购数据。
2015/4/20
视野 意志 品格
3、职责与贡献：平衡的采购是卓越运营的保证
获得与持 有成本
综合成本
技术/质量
三者的平衡
柔性与快速 响应
安全与稳 定可靠
准确及时交付
选择好的供应商至关重要：
供应商 采购部门
物料需求
产品技术需求 的管理
认证
认证供货货源
选择供应商， 与供应商签订
合同
研发部门
生产部门 市场需 求计划
执行
绩效管理
物料下单管理
供应商绩效管 理
采购业务流程主要由
2015/4/20
•认证和选择供应 商
•执行采购 •供应商绩效管理
视野 意志 品格
三个阶段构成
2、采购关键流程：9个步骤
库存持有成本：由于所持有的库存量而发生的一切 成 本，包含仓储管理，跌价损失等。
缺货（机会）成本：出现缺料而不能发货，而失去 销售机会或因缺货的额外损失。
能力关联成本：包括加班、转包合同、雇佣、培训 、 解雇与停工时间费用。当需要增加或减少能力， 或能 力暂时地过多或过少的费用。
华为综合成本下降率
业界市场该类物料 综合成本下降率
1例9p-四体综合征嵌合型胎儿的遗传学分析
1.2.3 CMA 抽取羊水10mL,采用 QIAampDNA Mini试剂盒(德国 Qiagen公司)提取和纯化全基因组 DNA,应 用 Affymetrix 750K 试 剂 盒 (美 国 ThermoFisher公司)对 DNA 进 行 酶 切、连 接、PCR 扩 增、 纯化、片 段 化、标 记、杂 交 等 处 理,最 后 应 用 配 套 的 ChAS软件 分 析 染 色 体 的 拷 贝 数 变 异 (CNV)。CNV 的分析标准是以 50 个 标 记、100kb 为 最 佳 临 界 值 进 行分析;杂合性缺 失 或 纯 合 状 态 以 5 Mb 的 分 辨 率 进 行分析,包含明确印记致 病 基 因 的 纯 合 状 态 区 域 报 告 标准染色体片段≥5 Mb,不包含明确印记致病基因的 纯合状态区域报告片段为染色体片段≥10 Mb。 1.2.4 荧 光 原 位 杂 交 技 术 (FISH)分 析 采 用 广 州 和能生物 科 技 有 限 公 司 生 产 的 GSPPD-L1(Red)和 CSP9(Green)探 针 进 行 原 位 杂 交,经 Zeise荧 光 显 微 镜观察,FISH 软件照相分析荧光信号。 2结 果 2.1 NIPT 检测结果 21、18、13-三 体 综 合 征 筛 查 低 风 险 ,但 9 号 染 色 体 异 常 。 2.2 核 型 分 析 结 果 胎 儿 核 型 为 47,Xn,+der(9) del(9)(q21q34)dup(9)(p12p24)[10]/46,Xn[90]。 2.3 CMA 检 测 结 果 对 羊 水 行 CMA,胎 儿 在 chr9p24.3p13.2 位 置 检 出 一 段 约 64.9 Mb 的 2.43 拷贝 重 复,检 测 结 果 为 arr[GRCH37]9P24.3P13.2 (208454-68216577)x2-3,涉 及 DOCK8、KANAK1、 DMRT1等164个 OMIM 基因。 2.4 FISH 验证结果 为9号染色体短臂定制探针, 对 CMA 测 序 结 果 提 示 的 chr9p24.3p13.2 重 复 片 段 进 行 验 证 ,发 现 二 者 结 论 一 致 ,见 图 1。
05 翻译9-9.2.4
9.分析过程原始字节系列荷载（RBSP）的比特值作为这个过程的输入。
这个过程的输出是语法元素的值。
在subclause7.3的语法表里列出的某个语法元素用ue(v),me(v),te(v)(参见subclause9.1),ce(v)(参见subclause9.2)或ae(v)(参见subclause9.3)描述时，这个过程将被调用。
9.1 Parsing process for Exp-Golomb codes在subclause7.3的语法表里列出的某个语法元素用ue(v),me(v),se(v)或者te(v)描述时，这个过程将被调用。
对于subclause7.3.4和.7.3.5中的语法元素，只有在熵码模式标志为0的时候才调用这个过程。
原始字节系列荷载（RBSP）的比特值作为这个过程的输入。
这个过程的输出是语法元素的值。
Exp-Golomb编码的语法元素码为ue(v),me(v)或者se(v)。
语法元素用te(v)编码的是精简了的Exp-Golomb编码。
这些语法元素的分析过程开始时先读取比特流最近位置的比特值包括第一个非0比特，同时计算值为0的主要比特的数目。
这个处理过程等效于：leadingZeroBits = -1;for( b = 0; !b; leadingZeroBits++ )b = read_bits( 1 )可变值codeNum按下式赋值：codeNum = 2leadingZeroBits – 1 + read_bits( leadingZeroBits )read_bits( leadingZeroBits )的返回值可以理解为具有最高有效位的无符号数的二进制表示。
表9-1用分离字符串的方式（分为前缀和后缀）说明了Exp-Golomb码的字符结构。
前缀就是上面计算leadingZeroBits的伪代码中分列的比特位，在表9-1中宗列中用0或1表示。
后缀就是计算codeNum中分列的比特位，在表9-1中用xi（希腊第十四个字母）表示，其中i的范围为0～leadingZeroBits – 1。
药典筛1~9号筛设备工艺原理
药典筛1~9号筛设备工艺原理1. 药典筛设备简介药典筛设备是一种常用的固体物料分离筛选装置，广泛应用于制药、化工、食品等领域。
药典筛设备可以根据物料特性和分离要求选择不同的筛孔尺寸和筛分方式，可以有效分离出不同粒径的物料，从而达到筛选、分离、纯化等目的。
药典筛设备主要包含筛体、电机、减震器、支架等部分。
根据筛选物料的颗粒大小不同，药典筛设备可以分为多个型号，其中1~9号筛设备是常见的型号之一。
2. 1~9号筛设备工艺原理1~9号筛设备的工艺原理基本相同，下面以1号筛设备为例介绍工艺原理。
1号筛设备主要由上篮筛、下篮筛、振动电机和底座四个部分组成，其工艺原理如下：•筛体：筛体是1号筛设备的关键部分，是由上篮筛和下篮筛组成。
上篮筛一般采用不锈钢材料制成，筛面平坦，筛眼尺寸精密；下篮筛一般采用青铜材料制成，具有良好的耐腐蚀性能。
•振动电机：振动电机是1号筛设备的驱动部分，主要用来产生设备的振动力，使得物料能够通过筛孔，分离出不同粒度的物料。
•底座：底座是1号筛设备的支撑部分，主要用来固定上篮筛和下篮筛，保证设备的稳定运行。
在使用1号筛设备的时候，首先将物料倒入上篮筛中，然后打开电机，通过振动力使得物料在筛孔中不断移动，从而实现分离、筛选的效果。
随着物料的不断筛分，粒度更小的物料被分离出来，落在下篮筛里，从而实现物料的分级和纯化。
3. 1~9号筛设备的筛分方式1~9号筛设备的筛分方式主要包括正向筛分和反向筛分两种方式。
正向筛分是指物料由上篮筛流向下篮筛过程，属于比较常见的筛分方式。
在正向筛分中，物料从上篮筛进入下篮筛，由较小的筛眼尺寸先筛选，随着时间的延迟，筛孔逐渐增大，筛分的粒度范围也逐渐加大。
反向筛分是指物料由下篮筛流向上篮筛过程，主要适用于特殊要求的物料筛选。
在反向筛分中，物料从下篮筛进入上篮筛，筛孔尺寸由大到小递减，从而实现物料的快速分离。
4. 1~9号筛设备使用注意事项1~9号筛设备在正常使用时需要注意以下几点：•定期对设备进行维护，包括清洗筛孔，检查电机、减震器等部件的工作状态。
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电泳常见分离模式
常见模式
1.毛细管区带电泳(CZE)
2.非水毛细管电泳(NACE)
3.胶束电动色谱 (MEKC)
4. 毛细管凝胶电泳 (CGE)
常规毛细管电泳
5. 毛细管等电聚焦(CIEF)
6. 毛细管等速电泳(CITP)
7.毛细管电色谱(CEC)
8. 亲和毛细管电泳（ACE）
芯片毛细管电泳
毛细管区带电泳capillary zone electrophoresis
毛细管区带电泳
分离原理：基于试样中各组分荷质比的差异
CZE 基本操作条件
p毛细管（是否涂层；内径；长度）
p电压 (影响电渗及电泳速度)
p缓冲溶液种类与浓度 (双电层厚度)
p缓冲溶液pH (调节电渗流及目标组分的带电性质)
p 添加剂及其含量 (控制电渗流；降低吸附)
胶束电动色谱法
Micellar Electrokinetic Capillary Chromatography，MEKC
SDS
及胶束的形成
分离原理： 基于组分在溶液相与胶束相之间的相互作用。
方法优势：可以实现中性微粒间的分离，扩大CE技术应用范围胶束电动色谱法
常用的表面活性剂
1.长链烷基表面活性剂
阴离子型：十二烷基磺酸钠（SDS）
阳离子型：溴化十六烷基三甲胺（CTAB）
2.胆汁酸表面活性剂
天然阴离子表面活性剂（螺旋形胶束）兼手性拆分试剂3.高分子表面活性剂
毛细管电色谱capillary electrochromatography （CEC）
毛细管电色谱
方法原理：
将HPLC固定相颗粒填充（涂
渍或键合）到毛细管中，以试
样与固定相之间的相互作用为
分离机制，以电渗流为驱动力
的色谱过程。
CEC色谱柱的制作
填充柱
•柱塞制作：水玻璃烧制或填料直接烧制•填充方法：高压匀浆法和电动法
•常用填料：ODS固定相及混合官能团固定相
方法优势：具有选择性
不利方面：气泡干扰柱效
开管柱
•实施方法：在毛细管内壁键合或涂层固定相
•制柱方法：涂层聚合物、化学键合及溶胶-凝胶技术
特点：
1.制备简单（无须烧制柱塞）
2.无气泡影响
3. 柱效高（无涡流扩散）
4. 柱容量小
整体柱
•实施方法：柱内聚合形成交联聚合物
•制柱方法：将反应溶液注入毛细管，促发聚合反应.
特点：
1.制备方法简单（无柱塞烧制）
2.多孔结构，渗透性好；
CEC特点
1. 分离效率高
2. 选择性比CZE高
3. 分析速度快
4. 可实现样品富集。