自动药敏鉴定表比较表
两种方法对血培养阳性标本细菌鉴定及药敏试验的比较
两种方法对血培养阳性标本细菌鉴定及药敏试验的比较【关键词】细菌学技术【Abstract】 AIM: To study the concordance rate of traditional method and direct method in bacterial species identification and drug susceptibility test. METHODS: The positive specimens detected by BacT9050 were transferred to the automatic microbiology identification system and their bacterial species identification and drug susceptibility test were conducted respectively by traditional method and by direct method. The concordance rate of the two methods was analyzed. RESULTS: The concordance rates of traditional method and direct method in identifying Enterobacteriaceae，Nonfermenters，Vibrionaceae and the Grampositive cocci were 95%, 75%, 67% and 77% respectively. No obvious difference between the two methods was observed in drug susceptibility test (Z=-1.002, P=0.316). CONCLUSION: Direct method is as accurate as traditional method but is more time efficient in bacterial species identification and drug susceptibility test.【Keywords】bacteriological techniques; bacteria/isolation & purification; microbial sensitivity tests【摘要】目的：比较直接法与常规法对血培养阳性标本进行细菌鉴定及药敏试验的一致率. 方法：将BacT9050型血培养仪报警的阳性标本，直接上机进行细菌检测及药敏试验，同时将阳性标本转种平板分离培养，分纯后的菌落按常规法上机鉴定及药敏试验，并对两种方法进行比较. 结果：直接法与常规法对肠杆菌科的鉴定一致率为95%，对非发酵菌、弧菌科及革兰阳性球菌的鉴定一致率分别为75%, 67%, 77%. 两种方法药敏试验结果比较无显著差异(Z=-1.002, P=0.316). 结论：对血培养阳性标本直接上机进行鉴定及药敏试验，与常规法检测结果无显著差异，而报告时间明显缩短.【关键词】细菌学技术；细菌/分离和提纯；微生物敏感性试验0引言菌血症和败血症是临床上严重危及患者生命的疾病，病死率可高达29%. 因此，快速准确的菌种鉴定与药敏试验是临床诊断和治疗的关键. 随着全自动血培养仪的引进，不仅大大提高了血培养阳性率，而且对于阳性标本24 h内可报警提示，比传统手工血培养缩短了24~48 h. 但血培养阳性标本从采集到给临床一份完整的结果报告，仍需要3~4 d［1］. 为进一步缩短检测时间，我们从全自动血培养仪报警的阳性标本中提取菌液，直接上全自动微生物分析仪检测，同时与阳性标本转种孵育后再上机检测的常规方法进行比较.1材料和方法1.1材料我院200103/200210门诊及住院患者中发烧并伴全身感染症状者血培养标本358例. BacT9050型全自动血培养仪、树脂血培养瓶均为美国Bactec Dickinson公司生产；Walkaway40全自动微生物鉴定仪、G-菌鉴定及药敏综合板（NC21）、G+菌鉴定及药敏综合板（PC11）为美国DadeBerhing公司产品；分离用血平板、麦康凯平板、巧克力平板购于陕西宝泰克生物科技有限责任公司.1.2方法1.2.1阳性标本的处理与直接检测将临床标本的血培养瓶放入BacT9050系统,系统自动孵育和检测. 当系统发生响声报警时，提示有细菌生长的阳性瓶被检出. 用无菌注射器抽取阳性瓶中菌液涂片，行革兰染色后镜检，根据镜检结果盲试选择触酶或氧化酶，并将菌液浓度调整至6.9×108 CFU/L. 然后将其接种于相对应的NC21或PC11综合板，上微生物分析仪进行细菌鉴定与药敏试验.1.2.2阳性标本的常规检测将阳性标本分别转种血平板、麦康凯平板和巧克力平板，经35℃孵育18~24 h后，挑取生长菌落涂片，行革兰染色镜检. 根据镜检结果选择相应的氧化酶或触酶试验，按Walkaway40系统操作步骤上机进行细菌鉴定与药敏试验.统计学处理：采用MannWhitney U检验，检验水准α=0.05.2结果2.1直接法与常规法细菌鉴定结果的比较358例血培养标本经血培养仪报警为阳性的135例. 其中经常规法鉴定出G-杆菌101株，G+球菌34株，直接法鉴定出G-杆菌88株，G+球菌26株. 两种。
药敏试验结果解读最终版
• C组：补充试验（药物用于对A组药物耐药的流行
菌株、对A组药物过敏的病人、某些不常见的细菌）
• U组：尿路感染
Contents
1 药敏试验的目的、意义及方法 2 药敏试验抗菌药物选择 3 药敏试验的结果报告的解读 4 药敏试验结果对临床选药的指导意义 5 与药敏试验相关的常见问题
的MIC 5倍以上。
• 耐药（Resistance）
– 用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 – MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓
度
敏感性判定的临床意义
• 中介 (Intermediate)
– MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗 反应率低于敏感株
• 药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) • 加大用药剂量可能有效
葡萄球菌属药敏
模式l
模式2
产β-内酰胺酶
S R ---S S S ---S S S ----
青霉素结合蛋白突变
R R ---R R R ---R S S ----
S
R
S
S
S
S
S
S
S
S
S
R
S
R
耐药特点 耐药原因
选药
青霉素S 苯唑西林S
不耐药
不产β-内 酰胺酶
敏感菌，对青霉素、头孢 菌素、 含β-内酰胺酶抑 制剂复方制剂及碳青霉烯 类、糖肽类均敏感。
青霉素R 苯唑西林S
产β-内酰 ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ酶
对不耐酶的青霉素耐药， 如：氨苄西林、阿莫西林、 美洛西林、哌拉西林。
对头孢菌素、 加酶抑制 剂的复方制剂及碳青霉烯 类、糖肽类敏感。
青霉素R 苯唑西林R
细菌鉴定药敏分析仪使用说明及维护
输入：交流 220V, 50/60Hz 保险丝输入电流：2A 250V 额定输入电流： 2A/220VAC + 2A/220VAC
操作人员要求
操作人员应为经培训合格的专业技术人员。
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山东鑫科生物科技股份有限公司
SHANDONG XINKE BIOLOGICAL TECHNOLOGY CO.,LTD.
仪器日常维护
进行仪器维修前必须对各个不同的组件及每个部件的功能进行检查，防止对仪器有严重的损 坏，并保证在最适宜的条件下进行仪器的维护。
注意： 1．在仪器维护前必须断开所有内部电源。 2．不要使用稀释剂，三氯乙烯或酮类物质擦洗所有塑料组件。
判读仪清洁的准备工作：
1．检查所有的电缆，电线以及插头是否安全。 2．检查所有的板孔是否干净。
（表 1 选择试剂盒） 6．将试剂盒和培养液、稀释液从冰箱取出，放置室温 10 分钟，按要求配制菌悬液，同时用专用比
浊仪读数或与比浊管比较浊度。 7．接种并培养 18-24 小时后，将试剂盒放入 XK 细菌鉴定药敏分析仪读数。操作步骤如图 1 所示：
（1）挑取菌落
（2）制作菌悬液
（3）取出试剂盒
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简易操作流程
1．收到标本后，参照《全国临床检验操作规程》的有关规定进行标本处理及平板接种，然后进行 18-24 小时增菌培养。
2．挑取增菌后的新鲜菌落，再次转种平板，进行 18-24 小时分纯培养。 3．挑取分纯的新鲜菌，进行革兰氏染色，然后镜检。 4．革兰氏阳性球菌做触酶试验；革兰氏阴性杆菌做氧化酶试验。 5．根据镜检、触酶或氧化酶结果选试剂盒（详见表 1）。
Vitek2compact与其它厂家仪器性能对比表
终点法 终点法 终点法 终点法 终点法
10.6小时 11.3小时 12小时 11.7小时 15.5小时
(Conventional Panel)
4 小时 4 小时 4 小时 15 ~ 18 小时
(Conventional Panel)
15 ~ 18 小时
(Conventional Panel)
✓
Χ
Χ
专家系统的功能
1. 能确认鉴定及药敏结果的准 确性。
2. 可检出每菌株拥有的1种或 多种耐药表型。
专家系统的功能
保证当天发送报告，而临
床尤为关注药敏结果。快
速准确的药敏结果更能让
临床体会自动化仪器带来
≧ 3-4 小时 (部份) 无 无 无
6-18 小时, 通常大于12小时
5 ~10 小时 通常大于12小时
✓ ✓ ✓
？
一份完整的实验室报告应 包括鉴定和药敏两部分。 临床和实验室都要求尽量 保证当天发送报告，而临 床尤为关注药敏结果。快 速准确的药敏结果更能让 临床体会自动化仪器带来 的便捷和实惠。不同指南 除可带来多方信息，亦可 提供更全面的抗生素结果 。
测试卡大小
调制菌液用溶液
✓ ✓ 体积小,重量轻
0.45%生理盐水
✓ X（未完成FDA） 体积/重量大 占库存
多种原厂专用试剂
测试卡是否需额外 加试剂
鉴定菌悬 液
否 手工配置
是 手工配置
菌液配制 药敏试验
手工配置
鉴定菌悬 3ml(较少的体积需要较少的纯菌
液体积
落数)
是否已有 条码辨识 条码系统 系统 机器自动
检测方法的革新，使检测 底物扩展至600余种。提高 单一结果报告率。
药敏试验及药敏试验结果介绍ppt课件
• 药物生理浓集部位有效 (尿－FQ) • 加大用药剂量可能有效
– 缓冲区：防止操作的系统误差造成重 大结果的判定错误
药敏试验的方法学
• 半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径) • MIC法：
– 稀释法(肉汤、琼脂) – 自动化仪法 – 抗生素连续梯度法 (Etest ) – 流式细胞仪
• 药敏可能无法检出新出现的耐药，VISA
药敏试验方法2－肉汤稀释法
4
8
混
16
32 64 128 256 ug/m
混清
抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml ， 孵育35℃， 16-20h，判读
药敏试验方法2－肉汤稀释法
• 调节离子浓度的MH肉汤 • 宏量肉汤法（2ml, 13x100mm ）
微量肉汤法 （ 0.1ml, 微量板） 自动化仪 • 优点：准确，可靠，可用于研究 • 缺点：
菌，
分枝杆菌
评价药物体外抗菌活性的指标
• MIC50, MIC90, MIC 均值， MIC 范围，R，I，S • MIC50/ MIC90：MIC从小到排列，位于第50 / 90百
分位菌株的MIC值 • 单纯比较MIC50，MIC90是片面的，还要同时看平
均MIC及MIC范围 • 同时结合R，I，S，（不同药物血浓度不同，安
8
Antibiotic concentration (ug/ml)
6
Drug A
4
Drug B
2
B
0
A
Time above MIC
Time
Drug A present at concentration of 2 ug/ml for 50% of dosing interval Drug B present at concentrationSloidef n2o ug/ml for 30% of dosing interval 40
自动微生物鉴定及药敏系统ATB
推出ATB CIRS中文报告软件
病人资料输入
推出ATB CIRS中文报告软件
病人资料查询
推出ATB CIRS中文报告软件
Rapid ATB UR （尿道肠杆菌）
每一个鉴定结果都会附有相应的评语
给出鉴定结果
每个生化孔载有特殊风乾底物
推出ATB CIRS中文报告软件
极好的鉴定
ID 32 鉴定试条 (数 码 鉴 定法)
++12 4
3
-++ ---ห้องสมุดไป่ตู้
1 2 4 1 2 4 ….
6
0
•将每3个生化反应分成一组,每组中阳性结果分别标记为1、2、4 •将每组数值相加,得到一个10位数的编码
计算机
• 计算机对这些编码进展分析
•
给出鉴定结果
• 储存结果
鉴定百分率 %ID
细菌鉴定的可能性:
可靠及具创意的选择
资料库
最典型 生化普
生化结果 (菌种 X)
(菌種X)
菌种 X
根据待检细菌各种不 同生化反应的结果计 算出其鉴定百分率。 从而找出待检菌在整 个数据库中应属于哪 个分类单位。
T值
待检菌的分类单位被 确定以后，根据T值来评 定其与该分类单位中典型 菌株的相似性。从而可以 确定待检菌在“种”中的 典型程度。
与数据库中各个项的
接近程度来确认未知菌是
否属于某一个分类单位(科
,属,种)
?
鉴定百分率：ID%图示
A 0.1%
B 99.8%
C 0.1%
X
待检菌X
典型性参数 T index
待检菌的分类单位被确定以后 ，T 值表示其生化反响结果与该菌最 典型生化谱的接近程度
全自动鉴定药敏分析系统等设备参数要求
全自动鉴定药敏分析系统、血培养仪、二氧化碳培养箱参数要求及部分微生物免疫试剂明细1、保修要求：对于保修期内的甲方设备故障报修，出现故障，服务人员2小时内到达现场，24小时内修复，超过24小时提供免费备用设备服务。
当仪器需用接口功能时、中标商负责提供接入我院LIS接口服务，费用包含在设备报价中。
2、国际或国内知名品牌，市场占有率高调研设备的项目参数要求及部分微生物免疫试剂明细包1：细菌鉴定药敏分析系统试剂及辅材明细表包2、血培养仪试剂及辅材明细表包3：二氧化碳培养箱用于细菌培养，提供一个稳定的温度和湿度环境，又能稳定、连续输送一定浓度的CO2气体，以控制培养液的PH值，为细菌培养生长提供较为理想的条件。
适用范围：主要适用于二氧化碳培养箱是细菌培养二氧化碳培养箱技术参数*一：资质要求：1.生产企业通过TÜV机构认证的ISO13485:2003认证，ISO9001：2008认证；2.产品通过TUV机构认证的CE质量认证和SFDA医疗器械注册证；二：技术参数：1.采用微电脑温度控制器，适用于细胞、组织、微生物等培养2.气套式加热系统，加热迅速，温度.湿度恢复速度快3.内部容积≥100L4.最低温度控制范围为室温+5℃*5.PT1000温度传感器，标配环境温度传感器,带独立传感器的超温保护装置*6.标配254nm波长无臭氧型紫外灯，实现箱体内快速消毒*7.CO2浓度传感器具有"AUTO-START"自动启动功能，自动校准，保证CO2浓度的高精确性8.CO2进气口配备HEPA高效过滤器，过滤效率99.998％9.内腔及附件不锈钢采用特殊电化学处理*10.倾斜式的底盘水库式设计结构，非增湿盘,增加蒸发面积,相对湿度:≥95%，湿度恢复速度快*11.具有玻璃门加热或外门加热功能，有效避免玻璃门上产生冷凝水12.具有独特循环风道设计，非自然对流，保证温度、湿度、CO2浓度的均一性13.可堆叠摆放，节省实验室空间14.标配虹吸泵，清洁方便15. 可配4个接口的钢瓶自动切换装置，同时接4个钢瓶，可自动切换16.具有声光报警装置，出错储存和分析功能列出保证仪器运行的消耗品价格及用量，（专用的写出供货渠道，遗漏视为免费提供）试剂及辅材明细表专用配套耗材部分特别说明：耗材部分报价：1. 详细标明原装耗材的规格和价格，具体明细表见（全自动全自动鉴定药敏分析系统等所需试剂耗材、半自动全自动鉴定药敏分析系统等所需耗材）。
药品无菌检查(薄膜过滤法)能力验证结果与分析
备供试品溶液，进样测定，测得样品中芍药苷的平均含量为１ ９８ｍｇ·ｇ－１，计算其ＲＳＤ为０ ５６％。
２ ５ 加样回收率２ ５ １ 对照品溶液配制：取芍药苷对照品１５ ２６ｍｇ，精密称定，置２５ｍＬ量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为芍药苷加样母液（Ａ）。
２ ５ ２ 样品溶液的制备：取９个１００ｍＬ具塞锥形瓶，标记瓶号１～９，分别准确移取１ ０ｍＬ（Ａ）加入到１～３号瓶，准确移取２ ０ｍＬ（Ａ）加入到４～６号瓶，准确移取３ｍＬ（Ａ）加入到７～９号瓶，将１～９号瓶吹干，分别取约０ ６ｇ的样品加入１～９号瓶，按１ ２ ３精密称定之后操作。
表２ 加样回收试验结果 （ｎ＝９）项目芍药苷回收量（ｍｇ）芍药苷实际加入量（ｍｇ）回收率（％）平均回收率（％）ＲＳＤ（％）加样回收０ ５倍 １０ ５７５０ ５８０９９ ０８加样回收０ ５倍 ２０ ５８４０ ５８０１００ ５４加样回收０ ５倍 ３０ ５７５０ ５８０９８ ９８加样回收１倍 １１ １５４１ １６１９９ ３８加样回收１倍 ２１ １６２１ １６１１００ ０６９９ ３８０ ７１加样回收１倍 ３１ １４９１ １６１９８ ９４加样回收１ ５倍 １１ ７４１１ ７４１９９ ９６加样回收１ ５倍 ２１ ７２９１ ７４１９９ ２８加样回收１ ５倍 ３１ ７１０１ ７４１９８ １９２ ６ 稳定性试验 在“１ ２ １”项色谱条件下，精密吸取供试品溶液５μＬ，注入液相色谱仪，分别于０、２、４、６、８、１２、１６ｈ测定，求得芍药苷峰面积的ＲＳＤ值为０ ２４％。
结果表明，供试品溶液在１６ｈ内稳定。
２ ８ 耐用性实验 考察不同色谱柱、柱温、流速对测定方法的影响，芍药苷平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ为０ ８２％。
２ ９ 十批次疏风愈痛丸含量测定结果 测定十个批次疏风愈痛丸中芍药苷含量，测得平均含量为２ ００ｍｇ·ｇ－１，下浮２０％，将芍药苷的限度定为每１ｇ不少于１ ６０ｍｇ，列入含量测定项正文。
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品牌 项目
A 自动化程度
自动孵育，自动加试剂 自动判读，自动发报告 对快速生长的细菌提供专利设计不须比浊调菌液 浓度的快速接种模式 自动孵育，但需手工比浊调菌液浓度， 自动孵育，但需手工比浊调配菌液浓度， 载物台分注鉴定接种水(0.5麦氏单位)到 手工分注鉴定接种水(0.5麦氏单位)到 药敏接种水，自动判读，自动发报告 药敏接种水，手工加上1滴氧化还原 指示剂在药敏接种上，自动判读， 自动发报告 比色法、比浊法、荧光法 100标本(包含鉴定及药敏报告) 376种 152种 234种 X X X 2.5-16 小时 X X X X 75种 微量稀释法MIC测定（2-12孔浓度,为实测 值） CLSI标准 X 必须先有细菌鉴定名称 V V 6-16小时 V V V
C 样本容量
40标本(包含鉴定及药敏报告)
D 鉴定处理能力
菌种数： G+ G酵母菌 厌氧菌 苛养菌（嗜血/奈瑟氏） 结果报告时间 G+/G机器判读外，亦可由目测法判读 厌氧菌 酵母菌 苛养菌 500种 101种 232种 56种 81种 30种 2.5-16 小时 V 4小时 4小时 4小时
E 药敏处理能力
G 软件
增强型稀有菌型数据库 流行病学/院内感染 统计软件（中/英文） 专家系统软件 中文报告系统软件
H 其他
加样 调配菌液浓度 仪器自动加试剂
抗生素种类 药敏方法 机器判读外,亦可由目测法判读 抗生素MIC结果不依赖鉴定ID 肺炎链球菌药敏 同时报告MIC/S,I,R 药敏报告时间 耐万古肠球菌(VRE)提示 β-内酰胺酶提示 ESBL筛选功能 86种 78种 微量肉汤稀释法MIC测定（2-12孔浓度，为实测值） MIC测定（2-3孔浓度，为推算值） CLSI标准 不符合CLSI标准 V X V 必须先有细菌鉴定名称 V V V V 最快4.5-16小时 4-18小时 V V V V V V
品牌 项目
自动耐万古霉素金黄色葡萄球菌 (VRSA)测定(FDA) 诱导酶(IB)提示
西门子诊断MicroScan
V V 普通板室温，快速荧光板4-15℃ V V V V V V V V （选配中文报告软件） 96孔真空加样器一次完成 专利Prompt接种技术,无需调配 V
法国bioMerieux
V V 2-8℃ V V X V V V V V （选配中文报告软件） 不能一次性完成加样 需预先手工调配 X
美国 BD Phoenix
V V 5-25℃ X X V X V X V V （中文报告软件由LIS供应商提供） 不能一次性完成加样 需预先手工调配 X
F 测定卡类型
储存温度 单项鉴定板 单项药敏板 复合板
西门子诊断MicroScan WalkAway 40/96Plus
法国bioMerieux VITEK-2 Compact 30/60
Hale Waihona Puke 美国 BD Phoenix Phoenix
B 检测原理
比色法、比浊法、荧光法 比色法、比浊法 15/30 标本(包含鉴定及药敏报告) 361种 123种 159种 52种 X 27种 G+：6-16小时 G-：4-14小时 X X 8小时 8小时